血红素氧合酶-1介导NAD表达在大鼠内毒素急性肺损伤中的作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)介导烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)表达在大鼠内毒素急性肺损伤中的作用。方法清洁级健康雄性SD大鼠40只,体重200~220 g,8周龄,采用随机数字表法分为四组:对照组(C组)、内毒素急性肺损伤组(L组)、HO-1激动剂Hemin+内毒素急性肺损伤组(H组)和HO-1阻断剂ZnPP-IX+内毒素急性肺损伤组(Z组),每组10只。L组、H组和Z组采用尾静脉缓慢注射脂多糖(LPS)5mg/kg溶于生理盐水1 ml,制备大鼠内毒素急性肺损伤模型。H组于模型前1 h腹腔注射Hemin 50mg/kg,用0.1 mol/L NaOH溶液稀释至1 ml。Z组于模型前1 h腹腔注射ZnPP-IX 10μmol/kg,50 mmol/L NaHCO3溶液稀释至1 ml。给予LPS后6 h处死大鼠,采集动脉血行血气分析,留取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,计算肺组织湿/干重比(W/D),采用NAD/NADH定量检测试剂盒测定NAD含量,Western blot法检测HO-1蛋白含量。结果与C组比较,L组、H组、Z组pH和PaO2明显降低,PaCO2、肺损伤评分、肺组织NAD含量、HO-1蛋白含量明显升高(P<0.05),肺W/D比值明显增大(P<0.05),肺组织病理损伤明显。与L组比较,H组pH和PaO2明显升高,PaCO2、肺损伤评分明显降低(P<0.05),肺W/D比值明显减小(P<0.05),肺组织NAD含量、HO-1蛋白含量明显升高(P<0.05),肺组织病理损伤减轻;Z组pH和PaO2明显降低,PaCO2、肺损伤评分明显升高(P<0.05),肺W/D比值明显增大(P<0.05),肺组织NAD含量、HO-1蛋白含量明显降低(P<0.05),肺组织病理损伤加重。与H组比较,Z组pH、PaO2明显降低,PaCO2明显升高(P<0.05),Z组肺损伤评分明显升高(P<0.05),肺W/D比值明显增大(P<0.05),肺组织NAD含量明显降低(P<0.05),肺组织病理损伤明显。结论内毒素肺损大鼠通过上调HO-1表达水平而增加肺组织NAD含量,降低了肺组织炎症反应,从而减轻大鼠内毒素急性肺损伤。     

盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时β-抑制蛋白-1表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对脓毒症小鼠急性肺损伤时β-抑制蛋白-1表达的影响.方法 健康雌性昆明小鼠30只,体重18～20 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=10):假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)和盐酸戊乙奎醚组(PHCD组).采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型.PHCD组于造模前1h腹腔注射盐酸戊乙奎醚0.45 mg/kg,S组和CLP组给予等容量生理盐水.造模后12 h,收集肺泡灌洗液(BALF),测定总蛋白浓度;取肺组织,行肺损伤评分,测定肺湿/干重(W/D)比和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、β-抑制蛋白-1的表达.结果 与S组比较,CLP组和PHCD组肺损伤评分、肺W/D比和BALF总蛋白浓度、肺组织MLCK表达升高,VE-cadherin表达降低,CLP组β-抑制蛋白-1表达降低,PHCD组β-抑制蛋白-1表达升高(P＜ 0.05或0.01);与CLP组比较,PHCD组肺损伤评分、肺W/D比和BALF总蛋白浓度、肺组织MLCK表达降低,VE-cadherin和β-抑制蛋白-1表达升高(P＜0.05或0.01).结论 盐酸戊乙奎醚预先给药可通过上调β-抑制蛋白-1的表达,降低肺微血管通透性,从而减轻脓毒症小鼠急性肺损伤.     

