应用电化学测菌法检测变形链球菌效果的评价研究

目的应用基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法,探讨该方法检测变形链球菌的可行性。方法利用基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法检测变形链球菌,建立特定频率下细菌浓度与系统电阻抗值之间的函数关系,依据上述函数关系和测得的电化学阻抗值,分析待检样品内变形链球菌的浓度。结果在1.2KHz固定频率下、变形链球菌浓度为104～109cells/ml时,所测细菌浓度的对数与系统电阻抗值呈良好的线性关系(RITO2=0.995);从进样到获得稳定阻抗数值的时间为6分钟;进样速度采用1ml/h时电化学测菌法的灵敏度最高。结论基于ITO叉指电极微流芯片的电化学测菌法,可为变形链球菌的快速检测提供新的途径。     

应用电化学测菌法检测牙龈卟啉单胞菌的初步研究

目的:探讨应用电化学测菌法检测牙龈卟啉单胞菌的可行性。方法:应用电化学阻抗谱方法测量去离子水溶液中特定细菌(牙龈卟啉单胞菌)的电化学阻抗,获得针对特定细菌的敏感阻抗谱,建立特定频率下细菌浓度与系统交流阻抗值之间的函数关系,依据函数关系和测得的电化学阻抗值分析待检样品内特定细菌的浓度。结果:当频率低于104Hz时,系统的交流阻抗值随去离子水溶液中牙龈卟啉单胞菌浓度的增加而减小;当设定频率为1.2 kHz、待测细菌(牙龈卟啉单胞菌)浓度为103～109/mL时,牙龈卟啉单胞菌浓度C的对数与系统阻抗值Z呈良好的线性关系(R2=0.98),logC(细胞数/mL)=-0.007 Z(kΩ)+10.792;单一浓度检测用时约40 m in。结论:基于电化学阻抗原理的电化学测菌法有可能成为简便、快速检测牙周致病菌的新方法。     

三种牙周细菌定量方法的比较

目的分析电化学测菌法用于牙周细菌定量检测的实用价值。方法选择牙龈卟啉单胞菌ATCC33277作为质控标准菌株,采集40份慢性牙周炎患者的龈沟液样本,分别运用电化学测菌法、细菌培养和实时定量PCR法对龈沟液样本中的牙龈卟啉单胞菌进行定量,比较3种定量方法的检测结果。结果细菌浓度在一定范围内,细菌浓度的对数与电化学测菌法的标准化阻抗值呈良好线性关系;电化学测菌法获得的细菌数多于细菌培养,少于实时定量PCR方法;电化学测菌法检测结果与细菌培养、定量PCR检测结果正相关(P<0.01)。结论电化学测菌法在一定细菌浓度范围内可用于牙周细菌定量检测。     

免疫磁分离技术在电化学测菌法特异检测牙龈卟啉单胞菌中的应用

目的:探讨结合免疫磁分离技术实现电化学测菌法特异检测牙龈卟啉单胞菌的可行性。方法:利用结合特异抗体的磁颗粒捕获分离目的菌,观察免疫磁分离前、后检测样本的阻抗变化。分析磁颗粒、杂菌、抗体浓度、反应时间、温度、pH值对阻抗测量的影响。结果:与初始菌液相比,免疫磁分离后的阻抗值增加,但无统计学差异(P>0.05);磁颗粒和杂菌未对阻抗测量产生明显干扰;抗体浓度为1∶10稀释时系统阻抗变化最明显;抗原抗体结合30 min时系统阻抗变化最大,延长时间未见增加;温度在25～37℃范围内,系统阻抗变化较平稳,超过37℃时,系统阻抗值出现下降趋势;pH在7.0～7.5之间时,系统阻抗值较平稳。结论:免疫磁分离技术能够与电化学测菌法结合,实现细菌的特异检测。     

