蛋白激酶C-α在兔自体移植静脉中的表达

目的观察蛋白激酶C-α（PKC-α）在兔自体静脉移植中的动态表达,探讨其与移植血管内膜增生的关系。方法采用兔自体颈静脉移植模型,25只新西兰大白兔随机分为5组,其中手术Ⅰ～Ⅳ组分别于术后3,7,14,28d取材,假手术组（SO组）作为对照组。应用Real-TimePCR法、WesternBlot法分别检测各组中PKC-dmRNA及其蛋白的表达变化;应用免疫组织化学法检测各组平滑肌细胞中PKC-α的表达。结果与对照组比较,PKC-αmRNA及其蛋白在术后3d时,表达均明显升高（P〈0．01）,而后逐渐降至正常。免疫组织化学检测PKC-α结果与Weatern蛋白印迹法一致。结论PKC-α可能参与了自体静脉移植后的血管平滑肌增生过程中的信号转导。     

PKC-α与热休克蛋白HSP70在兔自体静脉移植后的表达

目的 观察蛋白激酶C-α(PKC-α)与热休克蛋白HSP70在兔白体静脉移植中的表达的动态变化,探讨其与移植后血管内膜增生的可能关系.方法 采用兔自体颈静脉移植模型,25只新西兰大白兔随机分为5组,分别于术后3、7、14及28 d取材,应用Real-Time PCR法、免疫组织化学法分别检测各组中PKC-α、HSP70 mRNA与蛋白的表达变化.结果 PKC-α、HSP70 mRNA在术后3d时表达升高,而后渐降至正常,两者变化呈正相关(r=0.967,P<0.01),蛋白检测表达变化与其一致.结论 静脉移植后可能通过PKC-α信号传导通路使热休克蛋白HSP70表达升高,与促进血管平滑肌细胞增殖有关.     

脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠静脉桥血管内膜增生

目的 探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对自体移植静脉内膜增生的影响.方法 制作20 只自体颈部动脉上静脉移植SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10 只.移植前,实验组移植静脉行脂质体包裹的NF-κB decoy ODN溶液浸泡转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN溶液浸泡.移植术后4 周取出移植血管,利用病理学、凝胶电泳迁移率迟滞分析(EMSA)和RT-PCR 分别检测移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、血管组织NF-κB转录活性和TNF-α mRNA 表达情况.结果 实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、NF-κB转录活性、TNF-α mRNA 表达较对照组明显减小或减少(均P＜0.01).结论 NF-κB decoy ODN可有效抑制静脉桥血管NF-κB的激活从而抑制移植静脉内膜的增生.     

热休克蛋白HSP70在自体静脉移植中表达的动态变化

目的 观察热休克蛋白HSP70在免自体静脉移植中表达的动态变化,探讨其与移植血管内膜增生的关系.方法 采用兔自体颈静脉移植模型,25只新西兰大白兔随机分为5组,分别于术后3、7、14、28d取材,应用Real-Time PCK法、Western blot法分别检测各组中HSP70 mRNA与蛋白的表达变化.结果 HSP70mRNA在术后3 d时表达升高,而后渐降至正常.蛋白检测表达变化与其一致.结论 静脉移植后热休克蛋白HSP70表达升高,可能与血管平滑肌细胞增殖有关.     

核因子κB的小干扰RNA防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的 探讨核因子κB(NF-κB)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对大鼠自体静脉移植术后血管内膜增殖及相应炎性细胞因子表达的影响.方珐雄性Wistar大鼠80只,随机分为空白组(A组,n=10);自体静脉移植组(B组,n=18);空载体组(阴性质粒脂质体医用蛋白胶复合物转染移植静脉,C组,n=26)和基因转染组(NF-κB siRNA阳离子脂质体医用蛋白胶复合物转染自体移植静脉,D组,n=26).B、C及D组需制作大鼠自体颈外静脉--腹主动脉移植模型,每组4个时点(3,7,14,21 d),相应时间点取移植静脉观察病理形态学变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA),PCR测定单核细胞趋化因子(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA含量,Western blot测定NF-κB p65蛋白的表达.结果 自体静脉移植术后,B、C和D组移植静脉血管桥均出现内膜增生变厚,新生内膜有大量PCNA阳性细胞,中膜平滑肌细胞增生活跃.术后3 d,B组和C组MCP-1mRNA及TNF-αmRNA表达水平明显高于A组(P<0.05),但D组水平明显低于C组(P<0.05).术后7 d,B、C组NF-κB p65蛋白表达水平明显高于A组(P<0.05),与C组相比,D组NF-κB p65蛋白水平明显降低(P<0.05).结论 NF-κB的基因表达产物和MCP-1mRNA、TNF-αmRNA的表达有一定相关性,自体静脉移植术后新生内膜增生及炎性细胞因子表达在不同时相点呈动态变化.转染NF-κB siRNA阳离子脂质体复合物可抑制NF-κB的表达,减少MCP-1及TNF-αmRNA的表达,从而抑制移植静脉内膜增生和VSMC增殖,减轻再狭窄.     

