金黄色葡萄球菌毒素基因的检测及临床应用

目的:了解医院获得性金黄色葡萄球菌(HA-SA)和社区获得性金黄色葡萄球菌(CA-SA)所携带肠毒素、表皮剥脱性毒素(ETs)、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)及杀白细胞素基因(PVL)的特点. 方法:应用PCR法检测肠毒素A、B、C、D、E基因,ETs A、B基因,TSST-1以及PVL. 结果:116株金黄色葡萄球菌中,85株为HA-SA,检出肠毒素A基因6株,肠毒素C基因1株,肠毒素D基因1株,PVL2株;31株为社区获得性金黄色葡萄球菌,检出肠毒素A基因1株,肠毒素B基因1株,肠毒素D基因1株,PVL7株;所有菌株均未检测到肠毒素E、ETs A、B和TSST-1基因. CA-SA PVL检出率显著高于HA-SA,两者比较差异有统计学意义(P＜0.005),而肠毒素、ETs和TSST-1基因检出率比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:金黄色葡萄球菌可分泌多种毒素,在分离金黄色葡萄球菌的同时,应注意其毒素检测.     

银屑病、异位性皮炎、红斑患者和健康对照者中的葡萄球菌毒素

背景:金黄色葡萄球菌超抗原在异位性皮炎(AD)加重中的作用已明确,但在银屑病(PS)中的作用尚未得到证实。目的:作者研究了金黄色葡萄球菌在AD、寻常型PS、红斑、皮肤感染和脓毒症患者及健康对照者的皮肤及鼻孔上的分布。采用葡萄球菌肠毒素反向被动乳胶凝聚(SET-RPLAR)试验检测葡萄球菌肠毒素A、葡萄球菌肠毒素B、葡萄球菌肠毒素C和葡萄球菌肠毒素D。结果:25例AD患者中22例和25例PS患者中15例的皮损培养出金黄色葡萄球菌。44%的AD和36%的PS患者分离出产毒株。分别根据异位性皮炎的严重程度计分(SCORAD)或银屑病皮损面积和严重…     

食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其毒素检测

目的了解食品中金黄色葡萄球菌污染状况、产肠毒素特性及耐药性,为制定HACCP(Hazard Analysis andCritical Control Point,危害分析与关键控制点)防止由金黄色葡萄球菌引起的食源性疾病及临床用药提供依据。方法从各大商场超市、农贸市场、酒店饭店等销售的食品中随机采集6类不同品种食品共361份,按照GB/T 4789.10-2008的方法进行金黄色葡萄球菌检测,并对检出的金黄色葡萄球菌阳性菌株进行产肠毒素检验及药敏试验。结果 361份样品共检出金黄色葡萄球菌22株,检出率6.09%,其中豆制品检出率最高(30.0%),其次为凉拌食品(10.4%),膨化食品及婴幼儿食品未检出。采自农贸市场的食品金黄色葡萄球菌检出率最高(11.1%)。由于资源有限,只对其中13株阳性菌株检测肠毒素,6株检出肠毒素,产毒力为46.15%;6株含肠毒素金黄色葡萄球菌对苯唑西林、青霉素G、阿莫西林、红霉素、阿奇霉素产生耐药性,表现出多种耐药谱。结论食品中金黄色葡萄球菌有一定的污染,尤其在豆制品、凉拌食品中比较严重;食源性金黄色葡萄球菌产肠毒素能力较强;食品中金黄色葡萄球菌对多种药物耐药,临床治疗应建立在体外药敏试验基础上,有针对性选择抗菌药物。     

PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素型别比较

目的比较PCR和反相被动乳胶凝集（RPLA）法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型的效果。方法对9株金黄色葡萄球菌分别用PCR和RPLA法检测金黄色葡萄球菌肠毒素A～D型，并以标准株作对照质控。结果两种方法的检测结果一致，9株金黄色葡萄球菌中有4株检出肠毒素A型，均未检出肠毒素B、C和D型。结论PCR法较适合基层实验室应用于检测金黄色葡萄球菌肠毒素。     

