益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响

目的研究益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞的影响。方法 CCK8法、流式细胞术分别检测高剂量益肺解毒方、顺铂、两药联合对A549细胞增殖、凋亡的影响,Transwell、细胞划痕实验检测三者对A549细胞侵袭转移的影响,Western blot、qRT-PCR检测三者对A549细胞Bax、Bcl-2、MMP2、E-cad表达的影响。结果高剂量益肺解毒方、顺铂、两药联合对A549细胞增殖均有显著抑制作用(P0.05),以两药联合最强,联合指数为1.21;三者均可明显诱导A549细胞凋亡(P0.05),两药联合组更显著(P0.05)。与空白对照组比较,3组划痕愈合距离缩短,穿过的细胞数量减少,差异有统计学意义(P0.05),两药联合组更显著(P0.05)。与空白对照组比较,3组Bax、E-cad表达显著升高,Bcl-2、MMP2表达显著降低(P0.05),两药联合组变化更明显(P0.05)。结论益肺解毒方联合顺铂对抑制人肺腺癌A549细胞具有联合增效作用,其机制可能与抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡(促进Bax表达,抑制Bcl-2表达)、抑制细胞侵袭转移(下调MMP2表达,上调E-cad表达)有关。     

人肺腺癌A549干细胞的分离鉴定及益肺解毒方对其化疗耐药机制的调节

目的:研究无血清悬浮培养法分离人肺腺癌A549干细胞以及益肺解毒方对人肺腺癌A549干细胞化疗耐药机制的调控。方法:无血清悬浮培养法分离人肺腺癌A549干细胞;CCK8法检测顺铂、益肺解毒方药物血清、益肺解毒方药物血清协同顺铂对人肺腺癌A549的增殖抑制作用;流式细胞术检测人肺腺癌A549干细胞的ABCB1、ABCG2的表达。结果:无血清悬浮培养法可分离富集人肺腺癌A549干细胞,顺铂可抑制人肺腺癌A549、人肺腺癌A549干细胞的生长,呈量效关系;益肺解毒方药物血清能够抑制人肺腺癌A549干细胞的生长,呈量效关系;中剂量益肺解毒方药物血清协同顺铂对人肺腺癌A549干细胞的增殖抑制作用与顺铂组比较,P0.01,q值为1.22;高剂量益肺解毒方药物血清协同顺铂对人肺腺癌A549干细胞的增殖抑制作用与顺铂组比较,P0.01,q值为1.04;中剂量益肺解毒方药物血清协同顺铂作用于后人肺腺癌A549干细胞后,ABCB1、ABCG2的表达量下降,与顺铂组比较P0.01。结论:无血清悬浮培养法可分离人肺腺癌A549干细胞;益肺解毒方能够抑制人肺腺癌A549干细胞的生长,与顺铂具有协同增效效应,逆转其耐药,可能是通过降低人肺腺癌A549干细胞的ABCB1、ABCG2的表达实现的。     

从PTEN-PI3K-AKT信号通路探讨补肾疏肝方含药血清抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移的机制

目的:通过研究补肾疏肝方含药血清对PTEN-PI3K-AKT信号通路的影响,探讨补肾疏肝方抑制肺腺癌细胞增殖和转移作用机制。方法:大鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为生理盐水组(NS为2 m L),顺铂组(8 mg·kg-1),补肾疏肝方低剂量组(15 g·kg-1),补肾疏肝方高剂量组(30 g·kg-1),联合顺铂低剂量组(15 g·kg-1+8 mg·kg-1),联合顺铂高剂量组(30 g·kg-1+8 mg·kg-1),每只大鼠ig,2 m L,每天2次,共5 d。制备药物血清:经药物作用后的大鼠,经腹主动取血,分离血清,灭活,过滤,冻存。MTT法检测补肾疏肝方含药血清对A549细胞增殖的影响。三维细胞培养观察并计数各组细胞形成管状结构数量。RT-PCR检测含药血清对A549肺腺癌细胞AKT-1,Cyclin D1,NF-κB mRNA水平的表达,Western blot检测含药血清对PTEN,p-PI3K,p-AKT蛋白水平的表达。结果:低剂量补肾疏肝方含药血清对A549细胞有抑制作用,低剂量中药与顺铂联用有协同作用且以时间依赖方式,即补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组在48,72,96 h的抑制率均高于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组拟态血管数目均低于其他组(P0.05,P0.01);补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组PTEN蛋白表达均高于其他组(P0.05,P0.01),补肾疏肝方低剂量组与联合顺铂低剂量组p-PI3K,p-AKT蛋白,Akt1,Cyclin D1,NF-κB的mRNA表达均低于其他组(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方含药血清可通过PTEN-PI3K-AKT信号通路抑制人肺腺癌A549细胞增殖和转移。     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

