别嘌呤醇对高糖诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用

目的探讨别嘌呤醇对高糖损伤后的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制。方法以HUVEC为研究对象,体外培养至第三代,分为：①20mmol／L高糖损伤对照组;②别嘌呤醇保护组（浓度分别为0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）;③维生素C阳性对照组（浓度为100mg／L）。不同浓度别嘌呤醇及维生素C先与HUVEC孵育24h,再加入20mmol／L高糖诱导损伤48h,测定各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）含量及细胞凋亡率。结果别嘌呤醇（0．1mmol／L、0．2mmol／L、0．3mmol／L）药物保护组的细胞凋亡率低于20mmol／L高糖组,其中以0．3mmol／L更为明显（P〈0．01）;细胞培养液中SOD、NO的量均较20mmol／L高糖组增高,其中以0．3mmd／L别嘌呤醇组更为明显（P〈0．01）。药物保护组细胞培养液中合成MDA、ICAM-1较波动性高糖组降低,且在一定浓度范围内（0．05-49．30mmol／L）呈浓度依赖性（P〈0．05）。结论①别嘌呤醇对高糖体外诱导的HUVEC损伤有保护作用,呈浓度依赖性。②别嘌呤醇对高糖体外诱导HUVEC损伤保护作用的机制包括抑制氧化应激、炎症反应及细胞凋亡。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

高糖对人脐静脉内皮细胞表面血栓调节蛋白表达及活性的影响

目的观察高糖对血栓调节蛋白在原代人脐静脉内皮细胞的表达和活性的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为三组:1对照组;210 mmol/L葡萄糖组;320 mmol/L葡萄糖组,孵育细胞24 h。分别用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应和酶标仪检测血栓调节蛋白的蛋白、m RNA表达及活性强度。结果20 mmol/L葡萄糖组和10 mmol/L葡萄糖组相比于对照组在血栓调节蛋白的蛋白(41.38±3.41、32.60±2.59比27.96±1.58)、m RNA(2.05±0.19、1.44±0.32比1)水平上均升高(P0.05),20 mmol/L葡萄糖组与对照组相比在血栓调节蛋白活性上也增强(0.4157±0.0129比0.3957±0.0100,P0.05),但10 mmol/L葡萄糖组与对照组在血栓调节蛋白活性上差异无显著性。结论高糖可增加血栓调节蛋白表达,并增强其活性,提示这可能为内皮细胞对于高糖的一种防御机制。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(11 mmol/L、22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L葡萄糖),以上各组细胞培养48小时,采用流式细胞术及Hoechst 33258核染色观察各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+雷帕霉素组(雷帕霉素预处理24小时后加入33 mmol/L葡萄糖),以上分组细胞均培养48小时,Western blot分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、P-P70S6K、bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果 (1)与正常对照组早期凋亡率(2.9200 +0.0159)％相比,高糖组明显增加,且呈剂量依赖性[(4.8400 ±0.0092)％、(6.7200±0.0041)％、(8.4900 ±0.0047)％、(9.9500±0.0124)％,P均＜0.05)];高渗对照组早期凋亡率(2.9200±0.0023)％与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与正常对照组晚期凋亡率(2.3700±0.0059)％比较,高糖组晚期凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性[(3.2500±0.0280)％、(4.3600±0.0191)％、(5.9800±0.0083)％、(7.0100±0.0099)％,P均＜0.05];高渗对照组细胞凋亡率为(2.3600±0.0205)％,与正糖对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)与正常对照组比较,高糖组P-Tuberin/Tuberin(1.2774±0.0026比1.0052±0.0012)、P-P70S6K/P70S6K(1.2129 ±0.0065比0.8157 ±0.0030)、Bax/β-actin (0.7484±0.0004比0.3966 ±0.0029)表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),bcl-2/β-actin表达明显降低(0.2949±0.0010比0.6398±0.0011,P＜0.05);高糖+雷帕霉素组P-P70S6K/P70S6K(0.9287±0.0019)、Bax/β-actin(0.5558±0.0052)表达水平低于高糖组(P＜0.05),bcl-2/β-actin (0.4546±0.0023)表达高于高糖组(P＜0.05).结论 高糖可能通过激活Tuberin/mTOR活性,从而降低bcl-2、增加Bax表达而导致血管内皮细胞凋亡.     

