无机活性元素组织工程支架材料重建修复山羊颌骨缺损的扫描电镜观察

目的:用扫描电镜观察无机活性元素组织工程支架材料构建的组织工程骨及其修复羊大面积颌骨缺损的体内成骨状况.方法:实验组对15只山羊下颌角缺损(30 mm×25 mm×10 mm大小)以支架材料修复,左侧为实验组,右侧为空白对照组,术后分别于1、3、6个月处死5只动物行扫描电镜及生物化学检查,观察无机活性元素组织工程支架材料体内成骨情况.结果:实验组骨缺损新生骨在1、3、6个月显著优于对照组,空白对照组6个月骨缺损区均无明显骨修复现象.结论:应用扫描电镜观察到无机活性元素组织工程支架材料具有优良的成骨效果.     

无机诱导因子支架材料诱导成骨区种植牙初步观察

目的：观察无机诱导因子支架材料修复颌骨缺损后,能否形成满足牙种植所需要的骨量和骨质。方法：以无机诱导因子支架材料修复颌骨缺损（2.2cm×1.5cm）,跟踪观察1年,在骨密度影与周围正常颌骨骨密度影接近后行牙种植体植入。种植体植入后3月观察骨组织结合情况。结果：种植体植入后3月,X线显示无机诱导因子支架材料与修复的骨组织结合良好,未见明显骨吸收现象。结论：应用无机诱导因子支架材料诱导骨形成区域,可行牙种植修复,为较大区域骨组织缺损患者术后植牙提供了一种可行的方法。     

生物活性组织工程材料在口腔颌面部骨修复中的应用研究进展

生物活性骨组织工程材料是通过特定加工工艺或功能化等手段获得的具有一定成骨活性的3D支架,其广泛用于骨损伤修复,并显示出良好的临床治疗效果.影响骨组织工程材料成骨诱导活性的物理化学信号主要有生物活性陶瓷、生物活性离子、材料结构和生物分子等.本文主要从这几个方面探讨不同因素及联合作用在口腔颌面骨修复中的应用及效果,重点讨论目前生物活性组织工程支架的构建策略及其在颌骨、牙槽骨和牙体硬组织缺损修复方面的应用,评述骨组织工程材料不同生物活性要素在骨损伤修复中的研究现状,为口腔颌面骨修复活性材料的研发提供参考依据.     

生物活性组织工程材料在口腔颌面部骨修复中的应用研究进展

生物活性骨组织工程材料是通过特定加工工艺或功能化等手段获得的具有一定成骨活性的3D支架,其广泛用于骨损伤修复,并显示出良好的临床治疗效果.影响骨组织工程材料成骨诱导活性的物理化学信号主要有生物活性陶瓷、生物活性离子、材料结构和生物分子等.本文主要从这几个方面探讨不同因素及联合作用在口腔颌面骨修复中的应用及效果,重点讨论目前生物活性组织工程支架的构建策略及其在颌骨、牙槽骨和牙体硬组织缺损修复方面的应用,评述骨组织工程材料不同生物活性要素在骨损伤修复中的研究现状,为口腔颌面骨修复活性材料的研发提供参考依据.     

