低强度脉冲式超声波在脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞分化中的抗炎和抗氧化作用

目的研究低强度脉冲式超声波（LIPUS）对RAW264.7巨噬细胞极化的影响及相关分子机制。 方法100 ng/mL脂多糖（LPS）和10 ng/mL白细胞介素（IL）-4诱导巨噬细胞RAW264.7分别向M1和M2型极化，45 mW/cm²强度LIPUS对巨噬细胞处理25 min。采用流式细胞术检测巨噬细胞氧化应激活性氧（ROS）水平、M1分化标志物CD80和CD11b，以及M2分化标志物CD163的表达水平。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测CD80、CD11b、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6的mRNA水平。采用Western blot技术检测细胞p65、p-p65、TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平。采用流式细胞术检测细胞培养上清TNF和IL-6表达水平。 结果LIPUS可明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞ROS水平。LPS诱导后，RAW264.7细胞M1分化标志物CD80和CD11b表达和转录水平均上调；LIPUS可抑制LPS对RAW264.7细胞向M1的诱导，差异具有统计学意义。并且，LIPUS可促进IL-4诱导的巨噬细胞M2分化标志物CD163表达。LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平上调，LIPUS可下调这些炎症因子的mRNA水平，差异均具有统计学意义。LIPUS抑制了LPS对RAW264.7细胞因子蛋白p65和p-p65、IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白表达上调的作用。胰酶可以通过激活ROS-NF-κB通路，回复LIPUS促进巨噬细胞M1分化的作用。 结论LIPUS可通过ROS-NF-κB抑制RAW264.7向巨噬细胞M1型分化，促进RAW264.7向巨噬细胞M2型分化。氧化应激和炎症因子表达水平被抑制。LIPUS可能在牙周疾病中起到抑制氧化和炎症的作用，从而发挥对牙周疾病的治疗功能。     

IL-17联合IFN-γ体外诱导RAW264.7细胞增殖和凋亡的影响

目的研究白细胞介素-17(IL-17)联合干扰素-γ(IFN-γ)在小鼠破骨前体细胞系RAW264.7分化为成熟破骨细胞过程中,对细胞增殖和凋亡的影响。方法将核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导小鼠破骨前体细胞系RAW264.7建立破骨细胞体外诱导分化研究模型,被诱导的RAW264.7细胞培养24 h后,分为IL-17组、IFN-γ组、IL-17+IFN-γ联合组(IL-17+IFN-γ等量组、IL-17固定+IFN-γ梯度组)进行干预。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对破骨细胞成熟进行鉴定,利用CCK-8细胞增殖试验检测各组细胞增殖情况,AnnexinⅤ细胞凋亡实验评价各组细胞凋亡的差异,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达差异。结果 50 ng/m L IL-17与不同浓度的IFN-γ联合,随着IFN-γ浓度升高,IL-17对RAW264.7细胞生长抑制呈浓度依赖性。IL-17和IFN-γ的联合作用比单独应用IL-17,凋亡率更高;与单独应用IFN-γ相比,凋亡相关基因Fas L表达明显增加。结论试在RAW264.7细胞向破骨细胞的分化过程中,IL-17和IFN-γ联合能抑制破骨前体RAW264.7细胞向破骨细胞的增殖,并促进RAW264.7细胞的凋亡。     

硒代蛋氨酸通过NF-κB和MAPK通路抑制P.g-LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达

目的:探讨硒代蛋氨酸(Selenomethionine, SeMet)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P.g-LPS)诱导的RAW264.7细胞的作用和机制。方法:使用P.g-LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7体外构建炎症细胞模型,CCK-8法检测不同浓度SeMet对RAW264.7细胞活性的影响。以不同浓度的SeMet(10、25、50μmol/L)干预细胞1 h后,再使用P.g-LPS诱导细胞24 h。RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)相关基因表达,ELISA法检测iNOS和COX-2相关蛋白分泌情况。Western blot检测NF-κB和MAPK信号通路相关蛋白表达情况。结果:浓度低于50μmol/L的SeMet对RAW264.7细胞活性没有显著影响。对RAW264.7使用SeMet预处理后,SeMet明显抑制P.g-LPS诱导的iNOS和COX-2相关基因...     