L-精氨酸对兔肺缺血再灌注时血红素氧合酶-1的影响

目的 探讨L-精氨酸对兔肺缺血再灌注时血红素氧合酶-1(HO-1)的影响.方法 健康日本大耳白兔20只,雌雄不拘,体重1.7～2.6 kg,随机分为2组,肺缺血再灌注组(IR组)和L-精氨酸治疗组(L-Arg组),每组10只.建立兔单肺原位缺血再灌注损伤模型,L-Arg组肺缺血前20 min耳缘静脉注射L-Arg溶液100 mg/kg.采用原位杂交方法测定兔肺组织HO-1的表达;计算肺组织湿/干重比(W/D)及损伤肺泡百分数(IAR);电镜下观察肺组织超微结构.结果 HO-1在两组肺血管内皮、部分血管平滑肌、外膜层及部分气道上皮均有表达;与IR组比较,L-Arg组HO-1水平升高,W/D及IAR降低(P＜0.05);L-Arg组肺组织形态学异常改变轻于IR组.结论 L-精氨酸可通过上调肺组织HO-1的表达,增强肺组织HO-1的活性,减轻兔肺缺血再灌注损伤.     

电针刺激足三里和肺俞穴对兔内毒素休克诱发急性肺损伤的影响

目的 评价电针刺激足三里和肺俞穴对兔内毒素休克诱发急性肺损伤的影响.方法 健康雄性新西兰大白兔60只,体重1.5 ～ 2.0 kg,2月龄,采用随机数字表法,将其随机分为6组(n=10):假手术组(S组)、血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉-Ⅸ组(Z组)、内毒素组(L组)、电针刺激穴位+内毒素组(EL组)、电针刺激非穴位+内毒素组(SEL组)、电针刺激穴位+锌原卟啉-Ⅸ+内毒素组(ELZ组).EL组和ELZ组电针刺激双侧足三里和肺俞穴,疏密波,频率15 Hz,刺激强度以兔出现轻微肌颤为宜,1次/d,15 min/次,连续5d;SEL组刺激足三里和肺俞穴旁开0.5 cm处.停止电针刺激后24 h,L组、EL组、SEL组和ELZ组静脉注射脂多糖5 mg,/kg,S组和Z组给予等容量生理盐水0.5ml.Z组和ELZ组给予脂多糖后2h腹腔注射锌原卟啉-Ⅸ10 μmol/kg,其他4组给予等容量NaHCO3 1 ml.注射脂多糖后6h时处死兔,取肺组织,进行肺损伤评分,测定肺泡上皮细胞凋亡指数、HO-1和HO-1 mRNA表达.结果 与S组比较,Z组肺损伤评分、肺泡上皮细胞凋亡指数、HO-1和HO-1 mRNA 表达差异无统计学意义(P＞0.05),其他4组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数升高,HO-1和HO-1 mRNA表达上调(P＜0.01);与L组比较,EL组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数降低,HO-1 和HO-1 mRNA表达上调(P＜0.01),其他2组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EL组比较,ELZ组肺损伤评分和肺泡上皮细胞凋亡指数升高,HO-1和HO-1 mRNA表达下调(P＜0.01).结论 电针刺激足三里和肺俞穴可减轻兔内毒素休克诱发急性肺损伤,其机制与上调肺组织HO-1表达,抑制肺泡上皮细胞凋亡有关.     

不同程度呼吸机相关性肺损伤大鼠血清CC10蛋白水平的比较

目的 比较不同程度呼吸机相关性肺损伤(VILI)大鼠血清CCIO蛋白的水平.方法 清洁级Wistar大鼠40只,雌雄不拘,体重200～250 g,随机分为5组(n=8),对照组(Ⅰ组)仅切开气管,不行机械通气;轻度肺损伤组(Ⅱ组)潮气量(VT)7 ml/kg,机械通气2 h;中度肺损伤组(Ⅲ组)VT 7 ml/kg,机械通气4 h;重度肺损伤组(Ⅳ组)VT 40 ml/kg,机械通气2 h;极重度肺损伤组(Ⅴ组)VT 40 ml/kg,机械通气4 h.Ⅰ组在气管切开后即刻,其余各组在机械通气结束时采集腹主动脉血3 ml,并收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定血清和BALF中CC10蛋白水平;观察肺Clara细胞;计算肺湿/干重比(W/D).结果 Ⅳ组和Ⅴ组终末细支气管、呼吸细支气管管腔有大量脱落Clara细胞,血管壁有大量漏出的CC10蛋白,其余组上述表现不明显;Ⅱ组～Ⅴ组血清CC10蛋白水平逐渐升高,肺组织损伤程度逐渐加重(P＜0.05);与Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组比较,Ⅳ组和Ⅴ组BALF中CC10蛋白水平降低(P＜0.05);血清CC10蛋白水平与肺组织损伤程度和肺W/D呈正相关,相关系数分别为0.915和0.846(P＜0.01);BALF中CC10蛋白水平与肺组织损伤程度和肺W/D呈负相关,相关系数分别为-0.799和-0.816(P＜0.01).结论 血清CC10蛋白水平与大鼠呼吸机相关性肺损伤程度有关.     