无机活性元素支架材料对颌骨缺损骨创面骨祖细胞的生物诱导作用

目的：应用颌骨术后缺损骨创面周围骨松质分离培养鉴定成骨细胞,并将其与无机活性元素支架材料在体外复合生长,探讨无机活性元素支架材料对骨祖细胞来源的成骨细胞生物学特性的生物诱导作用。方法：应用组织块贴壁法分离培养出成骨细胞,并用碱性磷酸酶（Burstone偶氮偶联法）染色法、茜素红染色法、透射电镜、流式细胞仪等对其碱性磷酸酶活性、钙结节形成情况、细胞的超微结构、细胞生长周期进行鉴定,然后将体外培养的成骨细胞与无机活性元素支架材料体外复合生长,对复合体进行形态学、扫描电镜、细胞增殖能力、细胞周期变化的测定,评价细胞与材料的相容性。结果：颌骨术后缺损骨创面周围骨松质分离出的成骨细胞具有较强的碱性磷酸酶活性且有大量的钙结节形成,透射电镜观察其具有良好的分泌细胞特性,此成骨细胞与无机活性元素支架材料体外复合培养14 d,分布于支架材料的成骨细胞增殖良好,分泌细胞外基质并形成钙结节,细胞周期未见明显改变。结论：颌骨术后缺损骨创面周围骨松质中含有大量的骨祖细胞,具有较强的向成骨细胞分化和繁殖能力。无机活性元素支架材料均具有较好的细胞相容性,与成骨细胞共同培养有望获得具有三维立体结构的组织工程骨。     

锶离子修饰骨组织工程支架材料的研究现状

羟基磷灰石等无机材料是应用广泛的骨组织工程支架材料,通过离子掺杂对无机支架材料进行改性,是增强其成骨诱导性能的一种重要方法.近年来的研究证明,锶离子有益于骨形成且无毒性作用.本文主要总结骨组织工程中锶离子修饰支架材料的研究现状,分析存在的问题和进一步的应用前景.     

成骨细胞在快速成型技术构建的骨支架材料中粘附的实验研究

目的　观察成骨细胞在用快速成型技术构建的具有不同孔隙率的骨支架材料中的粘附情况以及材料的孔隙率对成骨细胞粘附的影响,以探索用快速成型技术构建骨组织工程支架材料的可行性。方法　体外分离培养、扩增乳鼠颅骨骨膜成骨细胞,经传代培养作为种子细胞,接种于由快速成型技术构建,孔隙率分别为80%、 90%、95%的骨支架材料中,复合培养4 d及10 d后,采用细胞计数及扫描电镜方法检测支架材料中细胞粘附的情况。结果　①各孔隙率组粘附成骨细胞总数均呈现随培养时间延长而增高的趋势(P<0·05),粘附细胞数的增加量则以80%孔隙率组为最低(0·35×105个),而90%孔隙率组为最高(2·84×105个);②电镜观察发现用快速成型技术构建的骨支架材料具有良好的细胞相容性,成骨细胞能够在各孔隙率组支架材料内部粘附、聚集。结论　快速成型技术构建的骨支架材料为组织工程骨支架材料的设计、成型开辟了一条崭新途径。     

多孔型活性CPC复合骨髓基质细胞构建组织工程骨的实验研究

目的:观察多孔型活性磷酸钙骨水泥用作骨组织工程支架材料的可行性.材料与方法:抽取成年毕格犬的骨髓,贴壁法获得骨髓基质细胞,经成骨诱导培养液体外培养、扩增、诱导后观察细胞增殖情况.将培养的第3代细胞接种于多孔型活性磷酸钙骨水泥,进行超微结构观察,并将多孔型活性磷酸钙骨水泥/骨髓基质细胞复合物植入毕格犬背部皮下,2,4周后进行组织学检测.结果:碱性磷酸酶染色呈阳性;Von Kossa染色可见钙结节形成;骨钙素免疫细胞化学染色呈阳性;超微结构观察可见细胞生长附着于材料网孔内表面;组织学检测提示4周时复合物内有新骨形成.讨论:活性多孔CPC/BMSCs骨修复材料孔径250μm,孔隙率为70%,易于BMSCs的渗入发育成骨.结论:多孔型活性磷酸钙骨水泥/骨髓基质细胞复合物显示良好的成骨活性,多孔型活性磷酸钙骨水泥可以用于骨组织工程支架材料.     

