多发性骨髓瘤细胞株PRIM8226侧群细胞分选及其生物学特性的研究

目的 检测和分选多发性骨髓瘤（MM）细胞株PRIM8226中的侧群细胞（SP细胞）并鉴定其生物学特性.方法 以Hoechst33342/碘化丙啶（PI）荧光染料双染,维拉帕米拮抗对照,应用流式细胞术荧光激活分选法检测并分选MM细胞株PRIM8226 SP细胞,并通过细胞生长曲线、细胞周期、免疫表型、集落形成实验、RT-PCR检测干细胞特异标志物mRNA表达量、裸鼠体内成瘤实验等对SP细胞的生物学特性进行初步探讨.结果 MM细胞株PRIM8226 SP细胞含量为（1.78±0.89）％,采用流式细胞术成功分选SP细胞.生长曲线显示：SP细胞分选初期生长较主群细胞（MP细胞）缓慢,进入稳定增长期后增殖能力与MP细胞差异无统计学意义（P＞0.05）.细胞周期分析显示：SP细胞与MP细胞相比,周期多处于Go/G1期[（44.34±3.09）％、（28.49±1.97）％,P＜0.05],较少的细胞处于S期[（38.83±3.69）％、（51.49±4.62）％,P＜ 0.05].在免疫表型研究中,观察到SP和MP细胞的CD138、CD38表达分别为（78.5±8.5）％、（82.0±4.0）％和（72.3±15.7）％、（84.3±11.9）％,差异均无统计学意义（均P＞0.05）.MM细胞株PRIM8226 SP细胞的单细胞克隆直径、克隆形成数、克隆形成率均高于MP细胞[0.280±0.016和0.118±0.019、1 722±127和358±14、（86.1±3.46）％和（17.9±1.88）％,P＜0.05].RT-PCR显示SP细胞干细胞标志性基因的表达高于MP细胞：c-myc[（29.90±3.73）％、（16.84±2.35）％]、KIF4[（29.97±2.89）％、（19.06±1.23）％]、SOX2[（40.00±4.58）％、（16.62±2.09）％]、OCT4[（32.96±1.56）％、（23.27±0.92）％]（均P＜0.05）.裸鼠体内成瘤实验显示SP细胞成瘤能力显著高于MP细胞（最低成瘤数量分别为5×103、5×105个）.结论 MM细胞株PRIM8226的SP细胞在静止期细胞比例、集落形成能力、干细胞标记c-myc、KIF4、SOX2、OCT4基因表达量、体内成瘤能力上与MP细胞差异均有统计学意义,而SP细胞和MP?     

侧群细胞的研究进展

在肿瘤的发生、发展中侧群细胞扮演着极其重要的作用。侧群细胞具有肿瘤干细胞的特性,尤其具备肿瘤的始发潜能,同时对化疗药物有较强的抵抗能力。对侧群细胞的生物学特性、分选与培养方法及侧群细胞与肿瘤耐药关系的研究,能为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路和方法。     

胃癌侧群细胞与肿瘤干细胞的研究新思路

以肿瘤于细胞(CSC)理论为基础,人们一直在探索恶性肿瘤的治疗方案.胃癌侧群细胞(SP)具有肿瘤干细胞特性.从胃癌侧群细胞出发,基于肿瘤干细胞理论,探讨胃癌的分子靶向治疗策略,可以为胃癌的早期诊断、治疗效果的鉴定、预后以及胃癌的治疗道路寻找新的方向.     

常见恶性肿瘤侧群细胞的研究进展

侧群细胞(SP)是指利用荧光染料Hoechst33342外排特性而筛选出来的细胞群体.SP具有肿瘤干细胞特性,在肿瘤的发生、发展中发挥极其重要的作用.目前国内外对于各类常见恶性肿瘤SP都进行了较为广泛的研究.对SP的研究可为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路和方法.     

