水浸束缚应激对大鼠下颌下腺内瘦素表达的影响

目的:观察应激状态下大鼠颌下腺内瘦素表达的变化,探讨应激反应对颌下腺瘦素分泌的影响及其意义.方法:采用水浸束缚应激(WRS)方法,将20只SD大鼠随机均分为WRS组(n=10)和对照组(n=10),用免疫组织化学方法观察大鼠颌下腺内瘦素的定位与分布;用ELISA法检测两组大鼠血清和颌下腺组织中瘦素水平.结果:瘦素免疫反应阳性细胞主要定位于颌下腺导管的颗粒曲管和纹状管,腺泡细胞为阴性,其中颗粒曲管上皮细胞呈强阳性反应. WRS组大鼠颌下腺导管上皮细胞瘦素免疫反应细胞的染色强度高于对照组. 与对照组相比,WRS组大鼠血清和颌下腺中瘦素水平均显著升高(P＜0.01).结论:瘦素表达于大鼠颌下腺导管上皮细胞;水浸束缚应激可致大鼠血清和颌下腺中瘦素浓度增加,颌下腺内瘦素可能参与应激反应过程的调节.     

模拟失重对大鼠肺微血管通透性的影响

目的：研究模拟失重条件下肺微血管通透性的变化。方法：采用尾悬为模拟失重，分为悬吊7d和21d及对照4组，每组10只健康雄性SD大鼠，共40只大鼠。用肺泡毛细血管对异硫氰酸荧光素钠标记的右旋糖苷通透性指数表示肺泡毛细血管通透性并对其进行了测定，并采用免疫组织化学技术检测肺组织的血管通透因子的改变情况。结果：7d悬吊组模拟失重大鼠肺微血管通透性指数显著增大（P＜0．01），且21d悬吊组模拟失重大鼠肺微血通透性指数仍较大（P＜0．05），但同7d悬吊组相比增大程度已明显降低；7d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织血管通透因子的表达水平明显高于正常对照组（P＜0．05），且21d悬吊组模拟失重大鼠肺组织血管通透因子的表达水平仍较高（P＜0．05），但增高程度已明显低于7d悬吊组。结论：在模拟失重条件下肺组织微血管通透性增高，并且随着时间延长增高程度会有所降低。     

γ-氨基丁酸受体基因转染对癫痫大鼠海马缝隙连接蛋白43表达的影响

目的： 探讨下丘脑乳头体上核内转染γ-氨基丁酸(GABA)受体基因对海人藻酸(KA)致痫大鼠海马区缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响。 方法：将24只Wistar雄性大鼠分为4组：正常对照组（n=2）、手术对照组（n=2）、KA对照组（n=10）及GABA受体基因转染组（n=10），正常对照组未经任何处置，手术对照组在右侧杏仁核注射生理盐水1 μL，KA对照组在杏仁核注射KA 1 μL（1　μg），GABA受体基因转染组则在KA注射前48 h预先将GABA 受体mRNA 400 nL (40 ng)注射到下丘脑的乳头体上核。采用原位杂交法观察4组大鼠各个时程（3 h、6 h、24 h、3 d、7 d）海马区形态及CX43阳性细胞数变化。 结果：正常对照组和手术对照组大鼠海马神经元结构完整；KA对照组海马神经元肿胀变性，其程度随时间延长而加重；GABA受体基因转染组海马神经元变性坏死程度相对于KA对照组减轻。CX43表达阳性细胞数定量分析显示，正常及手术对照组CX43表达阳性细胞数较少，KA对照组随时间延长CX43阳性表达细胞数逐渐增多， GABA受体基因转染组大鼠CX43阳性表达细胞数在各个时程均比KA对照组减少。 结论: 下丘脑内转染GABA受体基因可以下调海马区CX43的表达。     

模拟失重大鼠心肌细胞I_(Ca)对β-受体激动剂的反应性

目的　研究模拟失重大鼠心肌细胞钙电流 (ICa)对β-肾上腺素受体激动剂的反应性变化 .方法　用尾部悬吊大鼠模型模拟失重 (4 wk) ,胶原酶分离心肌细胞 ,用膜片钳全细胞方式记录单个心肌细胞的膜电容和 ICa等 .给予β-肾上腺素受体激动剂 (异丙肾上腺素 ) ,记录观察 ICa的反应性 .结果　对照组与悬吊组的 ICa密度无明显差别 (P>0 .0 5 ) ,ICa电流密度 -电压曲线基本一致 ;加入异丙肾上腺素后 ,两组 ICa密度均明显增大 ,但是两组的增加幅度不同 ,悬吊组的增加幅度 (84.3± 8.2 ) %明显小于对照组 (10 9.3± 7.9) % (P<0 .0 5 ) .结论　模拟失重 4wk大鼠心肌细胞的 ICa密度无明显改变 ;模拟失重后心肌细胞 ICa对 β-肾上腺素受体激动剂的反应性降低     