机械通气诱导肺损伤大鼠肺组织白细胞介素-8及表面活性蛋白B表达的变化

目的研究新生大鼠呼吸机相关性肺损伤模型肺组织白细胞介素(IL)-8及表面活性蛋白B(SPB)蛋白表达的变化,探讨新生大鼠呼吸机相关性肺损伤的发病机制。方法新生SD大鼠30只,体重12~18g,采用随机数字表法均分为三组:对照组(A组)、正常潮气量机械通气组(B组)和大潮气量机械通气组(C组)。A组气管插管后保持自主呼吸;B组和C组气管插管后行机械通气,B组潮气量7ml/kg,C组潮气量25ml/kg行机械通气4h。机械通气结束,采用光学显微镜下观察肺组织病理学改变,测定肺组织湿干重比(W/D);采用ELISA检测三组肺泡灌洗液IL-8、IL-10及SPB的浓度的变化;Western blot检测肺组织匀浆IL-8、IL-10和SPB的蛋白表达。结果光镜下见A、B组肺组织病理改变不明显,C组肺组织病理学改变累计面积达50%,肺泡结构紊乱,肺间隔增宽,肺间质水肿,肺泡腔融合并有大量炎性细胞聚集。C组W/D明显高于A、B组(P0.05)。C组IL-8表达明显高于,SPB浓度明显低于A、B组(P0.01),三组肺泡灌洗液中IL-10的表达水平差异无统计学意义。C组IL-8的蛋白表达明显高于,SPB的蛋白表达明显低于A、B组(P0.01)。结论 IL-8介导的肺部过度炎症反应及SPB下调是新生大鼠肺损伤的重要机制。     

Toll样受体4对失血性休克小鼠肺组织血红素加氧酶和诱导型一氧化氮合酶的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)对失血性休克小鼠所致急性肺损伤(ALI)中肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响.方法 TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ和野生型小鼠C3H/HeN(48只),随机分为假手术组和失血性休克(6、24、48 h)组.采用小鼠失血性休克致急性肺损伤模型,观察血气分析,HO-1和iNOS蛋白表达,白细胞介素-6(IL-6)水平,肺组织肺湿/干重比和病理形态学改变.结果 与假手术组比较,C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠失血休克后24 h肺组织HO-1蛋白强阳性表达,IL-6含量明显增加为365.38±48.26和300.89±39.34;6 h肺组织iNOS蛋白强阳性表达(P＜0.01).与C3H/HeN小鼠比较,C3H/HeJ小鼠失血休克后24 h肺组织HO-1、IL-6含量和W/D明显降低(P＜0.05);6 h肺组织iNOS蛋白显著减少为0.049±0.013.病理学检查显示失血休克后各时点肺组织损伤程度较假手术组明显加重.结论 TLR4在失血性休克后ALI过程中被激活,通过影响HO-1和iNOS的表达参与了失血性休克致急性肺损伤的过程.     

舒芬太尼预处理对大鼠肢体缺血-再灌注肺损伤的影响

目的观察舒芬太尼预处理对大鼠肢体缺血-再灌注肺损伤的影响。方法成年雄性SD大鼠60只,随机分为五组:假手术组(Sham组)、缺血-再灌注组(IR组)和舒芬太尼1、5、10μg/kg预处理组(S1组、S5组和S10组),每组12只。采用大鼠肢体缺血2h再灌注3h肺损伤模型。观察肺组织病理学改变,测定肺组织湿/干重比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)活性、细胞因子诱导的中性粒细胞化学趋化因子-1(CINC-1)含量及核因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达。结果与Sham组比较,IR组肺泡壁增厚,肺间质和肺泡水肿,大量炎性细胞浸润,呈局限性肺不张;与IR组比较,S1组、S5组和S10组肺组织损伤逐渐减轻,S10组只有少量渗出及肺泡隔轻度增宽,基本接近于正常肺组织。与Sham组比较,IR组、S1组和S5组W/D、MPO活性、CINC-1含量和IR组、S1组、S5组和S10组NF-κB p65蛋白表达明显升高(P0.01)。与IR组比较,S1组、S5组和S10组W/D、MPO活性、CINC-1含量及NF-κB p65蛋白表达明显降低(P0.01)。且S5组和S10组明显低于S1组(P0.01),S10组明显低于S5组(P0.01)。结论舒芬太尼预处理能减轻肢体缺血-再灌注大鼠的肺损伤,其机制可能与抑制NF-κB激活,从而减少CINC-1介导的中性粒细胞聚集有关。     

