腺病毒介导生长抑素2型受体对裸鼠人胰腺癌移植瘤抑制作用的研究

目的构建表达生长抑素2型受体(SSTR2)的重组腺病毒,探讨其对裸鼠人胰腺癌移植瘤生长的影响及机制。方法2004-06-01—2005-12-10,在暨南大学生物工程学系采用位点特异性重组方法构建和包装携带人生长抑素2型受体和报告基因LacZ的重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ。建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型,分别于瘤内注射生理盐水(阴性对照组)、Ad-LacZ(报告基因对照组)和Ad-SSTR2(实验组),观察肿瘤大小和重量变化。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)鉴定SSTR2在裸鼠肿瘤组织中的表达,Western blot测定信号传导通路蛋白ERK2和ras的表达情况。结果获得滴度分别为6.0×1012pfu/L和6.5×1012pfu/L的重组腺病毒Ad-SSTR2和Ad-LacZ。Ad-SSTR2转染裸鼠胰腺癌移植瘤后SSTR2 mRNA和蛋白都得到有效表达,实验组对移植瘤生长具有明显的抑制作用,抑制率为48.2%。与阴性对照组和报告基因对照组相比,实验组ERK2和ras蛋白的表达量明显减少(P<0.01)。结论腺病毒介导的生长抑素2型受体对裸鼠人胰腺癌移植瘤的生长具有抑制作用,其作用机制可能与信号传导通路蛋白ERK2和ras的表达下调有关,提示其有可能成为胰腺癌基因治疗的一种有效方法。     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的 应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌帝组织之间差异的蛋白质.方法利用双向凝胶电泳(2-DE)对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达.结果 鉴定出30个差异表达蛋白,包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3 sigma、Annexin Ⅱ、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶(NDPD)等.差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77.1%,而配对癌旁组织为28.6%.结论 2-DE为基础的蛋白质学技术是研究肿瘤的一种重要手段.NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物.     

核苷二磷酸激酶等蛋白在人胰腺癌与癌旁组织中的差异表达

目的应用比较蛋白质组学方法研究人胰腺导管腺癌组织和癌旁组织之间差异表达的蛋白质。方法利用双向凝胶电泳（2-DE）对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离，两组间差异蛋白质点用质谱和数据库检索鉴定。利用蛋白质印迹分析和免疫组织化学法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达。结果鉴定出30个差异表达蛋白，包括亲环素A、过氧化氧化还原蛋白1、14-3-3sigma、AnnexinII、热休克蛋白27、核苷二磷酸激酶（NDPK）等。差异表达蛋白NDPK在35例胰腺癌组织表达率为77．1％，而配对癌旁组织为28．6％。结论2-DE为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段。NDPK等差异表达蛋白可能是潜在的胰腺癌诊断标记物。     

生长抑素受体2转染胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的探讨生长抑素受体2(SSTR2)对胰腺癌恶性行为的影响。方法利用原先已构建的腺病毒载体Adv-GFP-SST2R将人SSTR2全长cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC3中,用RT-PCR检测SSTR2mRNA表达。通过肿瘤细胞与基膜成分黏附能力测定、运动能力测定、明胶酶谱法观察转染前后细胞的生物学特性的改变。结果转染Adv-GFP-SST2R的PC3细胞表达SST2RmRNA。SSTR2转染胰腺癌PC3细胞后,胰腺癌细胞与基质的黏附性、运动性下降,明胶酶的分泌能力明显减弱。结论SSTR2转染可明显减轻胰腺癌的恶性行为。     

生长抑素受体2转染胰腺癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨生长抑素受体2(SSTR2)对胰腺癌恶性行为的影响.方法 利用原先已构建的腺病毒载体Adv-GFP-SST2R将人SSTR2全长cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC3中,用RT-PCR检测SSTR2 mRNA表达.通过肿瘤细胞与基膜成分黏附能力测定、运动能力测定、明胶酶谱法观察转染前后细胞的生物学特性的改变.结果 转染Adv-GFP-SST2R的PC3细胞表达SST2R mRNA.SSTR2转染胰腺癌PC3细胞后,胰腺癌细胞与基质的黏附性、运动性下降,明胶酶的分泌能力明显减弱.结论 SSTR2转染可明显减轻胰腺癌的恶性行为.     