模拟失重对肺组织iNOS表达的影响及地塞米松的防治作用

目的 研究尾悬吊模拟失重大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的变化及地塞米松对这一变化的影响.方法 采用尾悬吊模拟失重,分为悬吊7、21 d及相应对照组和地塞米松干预组,每组10只,共50只大鼠.采用免疫组织化学技术检测肺组织iNOS的表达情况,采用原位杂交技术检测肺组织iNOSmRNA的表达情况,并观察应用地塞米松干预后肺组织iNOS的表达情况.结果 同对照组相比,7 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOS的表达水平明显增高(P＜0.05),21 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOS的表达水平亦显著增高(P＜0.05),同时血管内皮阳性细胞数目显著增多(P＜0.01).7 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平明显增高(P＜0.01),21 d尾悬吊模拟失重大鼠肺组织iNOSmRNA的表达水平也显著增高(P＜0.01).地塞米松干预后大鼠肺组织iNOS的表达明显减低(P＜0.05).结论 模拟失重可使肺组织iNOS活性增强,这可能是模拟失重造成肺损伤的重要机制之一,地塞米松可用于抑制模拟失重时肺组织一氧化氮的产生过程.     

实验性大鼠脑出血细胞凋亡与Bcl-2和Bax表达关系的研究

目的 研究大鼠脑出血（ICH）后血肿周围细胞凋亡及其与凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的变化规律和关系.方法 90只SD大鼠随机分为正常对照组（n=10）,假手术组（n=40）,ICH组（n=40）.假手术组和ICH组又依术后12h、1d、2d、3d和7d各分为5个亚组.用胶原酶配合肝素诱导大鼠脑尾状核出血,末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记法（TdT-mediated-dUTP nick end labeling,TUNEL）观察不同时间点细胞凋亡的变化, SABC法观察Bcl-2和Bax蛋白在各时点表达的变化,免疫印迹（Western-blot）技术检测Bcl-2和Bax蛋白相对光密度比值,电镜观察细胞超微结构改变.结果 ①ICH组TUNEL阳性细胞12h可检测到,3d达高峰,7d仍有表达（P＜0.01）,阳性细胞主要见于血肿周围,多见神经元,有少量神经胶质细胞和血管内皮细胞;②ICH组Bcl-2和Bax蛋白免疫反应阳性细胞分别于出血2、3d达高峰,7d仍有表达,主要表达于血肿区及血肿周围、同侧及对侧皮层;多见神经元,少数为神经胶质细胞、吞噬细胞和中性粒细胞;③Western-blot 正常对照组和假手术组均可检测到Bcl-2、Bax蛋白,但相对光密度比值较小;ICH组Bcl-2相对光密度比值2d达最大值,Bax则3d达最大值,在7d仍明显高于正常对照组（P＜0.05）.结论 ICH后存在细胞凋亡;Bcl-2和Bax参与了ICH细胞凋亡;ICH组TUNEL阳性细胞7d仍可检测到,提示ICH后7d内进行抗凋亡治疗可以不同程度地阻止细胞凋亡的发生.     

糖尿病大鼠下颌下腺内瘦素和瘦素受体表达变化

目的观察糖尿病大鼠下颌下腺内瘦素和瘦素受体表达的变化.方法 SD雄性大鼠24只,随机分为实验组12只(4、12周各6只)及对照组12只.用链脲佐菌素复制糖尿病动物模型,分别于4、12周后测体重和血糖,应用HE和免疫组织化学SABC法,观察组织学变化并检测瘦素及其受体表达.结果与对照组比较,实验组腺实质趋于萎缩.对照组大鼠下颌下腺导管上皮细胞呈瘦素及瘦素受体免疫反应中等阳性,免疫反应物分布于细胞胞质内,细胞核和腺泡细胞呈阴性.4周糖尿病组瘦素及其受体免疫反应呈较强阳性;12周时呈强阳性.结论随糖尿病病程延长,大鼠下颌下腺组织发生退变且瘦素及其受体表达增强,为探讨瘦素变化在糖尿病发病机制中的作用及意义提供了形态学依据.     

