Rb基因蛋白单克隆抗体的制备

用计算机分析Rb基因核苷酸顺序.择其Rb基因蛋白中一段亲水性氨基酸密集区人工合成多肽作为抗原,用以制备抗Rb基因蛋白的单克隆抗体.经细胞融合、ELISA和Western Blot 筛选得到了3侏分泌抗Rb基因蛋白的特异性抗体。亚类鉴定均属IgG1.（中华眼底病杂志，1993，9：2-4）     

108例视网膜母细胞瘤Rb基因突变的特征

目的；研究RB患者肿瘤及体细胞内Rb基因的存在状态、细微结构、Rb基因突变的特征、起源与传递。 方法；DNA分子杂交、SSCP分析、DNA序列测定。结果：108例RB肿瘤标本中80例(?4％)存在Rb基因点突变，其中44例为纯合型，20例有二个独立发生的杂合型点突变，16例只检出一个杂合型点突变。通过对比分析RB患者肿瘤与白细胞DNA、RB患者家庭成员白细胞DNARlo基因的结构，揭示了Rb基因点突变的起源与遗传特征。 结论：Rb基因是与RB肿瘤形成关系最为密切的基因。RB肿瘤发生需二次突变事件导致Rb基因的二个等位基因失活，第一次突变事件突出表现为点突变；第二次突变事件主要是LOH，其次是点突变。 （中华眼底病杂志，1997，13：12-16）     

反义Rb基因促进细胞生长

视网膜母细胞瘤易感基因（Rb基因）是一个搞癌基因，在多种肿瘤组织中存在缺失、突变或失活。我们成功构建了Rb基因的反义表达载体DLORBAS并用电穿孔技术将DOLRBAS导入人胚肺纤维细胞（HEL细胞），转染后72小时测定发现HEL细胞的Rb蛋白表达降低，同时生长速度加快，但不能在软琼脂上形成克隆。这表明正常的Rb基因可以抑制HEL细胞的分裂，但单纯的Rb基因失活还不足以导致HEL细胞的恶变。 （中华眼底病杂志，1993，9：198-201）     

PCR-SSCP联合序列分析法在RB1基因突变检测中的应用

用聚合酶链反应-单链构象多态(PCR-SSCP)联合序列分析，对视网膜母细胞瘤肿瘤组织RB1基因存在状态进行检测。对RB1基因全部27个外显子分别进行PCR扩增后，选用适当的限制性核酸内切酶将扩增产物切割成200bp左右的片段，加热至双链解离后，6%聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳后对有异常电泳迁移率条带所属标本的同一外显子行PCR扩增、序列分析，进一步证实突变的位置和类型。本研究发现包括点突变、缺失、插入等RBl基因改变，显示PCR-SSCP联合序列分析在已知序列基因突变检测中的敏感性和可靠性。 （中华眼底病杂志，1994，10：17-20）     

先天性静止性夜盲家系视紫红质基因的体外扩增分析

先天性静止性夜盲（CSNB）的主要临床特征表现为视网膜杆体功能的损害，而视紫红质是维持正常杆体功能所必需的感光色素。为探讨CSNB的分子缺陷是否涉及到视紫红质基因，本文应用聚合酶链反应（PCR）技术对一个常染色体显性遗传型（AD）CDNB大家系15名患者和5名正常家系成员的视紫红质基因第5外显子片段进行扩增，并结合限制性片段长度多态性（RFLP）作分析。结果显示，与12名正常对照组相比，CSNB患者视紫红质基因第5外显子片段无明显缺失；视紫红质基因端码区内的第314和第347位密码子及第313位密码子的第3个碱基和第348位密码子的第1个碱基均未检出突变或缺失。提示AD型CSNB的分子缺陷未涉及视紫红质基因编码区内这些位点的点突变或缺失。 （中华眼底病杂志，1993，9：66-68）     