鸢尾素通过抑制氧化应激减轻高糖/高脂诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的 研究鸢尾素（irisin）是否通过抑制氧化应激减轻高糖/高脂所致心肌细胞损伤。方法 将培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）分为3组:正常对照组、高糖/高脂组及高糖/高脂+irisin组。各组培养24 h后检测细胞存活率、凋亡率、ROS产量、NADPH氧化酶gp91phox表达水平。结果 与正常对照组相比,高糖/高脂组细胞存活率显著下降,ROS产量、NADPH氧化酶gp91phox表达水平、细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),irisin处理可以逆转上述改变（均P<0.05）。结论 高糖/高脂能够增加人脐静脉内皮细胞氧化应激,促进细胞凋亡;irisin可通过减轻氧化应激而发挥内皮保护作用。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞ICAM-1及TNF-α表达的影响

目的探讨波动性与持续性高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECS)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的影响。方法以HUVECS为研究对象,实验分为3组:正常对照组(5.5mmol/L)、持续高糖组(25mmol/L)、波动高糖组(5.5/25mmol/L,白天3h高糖2h正常浓度葡萄糖波动3次,高糖过夜)。通过双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测细胞在各种糖浓度条件下24h、48h、72hICAM-1及TNF-α的表达。结果ICAM-1的浓度各个时间段波动组与高糖组和正常对照组相比均升高(P0.05),呈时间-效应关系。TNF-α的浓度3个时间段波动组与高糖组、正常对照组相比显著升高(P0.05),呈时间-效应关系。结论波动性高糖较持续性高糖更增强HUVECSICAM-1和TNF-α的表达。     

黄连素对波动性高糖导致的人冠状动脉内皮细胞炎症反应的影响

目的:研究黄连素(BBR)对波动性高糖导致的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)炎症反应的作用。方法:分离、培养HCAECs,将HCAECs分为5组。正常血糖组(NG组)加入5.5 mmol/L葡萄糖;持续性高糖组(PHG组)加入25 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG组)加入5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L葡萄糖24 h波动1次;对照组(OC组)加入5.5 mmol/L和25 mmol/L甘露醇24 h波动1次,为波动性高渗环境;波动性高糖+黄连素组(IHG+BBR组):5.5 mmol/L葡萄糖和25 mmol/L葡萄糖+50μmol/L黄连素24 h波动1次。以上5组HCAECs培养7 d。用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-10(IL-10)等炎症指标的蛋白水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定IL-1β、TNF-α、MCP-1和IL-10的mRNA表达。结果:PHG组和IHG组IL-1β、TNF-α、MCP-1水平较NG组和OC组...     

利拉鲁肽改善波动性高糖诱导的内皮细胞氧化损伤的研究

目的探讨利拉鲁肽对波动性高糖诱导的内皮细胞氧化损伤的影响及潜在机制。方法分离培养人脐静脉内皮细胞,分为正常葡萄糖对照(NC)组、持续性高糖(HG)组、波动性高糖(FG)组、高渗对照(HC)组、FG+利拉鲁肽(Lira)组、FG+Lira+Exendin(9-39)组和Exendin(9-39)组,各组均干预4d。采用流式细胞仪检测细胞内活性氧簇(ROS)水平和细胞凋亡比率,采用Western blot检测活化Caspase-3蛋白水平。结果与NC组相比,HG、FG组ROS水平升高[(129.4±4.1)%vs 100%;(130.5±1.2)%vs 100%,P0.05],细胞凋亡比率增加[(21.6±1.7)%vs(14.8±3.9)%;(25.1±5.8)%vs(14.8±3.9)%,P0.05],FG组活化Caspase-3蛋白水平升高[(223.6±2.4)%vs 100%,P0.05]。与FG组相比,FG+Lira组ROS水平降低[(109.8±4.3)%vs(133.2±1.9)%,P0.05],细胞凋亡比率降低[(17.3±3.9)%vs(26.5±4.2)%,P0.05],活化Caspase-3蛋白水平降低[(110.3±6.4)%vs(223.6±2.4)%,P0.05]。添加Exendin(9-39)可部分消除FG+Lira组的上述效应。结论利拉鲁肽抑制波动性高糖诱导的内皮细胞氧化损伤,其作用至少部分是呈GLP-1受体依赖性的。     