Nrf2 / HO-1通路在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用

目的:观察核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用。方法:40只健康雄性新西兰大白兔,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组和全反式维甲酸组(n=10)。采用夹闭股动脉3 h、再灌注4 h的方法制备兔肢体缺血再灌注模型;电针组、全反式维甲酸组于模型制备前1～4 d(30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针足三里穴和肺俞穴,采用疏密波2/15 Hz,强度以兔出现轻微肌颤为宜;全反式维甲酸组于模型制备前30 min腹腔注射Nrf2抑制剂全反式维甲酸7 mg/kg。再灌注4 h时采集颈动脉血样,随后处死兔取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,计算肺湿/干重(W/D)比值;测定肺组织MDA含量及SOD活性,采用Western blotting法检测肺组织Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及HO-l蛋白表达水平。结果:模型组、电针组和全反式维甲酸组再灌注4 h时肺损伤评分分别为5.43±0.82、4.03±0.56、6.21±0.75,均明显高于假手术组(0.92±0.21,P0.05);肺组织W/D比值分别为6.42±1.00、4.45±0.68、7.08±1.12,均明显高于假手术组(2.04±0.29,P0.05);MDA含量分别为(4.82±0.51)nmol/mg、(3.56±0.45)nmol/mg、(5.18±0.47)nmol/mg,均明显高于假手术组(2.10±0.23)nmol/mg,P0.05;SOD活性分别为(50.6±6.3)U/mg、(63.1±7.7)U/mg、(47.2±5.6)U/mg,均明显低于假手术组(72.6±6.3)U/mg,P0.05;Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显高于假手术组(P0.05)。与模型组比较,电针组再灌注4 h时肺损伤评分、肺组织W/D比值、MDA含量均明显降低(P0.05),SOD活性、Nrf2总蛋白、核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显升高(P0.05)。与电针组比较,全反式维甲酸组再灌注4 h时肺损伤评分、肺组织W/D比值、MDA含量均明显升高(P0.05),SOD活性、Nrf2总蛋白、核蛋白及HO-l蛋白表达水平均明显降低(P0.05)。结论:Nrf2/HO-1信号通路激活参与了电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤的过程。     

地氟醚对内毒素致急性肺损伤大鼠肺泡毛细血管膜通透性的影响

目的 研究地氟醚对内毒素致急性肺损伤鼠肺泡毛细血管膜通透性和肺泡灌洗液(BAIF)内炎性细胞的影响。方法 48只雄Wistar大鼠随机分为4组,每组12只,C组:生理盐水对照组,股静脉注射生理盐水1.2 ml后机械通气4 h;L组:股静脉注射内毒素(LPS)5 mg/kg后机械通气4 h;D1L和D2L组:股静脉注射LPS 5 mg/kg后机械通气,分别吸人1.0 MAC和1.5 MAC地氟醚4 h。每组有6只大鼠不注射伊万斯蓝,用于病理学检查及肺泡灌洗。测定肺组织病理形态学积分、肺湿/干重比(W/D)、肺水含量、肺通透指数(LPI)、伊万斯蓝(EB)含量、BALF内炎性细胞总数及百分比、大鼠死亡率。结果 与C组比较,L组病理形态学积分、W/D、肺水含量、LPI和EB含量均升高(P<0.05或0.01),D1L组病理形态学积分和LPI升高(P<0.01)。与L组比较,D1L组W/D、肺含水量和EB含量升高(P<0.05)。与D1L组比较,D2L组病理形态学积分升高(P<0.05)。与C组比较,L组、D1L组、D2L组炎性细胞总数、中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞均升高(P<0.01)。与L组、D1L组比较,D2L组死亡率升高(P<0.01)。结论 吸入大剂量地氟醚加重内毒素致急性肺损伤。     