杨梅黄酮对变形链球菌毒力因子及生物膜的抑制作用研究

目的:探讨杨梅黄酮对变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)ATCC 25175毒力因子和生物膜的作用。方法:用液体稀释法准确测定杨梅黄酮对变形链球菌的最小抑菌浓度(MIC)和耐酸性;用结晶紫染色法检测药物对变形链球菌生物膜形成的抑制率;用乳酸试剂盒检测药物对变形链球菌产酸的影响;用蒽酮法检测药物对不溶性多糖生成量的影响;利用场发射扫描电子显微镜(FESEM)和激光共聚焦显微镜(CLSM)观察及分析药物对生物膜的抑制作用。结果:杨梅黄酮对变形链球菌的最小抑菌浓度为0.8 mg/mL,0.2～0.4 mg/mL的药物对生物膜的生成抑制作用明显,同时乳酸、不溶性多糖的生成量明显降低,0.4 mg/mL的药物对细菌耐酸性以及成熟生物膜的影响有显著性差异。结论:杨梅黄酮对于变形链球菌毒力因子和生物膜有显著的抑制作用。     

荧光原位杂交技术和流式细胞仪在菌斑中致龋性变形链球菌定量检测中的应用

目的:建立快速定量检测菌斑中主要致龋菌变形链球菌的方法,为龋齿活跃性评估提供参考数据。方法:收集无龋(caries free,CF)和高龋(caries susceptib le,CS)儿童牙菌斑各15例,将不同荧光素标记的寡核苷酸探针:细菌通用探针和变形链球菌特异性探针进行荧光原位杂交,结合流式细胞仪检测菌斑中变形链球菌所占的比例。结果:在无龋儿童菌斑中,变形链球菌在总菌中所占比例数是1.24%~3.4%(2.25±0.71),而在高龋儿童菌斑中比例为5.04%~9.7%(7.37±1.34),两组比较有着明显的统计学差异(P<0.01)。结论:流式细胞仪结合荧光原位杂交技术,可作为一种细菌定量检测方法应用于致龋性变形链球菌的定量分析中。     

唾液、血清和脓液对电化学测菌法检测牙龈卟啉单胞菌的影响

目的:观察唾液、血清和脓液对电化学测菌法检测牙龈卟啉单胞菌的影响。方法:利用免疫磁分离捕获牙龈卟啉单胞菌后进行电化学阻抗测量,观察唾液、血清和脓液对电化学测菌法检测限和检测灵敏度的影响。结果:唾液对电化学测菌法的检测限无影响,但可降低其检测灵敏度;血清对电化学测菌法的检测限和检测灵敏度均无明显影响;脓液明显影响电化学测菌法对牙龈卟啉单胞菌的检测。结论:应用电化学测菌法检测样本时应避免脓液的污染。     

应用电化学测菌法检测牙龈卟啉单胞菌的初步研究

应用电化学阻抗谱方法测量去离子水溶液中特定细菌(牙龈卟啉单胞菌)的电化学阻抗,获得针对特定细菌的敏感阻抗谱,建立特定频率下细菌浓度与系统交流阻抗值之间的函数关系,依据函数关系和测得的电化学阻抗值分析待检样品内特定细菌的浓度。结果:当频率低于104Hz时,系统的交流阻抗值随去离子水溶液中牙龈卟啉单胞菌浓度的增加而减小;当设定频率为1.2kHz、待测细菌(牙龈卟啉单胞     

季铵盐单体改性牙本质粘接剂对变形链球菌的抑制作用

目的 探讨季铵盐单体改性后牙本质粘接剂对变形链球菌生长、黏附的影响.方法 将季铵盐单体[甲基丙烯酰氧乙基-正十六烷基-二甲基氯化铵(methacryloxylethyl cetyl dimethyl ammonium chloride,DMAE-CB)]加入二甲基丙烯酸酯基牙本质粘接剂作为改性组,以二甲基丙烯酸酯基牙本质粘接剂作为阴性对照组,两组分别制作39个试件.采用接触抑菌实验和黏附实验,比较无处理、老化处理和唾液处理后两组粘接剂表面变形链球菌的生长和黏附情况;检测两组粘接剂浸提液中变形链球菌的细菌倍增时间,评价浸提液的抑菌作用.结果 无处理时改性组变形链球菌菌落数的中位数(四分位数间距)为2.80(1.50)×10~6 CFU,显著低于阴性对照组[2.60(0.90)×10~8 CFU,P＜0.01],变形链球菌的生长抑制率为99%;改性组黏附细菌所制悬液的吸光度A600值(0.332±0.063)显著低于阴性对照组(0.434±0.093,P=0.021).老化处理后改性组黏附细菌所制悬液的A600值(0.372±0.062)显著低于阴性对照组(0.455±0.066,P=0.022),变形链球菌的生长抑制率为99%;唾液处理后改性组黏附细菌所制悬液的A600值(0.299±0.061)显著低于阴性对照组(0.370±0.068,P=0.045),变形链球菌的生长抑制率为90%.改性组浸提液的细菌倍增时间为(130.5±8.4)min,与阴性对照组[(126.4±7.0)min]相比,差异无统计学意义(P=0.298).结论 DMAE-CB改性的牙本质粘接剂固化后其表面变形链球菌的生长和黏附受到抑制.     