The Effects and Mechanism of GSA on Expression of MCP-1 in Cultured Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Objectives To investigate the effects and mechanism of glycated serum albumin(GSA) on expression of Monocyte chemoattratant protein-1(MCP-1) in Endothelial Cells. Methods Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)are cultured with GSA of different concentrations and interfered by glycosylation products inhibitor Aminoguanidine (AG) and anti-oxidant N-acetylcy-steine (NAC), The expression of MCP-1 are evaluated by Immunocytochemistry and Sandwich ELISA. MDA content and SOD activity are determined by the technique of TBA and XOD respectively. Results GSA can stimulate MCP-1 production and secretion. Immunocytochemistry showed that after HUVECs were cultured with 50 mg/L GSA, expression of MCP-1 in group 4hrs, 8hrs and 12hrs was 1.3, 1.9 and 2.8 fold as much as that in control group (P < 0.01), and there was significant difference among the experiment groups(P < 0.01). Sandwich ELISA showed that expression of MCP-1 in three different groups was 1.6, 2.4 and 3.0 fold as much as that in control group(P < 0.01), and there was significant difference among the experiment groups(P < 0.01); GSA can cause the decrease of SOD activity(P < 0.05) and increase of MDA content(P < 0.01); AG and NAC can restrain obviously the expression of MCP-1 of HUVECs stimulated by GSA(P < 0.01); NAC can restrain the effect of GSA on SOD activity and MDA content in HUVECs (P < 0.05). Conclusions GSA can stimulate the expression of MCP-1 of endothelial cells by inducing endothelial cells oxidative stress.     

人巨细胞病毒对培养人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 :探讨人巨细胞病毒 (CMV)在动脉粥样硬化发生和发展中的作用。　　方法 :采用流式细胞计数仪观察了人 CMV对离体培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖和凋亡的影响。本实验分为 5组 ,分别为正常对照组 ,肿瘤坏死因子细胞凋亡组 ,无血清培养细胞凋亡组 ,CMV感染 肿瘤坏死因子细胞凋亡组 ,CMV感染 无血清培养细胞凋亡组。　　结果 :实验发现无血清培养和肿瘤坏死因子诱导的细胞凋亡率较正常对照组升高 ,而 CMV感染的细胞凋亡率明显降低 ;细胞计数的结果表明 CMV感染后 3天的 HUVEC细胞数是未感染的 5倍。流式细胞仪的检测结果表明 :CMV感染细胞的增殖指数明显高于正常对照组 ,CMV可使细胞耐受无血清培养条件 ,保持细胞增殖。　　结论 :人 CMV感染 HUVEC后能够改变 HUVEC的细胞增殖过程 ,抑制细胞凋亡 ,HUVEC的过度增生及 HUVEC感染引起的炎性反应可能影响内皮细胞的功能 ,甚至破坏内皮细胞 ,导致血栓形成、脂质代谢紊乱 ,最终形成动脉粥样硬化。     

同型半胱氨酸血症对人脐静脉内皮细胞增殖活性的影响

目的 观察不同浓度的同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作用不同时间后对细胞增殖和形态结构的影响.方法 在含有不同浓度的同型半胱氨酸培养环境及对照培养环境中,分别孵育内皮细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测同型半胱氨酸对内皮细胞增殖活性的影响,并进行细胞形态学观察.结果 同型半胱氨酸低浓度时对细胞生长的抑制不明显,随着浓度的增高,细胞生长抑制越明显,且呈浓度、时间依赖性.结论 高同型半胱氨酸可损伤内皮细胞,抑制细胞生长,有助于糖尿病和胰岛素抵抗致动脉粥样硬化等血管病变的发生和发展.     

白细胞介素6在登革热病毒感染人脐静脉内皮细胞中的作用

以人脐静脉内皮细胞（EC）为靶细胞研究白细胞介素6（IL—6）对登革Ⅱ型病毒（D2V）增殖的影响，以及感染细胞产生IL—6水平的动态变化。结果显示：（1）IL—6对人脐静脉EC中的D2V增殖有增强作用；（2）D2V感染能诱导人脐静脉EC产生IL—6、IL—6的分泌水平与D2V感染量呈正相关。     

芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的研究芎芍胶囊含药血清对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖作用。方法采用血清药理学和体外培养HUVEC的方法,通过倒置显微镜观察、MTT法和流式细胞术(FCM)检测芎芍胶囊高、中、低3个浓度含药血清对HUVEC增殖的影响。结果MTT法检测结果显示高、中、低剂量的芎芍胶囊含药血清均有促进HUVEC增殖的作用,增殖率分别为54.14%、54.98%、33.77%;FCM法检测发现高、中、低剂量芎芍胶囊含药血清均可增加S期细胞比例,分别为52.14%、42.65%、37.08%;显微镜观察结果也显示各含药血清具有促进HUVEC增殖的作用。结论芎芍胶囊能促进HUVEC的增殖,其促进细胞增殖的作用与浓度有一定的关系;提示芎芍胶囊的促血管新生作用可能是通过促进血管内皮细胞的增殖。     