整合素αvβ6 在大鼠呼吸机相关性肺损伤中的作用

目的 探讨整合素αvβ6 在大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠24只,随机分为3组(n=8),对照组(C组)不行机械通气;高潮气量组(H组)行高潮气量(40 ml/kg)机械通气4 h,呼吸频率40次/min,氧浓度21%;高潮气量+阻滞剂S247组(HS组)腹腔注射S247(含有αv 亚单位整合素非特异性阻滞剂)100 mg/kg,1次/d,持续2周,在最后一次腹腔注射S247后30 min行高潮气量机械通气,参数设定同H组.C组和H组于上述相应时点腹腔注射等量生理盐水.通气结束后处死大鼠,观察肺组织病理学,计算肺湿,干重比(W/D),记录支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞(WBC)计数,测定总蛋白(TP)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)的浓度、整合素αvβ6 mRNA及其蛋白的表达水平.结果 C组未见肺损伤的发生;H组肺泡结构严重破坏,肺泡内渗出物、出血和间质水肿明显;HS组中等程度炎性细胞浸润,肺泡内出血和肺泡壁增厚.与C组比较,H组和HS组肺W/D、BALF中WBC计数、TP浓度升高,整合素αvβ6 mRNA及其蛋白表达上调,H组BALF中MIP-2浓度升高(P＜0.01);与H组比较,HS组肺W/D、BALF中WBC计数、TP、TNF-α、MIP-2浓度降低,整合素αvβ6 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05或0.01).结论 整合素αvβ6参与了大鼠VILI的发生.     

鱼油脂肪乳剂预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤的影响

目的观察鱼油脂肪乳剂预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法 32只SD大鼠随机分为四组:预给鱼油脂肪乳剂再灌注组(FOFE组)、预给鱼油脂肪乳剂加锌原卟啉再灌注组(FOFE-Z组)、预给生理盐水再灌注组(Saline组)和假手术组(Sham组)。监测并采集大鼠缺血末和实验末时的HR、BP并计算RPP,检测平衡末、缺血末、实验末经股动脉处采血的动脉血气;测定左肺组织湿干重比(W/D)和肺泡损伤评分IQA;检测左肺组织中IL-6和MPO含量以及NF-κB和HO-1(血红素氧化酶-1heme oxygenase-1)的表达,观察左肺组织形态结构改变。结果与FOFE组比较,缺血末和实验末FOFE-Z组的HR明显减慢,SBP和RPP明显降低,实验末Sham组SBP和RPP明显升高(P0.05);FOFE-Z组和Saline组PaO2明显降低,IL-6含量、IQA评分和W/D明显升高(P0.05或P0.01),FOFE-Z组的BE明显降低(P0.05);Saline组MPO含量明显升高(P0.05);FOFE-Z组的NF-κB mRNA表达明显升高,FOFE-Z组和Sham组的HO-1的表达明显降低(P0.05)。与FOFE-Z组比较,缺血末和实验末Sham组HR明显增快,SBP和RPP明显升高(P0.05),实验末Saline组HR明显增快(P0.05)。与Sham组比较,实验末FOFE组、FOFE-Z组和Saline组的pH明显降低,IL-6含量和IQA评分明显升高(P0.05或P0.01),FOFE-Z组和Saline组的PaO2明显降低,W/D明显升高(P0.01),FOFE-Z组的BE明显降低(P0.05),Saline组MPO含量和NF-κB的mRNA表达明显升高(P0.05)。结论鱼油脂肪乳剂预处理可减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤,其机制可能与增强HO-1的活性和表达有关。     