肺癌侧群细胞microRNA表达谱检测及初步分析

背景与目的 目前研究认为侧群细胞(side population cell,SP cell)富集了肿瘤干细胞,是肿瘤生长和发展的根源;并且SP细胞对放化疗高度耐受,成为肿瘤复发转移的重要因素.为此,我们探讨了肺癌SP细胞与非SP细胞(non-SP)miRNA分子表达谱差异,旨在为进一步研究miRNA在肺癌干细胞中的作用机制打下基础.方法 利用Hoechst 33342染料法,通过流式细胞仪紫外激光分选功能分选出A549细胞中的SP细胞和non-SP细胞,分别采用Trizol一步法提取两者的总RNA,利用miRNA芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 肺癌SP细胞和non-SP细胞miRNA表达谱存在明显差异.与non-SP细胞相比,在SP细胞中上调2倍以上的miRNA有9条,下调2倍以上的miRNA有25条.结论 差异表达的miRNA能参与肺癌干细胞的发生发展过程,为进一步揭示肺癌干细胞发生的分子机制提供了依据.     

侧群细胞与肿瘤干细胞研究进展

目的:总结国内外采用侧群细胞分析法(side populations analysis)研究肿瘤干细胞的现状。方法:应用检索PubMed数据库检索系统,以“侧群细胞“和“肿瘤干细胞“等为关键词,检索1996-01-2008-12侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献。资料选择:选择所有侧群细胞法研究肿瘤干细胞的文献。纳入标准:1)侧群细胞法分离肿瘤干细胞;2)侧群细胞法鉴定肿瘤干细胞。根据纳入标准,精选80篇文献,最后纳入分析36篇文献。结果:采用SP法可以有效的分离和富集大部分类型的肿瘤干细胞,但是某些肿瘤SP细胞不具有肿瘤干细胞特性,此外,SP法还存在细胞毒性的问题。结论:采用SP分析法研究肿瘤干细胞存在许多问题,但是当无法确认到某种类型的肿瘤干细胞的表面标志时,它仍然是分离和富集肿瘤干细胞的有效方法之一。     

侧群细胞研究进展与肿瘤治疗策略

肿瘤组织具有无限增殖的能力,这和干细胞具有众多的类似[1]。新近研究表明肿瘤细胞自我更新和无限增殖的根源是肿瘤干细胞的存在。肿瘤干细胞在肿瘤组织中只是极小的一部分,却有着和干细胞类似的自我更新能力,它们本身分裂次数很少,却能产生类似前体细胞的快速增长的子代细胞群体。它们还和干细胞一样,能经受得起在血管中的长途游走,在适合的部位繁衍起来。总之,肿瘤干细胞是肿瘤细胞的祖细胞,是肿瘤的真正种子,它们虽然仅占肿瘤细胞中极少的一部分,但具有自我更新能力和不定分化潜能,是形成不同分化程度肿瘤和肿瘤不断生长的根源,是肿瘤发生扩散、复发等过程中的起始细胞或动力细胞。传统的治疗方法不能有效的作用于肿瘤干细胞,开发针对肿瘤干细胞的靶向治疗能给肿瘤治疗模式带来全新的改变,有望彻底改善肿瘤患者的预后。1侧群细胞定义1996年,Goodell[2]等首次在小鼠骨髓中用流式细胞仪分离出一小群SP(S ide Popu lation)细胞,因有很强的外排染料的功能而呈现Hoechst33342低染(Hoechst33342是一种核酸结合染料,在紫外光激发下可发出蓝色和红色两种荧光),这群细胞不仅表达造血干细胞的表面标志,而且仅正常量的千分...     

侧群细胞及其在肿瘤干细胞研究中的应用

摘 要：目前应用肿瘤干细胞表面标志鉴定、分选干细胞的方法,已经在多种肿瘤中发现了肿瘤干细胞。而不少肿瘤干细胞表面标志是未知的,因此可以通过初次分离得到干细胞样细胞再鉴定出肿瘤干细胞。侧群细胞是具有干细胞样特性的细胞,它们具有起始肿瘤发生、表达干细胞样基因及耐受化疗药物的特性。文章就侧群细胞的分选方法、特征、在肿瘤干细胞研究中的应用及存在的问题进行综述。     