应用电化学测菌法监测粘接性牙周夹板对牙周炎患者龈沟液中细菌定植的影响

目的:应用电化学测菌法监测粘接性牙周夹板对老年牙周炎患者龈沟液中牙龈卟啉单胞菌和血链球菌定植的影响.方法:老年慢性牙周炎患者10例,应用电化学测菌法检测患者患牙和健康对照牙初诊时、牙周基础治疗后夹板固定前、固定后2周、固定后4周相应位点共128个位点龈沟液中的牙龈卟啉单胞菌和血链球菌,细菌培养和定量PCR作对照,记录相...     

钛种植体表面粗糙度对细菌黏附的影响

目的：研究钛种植体的不同表面粗糙度对变形链球菌及血链球菌黏附的影响.方法：用光电3-D表面测量系统测定两种纯钛片机械切割表面和大颗粒喷砂酸蚀表面的表面粗糙度.将钛片与变形链球菌和血链球菌共同培养,培养时间分别为4h,1d和5d.通过菌落形成单位（CFU）计数法及结晶紫染色法,比较不同时间点两种细菌在两种粗糙度钛片上的黏附量.结果：机械切割表面和大颗粒喷砂酸蚀表面钛片的表面粗糙度Ra值分别为1.25 μm和4.25 μm.CFU计数显示,在不同的培养时间点,两组钛片上的变形链球菌及血链球菌活菌黏附数量相近,差异无统计学意义（P＞0.05）.结晶紫染色显示,在不同的培养时间点,大颗粒喷砂酸蚀组钛片上血链球菌的细菌黏附总量均多于机械切割组钛片,差异有统计学意义（P ＜0.05）.在培养早期（4h）,大颗粒喷砂酸蚀组钛片上变形链球菌的细菌黏附总量大于机械切割组钛片;但在培养后期（1 d,5 d）两组钛片上变形链球菌的细菌黏附总量相近,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：钛片不同表面粗糙度对变形链球菌和血链球菌的活菌黏附数量无影响,但粗糙表面上黏附的细菌及基质总量大于中度粗糙表面.对于变形链球菌而言,粗糙度对细菌及基质黏附总量的影响随着生物膜的成熟而消失.     

静磁场对口腔变形链球菌生长影响体外实验

目的：研究磁性附着体静磁场对口腔变形链球菌生长的影响。方法：将口腔变形链球菌分为12.5 mT和120 mT强度的静磁场加载组以及未加载磁场对照组,厌氧培养20 h,从培养后第8 h开始,每2 h进行活菌计数。结果：12.5 mT静磁场组变形链球菌活菌数与对照组相比未见显著差异（P〉0.05）,120 mT静磁场组细菌活菌数低于对照组（P〈0.05）。结论：12.5 mT静磁场对口腔变形链球菌生长无影响,120 mT静磁场抑制变形链球菌的生长。     

没食子鞣质和联合氟化钠对不同状态变链菌葡萄糖基转移酶活性的影响

目的：实验采用析因设计方法研究天然维药没食子和没食子联合氟化钠对变形链球菌浮游及生物膜状态下葡萄糖基转移酶（GTF）活性的影响,探讨实验药物防龋的作用机制。方法：用脑心浸液液体培养基分别培养浮游和生物膜状态下的变形链球菌,根据析因实验的分组将配置好的没食子鞣质、氟化钠、没食子鞣质联合氟化钠加入相应的菌液中厌氧培养18h。硫酸铵沉淀法提取粗酶,考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活性和药物对酶活性的抑制率。实验结果采用SPSS17．0软件包进行数据分析。结果：GTF酶活性在细菌不同培养状态下有统计学意义（P〈0．05）,浮游状态下GTF酶活性高于生物膜状态;没食子、氟化钠、没食子联合氟化钠对细菌不同状态下GTF酶活性的抑制率有差异（P〈0．05）,浮游状态下的葡萄糖基转移酶比生物膜状态对药物作用敏感,没食子的抑制作用最为显著。抑制率没食子〉没食子联合氟化钠〉氟化钠。结论：没食子鞣质可能是通过抑制葡萄糖基转移酶活性抑制变形链球菌的粘附,从而达到防龋的作用。     