一起食物中毒的金黄色葡萄球菌肠毒素检测

目的 对一起食物中毒样品进行致病菌检测,准确分析食物中毒原因,为食物中毒的处理提供依据.方法 依据《食品卫生微生物学检验》国家标准GB4789.10-2010、GB 14938-94《食物中毒诊断标准及技术处理总则》和WS/T80-1996《葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则》方法对采集的12份食物中毒样品进行病原菌金黄色葡萄球菌检测;应用荧光定量PCR法对检出的金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测.结果 在12份样品中检出5株金黄色葡萄球菌,分别来自患者呕吐物4份,砧板棉拭子1份,全部检出A型肠毒素,未检出其他病原菌.金黄色葡萄球菌总检出率为41.7％.结论 金黄色葡萄球菌A型肠毒素是此次食物中毒的病原体.实时荧光PCR快速检测方法适用于金黄色葡萄球菌肠毒素的基因分型.     

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测和耐药性分析

目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)产肠毒素(SE)的情况及耐药现状。方法对从临床标本中分离出的260株SA,用反向间接血凝试验检测其肠毒素,按2005年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准,用K-B法对260株SA进行药物敏感性试验,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测分别用检测头孢西丁及乳胶凝集检测PBP2a方法进行。结果260株SA中有172株携带肠毒素,占66.2%,主要为SEA型10.8%(28/260)、SEB型14.6%(38/260)、SEC型10.0%(26/260),同时携带二种或二种以上肠毒素的占23.8%(62/260);其中MRSA134株,全部携带肠毒素,且以SEA、SEB和SEC为主,分别为19.4%、16.4%和13.4%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)126株,携带肠毒素率为30.0%(38/126),以SEB为主,占9.5%。用头孢西丁及检测PBP2a的方法检测MRSA,检出率无显著意义(P>0.05);SA对临床常用的抗菌素除万古霉素及替考拉宁较敏感(100.0%敏感),其它的抗菌素存在多重耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强。结论临床分离的SA株大部分都携带肠毒素,MRSA的带毒率及耐药性均高于MSSA;临床应重视SA肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌素。     

金黄色葡萄球菌食物中毒病原检测及方法比较

目的:可疑金黄色葡萄球菌食物中毒事件病原学检测,传统的分离培养与荧光PCR检测方法的方法比较。方法:本实验采用国家标准方法对食物中毒标本进行金黄色葡萄球菌分离培养,并对食物中毒标本及分离的阳性菌株作肠毒素定性测定;用荧光PCR(FQ-PCR)方法对可疑食品及患者呕吐物标本进行金黄色葡萄球菌快速检测。结果:用国标方法,9份呕吐物标本中7份分离出金黄色葡萄球菌,阳性率77.78%,荧光PCR快速法检测相同标本,9份呕吐物均呈阳性,阳性率100%,食品卤香干检出金黄色葡萄球菌,8个阳性菌株C型肠毒素检出率100%。结论:该中毒确诊为金黄色葡萄球菌C型肠毒素中毒,中毒食品为卤香干。荧光PCR检测法快速、灵敏,尤其适用于药后患者标本及已加热杀菌的可疑中毒食品的检测,作为初筛、辅助诊断手段,在食物中毒病原检测中值得广泛推广。     

金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因的检测

[摘要]目的 检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法 根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果 在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为90.5%、6.9%、61.3%、5.2%和25.9%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株（67.2%）,以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%,7.8%,13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论 金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。     