肥胖大鼠胰腺组织中内源性大麻素受体1蛋白和mRNA的表达及定位

目的：检测大鼠胰腺B细胞中内源性大麻素受体1（CB1R）的定位,了解肥胖大鼠胰腺组织中CB1R表达的改变。方法：高脂饲料喂养雄性SD大鼠20周,制备肥胖大鼠模型（n=10）,并设正常对照组（n=10）。取2组大鼠胰腺,免疫组织化学法检测CB1R蛋白表达,原位杂交法检测CB1RmRNA表达,间接双重免疫荧光染色法检测胰岛B细胞CB1R的定位。结果：CB1R主要表达于胰岛B细胞;且肥胖组大鼠胰腺组织CB1R蛋白及mRNA表达均高于对照组（P均〈0.01）。结论：CB1R主要表达于胰岛的B细胞,且在肥胖时表达水平增加。     

N-乙酰半胱氨酸对尾悬吊模拟失重大鼠肺组织细胞凋亡的影响

目的:探讨N-乙酰半胱氨酸对尾悬吊大鼠肺组织细胞凋亡的影响.方法:采用尾悬吊大鼠模拟失重模型,将健康雄性SD大鼠分为尾悬吊组(尾悬吊 7 d 模拟失重)、N-乙酰半胱氨酸干预组(尾悬吊第3天开始腹腔注射N-乙酰半胱氨酸 200 mg/kg,共 5 d)和正常对照组,每组10只,用原位细胞凋亡检测技术检测肺组织细胞凋亡情况,并采用原位杂交技术检测肺组织bcl-2/baxmRNA的表达情况.结果:尾悬吊组凋亡指数显著高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05), N-乙酰半胱氨酸干预后细胞凋亡指数明显低于尾悬吊组,差异有统计学意义(P＜0.05).肺组织bcl-2/baxmRNA的表达也有相应的变化.结论:尾悬吊模拟失重的大鼠肺组织细胞凋亡水平增高,而N-乙酰半胱氨酸可抑制模拟失重大鼠肺组织细胞的凋亡.     

缺血后处理对再灌注损伤大鼠胃黏膜细胞ERK表达的影响

目的探讨缺血后处理（ischemic post-conditioning,I-postC）对大鼠胃黏膜再灌注（GI-R）损伤的影响及细胞机制。方法制备胃缺血后处理模型。实验分为3组（n=6）：假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I-R组）、缺血后处理组（I-postC组）。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记法（TUNEL）检测胃黏膜细胞的凋亡,用免疫组化方法检测胃黏膜细胞增殖及凋亡相关基因p-ERK的表达。结果与Sham组相比,I-R组胃黏膜细胞凋亡增加及增殖减少,p-ERK表达下调;与I-R组相比,缺血后处理显著降低胃黏膜细胞凋亡率,同时可以增加胃黏膜增殖率及p-ERK的表达。结论缺血后处理可抑制胃黏膜细胞凋亡,促进细胞增殖。其机制可能与p-ERK的表达上调有关。     

野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠血清中瘦素和肺组织中瘦素受体的表达及意义

目的 探讨瘦素及其受体(OB-R)在野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压(PAH)发生、发展中的意义.方法 15只SD大鼠被分为对照组(n=5)和两个实验组(n=10).实验组经腹腔注射MCT建立大鼠PAH模型,对照组注射相同剂量的溶媒.两个实验组大鼠在注射MCT后分别于第2、4周抽取静脉血测量平均肺动脉压及右心肥厚指数,随后取出肺组织,观察肺血管的病理学变化,ELISA检测血清瘦素的表达,Western blot检测肺组织中OB-R的表达情况.结果 与对照组相比,实验组大鼠的平均肺动脉压和右心肥厚指数明显升高(P＜0.05);血清中瘦素及肺组织中OB-R的表达水平明显增加(P＜0.05),且与平均肺动脉压呈正相关(r=0.912,P＜0.05;r=0.861,P＜0.05).结论 瘦素及OB-R可能在MCT诱导PAH的发生、发展中起重要作用.     