金蛭方对缺血性中风大鼠caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:通过观察金蛭方对缺血性中风大鼠缺血侧大脑皮质区细胞调亡相关因子Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白含量的影响,探讨金蛭方治疗缺血性中风的作用机制。方法:采用线栓法复制缺血性中风大鼠模型,随机分为假手术组、模型对照组、金蛭方高剂量组、金蛭方低剂量组、阳性药尼莫地平片对照组。应用western-blot技术检测caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白含量变化。结果:模型组大鼠缺血侧皮质区Bcl-2蛋白表达较假手术组明显降低(P0.01);caspase-3、Bax蛋白表达较假手术组明显升高(P0.01)。用药后各治疗组大鼠缺血侧皮质区Bcl-2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);caspase-3、Bax蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。高、低剂量组在增强Bcl-2蛋白表达和降低caspase-3、Bax蛋白表达方面的作用优于对照组。结论:金蛭方通过调节缺血性中风大鼠caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达达到拮抗缺血性中风作用。     

补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响

目的:探讨补肾疏肝方对人肺癌A549细胞及其相关干性因子的影响。方法:SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为补肾疏肝方低、高剂量组(15,30 g·kg-1),顺铂组(8 g·kg-1),低剂量联合顺铂组(联合低剂量组),高剂量联合顺铂组(联合高剂量组),正常组,顺铂组ip给予相应药物,补肾疏肝方ig给予相应药物,正常组给予等体积的生理盐水,制备大鼠含药血清;分别配制10%含补肾疏肝方低、高剂量、顺铂、低剂量联合顺铂、高剂量联合顺铂,分别与肺癌A549细胞共同培养,CCK8法检测补肾疏肝方含药血清对A549增殖的影响;流式细胞术检测含药血清对A549细胞周期的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术观察含药血清对A549细胞凋亡的影响;荧光定量PCR检测含药血清对相关m RNA表达的影响;流式细胞术检测含药血清对CD133蛋白表达的影响。结果:补肾疏肝方以时间、剂量依赖方式抑制A549细胞增殖,与顺铂联合有协同增效作用,24,48,72 h高剂量联合顺铂组的抑制率分别为45.39%,54.76%及59.94%;与正常组比较,补肾疏肝方、联合、顺铂含药血清可促进A549细胞凋亡,随着浓度增加,G2/M期细胞的百分比明显增加,明显下调CD133,SOX-2,OCT-4 m RNA的表达,明显降低CD133蛋白表达量,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:补肾疏肝方可抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡,与顺铂联合可下调CD133,SOX-2,OCT-4等干性因子的表达。     

益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织Bcl-2、Bax、MMP-9表达的影响

目的探讨益肺散结方对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及其作用机制。方法建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将50只建模小鼠随机分为模型组、顺铂组及益肺散结方低、中、高剂量组,每组10只。模型组给予生理盐水灌胃,1次/d,连续21 d;益肺散结方低、中、高剂量组分别给予含生药0.5,1.0,2.0 g/mL的益肺散结药液灌胃,1次/d,连续21 d;顺铂组给予2 mg/kg顺铂腹腔注射,隔日1次,共21 d。干预结束后处死各组小鼠,剥离瘤组织并称瘤质量,计算抑瘤率;采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中Bcl-2和Bax mRNA的表达量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量。结果益肺散结方中、高剂量组和顺铂组瘤质量均明显低于模型组(P均0.05),且益肺散结方中、高剂量组和顺铂组抑瘤率均明显高于益肺散结方低剂量组(P均0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组瘤质量和抑瘤率比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益肺散结方中、高剂量组移植瘤组织中Bcl-2 mRNA表达量和MMP-9蛋白表达量均明显低于模型组和益肺散结方低剂量组(P均0.05),而Bax mRNA表达量均明显高于模型组和益肺散结方低剂量组(P均0.05),益肺散结方高剂量组和顺铂组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论益肺散结方对小鼠Lewis肺癌组织具有明显的抑制作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2、MMP-9表达有关。     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231乳腺癌细胞凋亡及Bax、Bcl-2的影响