脂多糖刺激的单核巨噬细胞培养上清液对小鼠MC3T3-E1细胞c-fos表达的影响

目的：研究经牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）脂多糖（LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞（MC3T3-E1细胞）c-fos表达的影响。方法：收集100μg/L的Pg LPS刺激RAW264.724h后的上清液,以20%稀释浓度分别作用于MC3T3-E1,分别在1、3、6、12、24、48、72h时,采用RT-PCR和Western blot检测ALP mRNA、c-fos mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：Pg LPS刺激RAW264.7细胞培养上清作用于MC3T3-E1后,ALP mRNA表达均下降,在6h时表达最低,而c-fos的mRNA和蛋白水平均提高,分别在3h和6h时达最高水平。结论：Pg LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过上调成骨细胞c-fos的表达而抑制其成骨能力。     

Zeste基因增强子人类同源物2抑制剂GSK343调节巨噬细胞分化的作用

目的 研究Zeste基因增强子人类同源物2（EZH2）抑制剂GSK343调节巨噬细胞亚群的分化,探讨EZH2在牙周炎中潜在的治疗作用。方法 将巨噬细胞RAW264.7分为4组：空白组（A组）、对照组（B组）、内毒素（LPS）刺激组（C组）、LPS+GSK343组（D组）。细胞经培养及相应处理后,利用免疫印迹和酶联免疫吸附试验检测其表型生物学标志变化,包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素-10（IL-10）和精氨酸酶-1（Arg-1）。利用大肠杆菌吞噬试验检测巨噬细胞RAW264.7在不同条件下对大肠杆菌的吞噬作用。结果 LPS可以诱导RAW264.7产生M1表型生物标志（TNF-α和iNOS表达增加）,在加入EZH2抑制GSK343后,IL-10和Arg-1表达升高,提示EZH2抑制剂GSK343可以诱导RAW264.7细胞由M1型向M2型转化;RAW264.7细胞具有吞噬大肠杆菌的作用,加入LPS的条件下吞噬大肠杆菌作用加强,而EZH2抑制剂GSK343可以调节RAW264.7细胞对大肠杆菌的吞噬作用。结论 EZH2抑制剂GSK343可以调节巨噬细胞的分化,在牙周炎的治疗中可能具有潜在作用。     

硅酸二钙对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的促炎反应机制研究

目的:探讨硅酸二钙对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的促炎反应机制。方法:选取小鼠巨噬细胞系RAW264.7作为研究对象,磷酸三钙(Tricalcium phosphate,简称TCP)颗粒作为对比,硅酸二钙(Dicalcium silicate,简称C2S)、磷酸三钙颗粒均设置两种浓度:10 mg/L和100 mg/L,观察RAW264.7对两种材料的吞噬作用,观察是否有细胞自噬现象发生,采用qRT-PCR的方法,检测硅酸二钙、磷酸三钙颗粒分别与RAW264.7共培养6 h和24 h后TLR2(Toll like receptor2)、TLR9基因的表达量,初步探讨硅酸二钙促炎反应的机制。结果:硅酸二钙与磷酸三钙颗粒与RAW264.7共培养后,细胞吞噬颗粒,通过透射电镜观察可见细胞自噬现象。与磷酸三钙颗粒组相比,硅酸二钙颗粒组与RAW264.7共培养6 h后,TLR2、TLR9基因的表达均无明显变化;共培养24 h后,硅酸二钙颗粒组的TLR2基因表达量明显增高(P<0.001),10 mg/L磷酸三钙颗粒组的TLR2基因表达可能增高(0.05<P<0.1)。结论:硅酸二钙对小鼠巨噬细胞RAW264.7的促炎反应与TLR2基因的高表达可能有密切的关系。     