一起食物中毒中金黄色葡萄球菌的分子特征分析

目的利用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术对一起食物中毒中检出的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)进行分子分型,了解毒株的肠毒素类型,为金葡菌的分子溯源研究提供实验室数据。方法 mini VIDAS全自动荧光酶标免疫测试仪检测样品中葡萄球菌肠毒素。按照GB 4789.10-2010对样品进行菌株分离和生化鉴定,应用MLST方法对分离出的金葡菌进行基因分型,酶联免疫吸附法对分离株进行葡萄球菌肠毒素分型。结果分别从病人的呕吐物、食堂师傅手涂抹物、厨房刀涂抹物中检出金葡菌,呕吐物中检出葡萄球菌肠毒素;可疑食物中未检出金葡菌,葡萄球菌肠毒素为阴性。中毒毒株MLST分析得到4个ST序列型,ST5、ST15、ST59和ST338,其中ST5型金葡菌产肠毒素C、肠毒素D和肠毒素E; ST15型菌产肠毒素E; ST59型和ST338型菌产肠毒素B和肠毒素C。结论此食物中毒由不同MLST型别的金葡菌引起,毒株产葡萄球菌肠毒素的类别也不同。     

食源性金黄色葡萄球菌肠毒素及耐药性分析

目的了解乌鲁木齐市日常食品中分离出的金黄色葡萄球菌的肠毒素分布情况以及耐药性特征。方法金黄色葡萄球菌的分离以及肠毒素的鉴定依据国标GB 4789.10-2010《食品卫生微生物检验金黄色葡萄球菌检验》进行,利用法国梅里埃全自动微生物生化鉴定系统(VITEK2–compact)对菌株进行生化鉴定和药敏试验。同时对分离出的阳性菌株进行肠毒素测定及分型。结果 2013-2014年检测乌鲁木齐市日常食品样品6类823份,检测出38株金黄色葡萄球菌。通过对金黄色葡萄球菌肠毒素分型,共有12株产生肠毒素,携带率为31.6%。对阳性菌株进行耐药性分析,其中对万古霉素和头孢噻肟敏感,敏感率为100.0%;对青霉素的耐药程度较高,耐药率为71.1%;对诺氟沙星、氧氟沙星、甲氧苄啶敏感性较高,对其他几种抗生素都有不同程度的耐药。结论乌鲁木齐市食品中存在金黄色葡萄球菌潜在的危害,主要来源于肉制品;金黄色葡萄球菌的产毒能力较强,且耐药性较强,应合理用药。     

慢性鼻-鼻窦炎中金黄色葡萄球菌肠毒素基因研究

目的检测国人慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱,探讨与国人慢性鼻-鼻窦炎发病相关的金黄色葡萄球菌肠毒素基因类型。方法本实验取国人慢性鼻-鼻窦炎不伴鼻息肉组、慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉组及鼻中隔偏曲组患者中鼻道黏膜拭子进行金黄色葡萄球菌分离培养鉴定,通过PCR技术检测实验组每例患者金黄色葡萄球菌样本18种肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果 3组患者金黄色葡萄球菌肠毒素基因均有较高的阳性检出率,但差异无统计学意义;3组患者阳性检出例数均较高的几种肠毒素基因为:seg、sem、sen、sei、seo、seu;金黄色葡萄球菌肠毒素基因seq在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者中有16例阳性检出,而对照组无阳性检出,差异有统计学意义。结论金黄色葡萄球菌肠毒素seg、sem、sen、sei、seo、seu可能在慢性鼻-鼻窦炎的发病中起主要作用,肠毒素seq与慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病的关系还有待进一步深入研究。     

反向间接血凝试验对120株金黄色葡萄球菌产肠毒素分型的实验研究

近些年来,对金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素所致疾病越来越引起了国内外学者的重视。但有关葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒,其毒素的快速检测和分型国内报道甚少。本文采用反向间接血凝试验对来自武汉市的120 株血浆凝固酶阳性金葡菌产肠毒素的情况进行了初步探讨。     

SPA协同凝集试验检测肠产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素的研究

本文报道应用葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验检测55株产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素,结果与Y-1细胞培养法基本一致。此外,以血平板上培养菌用多粘菌素及三硝基甲苯溶解制备不耐热肠毒素,用协同凝集试验进行检测,结果较其它测毒方法敏感、特异、简单、经济、是一种检测不耐热肠毒素(LT)可行的方法,特别适用于基层的实验室。     