目的：研究疏肝健脾解毒方含药血清对MDA-MB-231三阴性乳腺癌(TNBC)细胞凋亡及相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达的影响。方法：给大鼠灌胃疏肝健脾解毒方制备含药血清,设置空白对照组、含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组及阳性对照组,以流式细胞术检测细胞凋亡,Western Blot测定Bcl-12、Bax蛋白表达量。结果：各给药组凋亡率及Bax、Bcl-12蛋白表达水平与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);含药血清低、中、高剂量组Bax、Bcl-2蛋白表达水平与阳性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：疏肝健脾解毒方对MDA-MB-231 TNBC细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与干预Bax、Bcl-2蛋白表达有关。     

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞中整合素β1蛋白表达的影响

目的:利用补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的肺腺癌A549细胞,观察A549细胞中整合素β1的表达变化,探讨补中益气汤在肺癌侵袭和转移过程中的作用。方法:采用血清药理学方法制备含药血清,按照随机对照方法将40只SD大鼠随机分为4组,分别为补中益气汤高剂量含药血清组(11.34 g·kg-1)、补中益气汤中剂量含药血清组(5.67 g·kg-1)、补中益气汤低剂量含药血清组(2.84 g·kg-1)和空白血清组(10 m L·kg-1),每日给药一次,连续灌胃三天后提取大鼠血清,用于后续实验。将A549细胞分为空白血清组(10%大鼠空白血清)、TGF-β+空白血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠空白血清)、TGF-β+补中益气汤高剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠高剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤中剂量含药血清(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠中剂量含药血清)、TGF-β+补中益气汤低剂量含药血清组(10 ng·m L-1TGF-β+10%大鼠低剂量含药血清)。MTT法检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞的抑制率。细胞划痕实验检测补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549细胞迁移能力的影响。细胞免疫荧光技术、western blot方法检测整合素β1在蛋白水平上的表达。结果:与A549细胞空白血清组、TGF-β+空白血清组分别比较,补中益气汤高剂量、中剂量和低剂量含药血清可提高对TGF-β介导的A549细胞的抑制率(IR)(P0.01),分别具有抑制TGF-β介导的A549细胞的迁移作用(P0.01),且能减少整合素β1在蛋白水平上的表达(P0.01)。结论:补中益气汤含药血清能抑制TGF-β介导的A549细胞的生长及迁移,以及能降低整合素β1在蛋白水平上的表达。     

芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路影响的研究

目的:观察芪杉胶囊对肺癌A549细胞PI3KAKt信号通路的影响。方法:分别运用MTT法检测含药血清对A549细胞增殖的影响;Annexin V-PE/7-AAD双染法检测含药血清对A549细胞凋亡的影响;Western-blot法检测含药血清对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响;RT-PCR法检测含药血清对A549细胞凋亡相关基因表达的影响。结果:芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为24.26%,16.44%和10.89%,含药血清浓度越大,对细胞的抑制作用越显著。与空白组相比,芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组细胞凋亡率显著升高,且含药血清浓度越大,对细胞凋亡的作用越显著。芪杉胶囊含药血清高、中、低剂量组及顺铂组Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因相对表达量与空白组相比,表达量降低,且含药血清浓度越大,对A549细胞凋亡相关蛋白和基因表达的影响越显著。结论:芪杉胶囊通过影响A549细胞凋亡相关Caspase-3、Caspase-9、Cytochrome c、AKT、m TOR及PI3K蛋白和基因表达,从而抑制细胞增值、促进细胞凋亡。     