细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达

目的 研究细胞周期相关因子Gli2在大鼠自体移植静脉中的表达变化及其与内膜增生的关系.方法 雄性Wistar大鼠36只,8周龄,体质量140 g.建立颈静脉-腹主动脉移植模型,分别于术后14 d、28 d各处死18只大鼠,取材移植血管,免疫荧光检测Gli2蛋白在移植血管新生内膜中的表达,Western印迹法观察Gli2及细胞增殖核抗原(PCNA)的表达,RT-PCR检测Gli2-mRNA的表达;以对侧颈静脉作为对照.结果 免疫组化结果显示,正常静脉、术后14 d和术后28 d移植静脉Gli2+细胞数比例分别为(3.2±0.4)%、(41.3±0.6)%和(58.3±0.6)%,正常静脉与移植静脉差异有统计学意义(P＜0.01).Western印迹法显示术后Gli2表达水平增加并与PCNA表达呈正相关(r=0.826,P＜0.01).RT-PCR结果显示术后14 d组和术后28 d组的Gli2 mRNA表达增加,分别为对照组含量的8.9和13.6倍.结论 自体静脉移植术后,Gli2在新生内膜中高表达并可能与细胞增殖相关.     

内皮型一氧化氮合酶基因转染在兔颈静脉移植血管桥中的表达

目的:研究腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因在兔自体移植颈静脉中的表达,寻找预防移植血管再狭窄的方法.方法:建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型,18只兔随机等分为3组,A:对照组,B:空载腺病毒液感染组,C:eNOS基因转染组.在兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术中,分别应用空载腺病毒液或AdCMVeNOS血管桥内注入法感染移植静脉1 h.术后4 wk,应用多聚寡核苷酸探针原位检测方法检测外源性基因mRNA的表达;免疫组织化学染色方法检测eNOS蛋白的定位;HE及弹力纤维染色后,应用计算机图像分析系统检测移植静脉内膜、中膜增生情况.结果:人内皮型一氧化氮合成酶基因在自体移植静脉中表达出相应的mRNA和蛋白质;术后4wk,与对照组相比,空载腺病毒液感染组移植静脉内膜和中膜厚度无明显变化;eNOS基因转染组移植静脉内膜和中膜厚度分别减少42.3%,13.5%,内膜厚度/中膜厚度比值(I/M)减少34.6%.结论:腺病毒载体介导的人内皮型一氧化氮合成酶基因成功转染兔自体移植颈静脉中并有效表达,eNOS基因具有防治移植静脉内膜增生作用.     

缬沙坦对自体移植静脉内膜Fas、FasL表达的影响

目的:观察缬沙坦对兔颈部自体移植静脉内膜增生、Fas、FasL表达的影响,探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)拮抗剂干预移植静脉再狭窄的作用和机制。方法:雄性新西兰大白兔20只行颈部自体静脉移植手术,对照组予普通饲料饲养,缬沙坦组予普通饲料 缬沙坦饲养,4周后取出静脉移植物行血管形态学检查,免疫组化方法检测Fas、FasL表达情况。结果:对比对照组,缬沙坦组移植静脉新生内膜厚度及面积明显减轻(P<0.01),Fas、FasL表达增加(P<0.05)。结论:缬沙坦可以显著抑制兔自体移植静脉新生内膜的形成,其机制与促进内膜Fas、FasL的表达、进而促进血管平滑肌细胞凋亡有关。     