没食子鞣质和联合氟化钠对不同状态变链菌葡萄糖基转移酶活性的影响

目的：实验采用析因设计方法研究天然维药没食子和没食子联合氟化钠对变形链球菌浮游及生物膜状态下葡萄糖基转移酶（GTF）活性的影响,探讨实验药物防龋的作用机制。方法：用脑心浸液液体培养基分别培养浮游和生物膜状态下的变形链球菌,根据析因实验的分组将配置好的没食子鞣质、氟化钠、没食子鞣质联合氟化钠加入相应的菌液中厌氧培养18h。硫酸铵沉淀法提取粗酶,考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活性和药物对酶活性的抑制率。实验结果采用SPSS17．0软件包进行数据分析。结果：GTF酶活性在细菌不同培养状态下有统计学意义（P〈0．05）,浮游状态下GTF酶活性高于生物膜状态;没食子、氟化钠、没食子联合氟化钠对细菌不同状态下GTF酶活性的抑制率有差异（P〈0．05）,浮游状态下的葡萄糖基转移酶比生物膜状态对药物作用敏感,没食子的抑制作用最为显著。抑制率没食子〉没食子联合氟化钠〉氟化钠。结论：没食子鞣质可能是通过抑制葡萄糖基转移酶活性抑制变形链球菌的粘附,从而达到防龋的作用。     

不同牙科粘接剂抗变形链球菌性能比较

目的对不同牙科粘接剂抗变形链球菌性能进行比较。方法将临床常用的7种粘接剂分,3M公司的Single Bond 2(SB)、Easy One(EO)和SE Plus B(SEPB),可乐丽公司的SE Bond(SEB)和Protect Bond(PB),松风公司的Fl-Bond II(FLB),贺利氏古莎公司的Durafill Bond(DB),制备成10mm×10mm×1mm试件,采用薄膜覆盖直接接触法进行抗菌性能检测,将菌悬液滴加在试件中间,用无菌聚乙烯薄膜覆盖在菌液上,培养24h,将薄膜及试件用生理盐水震荡洗涤,洗涤液再行细菌培养、计数,对菌落计数结果进行单因素方差分析,比较各粘接剂固化后对变形链球菌的抗菌效果。结果各种粘接剂对变形链球菌的抑菌菌落计数为SB:61.40±59.26;EO:0.20±0.45;SEPB:0.20±0.45;SEB:533.20±332.91;PB:16.80±30.72;DB:1099.60±329.05;FLB:936.40±308.20。SEPB、EO、PB抑菌效果最佳,三者间无统计学差异(P>0.05),与DB和FLB比,差异有统计学意义(P<0.05)。DB和FLB的抑菌效果最差,两者间无统计学差异(P>0.05)。SB抑菌效果较好,与SEPB、EO、PB无统计学差异(P>0.05),与DB和FLB有统计学差异(P<0.05);SEB抑菌效果较差,与SEPB、EO、PB DB、FLB均有统计学差异(P<0.05)。结论 SEPB、EO、PB抑菌效果最佳,其次为SB、SEB,而DB和FLB抑菌效果最差。     