珍珠（层）在骨组织修复中的研究进展

目的: 对珍珠(层)的成骨性及其在骨组织工程中的应用研究进展进行综述。方法: 广泛查阅近年来国内外相关文献,并进行总结。结果: 珍珠(层)粉是具有一定成骨作用的天然有机-无机复合材料,可以作为骨组织工程支架材料,而纳米级珍珠(层)粉具有更好的生物降解性和成骨作用。结论: 珍珠(层)在骨组织工程中具有潜在的应用前景,但制备出各种符合临床实际应用的骨修复材料仍需进一步研究。     

RP构建不同孔隙率骨支架材料对成骨细胞增殖的影响

目的观察复合培养时,成骨细胞在由快速成型技术构建的具有不同孔隙率的骨支架材料中的增殖情况,考察材料的孔隙率对成骨细胞生长的影响,以探索用快速成型技术(RP)构建骨组织工程支架材料的可行性.方法体外分离培养、扩增乳鼠颅骨骨膜成骨细胞,经传代培养作为种子细胞接种于由快速成型技术构建、孔隙率分别为80%,90%,95%的骨支架材料中,复合培养4天及10天后,通过细胞计数及碱性磷酸酶ALP生化染色半定量测定等方法,检测支架材料中细胞增殖情况的变化.结果1.各孔隙率组的成骨细胞增殖数均呈现随培养时间延长而增长的趋势,细胞随培养时间的增加量则以80%孔隙率组为最低(0.35×105),而90%孔隙率组为最高(2.84×105);2.各孔隙率组的成骨细胞内碱性磷酸酶的半定量值变化趋势基本与成骨细胞增殖情况一致,均呈现随培养时间延长而ALP相对活性增高的趋势,随培养时间的增加量也仍以80%孔隙率组为最低,90%孔隙率组为最高.结论快速成型技术构建的骨支架材料的孔隙率对成骨细胞的增殖及ALP相对活性有一定影响,可为组织工程骨支架材料的构形设计提供一定的参考,值得进一步研究.     

纳米级支架材料在骨组织工程中的应用

骨组织工程研究领域中，支架材料与细胞的相互作用是主要的研究课题。支架材料表面的微观结构对细胞的生物调控作用非常重要。纳米材料因具有一些独特的效应，有利于细胞的黏附、增殖和功能的增强，因而作为骨组织工程支架有着良好的应用前景。目前用于骨组织工程的纳米支架材料主要有纳米复合材料和纳米纤维材料。作者就纳米支架材料与细胞作用的机制以及近年来其在骨组织工程中的应用研究现状作一综述。     

应用兔骨髓基质细胞膜片与珊瑚支架构建组织工程骨

目的：探讨应用富血小板血浆与骨髓基质细胞（BMSCs）构建骨髓基质细胞膜片，以及应用骨髓基质细胞膜片与珊瑚支架构建组织工程骨的可行性。方法：将取自同一供体兔的BMSCs与富血小板血浆复合后，共同在体外培养10天，构建出BMSCs膜片，用其包裹珊瑚支架后植入裸鼠背部皮下，另以单纯BMSCs种植到珊瑚支架及以单一珊瑚植入作为对照。术后4周和8周取材，通过组织学观察和组织形态测量分析，评价其成骨情况。采用SPSS11．0软件，对所得数据进行统计学分析。结果：BMSCs与富血小板血浆共同在体外培养10d，可构建出厚约2mm的BMSCs膜片。用其包裹珊瑚支架后植入裸鼠背部皮下4周和8周，在珊瑚表面及其孔洞内有大量软骨和骨质形成．其成骨量明显大于单纯BMSCs种植组。单一珊瑚植入组未见骨或软骨形成。结论：将富血小板血浆与BMSCs复合后共同在体外培养，可构建出具有一定厚度的BMSCs膜片，将此膜片包裹珊瑚支架所形成的膜片一支架复合体具有良好的成骨活性.     