生长抑素及其受体基因在胃粘膜癌变过程中的表达

0 引言生长抑素通过其受体对胃肠道粘膜起着十分重要的生理调节作用,生长抑素及其受体基因表达的异常与肿瘤的发生有     

胃癌组织中生长抑素Ⅱ型受体基因低表达与淋巴结转移

目的　恶性肿瘤的发生和转移机制尚未完全明确，我们旨在研究胃癌癌灶（Ｃ） 、癌旁组织（Ｐ） 和远处正常组织（ Ｎ） 生长抑素（ＳＳ） 含量及其Ⅱ型受体（ＳＳＲ Ⅱ） 基因的表达情况，及其与腹腔淋巴结转移的关系，探讨ＳＳ 及ＳＳＲⅡ在胃癌发生、发展和转移中的作用．方法　外科手术切除的胃癌标本３６ 例，分为２ 组：腹腔淋巴结转移组（Ａ 组）２０ 例，男１７ 例，女３ 例，年龄５８－４ 岁±１４－８ 岁；Ｂ 组（ 无淋巴结转移）１６ 例，男１４ 例，女２ 例，年龄６０－５ 岁±１４－２ 岁． 大体标本离体后立即取癌灶、癌旁和远处正常组织，应用ＲＩＡ 法检测其ＳＳ 含量、同位素掺入ＲＴＰＣＲ 法检测ＳＳＲⅡ基因表达情况（ 以ｃｐ ｍ 高低间接反映基因的表达强弱） ．结果　Ａ，Ｂ 两组的年龄和性别分布无显著性差异（ Ｐ＞ ０－０５） ．癌灶ＳＳ 含量明显低于癌旁和正常粘膜（ Ｐ＜ ０－０５） ，但Ａ，Ｂ 两组间的差异无统计学差异（ｐ ｍｏｌ／ ｇ ，Ａ 组：Ｃ １５ ±８ ，Ｐ３０ ±８ ， Ｎ３２ ±１１ ；Ｂ 组：Ｃ １６ ±９ ， Ｐ３２ ±１０ ， Ｎ ３６ ±１２） ．Ａ 组癌灶ＳＳＲⅡ基因表达明显低于癌旁和远处粘膜（ Ｐ＜ ０－０１） ，也低于Ｂ 组癌灶的ＳＳＲⅡ的表达（     

蛋白组学分析胰腺癌干细胞相关差异蛋白的表达

目的:筛选与鉴定胰腺癌干细胞相关的差异表达蛋白质.方法:以MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)为研究胰腺癌干细胞的工具细胞,采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选上述细胞差异表达蛋白,反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白,免疫印迹验证差异表达的TRIM28.结果:获得了MIA-PaCa2(TIChigh)与BxPc-3(TIClow)荧光差异蛋白表达图谱,经DeCyder v6.5软件分析,共有23个差异在1.5倍以上的蛋白质点,经质谱鉴定得到19个蛋白质,相对于BxPc-3(TIClow),在MIA-PaCa2(TIChigh)细胞组中高表达者有8个,低表达者有11个,包括参与细胞通讯和信号传导蛋白、免疫反应蛋白、转录因子与细胞周期调控蛋白、调节脂肪细胞分化和脂滴形成蛋白、细胞骨架蛋白、细胞黏附分子、差向异构酶、转运活性蛋白及参与翻译调节相关蛋白.免疫印迹结果显示TRIM28在BxPc-3(TIClow)没有表达,在MIA-PaCa2(TIChigh)高表达.结论:筛选得到的TRIM28等胰腺癌干细胞相关差异表达蛋白可能与胰腺癌干细胞的发生、发展和调控机制相关,有望成为胰腺癌新的治疗靶点.     

^99Tc^m—Sandostatin生长抑素受体显像在胰腺癌诊断中的应用

目的探讨^99Tc^m-Sandostatin生长抑素受体显像用于胰腺癌诊断中的价值。方法荷瘤裸鼠静脉注射^99Tc^m-Sandostatin 37 MBq,分别于2、4和6h行生长抑素受体显像。用感兴趣区（ROI）技术获得肿瘤与对侧正常组织的放射性比值（T／NT）。最后一次显像完成后处死裸鼠,取血样及心、肝、脾、肺、肾、胃、瘤体对侧正常肌肉组织,计算每克组织放射性计数及T／NT比值。结果静脉注射^99Tc^m-Sandostatin后2h肿瘤即显影,其组织放射性在4～6h时达高峰,此时肿瘤显影十分清晰。肿瘤的放射性摄取明显高于除肾脏外的正常组织,与肌肉、血液、胃、脾脏、心脏、肺脏、肝脏的T／NT比值均值分别为7．59、5．39、3．91、3．21、2．96、2．57及1．17。结论^99Tc^m-Sandostatin生长抑素受体显像用于胰腺癌的早期诊断效果好。     

