基质细胞衍生因子/趋化因子受体4轴参与胰腺癌细胞侵袭的体外实验研究

目的 探讨胰腺癌细胞株趋化因子受体(CXCR)4的表达及其与增殖、侵袭和粘附的关系.方法 采用RT-PCR检测3个胰腺癌细胞株中CXCR4 mRNA的表达;Western印迹法检测胰腺癌细胞株中CXCR4的蛋白表达;共聚焦显微镜检测基质细胞衍生因子(SDF)-1α作用下AsPC-1细胞内钙荧光强度变化;MTT法检测细胞增殖;细胞体外粘附试验及Transwell体外侵袭实验观察胰腺癌细胞的粘附及侵袭能力.结果 3个胰腺癌细胞株均不同程度地存在CXCR4 mRNA及蛋白表达,AsPC-1细胞表达最强,而SW1990表达最弱;CXCR4功能性表达于AsPC-1细胞;SDF-1α不同程度的促进3种胰腺癌细胞的增殖、侵袭及粘附,尤以AsPC-1细胞最为明显,而SW1990细胞最弱;AMD3100可抑制SDF-1α所致的促增殖、侵袭及粘附作用.结论 胰腺癌细胞表达CXCR4mRNA及蛋白,SDF-1α通过与CXCR4作用影响胰腺癌细胞的侵袭转移,该效应与CXCR4表达程度密切相关.     

运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其临床意义

目的 探讨运动相关蛋白Fascin在胰腺癌的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用RT-PCR法检测SW1990、Patu8988、BxPC3、CfPAC1 4株胰腺癌细胞株Fascin mRNA表达;采用免疫组化方法 检测54例胰腺癌及42例相应癌旁胰腺组织Fascin蛋白表达.结果 胰腺癌细胞株SW1990、Patu8988、CfPAC1有Fascin mRNA表达,BxPC3无表达;54例胰腺癌组织Fascin蛋白表达阳性35例,占64.8%,42例癌旁胰腺组织中均无阳性表达.Fascin蛋白表达与肿瘤分化程度(P<0.01)和淋巴转移(P<0.05)呈显著正相关,但与肿瘤大小及远处转移无相关性(P>0.05).结论 Fascin蛋白在胰腺癌组织中有较高的阳性表达率,检测其表达有助于胰腺癌的诊断,并有助于判断胰腺癌恶性程度.     

五株胰腺癌细胞株的 PTCH 和 SMO mRNA 表达

目的 研究胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988s、PANC-1、BxPC3、CFPAC中PTCH和SMO mRNA表达及相关关系.方法 用RT-PCR法测定5株胰腺癌细胞株和正常胰腺组织的PTCH和 SMO mRNA表达.结果 正常胰腺组织无PTCH和SMO mRNA表达;胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988s、PANC-1、BxPC3有PTCH mRNA的表达;胰腺癌细胞株PaTu8988s、PANC-1、BxPC3有SMO mRNA表达,而SW1990无SMO mRNA表达;胰腺癌细胞株CFPAC无PTCH及SMO mRNA表达.结论 正常胰腺组织无PTCH和 SMO mRNA表达;胰腺癌细胞株PTCH和SMO mRNA表达有差异,这可能与其生物学特性不同有关.     

胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达

目的 分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况.方法 应用RT-PCR检测Oct-4 mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Western blot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素 (FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率.结果 4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白.88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4 mRNA和Oct-4 蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关.Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%.结论 Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞.     

胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌的表达

目的分析胚胎干细胞标志物Oct-4在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达状况。方法应用RT-PCR检测Oct-4mRNA在25例胰腺癌组织以及胰腺癌细胞株SW1990、PC3、JF305和BxPC3中的表达;应用Westernblot法检测胰腺癌组织及胰腺癌细胞株中Oct-4蛋白表达;应用异硫氰荧光素(FITC)标记的流式细胞仪分选法检测Oct-4在胰腺癌细胞株中的表达率。结果4株胰腺癌细胞株均表达Oct-4mRNA和Oct-4蛋白。88%(22/25)胰腺癌组织高表达Oct-4mRNA和Oct-4蛋白,其表达率与胰腺癌的分化程度无关。Oct-4在SW1990的表达率为50.21%、BxPC3为68.53%、PC3为66.27%、JF305为67.61%。结论Oct-4异常表达可能与胰腺癌始发有关,胰腺癌可能来源于胰腺干细胞。     

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌的表达研究

目的 研究人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)及其表达产物eEF1A2蛋白在人胰腺癌细胞株和组织标本中的表达.方法 收集人胰腺导管腺癌病理标本15例,人正常胰腺组织标本8例.运用RT-PCR、Realtime-PCR、Western blot以及免疫组化等技术检测人胰腺癌细胞株SW1990、BxPC3、PaTu8988和胰腺癌组织标本中EEF1A2的表达水平.结果 人胰腺腺癌细胞株PaTu8988、SW1990和BxPC3中,EEF1A2 mRNA和eEF1A2蛋白表达水平与正常胰腺组织相比,均明显上调.8例癌旁正常胰腺组织标本中仅1例胰腺导管细胞内eEF1A2呈弱阳性表达,而15例胰腺导管腺癌病理标本中,胰腺导管腺癌细胞内eEF1A2均呈中至强阳性表达,两者比较有显著差异(P ＜ 0.05).结论 EEF1A2在胰腺癌中呈异常高表达.EEF1A2的致癌机制可能与加速蛋白质翻译速度、抑制凋亡以及改变细胞骨架有关.EEF1A2有可能成为胰腺癌一个有效的诊断标志物和基因治疗靶点.     