氧化石墨烯修饰的类骨单位钛表面对巨噬细胞破骨分化影响的研究

目的 本研究通过模拟天然骨单位进行同心圆结构的设计,并修饰氧化石墨烯（GO）,探究新的仿生微纳米结构表面对巨噬细胞RAW264.7破骨分化的影响。方法 实验分为光滑钛片组（SS）、微沟槽组（CMS）和微沟槽表面修饰GO组（GO-CMS）,利用扫描电子显微镜（SEM）、接触角测量仪、原子力显微镜、X射线光电子能谱分析仪和拉曼光谱仪研究材料表面的理化性能,通过细胞活性检测、SEM和激光共聚焦显微镜研究修饰后的材料表面对RAW264.7的细胞生物学行为的影响,通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）免疫荧光染色、TRAP定量检测和荧光实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）研究其对巨噬细胞破骨分化的影响。结果 巨噬细胞沿着微沟槽排列成同心圆状,修饰GO后,材料表面含氧基团增多,亲水性增加。GO-CMS组诱导形成的破骨细胞体积小,数量少,TRAP表达量最少,TRAP单位酶活性也最低。GO-CMS组虽然促进巨噬细胞的增殖,但破骨分化相关基因的表达低于SS组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 同心圆微沟槽限制了破骨细胞的融合及封闭区的形成,GO修饰类骨单位同心圆微沟槽抑制了巨噬细胞RAW26...     

白介素-17对破骨前体细胞RAW264.7增殖分化的影响

探讨白细胞介素-17对破骨前体细胞RAW264.7增殖分化功能的影响。方法：采用RANKL和M-CSF刺激破骨前体细胞系RAW264.7培养24小时后,将IL-17干预细胞培养。采用CCK-8试剂盒,及实时荧光定量PCR,分别评价破骨前体细胞增殖和特征性基因的表达差异。 结果：IL-17A促进小鼠RAW264.7细胞增殖,且呈时间、浓度依赖性;IL-17A浓度在50mg/ml时,特征性基因CathK,RANK和NAFTC1 mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论：IL-17A促进RAW264.7细胞增殖,促进破骨前体细胞分化。     

蛇床子素对脂多糖诱导的巨噬细胞极化和炎症反应的影响

目的: 探讨蛇床子素(osthole, OST)对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的巨噬细胞极化、炎症反应的影响。方法: 以CCK-8法检测不同浓度OST对RAW264.7巨噬细胞增殖活性的影响;使用细胞内活性氧（reactive oxygen species, ROS）检测试剂盒（DCFH-DA）、免疫荧光染色、q-PCR、流式细胞术明确不同浓度（6.25、12.5、25 μmol/L）OST对巨噬细胞极化和炎症反应的影响。采用Graphpad prism 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果: CCK-8结果显示,在25 μmol/L以下时,OST对RAW264.7无明显细胞毒性。免疫荧光染色及q-PCR结果显示,6.25、12.5、25 μmol/L的OST均能抑制M1型巨噬细胞炎症因子的表达,iNOS、TNF-α、CCR7呈浓度依赖性降低,并且有效上调M2抑炎因子IL-10、Arg-1及CD206的表达。流式细胞仪分析表明,OST可有效抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型标志物CD86的表达。结论: OST调节LPS诱导的M1型巨噬细胞极化,减轻炎症反应。     

牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后对破骨相关因子mRNA表达的影响

目的 检测牙周炎患者自身组织核酸刺激巨噬细胞后破骨相关因子白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-12（IL-12）p35、IL-12p40、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、活化T细胞核因子 1（NFATc1）、核激活因子κB受体（RANK）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达,观察牙周炎患者自身组织核酸对巨噬细胞向破骨细胞分化的影响作用。方法 采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎症牙周组织及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织,提取组织总RNA逆转录cDNA。培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,加入质量浓度1 μg•mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3 h后（以1 μg•mL-1的PBS作为对照）,加入已提取的炎症牙周组织及健康牙周组织cDNA（质量浓度为1 μg•mL-1）。实验分4组：健康组织cDNA,炎症组织cDNA,MT01+健康组织cDNA,MT01+炎症组织cDNA。4组细胞分别孵育3、6、12、24 h,采用实时定量聚合酶链反应法检测破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表达,进行两两组间比较。结果 牙周炎患者自身组织核酸可上调RAW264.7破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-α mRNA的表达;在免疫抑制剂MT01的作用下,牙周炎患者自身组织核酸上调RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达状况受到抑制。结论 牙周炎患者自身组织核酸可以影响小鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化。     

DHA对牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导巨噬细胞炎症的抑制作用

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症的抑制作用.方法 用CCK-8方法检测DHA对P.g-LPS诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞的毒性.将P.g-LPS与RAW264.7细胞共培养24 h后,更换含有DHA的培养基培养24 h,实时荧光逆转录定量PC...     