二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应初探

目的探讨二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应。方法采用中药血清药理学方法,选择高、中、低剂量的二冬膏水溶液以灌胃方式给药,获取二冬膏含药血清,以空白血清为对照,干预A549细胞,应用MTT法、划痕实验法及Transwell侵袭实验法检测二冬膏含药血清对A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果二冬膏高、中、低剂量组干预A549细胞24 h后均可不同程度抑制肺腺癌A549细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05),并呈时间、剂量依赖性,以二冬膏中剂量组抑制作用最明显;二冬膏高、中、低剂量组A549细胞的迁移距离较空白组缩短,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组细胞迁移距离最短;二冬膏高、中、低剂量组均能降低A549细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组侵袭过膜的细胞数最少。结论二冬膏含药血清能抑制肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力,中剂量抑制作用最明显。     

新型抗癌复方蟾山护金方干扰肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的:观察新型抗癌复方蟾山护金方含药血清对肺腺癌A549细胞增殖的影响,并探讨其能否诱导A549细胞凋亡。方法:将30只SD大鼠随机分成3组,分别为含药血清组、消癌平组、阴性血清组,每组10只,各组依次灌胃蟾山护金方煎剂、消癌平片水溶剂和生理盐水,制备含药血清,利用含药血清做A549细胞增殖抑制实验(MTT实验)、细胞凋亡实验和检测"死亡蛋白酶"caspase-3的表达变化。结果:通过MTT实验,发现蟾山护金方含药血清能够抑制A549细胞的增殖,且呈剂量相关性,与阴性血清组比较,差异有统计学意义(P 0. 05);与消癌平组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。通过流式细胞仪检测细胞凋亡,发现蟾山护金方含药血清中浓度组和高浓度组诱导A549细胞早期凋亡,与阴性血清组比较,差异有统计学意义(P 0. 05; P 0. 05)。通过Western-Blot实验发现A549细胞caspase-3激活上调。结论:新型抗癌复方蟾山护金方含药血清能抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,且呈剂量正相关性。     

益气活血解毒方对肺癌A549/DDP耐药细胞株JAK2-STAT3信号通路的干预作用研究

目的观察益气活血解毒方对A549/DDP耐药细胞JAK2-STAT3信号通路分子JAK2、STAT3表达的影响。方法培养A549细胞、A549/DDP细胞,分别用高、中、低剂量益气活血解毒方含药血清进行干预,MTT法筛选最佳浓度的含药血清,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot技术检测各组细胞中JAK2、STAT3蛋白表达变化,RT PCR技术检测各组细胞中JAK2、STAT3 mRNA表达变化。结果益气活血解毒方含药血清作用48h能明显抑制A549/DDP细胞增殖,且最佳浓度为中剂量;与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞凋亡率明显提高(P0.05);与A549细胞组比较,A549/DDP细胞组JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显降低(P0.05),与对照血清组比较,益气活血解毒方最佳含药血清组A549/DDP细胞JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显升高(P0.05)。结论益气活血解毒方干预肺癌化疗耐药的作用可能是通过调节JAK2-STAT3信号通路,促进细胞凋亡实现的。     

不同剂量活血、破血药对动脉粥样硬化小鼠主动脉Bcl-2及Bax基因表达的影响

目的观察不同剂量活血药(川芎、当归)、破血药(三棱、莪术)对动脉粥样硬化(AS)小鼠主动脉B细胞白血病-淋巴瘤-2(Bcl-2)及B细胞白血病-淋巴瘤-2相关蛋白基因(Bax)表达的影响。方法 64只4周龄Apo E基因敲除小鼠制备AS模型,模型制备成功后随机分为6组:模型对照组(模型组)、阿托伐他汀钙组(他汀组)、低剂量活血药组(低活血组)、低剂量破血药组(低破血组)、高剂量活血药组(高活血组)、高剂量破血药组(高破血组)。连续灌胃给药8周后,处理动物。选用RT-PCR检测主动脉组织Bcl-2及Bax基因m RNA表达并分析比较其结果。结果活血药、破血药均能显著上调Bcl-2、下调Bax基因表达水平(P0.01)。其中在上调Bcl-2基因表达水平方面,破血药作用优于活血药(P0.05或P0.01),且高、低剂量组组间存在显著量效关系(P0.01);在下调Bax基因表达水平方面,活血药作用显著优于破血药(P0.01),且高、低剂量组组间存在量效关系(P0.05或P0.01)。结论活血药、破血药可通过调节主动脉Bcl-2及Bax基因表达水平,从而起到抗动脉粥样硬化的作用。     