胰腺癌的基因不稳定性

目的分析胰腺癌细胞和组织的基因不稳定性. 方法应用RAPD方法7种引物扩增4株胰腺癌细胞株BxPC-3、AsPC-1、SW1990和PaTu8988,3例手术切除胰腺癌及其癌旁组织,1例正常胰腺组织的DNA片段.结果PaTu8988与SW1990扩增的DNA片段类型基本一致,但与BxPC-3、AsPC-1的类型不同;胰腺癌和癌旁组织扩增的DNA类型多数相同,少数存在差异,但与正常胰腺组织及胰腺癌细胞株不同.结论胰腺癌组织中存在着基因不稳定性,这是造成肿瘤异质性的基础.     

趋化因子CXCL4L1及其受体CXCR3在胰腺癌转移中的作用机制

目的观察CXC趋化因子配体(CXCL)4L1及其受体CXCR3在胰腺癌中的表达,并探讨二者在胰腺癌转移中的作用。方法 RT-PCR检测CXCL4和CXCL4L1胰腺腺癌细胞BxPC3和胰腺导管癌细胞Panc-1中的mRNA水平,免疫荧光检测CXCL4L1在BxPC3细胞和经成肌纤维细胞共培养的BxPC3细胞中的表达,CXCR3在BxPC3和Panc-1细胞中的表达。免疫组化检测CXCL4L1及其受体CXCR3在胰腺腺癌组织和肺转移的组织中的表达。结果 CXCL4在胰腺腺癌细胞BxPC3和胰腺导管癌细胞Panc-1中均有表达,但差异无统计学意义(P0.05),且CXCL4L1在胰腺导管癌细胞Panc-1中mRNA相对表达量显著高于胰腺腺癌细胞BxPC3(P0.05);CXCL4L1的相对荧光表达量在BxPC3与成肌纤维细胞共培养时显著高于单独BxPC3细胞培养时的相对荧光表达量(P0.05);CXCR3在胰腺导管癌细胞Panc-1的相对荧光表达量显著高于胰腺腺癌细胞BxPC3(P0.05);免疫组化检测结果显示,CXCL4L1在肺转移的胰腺导管癌组织中的阳性表达显著高于胰腺导管癌原发肿瘤组织,CXCR3在肺转移组织中的阳性表达显著高于胰腺导管癌原发肿瘤组织(均P0.05)。结论趋化因子CXCL4L1和CXCR3受体在胰腺癌肺转移的组织中高表达,其可能对胰腺癌的转移具有促进作用。     

12-脂氧合酶在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测胰腺癌组织和胰腺癌细胞株SW1990和PANC1的12-脂氧合酶(12-lipooxygenase,12-LOX)表达,探讨其与胰腺癌临床病理参数的关系.方法 分别应用免疫组化染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测胰腺癌组织、癌旁正常胰腺组织及胰腺癌细胞株SW1990和PANC1中12-LOX mRNA和蛋白的表达.分析胰腺癌组织12-LOX表达与临床病理参数的相关性.结果 30例胰腺癌组织12-LOX表达阴性8例,弱阳性7例,强阳性15例,总阳性率为73.3％.SW1990和PANC1细胞均表达12-LOX.阳性表达的胰腺癌组织及两株胰腺癌细胞株均表达12-LOX mRNA,而癌旁正常胰腺组织不表达12-LOX mRNA及蛋白.胰腺癌组织12-LOX强阳性表达与肿瘤TNM分期、肿瘤病理分级和淋巴结转移相关(P＜0.05),而与患者年龄、性别无关.结论 12-LOX在胰腺癌中表达上调,与胰腺癌的恶性生物学行为有关.     

胰腺癌的基因不稳定性

目的 分析胰腺癌细胞和组织的基因不稳定性。方法 应用RAPD方法7种引物扩增4株胰腺癌细胞株BxPC-3、AsPC-1、SW1990和PaTu8988，3例手术切除胰腺癌及其癌旁组织，1例正常胰腺组织的DNA片段。结果 PaTu8988与SW1990扩增的DNA片段类型基本一致，但与BxPC-3、AsPC-1的类型不同；胰腺癌和癌旁组织扩增的DNA类型多数相同，少数存在差异，但与正常胰腺组织及胰腺癌细胞株不同。结论 胰腺癌组织中存在着基因不稳定性，这是造成肿瘤异质性的基础。     