肝癌生长抑素受体mRNA表达的研究

生长抑素（SST）是一种广泛存在于人体内分泌系统中环状的多肽类激素，近来SST及其类似物对肝癌诊断及治疗方面的作用正日益受到关注，其多种生物活性的发挥是通过靶细胞膜上的特异性受体介导的。本实验应用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）检测原发性及转移性肝癌癌组织、癌旁组织、非癌肝组织、人肝癌细胞株HepG2及人肝细胞QSG-7701中生长抑素受体（SSTR）五种亚型mRNA的表达情况。     

沉默SIRT1基因表达对胰腺癌细胞PANC1增殖和凋亡的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默胰腺癌PANC1细胞的SIRT1基因表达,观察其对细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建靶向SIRT1基因表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达质粒pGC-shRNA,转染胰腺癌细胞PANC1.设对照shRNA(shRNA-C)转染组和未转染对照组.实时定量PCR和免疫细胞化学法检测转染后细胞SIRT1 mRNA及蛋白的表达;MTT法检测细胞的增殖率;ELASA法检测细胞caspase-3和caspase-9活性;Western bloting检测细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与未转染组相比,shRNA组转染后48 h,PANC1细胞SIRT1 mRNA及蛋白表达的抑制率分别为(76.2%±10.4)%和(80.1±11.6)%;细胞增殖抑制率为(45.1±6.5)%;caspase-3和caspase-9酶活性显著增高;Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调.结论 应用RNA干扰技术能有效沉默PANC1细胞SIRT1基因的表达,其机制可能与caspasa酶活性升高及Bax表达上调、Bcl-2表达下调有关.     

TFPI-2基因体外诱导胰腺癌Panc-1细胞的凋亡

目的: 将TFPI-2基因转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, 研究其对胰腺癌细胞凋亡的影响.方法:将重组质粒pEGFP-C1-TFPI-2通过脂质体介导转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, G418筛选获得阳性细胞克隆后, 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测转染细胞中TFPI-2 mRNA及相应蛋白的表达, 同时测定转染细胞的生长曲线和凋亡情况. 结果: 同转染空载体及未转染细胞相比, 转染成功的Panc-1细胞可以检测到TFPI-2 mRNA和相应蛋白的表达, 细胞生长受到抑制(n = 9, P = 0.02), DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的"梯状"条带.结论:外源性TFPI-2基因能够抑制胰腺癌细胞生长增殖、诱导胰腺癌细胞凋亡.     

体外转染PTEN对胰腺癌细胞增殖能力的影响

目的选择PTEN低表达胰腺癌细胞系,探讨体外转染PTEN对该细胞系的影响。方法将PTEN转染到PTEN低表达胰腺癌细胞系,应用RTPCR、免疫组化、克隆形成率及观察裸鼠移植瘤生长等方法检测PTEN对胰腺癌细胞系的影响。结果PTEN在ASPC1细胞呈低表达,ASPC1、ApE、ApEP细胞PTENmRNA表达量和克隆形成率分别为203%、150%、568%和333%、317%、240%;ASPC1细胞转染后PTEN蛋白表达水平升高,血管内皮生长因子蛋白下降,表皮生长因子受体蛋白无明显变化;5周时转染前后荷瘤裸鼠瘤结节体积分别为2027mm3和1424mm3,差异有统计学意义(P<001)。结论PTEN低表达ASPC1细胞系经转染PTEN后细胞增殖活性及裸鼠致瘤能力明显降低。     

健择对胰腺癌细胞株蛋白质表达的影响

目的观察健择致胰腺癌细胞株蛋白质变化的影响,寻找一些在化疗过程中出现的蛋白质,为临床治疗提供理论依据.方法利用蛋白质组学技术,分析胰腺癌细胞株SW-1990在加入健择和5-FU后其蛋白质谱的变化,最后鉴定其差异表达的蛋白质.结果培养细胞受抑制约50%时,健择为1～100 ng/ml,5-FU为250～2 500 ng/ml.质谱鉴定了9个差异表达的蛋白质,其中对照组3个,加药组6个.结论健择对细胞株的作用明显优于5-FU.β-肌动蛋白、MGC:19713等某些高表达的蛋白质可能成为观察化疗效果的重要指标.     