波动性高糖对内皮细胞血管舒张因子合成的影响

目的对比研究波动性与恒定性高糖对血管内皮细胞血管舒张因子合成的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,分别测定波动性高浓度葡萄糖(5或20 mmol/L)与恒定性高浓度葡萄糖(20 mmol/L)环境下内皮细胞合成的血管舒张因子前列环素及一氧化氮的含量,同时观察培养液中丙二醛含量的变化。前列环素应用放射免疫法测定其稳定代谢产物,而一氧化氮及丙二醛的检测则分别应用Griess法与Schuh法。结果波动性高糖组前列环素与一氧化氮均明显低于恒定高糖组(分别为21±6 ng/L比36±8 ng/L,P<0.01;13.6±2.0mmol/L比18.2±3.7 mmol/L,P<0.001),而波动性高糖组的丙二醛则明显高于恒定性高糖组(16.5±2.7 mmol/L比13.2±2.2 mmol/L,P<0.05)。结论波动性高血糖较恒定性高血糖对血管内皮细胞可能具有更强的损伤效应。     

重组C反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2

目的观察重组C反应蛋白(CRP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-2mRNA转录和蛋白水平表达,观察不同浓度CRP及不同孵育时间对HUVEC MMP-2表达的影响。结果CRP呈浓度和时间依赖性增加培养HUVEC的MMP-2mRNA转录和蛋白水平的表达。结论CRP可上调HUVEC MMP-2表达。     

丹参多酚酸盐对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨丹参多酚酸盐对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法将人脐静脉内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(正常对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖损伤组)、30mmol/L葡萄糖±50mg/L丹参多酚酸盐(低剂量丹参多酚酸盐组)和30mmol/L葡萄糖±100mg/L丹参多酚酸盐(中剂量丹参多酚酸盐组)、30mmol/L葡萄糖 200mg/L丹参多酚酸盐(高剂量丹参多酚酸盐组)的培养基中培养48h,倒置相差显微镜观察细胞形态,并分别进行细胞活力、细胞培养上清液丙二醛含量、谷胱甘肽-过氧化物酶活力、一氧化氮和内皮素1分泌量的测定。结果高糖损伤组及低、中、高剂量丹参多酚酸盐组的细胞活力、丙二醛含量、谷胱甘肽-过氧化物酶活力、一氧化氮及内皮素1的分泌量与正常对照组比差异均有统计学意义(P<0.01);低、中、高剂量丹参多酚酸盐组的细胞活力、丙二醛含量、谷胱甘肽-过氧化物酶活力、一氧化氮及内皮素1的分泌量与高糖损伤组比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论丹参多酚酸盐对体外高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能通过保护细胞线粒体、清除活性氧、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力和抑制内皮素1的分泌而实现的。     

对乙酰氨基酚对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 探讨对乙酰氨基酚对体外过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞损伤及凋亡的保护作用及机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞株传代后进行实验,分为正常对照组、过氧化氢损伤组(0.1 mmol/L)、药物处理加对乙酰氨基酚低浓度(25 μmol/L)、中浓度(50 μmol/L)和高浓度(100 μmol/L)预处理1 h组.用噻唑蓝比色法检测内皮细胞活力,用试剂盒检测丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性,用蛋白免疫印迹法检测Caspase-3的表达,用流式细胞仪分析细胞凋亡率.结果 与正常对照组比较,过氧化氢能明显造成内皮细胞损伤(P<0.05),表现为细胞活力降低,丙二醛含量增加,超氧化物歧化酶活性下降,Caspase-3表达增加,细胞凋亡率增加.对乙酰氨基酚可干扰过氧化氢对内皮细胞的损伤作用,使内皮细胞活力增加,丙二醛含量减少,超氧化物歧化酶活性升高,Caspase-3表达降低,细胞凋亡率减少(P<0.05).结论 对乙酰氨基酚可降低过氧化氢对人脐静脉内皮细胞的损伤作用,抑制过氧化氢引起的内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抗氧化及抑制Caspase-3有关.