三羟异黄酮预先给药对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的研究三羟异黄酮预先给药对内毒素诱导大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法 32只雄性Wistar大鼠,随机分为4组,每组8只:对照组(C组)、三羟异黄酮组(G组)分别腹腔注射生理盐水1 ml／kg、三羟异黄酮50 mg／kg,30 min后,静脉注射生理盐水1 ml／kg;内毒素组(L组)、三羟异黄酮预预先给药组(Gpre组)分别腹腔注射生理盐水1 ml／kg、三羟异黄酮50 mg／kg,30 min后,静脉注射脂多糖6 mg／kg。注射脂多糖后4 h处死动物。测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白浓度、髓过氧化物酶(MPO)活性及中性粒细胞(PMN)数。检测肺组织湿干重比(W／D)、丙二醛(MDA)含量、MPO 活性、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA、蛋白表达。观察肺组织病理学的改变。结果与C组比较,L组肺损伤严重、BALF中蛋白、MPO、PMN水平和肺组织W／D、MDA及MPO水平及TNF-α和HO-1 mRNA、蛋白表达水平升高(P<0．05或0．01),G组上述指标差异均无统计学意义(P >0．05);与L组比较,Gpre组除HO-1 mRNA、蛋白表达水平升高(P<0．05)外,其他指标均降低(P< 0．05或0．01)。结论三羟异黄酮预先给药对内毒素诱导大鼠急性肺损伤有一定的保护作用,与抑制PMN在肺组织的聚集、激活,TNF-α表达下调及HO-1表达上调有关。     

右美托咪定对大鼠单肺通气后肺损伤中细胞凋亡及CHOP的影响

目的评价右美托咪定对大鼠单肺通气(OLV)后肺损伤中细胞凋亡及CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的影响。方法成年雄性SD大鼠40只,随机分为四组(n=10):对照组、OLV组、生理盐水处理组(OLV+生理盐水组)、右美托咪定处理组(OLV+右美托咪定组)。实验结束后处死大鼠,留取左肺组织以测定肺组织湿/干重比(W/D);光镜下观察肺脏组织的形态学改变;电镜下观察肺组织超微结构的改变;采用原位末端标记(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡指数(AI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOP mRNA和蛋白表达水平的改变。结果与对照组和OLV+右美托咪定组比较,OLV组和OLV+生理盐水组肺组织W/D和AI明显升高(P<0.01),GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达均明显上调(P<0.01)。与OLV组和OLV+生理盐水组比较,OLV+右美托咪定组肺组织结构损伤明显减轻。结论右美托咪定预处理对大鼠单肺通气时的肺脏具有保护作用,其作用机制可能与其减轻细胞凋亡、抑制CHOP有关。     

电针刺对兔肢体缺血再灌注诱发肺损伤内质网应激的影响

目的:评价电针对肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤时肺组织内质网应激的影响。方法:40 只健康雄性新西兰大白兔,采用随机数字表法分为4 组:假手术组、模型组、电针组和非穴位电针组,每组10 只。采用夹闭股动脉3 h、再灌注4 h的方法制备兔肢体缺血再灌注损伤模型。电针组于模型制备前4 d( 每天早8 点,30 min/ 次,1 次/d) 及模型制备过程中电针肺俞穴和足三里穴( 疏密波,刺激电流l~2 mA,频率2/15 Hz,波宽0.2~0.6 ms),以兔出现轻微肌颤为宜;非穴位电针组以相同的参数电针刺激肺俞穴和足三里穴旁开0.5 cm 非经非穴处。再灌注4 h 时处死兔,取肺组织行HE 染色和肺损伤评分,计算肺湿重/ 干重(W/D) 比值;采用TUNEL 法确定肺泡上皮细胞凋亡指数(AI) ;采用Western blotting 法检测肺组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/ 增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP) 及caspase-12 表达水平。结果:与假手术组比较,其余3 组的肺损伤评分、W/D 比值及肺泡上皮细胞AI 均升高,肺组织GRP78、CHOP 及caspase-12 表达均上调,差异有统计学意义(P <0.05) ;与模型组比较,电针组肺损伤评分、W/D 比值及肺泡上皮细胞AI 降低,肺组织GRP78、CHOP 及caspase-12 表达下调,差异有统计学意义(P <0.05)。结论:电针刺激肺俞穴和足三里穴减轻兔肢体缺血再灌注诱发肺损伤的机制可能与抑制内质网应激诱导、减轻肺泡上皮细胞凋亡有关。     