HAART治疗期间艾滋病儿童口腔健康与免疫功能的相关研究

目的:调查已接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的艾滋病(AIDS)患儿口腔健康状况和免疫功能,探讨其相关关系及与HAART治疗的时相关系。方法:纳入2010年2～8月期间由广西壮族自治区疾病预防控制中心确诊的AIDS患儿49例,通过病史采集,口腔专科检查收集临床资料,并结合辅助检测获得患儿唾液念珠菌负荷,治疗基线及治疗后外周血CD4+T淋巴细胞绝对数及百分比等数据,进行相关分析。结果:49例AIDS患儿均接受HAART,其中男25例,女24例,年龄3～11岁,平均6.18±2.05岁,共14例(28.6%)存在口腔黏膜病损,依次为口腔念珠菌病8例,口腔溃疡5例,带状疱疹1例。全部患儿中,有31例检出口腔念珠菌(63.3%)。患儿治疗基线及治疗后CD4+T淋巴细胞百分比均数分别为0.162±0.110和0.309±0.063(P<0.01),治疗后的CD4+T淋巴细胞百分比明显高于治疗基线水平。免疫抑制程度与HAART时限之间呈负相关关系(r=-0.418,P=0.003),而与口腔病损之间呈正相关关系(r=0.322,P=0.024)。结论:HAART能明显提高艾滋病儿童的免疫功能,但在HAART治疗期间,口腔病损的存在提示艾滋病患儿处于免疫抑制状态。     

激光共聚焦显微镜研究clpP基因缺失对变形链球菌生物膜耐酸陛的影响

目的：应用激光共聚焦显微镜观察clpP基因对变形链球菌生物膜耐酸性的影响。方法：将变形链球菌标准株UAl59和它的clpP基因缺陷株分别做成预酸化和致死酸化处理的菌液,接种于刻有宽500txm深500μm沟的羟基磷灰石圆片上厌氧培养12h。培养后取出圆片,所有圆片均在处理后立刻进行荧光死、活菌斑染色并行共聚焦观察。测算活菌厚度、面积及荧光强度占总菌斑的百分比,应用SPSS15．0统计软件,采用方差分析及均数两两比较分析clpP基因缺失对细菌生长及耐酸能力的变化。结果：共聚焦显微镜下,clpP基因缺失菌株所形成的生物膜菌斑厚度略薄于标准菌株（P〈0．05）,经过预酸化处理和致死酸处理后clpP基因缺失菌株所形成的生物膜菌斑厚度显著薄于标准菌株（P〈O．01）,而且活菌百分比显著低于标准株（P〈0．01）。结论：共聚焦显微镜下clpP基因可以显著地降低变形链球菌的耐酸能力,并一定程度地降低变形链球菌的生长能力。     

义齿基托修复材料表面粗糙度对变形链球菌粘附的影响

目的：观察义齿基托修复材料的表面粗糙度对变形链球菌粘附的影响,为正确处理义齿基托的表面提供参考。方法：常规制备钴铬合金标准试件8mm×8mm×1mm共40件,分为5组,每组8件,分别按照五种不同的打磨方法处理试件表面,使用手持式表面粗糙度仪测量每组试件的表面粗糙度,通过体外粘附实验观察变形链球菌在不同表面粗糙度试件上的粘附情况,进行Pearson相关性检验和单因素方差分析。结果：各组试件的表面粗糙度与变形链球菌粘附量之间有显著相关性（P〈O．01）,各组试件细菌粘附量之间的差异具有显著的统计学意义（P〈0．01）。结论：义齿基托修复材料表面粗糙度与细菌的粘附量呈正相关,提示制作义齿时应通过正确的方法减小义齿的表面粗糙度。     

高果糖玉米糖浆对变形链球菌粘附能力的影响

目的：以目前食品加工业中广泛使用的高果糖玉米糖浆（HFCS）为研究对象,通过与蔗糖、葡萄糖和果糖的比较,研究高果糖玉米糖浆对变形链球菌粘附能力的影响。方法：将变形链球菌uA159分别接种于0．25％、0．5％、1％、3％、5％五组不同浓度TSB糖培养基培养18h后,用磷酸盐缓冲液洗脱2次并采用紫外分光光度计540nm检测各试管中的A值,计算粘附比,行方差分析,比较粘附力。结果：4种饮食糖培养基的粘附比存在统计学差异（P〈0．01）,HFCS组的变形链球菌粘附比显著低于蔗糖组,与葡萄糖和果糖组之间无显著差异;5组浓度糖培养基的变形链球菌粘附比之间的差异也具有统计学意义（P〈0．01）。结论：HFCS对变形链球菌粘附力的促进弱于蔗糖,与葡萄糖和果糖无明显差异。