兔颈静脉动脉化后血管的重塑机制

目的: 建立兔颈动脉静脉桥旁路移植模型,观察不同时期静脉桥病理改变及PCNA,α-actin表达和检测细胞凋亡,探讨移植静脉重塑机制. 方法: 家兔30只,将一侧颈总动脉与颈外静脉分别游离后,行颈总动脉与颈外静脉侧侧吻合,结扎颈外静脉两吻合口外侧及颈总动脉吻合口中部,使动脉血经颈外静脉桥通过,于术后不同时间段取静脉桥行HE及弹力纤维染色,定量分析血管壁内膜、中膜厚度,观察PCNA,α-actin表达和细胞凋亡情况. 结果: 30只家兔全部存活,静脉桥全部保持通畅;病理所见静脉桥血管壁增厚、血管内膜及中膜均明显增生,术后2～4 wk内膜增生达高峰,且厚度不均匀,中膜、内膜均有PCNA阳性表达,内膜出现α-actin阳性表达,术后1 wk血管内膜及中膜开始出现凋亡细胞,术后4 wk达高峰. 结论: 兔颈静脉动脉化后静脉血管管壁呈不均一性增厚,早期以血管内膜增生为主,中膜血管平滑肌细胞增殖并向内膜迁移,细胞凋亡可能参与血管桥重塑.     

自体血管移植后内膜增生与eNOS mRNA表达关系的实验研究

目的探讨自体血管移植后内膜增生的机制以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和内膜增生的关系。方法建立自体动脉静脉血管搭桥模型,分成静脉组、游离动脉组和非游离动脉组,分别于移植后1-10周切取移植段血管,进行组织形态学检查观察内膜增生情况,以及运用原位杂交分子生物学方法检测血管壁eNOS mRNA的表达。结果静脉组内膜增生最为明显,而非游离动脉组无明显内膜增生。同一时间点静脉组eNOS mRNA表达信号明显低于游离动脉组（6周内）（P〈0.01）,而非游离动脉组eNOS mRNA表达信号与正常血管无差别。静脉组和游离动脉组血管壁eNOS mRNA表达与血管搭桥后内膜增生显著相关。结论静脉桥eNOS mRNA表达比动脉桥弱是静脉桥内膜增生明显的重要机制。     

缺氧诱导因子1α与Gax基因对自体静脉移植术后内膜过度增生的调控机制

自体静脉移植术后内膜过度增生是影响术后效果的重要原因,缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与Gax基因可以抑制自体静脉移植术后内膜过度增生,可作为治疗移植静脉再狭窄的一个新手段,HIF-1α通过调控血管内皮生长因子的表达,对恢复血管内皮细胞的结构和功能起着重要的调节作用,而Gax基因通过影响细胞周期和诱导细胞凋亡两条途径来调节血管平滑肌细胞的增殖。     

核因子κB的小干扰RNA防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的   探讨核因子κB（NF-κB）的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA)对大鼠自体静脉移植术后血管内膜增殖及相应炎性细胞因子表达的影响。方法    雄性Wistar大鼠80只,随机分为空白组（A组,n=10）;自体静脉移植组（B组,n=18）;空载体组（阴性质粒脂质体医用蛋白胶复合物转染移植静脉,C组,n=26）和基因转染组（NF-κB siRNA阳离子脂质体医用蛋白胶复合物转染自体移植静脉,D组,n=26）。B、C及D组需制作大鼠自体颈外静脉——腹主动脉移植模型,每组4个时点( 3,7,14,21d),相应时间点取移植静脉观察病理形态学变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）,PCR测定单核细胞趋化因子（MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF α）的mRNA含量,Western blot测定NF-κB p65蛋白的表达。结果    自体静脉移植术后,B、C和D组移植静脉血管桥均出现内膜增生变厚,新生内膜有大量PCNA阳性细胞,中膜平滑肌细胞增生活跃。术后3d,B组和C组 MCP-1 mRNA及TNF-αmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）,但D组水平明显低于C组（P＜0.05）。术后7d,B、C组NF-κB p65蛋白表达水平明显高于A组（P＜0.05）,与C组相比,D组NF κB p65蛋白水平明显降低（P＜0.05）。结论     NF-κB的基因表达产物和MCP-1mRNA、TNF-αmRNA的表达有一定相关性,自体静脉移植术后新生内膜增生及炎性细胞因子表达在不同时相点呈动态变化。转染NF-κB siRNA阳离子脂质体复合物可抑制NF-κB的表达,减少MCP-1及TNF-αmRNA的表达,从而抑制移植静脉内膜增生和VSMC增殖,减轻再狭窄。     