亚甲蓝对大鼠机械通气相关肺损伤中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体的影响

目的评价亚甲蓝对大鼠机械通气相关损伤(VILI)中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠36只,8周龄,体重240～260 g,采用随机数字表法分为三组:自主呼吸对照组(C组)、大潮气量模型组(H组)和大潮气量+亚甲蓝组(MB组),每组12只。三组大鼠均行气管切开插管术,MB组经腹腔注射1%亚甲蓝50 mg/kg,10 min后以V_T 20 ml/kg行机械通气;C组经腹腔注射等容量生理盐水后保持自主呼吸;H组经腹腔注射等容量生理盐水,10 min后以V_T 20 ml/kg行机械通气。通气参数:FiO_2 21%,I∶E 1∶1,RR 80次/分,PEEP 0,通气时间4 h。于基础状态、通气结束时经颈总动脉取血行血气分析,通气结束后颈总动脉放血处死大鼠,收集肺组织标本、支气管肺泡灌洗液(BALF)。光镜下观察肺组织病理学改变,记录肺损伤评分,计算肺组织湿/干重比值(W/D)。采用ELISA法测定BALF中总蛋白含量以及血清、BALF中白细胞介素(IL)-1β、IL-18浓度;鲁米诺化学发光法检测肺组织中活性氧(ROS)含量;RT-PCR法及Western blot法分别检测肺组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA表达量及蛋白含量。结果与C组比较,H组肺损伤评分、W/D明显升高(P0.01),BALF中总蛋白以及血清、BALF中IL-1β和IL-18浓度明显升高(P0.01),肺组织中ROS含量、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量及蛋白含量明显升高(P0.01)。与H组比较,MB组肺损伤评分、W/D明显降低(P0.05),BALF中总蛋白以及血清、BALF中IL-1β和IL-18浓度明显降低(P0.05),肺组织中ROS含量、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA表达量及蛋白含量明显降低(P0.05)。结论亚甲蓝通过抑制大鼠肺组织中NLRP3炎性小体的激活,阻碍促炎因子IL-1β及IL-18的形成,减轻大鼠VILI。     

七氟醚预处理对大鼠单肺通气时肺组织血红素氧合酶-1表达的影响

目的 评价七氟醚预处理对大鼠单肺机械通气时肺组织血红素氧合酶-1(HO-1)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重220～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):对照组(C组)、双肺通气组(T组)、单肺通气组(O组)和七氟醚预处理+单肺通气组(SO组).T组气管插管后行双肺通气1h,潮气量10ml/kg,通气频率60次/min,吸呼比1∶2,维持PETCO2 35～50 mmHg;O组和SO组气管插管后行右侧单肺通气1h,潮气量5ml/kg,通气频率80次/min,吸呼比1∶2,维持PETCO2 35～50 mm Hg.SO组单肺通气前吸入2.4％七氟醚30 min,纯氧洗脱15 min.C组和T组取左侧肺组织,O组和SO组取双侧肺组织,观察病理学结果,测定湿/干重比(W/D比)和HO-1表达.结果 与C组比较,T组左肺组织、O组和SO组双肺组织W/D比升高,HO-1表达上调(P＜0.05);与T组比较,O组双肺组织和SO组右肺组织W/D比升高,O组右肺组织和SO组双肺组织HO-1表达上调(P＜0.05);与O组比较,SO组双肺组织W/D比降低,HO-1表达上调(P＜0.05),病理学损伤减轻.结论 七氟醚预处理减轻大鼠单肺通气所致肺损伤的机制与其上调肺组织HO-1的表达有关.     

环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路对大鼠深低温缺血再灌注后肺组织水通道蛋白-5的调控及其与肺损伤的关系