Influence of catgut implantation at acupoints on leptin and insulin resistance in simple obesity rats

OBJECTIVES:To investigate the influence of catgut implantation at acupoints on leptin resistance(LR) and insulin resistance(IR) in the simple obesity rat.METHODS:Rats were made obese with high-fat diets,after which surgical catgut was implanted at Zusanli(ST 36) and Neiting(ST 44) acupoints once a week for 4 weeks(implantation group).Rats from the implantation group were compared with normal rats and unoperated obese rats(control group).Gene expression of the leptin receptor(OB-R) was evaluated using RT-PCR and northern blot.Serum and hypothalamus leptin and insulin(INS) levels were determined by radioimmunoassay.Body weight,Lee’s index,body fat,serum and hypothalamus leptin and INS levels,and hypothalamic OB-R gene expression were determined before and after treatment.RESULTS:Body weights,Lee’s index,body fat,and serum leptin and INS levels were significantly higher in obese than in normal rats.Hypothalamic leptin and INS levels and OB-R gene expression were significantly lower in obese rats.Catgut implantation at acupoint promoted weight loss and decreased serum leptin and INS levels.Hypothalamic leptin and INS levels and OB-R gene expression increased significantly.CONCLUSIONS:Catgut implantation at acupoint adjusts central and peripheral leptin and promotes hypothalamic OB-R gene expression.This may be an important method for regulation of LR,IR and abnormal endocrinology and metabolism.     

益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征大鼠瘦素及其受体和IGF-IR表达的影响

目的:观察益肾导痰调冲汤对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠瘦素及其受体和胰岛素样生长因子I受体(IGF-IR)表达的影响。方法:SD大鼠,采用"T+HCG"造模法建立PCOS大鼠模型。随机分为正常对照组、空白模型组、益肾导痰调冲汤等效剂量组(以下简称中药组)、西药达英-35组、达英加中药组、桂枝茯苓丸组各10只。观察卵巢组织形态学改变;放射免疫法测定血清内分泌水平;ELISA法测定瘦素(Lep);免疫组化法测定卵巢组织瘦素受体(OB-R)及IGF-IR表达。结果:益肾导痰调冲汤可改善PCOS大鼠卵巢组织结构,缩小卵巢体积,减少囊状卵泡及闭锁卵泡数目。降低LH、LH/FSH、T、Lep,增高E2水平,降低OB-R、IGF-IR阳性表达(P<0.05或P<0.01)。结论:益肾导痰调冲汤可改善PCOS大鼠lep与OB-R的结合障碍,调节OB-R、IGF-IR的生物利用度,从而改善PCOS大鼠的高雄激素血症及排卵障碍。     

重组瘦素治疗对链脲佐菌素糖尿病大鼠胃促生长素水平的影响

目的：探讨重组瘦素治疗对链脲佐菌素（STZ）糖尿病大鼠血浆胃促生长素水平及胃壁组织mRNA表达水平的影响。方法：SPF级近交系雄性健康Wistar大鼠分为正常对照组(NC, n=8)、糖尿病组（DM, n=6）、糖尿病瘦素治疗组(DM-LEP, n=6)和糖尿病瘦素治疗饮食配对组(DM-PF, n=6)。瘦素按4mg/kg皮下注射。观察治疗前后各组大鼠进食量、体重及血糖、胰岛素、瘦素、胃促生长素水平以及瘦素在脂肪组织和胃促生长素在胃壁组织的mRNA表达水平。结果：瘦素治疗后,DM-LEP组大鼠摄食量显著低于DM组(P＜0.05),血糖水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05）,但与NC组比较,仍有显著差异（P＜0.01）;DM-LEP组和DM组及DM-PF组相比,血清瘦素水平及其脂肪组织表达水平均显著升高（P均＜0.05）,但仍低于NC组（P＜0.05）;DM-LEP组血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA表达水平显著低于DM组和DM-PF组（P均＜0.05）,但仍高于NC组（P＜0.05）。结论：瘦素可降低STZ大鼠血浆胃促生长素及其胃壁组织mRNA的表达水平,且此作用与其抑制摄食作用无关。     

外周血单个核细胞内长型和短型瘦素受体的表达

目的探讨肥胖者和正常体重者外周血单个核细胞内长型瘦素受体（OB-RL）和最短的膜结合瘦素受体（OB-Rs）的表达。方法从30例肥胖者（体重指数〉25kg／m^2）和20名正常体重者（体重指数〈23kg／m^2）中获取单个核细胞,利用TRIzoL等分离试剂提取细胞内的总RNA。应用RT-PCR定量研究OB-Rs和OB-RL的表达水平,用放免法检测受试者血清中瘦素的水平。结果在所有受试者中都存在OB-Rs表达;38例受试者存在OB-RL表达,12例肥胖的受试者（BMI〉39kg／m^2）不存在OB-RL mRNA表达。所有受试者的OB-RS表达均高于OB-RL至少4倍以上,无男女差别。肥胖者OB-Rs和OB-RL表达水平比正常体重均显著下降,血清瘦素水平显著升高（6．08ng／ml or 31．21ng／ml）。瘦素受体表达水平与体重指数及血清瘦素水平之间存在显著的负相关。结论外周血单个核细胞内存在OB-Rs和OB-RL的表达,无性别差异,并且OB-Rs具有显著的优势性。     