一起由金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌引发食物中毒病原分析

目的 通过一起疑似葡萄球菌引发食物中毒进行葡萄球菌肠毒素检测,并结合检测出致病性葡萄球菌病原学分析,为下一步食物中毒处置提供诊断依据。方法 根据流行病学调查和国家标准《食品微生物学检验》GB4789,对可疑食物及患者呕吐物、肛拭子等进行了几种常见致病原菌分离培养,并直接采用实时荧光PCR方法对金黄色葡萄球菌肠毒素A~E基因进行分型,用全自动微生物鉴定分析仪进行系统生化鉴定,并做血浆凝固酶试验。结果 在食用剩余汉堡中分离出1株金黄色葡萄球菌、2名患者肛拭子中分离出2株金黄色葡萄球菌,1名患者呕吐物中分离1株血浆凝固酶阴性路邓葡萄球菌,利用PCR方法分别对其进行了肠毒素基因分型,结果显示,食用剩余汉堡中1株和2株患者肛拭子的金黄色葡萄球菌肠毒素均为SEA型,为同一型;1株患者呕吐物的路邓葡萄球菌的肠毒素为SEC型。 结论 该起食物中毒主要是由金黄色葡萄球菌产生SEA型肠毒素所导致,血浆凝固阴性路邓葡萄球菌跟金黄色葡萄球菌一样,也能产生肠毒素同样具有致病性作用,提示路邓葡萄球菌不单纯只是人类皮肤共生菌,或许还跟金黄色葡萄球菌同样具有侵袭性、产肠毒素等致病性,在进行公共卫生流行调查诊断时不能被忽视。     

广州地区奶类抗生素残留和金黄色葡萄球菌污染调查

目的为了解广州地区奶类抗生素残留和金黄色葡萄球菌污染状况。方法 2006-2009年期间,采用随机抽样方法分别对我市十个区以及两个地级市共计302份奶类样品进行了抗生素残留、金黄色葡萄球菌以及葡萄球菌肠毒素的检测。金黄色葡萄球菌的检测按照国标GB4789.10进行;抗生素残留和葡萄球菌肠毒素的检测则依照试剂盒的要求进行。结果 302份样品,其中有62份检测到有抗生素残留,阳性率为20.53%;奶粉类为高,29.51%;纯奶类次之,为22.67%。通过对各年份的相互比较,抗生素残留的检出呈逐年上升的趋势。随机抽取的42份奶制品均未检出金黄色葡萄球菌,肠毒素检测阴性;10份生奶有7份检出金黄色葡萄球菌,其中5份肠毒素检测呈阳性。结论广州地区的奶制品存在较高的抗生素残留的不安全因素,生奶类检出抗生素残留、金黄色葡萄球菌及其肠毒素等的情况说明奶源存在污染。因此,监督部门必需更进一步规范生牛奶供应市场,加强对奶制品的抗生素残留的监控,以维护广大人民的身体健康。     

鼻窦源性葡萄球菌肠毒素B在溃疡性结肠炎发病中的作用

目的研究鼻窦源性葡萄球菌肠毒素B在溃疡性结肠炎发病中的作用。方法选择32例同时患有慢性鼻窦炎和溃疡性结肠炎病例,另选10例没有患慢性鼻窦炎的溃疡性结肠炎病人作为对照,20例健康志愿者作正常对照组,所有病例进行病变程度计分(0~4分,0分为无症状,4分为疾病严重)。回收上颌窦冲洗液,进行鼻内镜手术,做血清葡萄球菌肠毒素B特异性IgEI、L-4I、L-5I、L-13和IFN-γ含量测定。结果经鼻内镜治疗后临床症状显著改善,29/32(90.6%)的病例慢性鼻窦炎临床症状计分降至0或1,21/32(65.6%)病例的溃疡性结肠炎临床症状计分为0或1,鼻内镜手术后Th1/Th2失平衡状态逆转,血清IL-4I、L-5I、L-13和IFN-γ含量均接近正常对照组(P<0.05)。术前上颌窦冲洗液中均检测到较高浓度的葡萄球菌肠毒素B[(154.6±18.6)pg/ml],血清中也检测到葡萄球菌肠毒素B特异性抗体,术后上颌窦冲洗液中葡萄球菌肠毒素B和血清抗葡萄球菌肠毒素B抗体含量比术前显著降低(P<0.05)。结论鼻窦源性葡萄球菌肠毒素B可能是溃疡性结肠炎的发病原因之一。     