人脐动脉的抗压力性及其用于兔血管移植的研究

目的探讨人脐动脉的耐压性能,观察辐照氟银脐动脉移植至中国白兔颈动脉后的内膜增生及ki-67的表达。方法液压扩张法检测脐动脉的耐压性能。30只中国白兔的左、右侧颈动脉同时分别植入辐照氟银脐动脉(实验组)和自体颈动脉(对照组),术后2、6周观察血管通畅情况,分别取材作组织形态学观察和免疫组织化学检测,观察血管内膜厚度及血管平滑肌细胞中ki-67的阳性表达。结果人脐动脉具有良好的耐压性能。移植术后2、6周2组兔移植血管内膜厚度比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验组兔血管平滑肌细胞中ki-67的表达较对照组高,但2组术后2、6周比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论人脐动脉从耐压性能上具备作为冠状动脉搭桥血管材料的基本条件。辐照氟银脐动脉的内膜增生与自体动脉无明显差异。     

大鼠自体移植静脉血管平滑肌细胞增殖与血浆内皮素变化关系的动态研究

目的 :研究自体静脉移植术后血浆内皮素 (ET)变化与移植静脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的关系。方法 :建立大鼠自体颈静脉移植于肾下腹主动脉动物模型 70只 ,于术后 3d～ 8周 ,采用放射免疫法检测血浆ET的变化 ,免疫组化法观察增殖细胞核抗原 (PCNA)在移植静脉VSMC中的表达和分布。结果 :术后 1～ 2周 ,血浆ET比术前明显增高 (P <0 .0 1) ;血浆ET与移植静脉VSMC增殖具有相关性 (r=0 .783,P <0 .0 1)。结论 :静脉移植术后测定血浆ET有助于反映移植静脉VSMC的增殖水平 ,为内膜增生的防治提供线索。     

自体骨髓单个核细胞移植促进移植静脉桥血管再内皮化及抑制内膜增生

目的:探讨自体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNCs)移植对自体静脉移植后静脉桥血管再内皮化及内膜增生的作用.方法:抽取成年兔骨髓分离制备BMMNCs,并用DAPI进行体外标记.将成年新西兰大白兔23只随机分为细胞移植组(n=13)和对照组(n=10)2组.取左颈外静脉4～5 cm,上下倒置后移植至颈总动脉,在建模后第3天将100 μl DAPI标记的BMMNCs液(6×108个细胞)经耳缘静脉注入细胞移植组动物体内,对照组注入等量的PBS液.细胞移植4周后处死动物,计算机图像分析系统测量并计算静脉移植段血管内皮的完整性及内膜厚度.结果:移植静脉血管内皮有DAPI标记的细胞;细胞移植后,细胞移植组移植血管内皮细胞覆盖程度明显高于对照组(P＜0.05),内膜厚度明显低于对照组(P＜0.05).结论:自体BMMNCs的移植可以促进移植静脉桥血管的再内皮化及抑制内膜的过度增生.     

联合转染eNOS基因和反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的：探讨联合转染eNOS基因和反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法：制作20只自体颈静脉腹主动脉移植Wistar大鼠模型，实验组、对照组各10只，实验组移植血管行腺病毒介导的eNOS溶液泡和反义ET核酸凝胶涂布，对照组仅行空载腺病毒溶液浸泡和凝胶涂布。要后2周取出植物血管，利用病理学、免疫组织化学、RT－PCR方法检测移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、内膜VSMC数及PCNA阳性表达、血管ETmRNA、eNOS、mRNA表达情况。结果：实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度及VSMC数均较对照组减小或减少，PCNA阳性表达及ETmRNA表达较对照组减少，而eNOSmRNA表达则明显增加。结论：联合传染eNOS基因和反义ET核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生，是一种有效的防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