舌鳞癌组织中CENP—H的表达及临床意义

目的：检测着丝粒蛋白-H（CENP—H）在舌鳞状细胞癌中的表达水平,并结合临床病理资料探讨其l临床意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测168例舌鳞状细胞癌组织石蜡切片中CENP—H的表达情况。所有病例均有完整的『临床病理资料,应用SPSS13．0软件包对数据进行统计学处理,分析CENP—H表达水平对舌鳞癌的早期诊断和预后评估的价值。结果：168例舌鳞癌标本中,CENP—H的强阳性率为55．95％（94／168）;不同临床分期（P=0．005）、T分期（P=0．004）的CENP—H表达有显著性差异,随分期增高而表达升高;多因素Cox回归分析显示,CENP—H的表达水平（P=0．043）、临床分期（P〈0．001）分别是舌鳞癌患者的独立预后因素。生存分析显示,高表达CENP—H的患者生存率显著低于低表达CENP—H的患者（P=0．0011：早期舌鳞癌组中CENP—H高表达患者预后较差（P=0.000）。结论：CENP—H可能是与舌鳞癌发生、发展相关的标志物。对舌鳞癌患者的预后评估,特别是对早期患者的预后评估具有重要意义。     

实时定量PCR检测Nel样Ⅰ型分子基因对大鼠骨髓基质细胞成骨相关基因表达的影响

目的：研究Nel—like 1型分子（Nell-1）基因对体外培养大鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,bMSCs）成骨相关基因表达的影响。方法：取6周龄雄性Fischer 344大鼠胫骨和股骨骨髓体外培养。以腺病毒为载体。进行基因转染，绘制生长曲线并测定转染效率。以转染β-半乳糖苷酶（β—Galactosidase，LacZ）基因的bMSCs为对照组，转染Nell-1的bMSCs为试验组，用实时定量PCR（real—timePCR）测定成骨相关基因碱性磷酸酶基因（alkaline phosphatase，ALP）、骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP）、骨钙素（osteocalcin，OC）、骨桥蛋白（osteopontin，OP）和Sox9的表达。以2^-△△CT法计算基因表达的相对比值。结果：随着Nell-1基因转染滴度的增高。细胞增殖速度减慢。基因转染效率随滴度增加而增高。Nell-1基因转染大鼠bMSCs．早期下调、中期和晚期上调ALP的表达。晚期上调OC的表达,整个成骨周期中均上调OP和BSP的表达。结论：Nell-1基因可能通过影响各成骨相关基因的表达而促进大鼠bMSCs的成骨分化。     

骨形成蛋白2基因修饰的山羊耳软骨细胞体内异位植入研究

目的：应用AdBMP-2基因修饰体外培养的山羊耳软骨细胞，并与F127pluronic支架材料复合，进行裸鼠皮下异位植入研究，探索BMP-2基因修饰高等哺乳动物软骨细胞促进软骨组织重建的可行性。方法：体外培养山羊耳软骨细胞，转染AdBMP-2和AdLacZ基因，X-gal则染色检测基因转染效率。将基因修饰的细胞与可吸收生物材料Pluronic F127复合形成细胞-生物材料复合物，并注射到裸鼠皮下，分别在术后2周和4周取材，观察2周标本CollX染色，4周标本X—gal、阿利新蓝、BMP-2及VEGF免疫组化染色。结果：50pfu／细胞可以获得80％的转染效率．AdBMP-2组在2周时出现大量成熟的软骨组织．4周时出现较多的骨样组织，BMP-2和VEGF染色强阳性：而AdLacZ组2周时尚未形成明显的软骨样组织，4周出现小块的软骨组织，未见骨样组织及VEGF阳性表达。结论：实验条件下,BMP-2基因转染早期即促进了软骨的成熟和分化，但随后发生了骨化，提示可尝试将其应用于软骨原位缺损或筛选更为理想的生长因子,以促进软骨再生。     