Pancreatic Stellate Cells Increase the Invasion of Human Pancreatic Cancer Cells through the Stromal Cell-Derived Factor-1/CXCR4 Axis

Aim: Both pancreatic stellate cells (PSCs) and the stromal cell-derived factor-1(SDF-1)/CXCR4 receptor ligand system have important roles in pancreatic cancer progression. This study set out to detect if PSCs express SDF-1 and promote the invasion of pancreatic cancer through the SDF-1/CXCR4 receptor ligand axis. Methods: RT-PCR was performed to detect the expression of SDF-1 and CXCR4 in PSCs, pancreatic cancer lines and cancer tissue samples. ELISA was used to investigate the concentration of SDF-1 in PSC supernatants. An MTT assay was applied to detect the proliferation of pancreatic cancer cells. A transwell chamber migration assay was employed to detect the migration of AsPC-1 cells. An in vitro invasion assay was used to detect the invasion of AsPC-1 cells. Results: CXCR4 expression was detected in PSCs; AsPC-1, SW1990 and BxPC-3 cancer cells; and cancer tissues. SDF-1 was detected in PSCs and cancer tissues, but not in AsPC-1, SW1990 and BxPC-3 cells. SDF-1α protein was found in PSC supernatants. PSC-conditioned media can promote the proliferation, migration and invasion of pancreatic cancer cells. SDF-1 neutralizing antibody or AMD3100 can significantly inhibit these promotive effects. Conclusion: PSCs can secrete SDF-1 and increase the invasion of pancreatic cancer cells through the SDF-1/CXCR4 axis.     

Expression of fibroblast activation protein in human pancreatic adenocarcinoma and its clinicopathological significance

AIM: To examine fibroblast activation protein (FAP) expression in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) and to analyze its relationship with the clinicopathology of PDAC.METHODS: FAP expression was examined in 134 PDAC specimens by immunohistochemistry, and in four pancreatic cancer cell lines (SW1990, Miapaca-2, AsPC-1 and BxPC-3) by Western blotting assay. We also analyzed the association between FAP expression in PDAC cells and the clinicopathology of PDAC patients.RESULTS: The results showed that the FAP was ex-pressed in both stromal fibroblast cells (98/134, 73.1%) and carcinoma cells (102/134, 76.1%). All 4 pancreatic cancer cell lines expressed FAP protein at different levels. Protein bands corresponding to the proteolytically active 170-kDa seprase dimer and its 88-kDa seprase subunit were identified. Higher FAP expression in carcinoma cells was associated with tumor size (P < 0.001), fibrotic focus (P = 0.003), perineural invasion (P = 0.009) and worse clinical outcome (P = 0.0085).CONCLUSION: FAP is highly expressed in carcinoma cells and fibroblasts in PDAC tissues, and its expression is associated with desmoplasia and worse prognosis.     

CXCR4/SDF-1 axis is involved in lymph node metastasis of gastric carcinoma

AIM:To investigate the role of CXC chemokine receptor-4 (CXCR4) and stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) in lymph node metastasis of gastric carcinoma.METHODS:In 40 cases of gastric cancer,expression of CXCR4 mRNA in cancer and normal mucous membrane and SDF-1 mRNA in lymph nodes around the stomach was detected using quantitative polymerase chain reaction (PCR) (TaqMan) and immunohistochemistric assay.SGC-7901 and MGC80-3 cancer cells were used to investigate the effect of SDF-1 on cell proliferation and m...     

SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义

目的检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用。方法收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达。结果6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P<0.01)。SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性。结论胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件。     

SDF-1、CXCR4在三阴性乳腺癌组织中的表达及其与患者预后的相关性

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及基质细胞衍生因子受体-4（CXCR4）在三阴性乳腺癌（TNBC）组织中的表达和临床意义。方法用免疫组化法检测77例TNBC组织中SDF-1和CXCR4的表达,分析SDF-1和CXCR4与TNBC临床病理特征及患者预后的关系。结果 SDF-1和CXCR4在TNBC中高表达率分别为41.6%、64.9%,且二者表达呈显著正相关（P=0.041）;SDF-1和CXCR4高表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期及组织学分级不相关（P〉0.05）,与淋巴结转移及无瘤生存呈显著正相关;多因素分析结果表明：SDF-1是TNBC患者无瘤生存的独立预后因素（OR=2.318,95%CI=1.028～5.230）。生存分析显示SDF-1和CXCR4高表达者无瘤生存时间短于低表达者（P均〈0.05）。结论 TNBC中SDF-1/CXCR4表达可作为判断TNBC预后的重要生物学指标。     

Stromal heterogeneity in pancreatic cancer and chronic pancreatitis

Background/objectives

An abundant stromal reaction is a hallmark of pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) and chronic pancreatitis (CP). The cells mainly responsible for the stromal reaction are activated pancreatic stellate cells (PSCs). Despite their crucial role, PSCs are not well characterized. PSCs share characteristics with the better-known hepatic stellate cells (HSCs). The aim of this study was a detailed analysis of PSCs in PDAC and CP.