L-arginine-dependent nitric oxide production of a murine macrophage-like RAW 264.7 cell line stimulated with Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide

The aim of this study was to determine nitric oxide (NO) production of a murine macrophage cell line (RAW 264.7 cells) when stimulated with Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharides (Pg-LPS). RAW 264.7 cells were incubated with i) various concentrations of Pg-LPS or Salmonella typhosa LPS (St-LPS), ii) Pg-LPS with or without L-arginine and/or NG-monomethyl-L-arginine (NMMA), an arginine analog or iii) Pg-LPS and interferon-gamma (IFN-gamma) with or without anti-IFN-gamma antibodies or interleukin-10 (IL-10). Tissue culture supernatants were assayed for NO levels after 24 h in culture. NO was not observed in tissue culture supernatants of RAW 264.7 cells following stimulation with Pg-LPS, but was observed after stimulation with St-LPS. Exogenous L-arginine restored the ability of Pg-LPS to induce NO production; however, the increase in NO levels of cells stimulated with Pg-LPS with exogenous L-arginine was abolished by NMMA. IFN-gamma induced independent NO production by Pg-LPS-stimulated macrophages and this stimulatory effect of IFN-gamma could be completely suppressed by anti-IFN-gamma antibodies and IL-10. These results suggest that Pg-LPS is able to stimulate NO production in the RAW 264.7 macrophage cell model in an L-arginine-dependent mechanism which is itself independent of the action of IFN-gamma.     

重组人β防御素3对牙龈卟啉单胞菌脂多糖致炎作用的影响

目的:以牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)诱发载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠和RAW264.7小鼠单核巨噬细胞的急性炎症反应,并应用重组人β防御素3(rhBD3),观察其对炎症的干预效果。方法:20周龄雄性ApoE-/-小鼠随机均分为PBS对照组、P.g-LPS组和P.g-LPS+rhBD3组,分别经腹腔注射给药2h后,检测血清中不同炎症指标(MCP-1、TNF-α、IL-6、IL-1β和NO)的水平。同时,以rhBD3干预P.g-LPS对RAW264.7细胞的致炎作用,分别检测培养上清和细胞中炎症指标的水平及其mRNA的相对表达量。结果:经P.g-LPS刺激后,ApoE-/-小鼠血清MCP-1、TNF-α、IL-6和NO的水平较对照组显著上调;而同时应用rhBD3能明显降低MCP-1、TNF-α和NO表达量。P.g-LPS能显著上调RAW264.7细胞培养上清中TNF-α和NO的水平以及细胞中TNF-α和IL-6的mRNA相对表达量,rhBD3对此具有抑制作用。结论:rhBD3对P.g-LPS在体内、外诱导的急性炎症具有一定的抑制效应,可能在牙周炎与高脂血症的相互作用中发挥免疫调节作用。     

脂多糖刺激单核巨噬细胞培养上清液对成骨细胞成骨特性的影响

目的 探讨建立牙周炎症的体外实验模型的可行性,为后续进行牙周炎症状态下应力对牙槽骨改建的研究奠定基础.方法 以牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)Pg-LPS刺激小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)的培养上清液作用于体外培养的小...     

脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对人牙周膜干细胞（HPDLSCs）增殖及炎性因子表达的影响。方法 培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10 μg•mL-1 LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng•mL-1 LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLSCs白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显（P<0.05）;A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对破骨细胞EphA2基因表达的调控

目的:研究小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7在破骨分化过程中,Pg-LPS对破骨细胞EphA2表达的影响。方法:用终浓度10 mg/L的Pg-LPS 刺激RAW264.7 细胞后,分别在1、3、5 d,应用RT-PCR检测破骨细胞中EphA2基因和破骨细胞相关基因(破骨细胞内基质金属蛋白酶( MMP9)、ACP5、c-fos、组织蛋白酶K(CtsK)、NFATc1)的表达,并且通过酒石酸抗酸性磷酸酶(TRAP)染色观察实验组和对照组破骨细胞的分化成熟情况。结果:RT-PCR检测10 mg/L的Pg-LPS在第3天和5天,实验组比对照组EphA2基因表达分别增高2.4倍和1.2倍,两组之间存在显著差异(P<0.01);同时也能够促进破骨相关基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达,实验组与对照组相比差异有显著性;TRAP染色结果显示:实验组比对照组的TRAP阳性多核细胞数目明显增多。结论:10 mg/L的Pg-LPS对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,在破骨分化的中期和晚期均能够促进EphA2基因的表达,但是在破骨分化早期对EphA2基因的表达无明显作用。