膜联蛋白A1表达下降在口腔鳞癌中的意义

目的：研究膜联蛋白A1（ANXA1）在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理的关系。方法：应用实时定量PCR、Western印迹方法和免疫组化方法检测ANXA1在口腔鳞癌细胞株和30例原发口腔鳞癌中的表达，采用SPSS10．0软件包对数据进行非参数检验。结果：与人永生化口腔黏膜上皮细胞（HIOEC）相比，Tca8113、TSCC、OSC和NT细胞中ANXA1的mRNA表达降低；Tca8113、TSCC、CAL-27、OSC和NT细胞中ANXA1的蛋白表达降低。30例口腔鳞癌组织标本中，ANXA1的mRNA和蛋白表达均较癌旁组织降低（p〈0．001）。ANXA1的表达水平与肿瘤的病理分化程度有关（mRNA：P=0．007；蛋白：P=0．006），与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移无关。结论：ANXA1在口腔鳞癌中表达降低，可能与肿瘤的发生、发展和组织分化有关。     

HIF-1α促进BMSCs成骨及成血管作用的体内外研究

目的:运用基因工程技术,检测HIF-1α基因诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)在体内、外向成血管和成骨方向分化的作用.方法:(1) HIF-1α基因突变后,应用Lentivirus构建Lenti-LacZ、Lenti-WT、Lenti-MT.(2)分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染BMSCs,检测①细胞转染效率;②目的基因在mRNA及蛋白水平的表达;③目的基因在BMSCs细胞内的定位.(3) BMSCs成功转染目的基因后,分别在特定时间点提取总RNA和蛋白,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因对BMSCs成血管和成骨因子表达的调控作用.(4)行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和钙结节的表达检测.(5)检测生物支架材料-明胶海绵(GS)的结构、形态及细胞附着情况.(6)建立F344大鼠颅骨双侧直径5mm的标准骨缺损模型,分别将细胞复合支架材料植入骨缺损区.术后8周取材,行Microfil灌注,观察血管形成,通过大体标本观察、X线及Micro-CT检查、组织学和形态学检测等观察骨修复情况,采用SPSS10.0软件包对结果进行单因素方差分析,评价修复效果.结果:当感染复数(MOI)=15时,BMSCs的转染效率最高.免疫荧光检测表明,目的基因在BMSCs细胞核内.体外常氧条件下,HIF-1α能够显著上调BMSCs的成骨和成血管因子的表达,且ALP和钙结节结果表明目的基因可诱导BMSCs骨向分化.体内实验结果显示,8周时,Lenti-WT组和Lenti-MT组对骨缺损的修复作用明显强于Lenti-LacZ组,而Lenti-MT组又优于Lenti-WT组.结论:HIF-1α基因可以显著提高BMSCs成血管和成骨活性.     

bFGF基因转染的骨髓间充质干细胞在珊瑚骨表面的生长特性

目的：将转染bFGF基因的骨髓间充质干细胞（BMSCs）与珊瑚骨复合培养，观察转染bFGF基因的BMSCs在珊瑚支架材料上的生长状况。方法：穿刺抽取新西兰大白兔胫骨骨髓，采用密度梯度离心法分离BMSCs．采用贴壁筛选法对分离出的BMSCs进行纯化，利用脂质体转染bFGF—pcDNA3到BMSCs。取生长良好的转染bFGF基因的BMSCs和未转染的BMSCs，分别接种于不同珊瑚表面，利用扫描电镜观察珊瑚支架上BMSCs的生长状况：采用MTT法观察细胞一支架复合培养的BMSCs增殖情况，采用SPSS10．0软件包对数据进行t检验。结果：扫描电镜观察显示．复合培养的BMSCs贴附在珊瑚上，并在材料上完全铺展，形态多样，细胞跨越微孔表面或向孔内长人，部分区域有细胞外基质形成。MTT法检测显示，细胞-支架复合培养转染组与复合培养未转染组的BMSCs增殖状况相比有统计学差异（P〈0．05），复合培养转染组，BMSCs生长增殖强于未转染组。而复合培养的转染组与单纯培养转染组BMSCs增殖相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：转染bFGF基因的BMSCs在珊瑚支架材料上的生长状况较未转染组好，珊瑚人工骨可以作为BMSCs支架材料，用于构建组织工程骨。     