RB患者肿瘤及体细胞中Rb基因点突变谱及其特征和意义

目的：研究RB患者肿瘤及体细胞巾Rb基因点突变的频率，特征及其在肿瘤遗传易感性的传递及肿瘤形成机制中所起的作用。 方法：SSCP分析及直接DNA序列分析。 结果：在302例经Southern blotting杂交证实无明显Rb基因缺失或重排的RB患者的肿瘤或外周血白细胞DNA中共发现187个Rb基因点突变。 结沦：Rb基因点突变几乎随机分布在整个编码区，常常导致氨基酸密码突变为终止密码，阅读框架移位或mRNA拼接异常，产生缩短丁的或缺乏某个外显子编码氨基酸的蛋白质。并以半个碱基取代占绝大多数。缺失或插入突变通常是一个或二个碱基的微小病变。 （中华眼底病杂志，1995，11：240-243）     

THE EFFECT OF CYCLICAL MECHANI- CAL STRETCH ON DIFFERENTIAL GENE EXPRESSION IN LAMINA CRIBROSA CELLS

Objective: To create an in-vitro model for raised intraocular pressure by exposing lamina cribrosa cells to cyclical mechanical stretch and examine the effect of this stimulus on gene expression patterns of components and modulators of the extracellular matrix (ECM) of the lamina cribrosa. Methods: Confluent normal primary human lamina cribrosa were transferred onto flexible     

Rb基因调节细胞周期抑制乳腺癌细胞生长及其肿瘤特性

视网膜母细胞瘤易感基因（Rb基因）在多种肿瘤组织中有缺失或失活。我们构建了含正常人Rb cDNA全长序互列的逆转录病毒载体DOLRB,用电穿孔转染DOLRB引入Rb基因几乎完全缺失的乳腺癌细胞的MDAMB468.Rb基因在该细胞内得到表达，使其生长速度下降约50%，软琼脂克隆形成能力完全受抑，裸鼠体内致癌性部分受抑。同时流式细胞学检查显示该细胞在G1期比例明显增加，S期比例亦有增加。增殖商数下降约50%.证实Rb基因可阻止G1期向S期转变。 （中华眼底病杂志，1993，9：135-140）     

三个Rb基因突变嵌合体家系分子遗传学分析

目的：遗传型RB是一种单基因疾病，由定位在13q14的Rb基因突变所致。大多数遗传性RB表现出典型的孟德尔常染色体显性遗传特征。作者分析三个遗传性RB家系RB外显不全及表型传递规律变异的原因。 方法：RELPs和VNTRs作单体型分析，SSCP及直接DNA序列分析检测Rb基因点突变。 结果：Rb基因突充嵌合体是造成某些Rb基因突变携带者不发病以及家庭成员中RB表型遗传不符合孟德尔规则的重要原因之一。结论：直接检测致病性的Rb基因突变才能准确判断携带者，估计患病风险。 （中华眼底病杂志，1996，12：37-40）     

视网膜色素上皮移植方法的探讨

目的；探讨视网膜色素上皮移植的方法。 方法：以常规方法割备有色素兔眼视网膜色素上皮(RPE)细胞作为供体，移植到10只无色素兔眼．8只眼经外路法，即穿过巩膜和脉胳膜的方法；另10只眼内路法，即从睫状体平部进入玻璃体，制成人为的局限性视网膜脱离，将RPE细胞移植到受体眼视网膜下腔。术后第10、20、40、90天作光镜和电镜检查。 结果：内路法组，手术后40天光镜观察，移植区和非移植区神经视网膜层厚度无差别．透射电镜显示：移植的RPE细胞嵌入Bruch膜，光感受器外节在正常位置，术后90天，移植细胞内发现吞噬外节的次级溶酶体．外路法的8只眼因脉胳膜出血或视网膜穿破而失败。 结论：内路法是RPE细胞移植切实可行的方法。 （中华眼底病杂志，1997，13：160-162）