补中益气汤含药血清干预A549/DDP细胞Bad、NF-κb、Caspase-9表达的实验研究

目的 探讨补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞中Bad、NF-κb、caspase-9表达的影响。方法 用MTT法筛选最佳浓度的含药血清。用免疫印迹法、real time PCR方法检测A549、A549/DDP细胞各组中Bad、NF-κb、Caspase-9蛋白和mRNA的表达水平。采用SPSS 16.0进行数据处理,P0.05有统计学意义。结果 中剂量含药血清培养48h为最佳浓度含药血清;A549/DDP对照组中Bad、NF-κb蛋白和基因的表达明显高于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组Bad、NF-κb的蛋白和基因表达减少,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。A549/DDP对照组中caspase-9蛋白和基因的表达明显低于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组caspase-9的蛋白和基因表达增加,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。结论 补中益气汤含药血清抑制A549/DDP的作用可能是通过调节Bad、NF-κb、caspase-9蛋白、基因的表达,促进细胞凋亡实现的。     

芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组(10 mL/kg生理盐水)和芪楼丸低、中、高剂量组(6.75、13.5、27 g/kg芪楼丸浸膏),各组连续干预5 d,腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分别给予各组芪楼丸含药血清干预24、48、72 h。采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测细胞凋亡情况，ELISA法检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9水平，RT-qPCR法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达，Western blot法检测细胞JAK2、STAT3、STAT5、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，芪楼丸含药血清能抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),细胞中Bax、caspase-3、caspase-9水平和Bax mRNA表达均升高(P<0.01),Bcl-2水平、Bcl-2 mRNA表达和JAK2、STAT3、p-JA...     

益气逐瘀方对心肌梗死大鼠心功能、细胞凋亡及miR-24相关基因表达的影响

目的探讨益气逐瘀方参元益气活血胶囊(SYD)对急性心肌梗死大鼠心功能、细胞凋亡及miR-24相关基因表达的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、SYD高剂量组、SYD中剂量组、SYD低剂量组,每组10只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心肌梗死模型,SYD高、中、低剂量组从术后第2天开始给予SYD药液灌胃,共给药2周。治疗结束后检测大鼠血清CK、LDH水平,超声心动图检测左室功能,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR检测心肌组织miR-24、Bim、Bcl-2、Bax、caspase-9mRNA表达。结果与模型组比较,SYD高、中、低剂量组均能显著降低血清CK、LDH水平(P0.05,P0.01),降低左室舒张和收缩末期内径(P0.05,P0.01),升高左室短轴缩短率及射血分数(P0.05,P0.01),升高心肌组织miR-24、Bcl-2 mRNA表达(P0.05,P0.01),降低Bim、Bax、caspase-9 mRNA表达(P0.05,P0.01),同时降低心肌细胞凋亡指数(P0.05,P0.01)。结论 SYD能够减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与上调miR-24表达,抑制靶基因Bim及促凋亡基因Bax、caspase-9表达有关。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

温下方含药血清诱导A549/DDP细胞凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响

目的:研究温下方含药血清诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡及对Bcl-2,Bax,p53蛋白表达的影响。方法:制备温下方含药血清,高效液相色谱法(HPLC)定性检测含药血清中人参皂苷Rb1、大黄素和乌头碱。A549/DDP细胞分为DDP干预组,含药血清+DDP干预组,正常血清+DDP干预组。孵育24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜检测Bcl-2,Bax及p53蛋白表达。结果:HPLC结果显示含药血清中含有人参皂苷Rb1、大黄素及乌头碱。含药血清作用后,与DDP干预组比较,含药血清+DDP干预组细胞凋亡率增高至(21.82±3.27)%(P<0.05);细胞内Bcl-2蛋白表达降低至2.81±0.02(P<0.05);Bax蛋白表达增高至2.90±0.08(P<0.05);p53蛋白表达增高至3.58±0.09(P<0.05)。结论:温下方含药血清明显诱导A549/DDP细胞凋亡,显著降低Bcl-2蛋白表达,提高Bax,p53蛋白表达,可能从诱导耐药细胞凋亡角度逆转耐药。