目的 探讨环磷酸腺苷-蛋白激酶A (cAMP-PKA)信号通路对大鼠深低温缺血再灌注后肺组织水通道蛋白-5(AQP5)的调控及其与肺损伤的关系.方法 将28只Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、深低温缺血再灌注损伤组(I/R组)、H89组和forskolin组,每组7只.I/R组大鼠体表降温至深低温后阻断左下肺门30 min后开放、复温;sham组只开胸但不降温阻断左下肺门;H89组和forskolin组分别于实验前2d腹腔注射H89和forskolin,其余操作同I/R组;测量左下肺组织湿重/干重比值(W/D比值)同时观察组织学变化,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)以及Westem blot法检测左下肺组织中AQP5 mRNA和蛋白表达.结果 I/R组与sham组比较,肺组织AQP5 mRNA表达减少(0.67±0.15,P＜0.01)、AQP5蛋白表达减少(0.47±0.09,P＜0.01),W/D比值增高(5.27±0.92,P＜0.01),肺组织形态及结构明显受损;forskolin干预组与I/R组比较,肺组织AQP5 mRNA表达增加(0.83 ±0.30,P＜0.01)、AQP5蛋白表达增加(0.89±0.07,P＜0.01)、W/D比值减低(3.98±0.45,P＜0.01),肺组织病理形态学改变轻于I/R组,与sham组比较,AQP5表达减少,但差异无统计学意义;H89干预组与I/R组和sham组比较,肺组织AQP5 mRNA表达减少(0.53±0.11,P＜0.01)、AQP5蛋白表达减少(0.31±0.03,P＜0.01),W/D比值增高(6.13 ±0.78,P＜0.01),肺组织形态及结构受损最为明显.结论 深低温缺血再灌注肺组织中AQP5表达下调且与肺损伤程度相关,cAMP-PKA信号通路可能参与AQP5的调控.     

核因子-κB介导脂多糖诱导急性肺损伤大鼠高迁移率族蛋白B1的表达

目的探讨核因子(NF)-κB在脂多糖诱导大鼠急性肺损伤过程中对肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达的影响。方法采用腹腔注射脂多糖(LPS)致大鼠脓毒症急性肺损伤模型。取健康SPF级雄性SD大鼠72只,体重180~220g,采用随机数字表法,分为对照组(C组,n=6)、急性肺损伤组(L组,n=30)、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)溶剂对照组(P组,n=6),PDTC治疗组(LP组,n=30)。各组分别给予腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)(C和P组)或LPS(L和LP组);P组和LP组在PBS或LPS注射前15min,给予腹腔注射PDTC 100mg/kg。C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的16h后各取6只大鼠检测其肺湿/干重比(W/D);C组和P组腹腔注射PBS后的16h,L组和LP组注射LPS后的4h(T1)、8h(T2)、16h(T3)、24h(T4)和48h(T5)时各取6只大鼠经处理后采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中髓过氧化物酶(MPO)和白细胞介素6(IL-6)水平,Western blot法检测肺组织HMGB1的表达水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织的病理变化。结果与C组比较,L组肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显升高(P0.01),病理切片显示严重肺组织损伤,T2~T4时肺组织中HMGB1的表达水平明显升高(P0.05);使用PDTC治疗后,与L组比较,肺组织W/D、BALF中MPO和IL-6水平明显降低(P0.01),病理示肺损伤程度明显减轻;T2~T4时肺组织HMGB1表达水平明显降低(P0.05)。结论在脂多糖诱导急性肺损伤中,被激活的NF-κB通过介导晚期炎症因子HMGB1的表达来参与急性肺损伤的发生与发展过程。     

蛋白激酶C在大鼠机械通气相关性肺损伤中的作用

目的 探讨蛋白激酶C(PKC)在大鼠机械通气相关性肺损伤中的作用.方法 健康雄性Wistar大鼠30只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠分为5组(n=6):对照组(C组)、小潮气量组(S组)、小潮气量+ PKC抑制剂组(S+P组)、大潮气量组(L组)、大潮气量+PKC抑制剂组(L+P组).大潮气量组VT42 ml/kg,小潮气量组VT7 ml/kg,呼吸频率40次/min,I∶E 1∶2,呼吸末正压为0,FiO221％,机械通气4h.S+P组、L+P组于麻醉前1h肌肉注射PKC抑制剂bisindolvlmaleimide Ⅰ 0.12 mg/kg.C组于气管切开后即刻,其它4组机械通气4 h时处死大鼠,取肺组织,计算湿/干重比(W/D比),观察病理学结果；采用Western blot法测定肺组织occludin蛋白表达.结果 与C组比较,其余4组肺组织W/D比升高,occludin蛋白表达下调(P＜0.05)；与 S组比较,L组肺组织W/D比升高,occludin蛋白表达下调,S+P组肺组织W/D比降低,occludin蛋白表达上凋(P＜0.01)；与L组比较,L+P组肺组织W/D比降低,occludin蛋白表达上调(P＜0.01).S+P组和L+P组肺组织病理学损伤较S组和L组减轻.结论PKC参与了大鼠机械通气相关性肺损伤.