Effects of ezrin silencing on pancreatic cancer cell line Panc-1

Objective To explore the effects of ezrin silencing on pancreatic cancer cell line Panc-1. Methods Pancre-atic cancer cell line Panc-1 was transfected with ezrin silencing plasmid. The proliferation and the cell cycle status were determined by CCK-8 assay and flow cytometry     

HDAC1基因沉默对人胰腺癌细胞PaTu8988细胞周期的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶1( HDAC1)基因沉默对人胰腺癌PaTu8988细胞周期影响及可能机制.方法 常规培养胰腺癌PaTu8988细胞,分为对照组、阴性siRNA转染(c-siRNA)组及15、30 nmol/L HDAC1 siRNA转染组.采用脂质体2000转染细胞48 h后,应用蛋白质印迹法检测细胞HDAC1基因沉默效率及p21基因表达;流式细胞法检测细胞周期的变化.结果 与对照组比较,30 nmol/L HDAC1 siRNA组PaTu8988细胞的HDAC1蛋白表达明显下降,P21蛋白表达明显增加;G2/M 期细胞比例显著减少[(21.48±3.67)％比(28.28±2.94)％,P＜0.05],S期细胞比例显著增加[(50.20±6.85)％比(32.49±2.78)％,P＜0.05].结论 HDACl siRNA能特异、有效地抑制人胰腺癌PaTu8988细胞HDACl的表达,引起细胞S期阻滞,其机制可能与上调p21蛋白表达有关.     

miR-101在胰腺癌组织中的表达以及对胰腺癌细胞ASPC-1增殖的影响

目的 观察miR-101在胰腺癌组织中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响.方法 采用实时定量PCR方法 检测miR-101在胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中的表达.通过基因重组技术构建miR-101的表达载体peGFPc1-miR-101,应用脂质体将其转染到ASPC-1细胞,荧光显微镜检测转染效率;实时定量PCR检测转染细胞miR-101的表达水平,以癌旁正常胰腺组织为1,折算成相对倍数;MTT法检测转染细胞的增殖率.利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因.结果 miR-101在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中相对表达量分别为55%和39%,较癌旁正常胰腺组织显著降低(P＜0.01).peGFPc1-miR-101转染ASPC-1细胞后,miR-101表达增加,为对照组的19.8倍(P＜0.01),癌细胞增殖率明显降低,最低仅为原代细胞的26%(P＜0.01).EZH2基因是miR-101影响胰腺癌细胞增殖活力的可能靶基因.结论胰腺癌组织miR-101低表达,它可能通过抑制EZH2的表达调控细胞的增殖.     

乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染对胰腺癌AsPC1细胞增殖、转移的影响

目的 观察乏氧环境下PTEN和KAI1基因双转染人胰腺癌AsPC1细胞后对其增殖、迁移的影响.方法 应用我们前期构建的PTEN和KAI1基因过表达载体同时转染乏氧环境培养的人胰腺癌AsPC1细胞,采用蛋白质印迹法检测PTEN和KAI1蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,克隆形成实验观察肿瘤细胞形成集落能力,Transwell小室实验观察细胞的迁移能力.结果 双基因转染后,乏氧培养的AsPC1细胞的PTEN、KAI1蛋白表达量较空载体转染组细胞增加2.05倍及1.51倍;细胞增殖显著减缓(0.5比0.8,P=0.000);克隆形成数显著下降[(41.67±5.03)个比(86.00±7.81)个,P=0.017)];细胞迁移能力明显减弱(0.68±0.05比1.23±0.03,P=0.003).结论 乏氧条件下PTEN、KAI1基因双转染AsPC1细胞后能够抑制其增殖、迁移能力,基因联合治疗胰腺癌可能具有潜在的应用价值.     

基质细胞衍生因子/趋化因子受体4轴参与胰腺癌细胞侵袭的体外实验研究

目的 探讨胰腺癌细胞株趋化因子受体(CXCR)4的表达及其与增殖、侵袭和粘附的关系.方法 采用RT-PCR检测3个胰腺癌细胞株中CXCR4 mRNA的表达;Western印迹法检测胰腺癌细胞株中CXCR4的蛋白表达;共聚焦显微镜检测基质细胞衍生因子(SDF)-1α作用下AsPC-1细胞内钙荧光强度变化;MTT法检测细胞增殖;细胞体外粘附试验及Transwell体外侵袭实验观察胰腺癌细胞的粘附及侵袭能力.结果 3个胰腺癌细胞株均不同程度地存在CXCR4 mRNA及蛋白表达,AsPC-1细胞表达最强,而SW1990表达最弱;CXCR4功能性表达于AsPC-1细胞;SDF-1α不同程度的促进3种胰腺癌细胞的增殖、侵袭及粘附,尤以AsPC-1细胞最为明显,而SW1990细胞最弱;AMD3100可抑制SDF-1α所致的促增殖、侵袭及粘附作用.结论 胰腺癌细胞表达CXCR4mRNA及蛋白,SDF-1α通过与CXCR4作用影响胰腺癌细胞的侵袭转移,该效应与CXCR4表达程度密切相关.