山羊下颌骨牵张成骨过程中间隙连接蛋白43的表达

目的：探讨牵张成骨过程中连接蛋白43（Cx43）调节成骨细胞的骨形成功能与破骨细胞的骨吸收功能之间的偶联动态平衡的作用机制。方法：在建立山羊下颌骨牵张成骨动物模型的基础上，应用免疫组化法观察牵张成骨不同时期骨组织中Cx43的表达以及分布情况。计算骨组织细胞中Cx43的阳性表达率．应用SigmaStat2．03软件包进行单因素方差分析。结果：Cx43表达主要位于成骨细胞、破骨细胞和骨细胞的细胞膜上。牵张1周后，牵张区成骨细胞、破骨细胞Cx43阳性表达率分别为（59．7±3．0）％和（56．8±4．0）％，两者无显著差异（P〉0．05）。骨细胞Cx43阳性表达率为（29．0±2．8）％，显著低于成骨细胞和破骨细胞（P〈0．05）。牵张2周后，牵张区的成骨细胞、破骨细胞和骨细胞的Cx43的阳性表达率分别为（56．7±5．3）％、（49．0±4．1）％和（36．2±5．1）％，成骨细胞Cx43的阳性表达率显著高于破骨细胞和骨细胞（P〈0．05），表达主要位于细胞膜上，胞质中亦有少许表达。完成牵张4周及6周后，新骨形成区成骨细胞、破骨细胞和骨细胞细胞膜上均有Cx43表达，其阳性表达率无显著差异（P〉0．05）。结论：牵张成骨过程中，Cx43对成骨细胞的骨形成功能与破骨细胞的骨吸收功能之间的偶联动态平衡有比较重要的调节作用。     

快速原型技术在颞下颌关节重建中的应用

目的：计算机辅助软件进行颞下颌关节手术前设计,经快速原型技术制作模型,探讨该技术在下颌骨及颞下颌关节重建中的应用价值。方法：选取11例（13侧）需要进行髁突-下颌支-下颌体重建手术的患者为快速原型组,术前均进行头颅三维CT扫描（层厚0．625mm）：将DICOM格式的CT数据输入电脑软件Simplant CMF,通过软件对头颅模型进行下颌骨分离、截骨线设计、截骨及骨块移动;利用镜面反射原理,以健侧下颌骨为标准,重建患侧下颌骨;然后以重建的头颅模型为标准．对钛板进行塑形;术中根据已经塑形好的钛板,对移植骨块进行塑形,重建颞下颌关节。另选24例用传统方法进行髁突-下颌支-下颌体重建的患者作为对照组。采用SPSS13．0软件包分析2组患者手术用时,并采用两独立样本t检验：对Simplant测量出的CT扫描数据,采用配对t检验分析快速原型组内手术前、后面部对称性的差异。结果：所有患者伤口均一期愈合,无感染、出血、面神经损伤等并发症发生;术后临床及影像学检查显示,患者面形基本对称,对手术效果满意,咬合关系良好：MRI显示移植的肋骨肋软骨头均在关节窝内。手术用时传统方法平均为7．09h,快速原型组平均为5．67h．两组之间有显著性差异（P〈0．05）;应用Simplant对下颌骨CT扫描的数据进行处理,测量每个患者术后的CI（condyle—incisor）、CM（condyle—mental foramen）、CA（condyle—angle）3组变量,对健、患侧的测量数据进行配对t检验,3个指标的健、患侧均无显著差异（P〉0．05）。结论：利用快速原型技术,可以达到准确重建颞下颌关节、保持下颌骨双侧对称的目的,有利于改善术后颞下颌关节功能,提高颞下颌关节及下颌骨重建的效果。