左旋精氨酸对静脉移植保护作用的综合研究

目的:观察左旋精氨酸(L-Arg)对自体移植静脉内膜增生的影响,探讨其作用机制.方法:(1)动物实验:60只新西兰兔,随机分为左旋精氨酸实验组、生理盐水对照组.所有动物术日建立自体静脉旁路移植模型:于术后1、2、4、6周及8周取材,统计学分析各组间差异.(2)临床试验部分:将33例欲行非体外循环冠脉搭桥手术的患者随机分成两组,对照组给予常规血管保存液处理血管桥,观察组给予含L-Arg的血管保存液处理血管桥.结果:(1)移植4周后,各组静脉均有内膜及中膜较正常颈静脉明显增厚表现,左旋精氨酸组内膜及中膜增厚较对照组轻.两组静脉桥的管腔狭窄程度进行比较存在明显差异.(2)两组手术成功率无显著性差异(P＞0.05).观察组术后细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)、内皮素-1(ET-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)水平均较术前有明显降低(P＜0.05),且与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)兔静泳移植至股动脉后内膜及中膜增厚.(2)左旋精氨酸联合降脂药物能抑制移植静脉内膜及中膜增生,减少静泳桥狭窄.(3)含有左旋精氨酸的血管保护液可一定程度上改善血管内皮细胞的功能,从而延缓血管硬化,并有效控制病情进展.     

缺氧诱导因子-1α表达与移植静脉再内皮化关系的实验研究

目的　探讨缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)表达水平与移植静脉再内皮化的关系。方法　将6 0只Wistar大鼠随机分为实验组与对照组 ,前者行颈内静脉 颈总动脉移植术。于术后 7d与 14d切取移植静脉。分别采用反转录多聚酶链反应 (RT PCR)、Western印迹法、免疫组织化学及电镜等检测 ,观察HIF 1α和血管内皮生长因子 (VEGF)表达水平及再内皮化过程。结果　术后 7d与 14d相比较 ,移植静脉再内皮化显著 ;HIF 1αmRNA及其蛋白和VEGF蛋白表达增强 (P均 <0 0 1) ;增生内膜中HIF 1α阳性表达细胞增多。HIF 1α与VEGF表达呈正相关 (r=0 90 2 6 ,P <0 0 1)。结论HIF 1α与移植静脉内皮细胞增殖密切相关 ,其早期表达不足是引起内膜过度增生 (IH)的重要基因之一。     

大鼠自体血管搭桥后血管桥VEGF mRNA表达及意义

目的 :探讨搭桥后血管桥VEGFmRNA表达情况 ,为临床预防内膜增生及血管桥的选择提供理论依据 .方法 :建立大鼠自体血管移植模型 ,每组 80只 ,分成静脉组 (V组 ) ,游离动脉组 (A组 ) ,非游离动脉组 (nA组 ) ,分别于不同时间切取搭桥血管 .应用免疫组织化学和原位杂交方法进行指标检测 .结果 :V组织内膜增生比A组明显 ,V组VEGFmRNA及蛋白信号明显比A组弱 (2 8%vs 5 6 % ,P <0 .0 1 ) .结论 :自体血管移植后VEFGFmRNA表达异常 ;促进血管壁VEGFmRNA表达将有助于抑制内膜增生的发生     

联合转染p21基因及反义C-Fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

①目的　探讨联合转染p2 1基因及反义C Fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响 ,探索一种理想的预防血管再狭窄的基因疗法。②方法　选用 2 0只新西兰家兔 ,实验组 10只 ,对照组 10只 ,均行自体颈静脉、颈总动脉移植手术 ,实验组行腺病毒介导的p2 1cDNA溶液浸泡和反义C Fos寡聚核酸凝胶涂布 ;对照组仅行空载腺病毒溶液浸泡和凝胶涂布。术后 2周取出移植血管 ,分别检测移植血管内膜厚度、内膜平滑肌细胞数 (VSMC)及内膜平滑肌细胞增殖细胞抗原 (PCNA)阳性表达情况。③结果　实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、VSMC数及PCNA阳性表达情况较对照组均有明显差异 (t=2 8.30～ 38.5 2 ,P <0 .0 1)。④结论　联合转染p2 1基因及反义C Fos核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生 ,是一种有效防治移植静脉再狭窄的基因疗法。