转染leptin的胎盘间充质干细胞对放射损伤复合创伤愈合的促进作用

目的：探讨瘦素（leptin）和人胎盘间充质干细胞（HPMSCs）对大鼠背部放射损伤复合创伤（放创复合伤）皮瓣愈合的促进作用,阐明其在放创复合伤愈合过程中的协同作用。方法：将30只雄性Wistar大鼠随机分为转染leptin的HPMSCs组（n=10）、转染空载体的HPMSCs组（n=10）和空白对照组（n=10）。建立放创复合伤大鼠模型,放疗后24 h各组大鼠局部皮下注射转染leptin的HPMSCs、转染空载体的HPMSCs以及生理盐水,观察各组大鼠皮瓣颜色、皮纹、质地、温度、毛发生长、渗出、坏死范围及针刺出血情况;检测各组大鼠皮瓣成活率;HE染色观察各组大鼠皮瓣组织形态表现;免疫组织化学法检测大鼠皮瓣中leptin和血管性血友病因子（vWF）的表达情况。结果：给药后第7天,各组大鼠皮瓣成活与坏死界限基本清楚,坏死区域皮瓣质地坚硬,成活区域皮瓣颜色红润,皮纹模糊,质地中等,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣坏死面积均小于空白对照组。给药后第7天,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于转染空载体的HPMSCs组和空白对照组（P<0.05）,转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于空白对照组（P<0.05）。给药后第14天,HE染色检测,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣肉芽组织最为丰富,新生毛细血管和成纤维细胞最多。给药后第14天,免疫组织化学染色,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体HPMSCs组大鼠皮瓣真皮下方可见大量的黄染颗粒（阳性表达）,转染leptin的HPMSCs组胞浆中阳性表达的leptin细胞最多。结论：在局部微环境作用下,HPMSCs可以分化为血管内皮细胞,促进新生血管的形成,HPMSCs与leptin可协同促进放创复合伤皮瓣的愈合,HPMSCs携带目的基因或单独应用均可明显提高放创复合伤皮瓣的成活率,但转染leptin的HPMSCs作用力更强。     

瘦素及其受体系统在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达

目的:探讨瘦素(leptin)及其受体(Ob-Rb)在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达规律,以明确其在胚泡着床过程中的可能作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测小鼠胚泡着床过程中子宫内膜leptin及其受体(Ob-Rb)的表达.结果:leptin在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P＞0.05);Ob-Rb在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异(P＜0.01),且在孕期第4天表达水平最高,在5到7天仍然维持在一定水平.结论:瘦素及其受体(Ob-Rb)可能在胚泡着床过程中发挥作用,同时也可能参与着床后胚胎的生长发育.     

胃溃疡患者血液中瘦素、神经肽Y检测的意义

目的 探讨胃溃疡患者血液中瘦素与神经肽Y（NPY）的变化及其在发病中的作用。方法 用放射免疫法检测48例胃溃疡溃疡组和79例健康体检者（癌素正常对照组和NPY正常对照组）血液中瘦素和NPY的浓度。结果 胃溃疡组和正常对照组的瘦素和体脂呈正相关（P=0．678，P=0．000；P=0．557，P=0．000），但瘦素和NPY间无相关性（P=0．009，P=0．951）。胃溃疡组瘦素、NPY水平显著低于瘦素正常对照组及NPY正常对照组（P=0．000；P=0．005）。结论 瘦素、NPY可能参与了胃溃疡的发病。     

胃溃疡愈合前后黏膜中瘦素的表达及其意义

目的探讨瘦素(Leptin)在胃溃疡的发生及愈合中的作用机制.方法采用免疫组织化学ABC法,对30例胃溃疡患者愈合前后胃黏膜组织中瘦素的表达水平及其分布进行检测.结果治疗前30例活动性胃溃疡患者胃黏膜组织中瘦素的表达水平为0.7548±0.041 6(以平均吸光度A值表示),与治疗后(A值为0.211 5±0.016 2)相比明显增高(P＜0.01).镜下,瘦素主要表达于胃黏膜上皮细胞和胃腺上皮细胞胞质内.结论瘦素促进溃疡周边黏膜上皮及胃腺上皮细胞的增殖,对溃疡的愈合起促进作用.