一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的溯源

2006年9月，市区某小学发生了一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒，我们在常规培养的同时，对该起食物中毒进行了溯源检测。先运用小型VIDAS设备检测样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素，证实样品中有金黄色葡萄球菌肠毒素存在，进一步用PCR对其进行分型。结果在引发食物中毒的食品的生产厂家的两名工人咽拭子中分离检测到与病人同一型别的金黄色葡萄球菌肠毒素。由此对本次食物中毒的原因有了一个较圆满的解释。     

一起金黄色葡萄球菌食物中毒事件的检验分析

目的通过流行病学调查和实验室检测分析一起食物中毒原因,为食物中毒的应急处理提供依据。方法参照《食品卫生微生物学检验》国家标准(GB/T 4789-2003、GB 4789-2008、GB 4789-2010、GB 4789-2012适时版本)和WS/T 80-1996对所采集的食物中毒标本进行病原菌检测,并应用荧光定量PCR法对所分离的金黄色葡萄球菌进行肠毒素检测。结果 20份样品中检出5株金黄色葡萄球菌,5株菌均检出A型肠毒素,未检出其他病原菌。结论金黄色葡萄球菌A型肠毒素是引起此次食物中毒的主要原因。     

食物中毒金葡菌分离株产肠毒素、耐药性和PFGE分型

目的对2014-2015年广州市食物中毒检出的44株金黄色葡萄球菌进行肠毒素、耐药研究以及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,了解其产肠毒素、耐药特性以及同源性。方法依据GB4789.10-2010采用ELISA方法测定金黄色葡萄球菌肠毒素(SEA-SEE),利用VITEK 2 compact对菌株进行药敏试验,并对菌株进行PFGE分型研究。结果 44株金黄色葡萄球菌产肠毒素的有38株(86.4%),其中同时产两种及以上肠毒素型别的有13株(34.2%),产A型肠毒素的菌株最多,有34株(89.5%)。对青霉素(79.5%)、四环素(63.6%)、克林霉素(54.5%)、红霉素(52.3%)耐药率较高。PFGE分型显示菌株可以分为4个聚类、7个PFGE型别。结论食物中毒株产肠毒素能力较强,其对多种抗生素的耐药性提示安全用药的重要性,PFGE分型对广州市金黄色葡萄球菌食物中毒的防控及溯源有重要意义。     

一起由金黄色葡萄球菌及其肠毒素引发食物中毒的实验室检测与分析

目的查明引发食物中毒的致病菌,运用基因分型技术对致病菌进行溯源分析,为食物中毒诊断提供依据。方法采用食品安全国家GB 4789系列标准方法对致病菌进行分离、鉴定。金黄色葡萄球菌肠毒素分型检测采用酶联免疫吸附法(ELISA),肠毒素基因的检测采用实时荧光定量PCR的方法,利用脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)进行同源性分析,全自动药敏接种判读仪(AIM-Vizion)进行耐药分析。结果 4份标本中都检测出金黄色葡萄球菌,4株菌均产A型肠毒素,携带sea基因,剩余食物分离株与病人分离株PFGE带型相似性为93.8%,具有高度同源性,菌株对5种抗生素耐药。结论本次食物中毒由肠毒素A型的金黄色葡萄球菌所致,实时荧光定量PCR可以弥补传统ELISA的不足。PFGE可迅速锁定传染源。提醒相关部门要加大合作和监督力度,保障食品安全。