侧群细胞与肺癌肿瘤干细胞

侧群(side population,SP)细胞是一小群能够将染料Hoechst 33342排出从而在流式细胞图上呈现Hoechst 33342低染的细胞,研究者已在多种肿瘤组织和细胞系中检测出了SP细胞并验证这些SP细胞具有强干细胞活性。现有试验结果证实多种肺癌组织和肺癌肿瘤细胞系中也存在具有类干细胞特性的SP细胞,这些SP细胞的鉴别与分离对于肺癌肿瘤干细胞的研究有何意义?本文将整合现有研究资料就这一问题进行阶段性综述。     

人小细胞肺癌细胞株H446侧群细胞的生物学特征

背景与目的:肿瘤干细胞学说的提出为肿瘤治疗提供了新的靶点和方向,但肿瘤干细胞的分离纯化一直是个难题。本研究拟从人小细胞肺癌细胞株H446中分离并鉴定出具有干细胞特性的侧群(SP)细胞,研究其生物学特征,为肿瘤干细胞的分离纯化奠定基础。方法:采用荧光激活细胞分选(FACS)技术分选得到H446细胞中SP细胞和非侧群(NSP)细胞,并检测纯度。观察形成悬浮肿瘤细胞球的能力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及荧光定量PCR检测这两种细胞亚群中CD133、ABCG2、NucleosteminmRNA水平。MTT法比较SP细胞、NSP细胞及未分选细胞体外增殖能力及耐药性差异,流式细胞仪检测体外分化能力,裸鼠成瘤实验检测体内成瘤能力。结果:荧光显微镜下H446细胞中Hoechst33342阴性细胞约为(5.1±0.2)%。流式细胞分选结果显示,H446中SP细胞比例为(6.3±0.1)%。SP细胞在无血清培养基中形成悬浮肿瘤细胞球的能力强于NSP细胞。CD133、ABCG2在SP细胞中的表达是NSP细胞的(21.60±0.26)倍、(7.10±0.14)倍,差异有统计学意义(P<0.01);Nucleostemi...     

膀胱癌细胞系T24侧群细胞的分离及初步鉴定

目的:检测和分选人类膀胱癌细胞系T24中的侧群（side population,SP）细胞,并初步鉴定其癌干细胞特性,为癌干细胞的分离纯化奠定基础。方法:采用荧光激活细胞分选（FACS）技术,分选得到T24细胞中的侧群细胞,并检测其比例。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测侧群细胞中ABCG2的表达情况;继而将侧群细胞培养于无血清培养基中,观察形成悬浮肿瘤细胞球的能力。结果:流式细胞分选结果显示:T24细胞中侧群细胞的比例约为3.6%。和对应的母系T24细胞相比,T24侧群细胞的ABCG2表达增高。培养于无血清培养基中的侧群细胞成簇生长,并形成肿瘤细胞球。结论:人类膀胱癌细胞系T24中存在具有癌干细胞特性的侧群细胞。     

siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响

目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.     

过表达miR-145的脐带间充质干细胞外泌体改善肾细胞癌细胞786-0对舒尼替尼的药物敏感性

目的:探究过表达miR-145的脐带间充质干细胞外泌体对肾透明细胞癌细胞786-0舒尼替尼药物敏感性的影响.方法:分离纯化人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),流式细胞术鉴定其细胞表型,茜素红及红油O染色观察其成骨与成脂分化能力;差...     

人前列腺癌细胞系DU 145中肿瘤干细胞样侧群细胞的分离

目的:分离人前列腺癌细胞系DU 145中的侧群(side population,SP)细胞,并初步分析其生物学特性。方法:采用荧光激活细胞分类(fluorescence activated cell sorting,FACS)技术,从DU 145细胞中分离出侧群细胞,并检测其比例;继而培养于无血清培养基中,观察其生长特性。采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测侧群细胞中ABCG2的表达水平。结果:DU 1 4 5细胞中存在含量极少的侧群细胞,比例约1.1%;培养于无血清培养基中成簇生长。和对应的母系DU 145细胞相比,DU 145侧群细胞的ABCG2表达增高。结论:人前列腺癌细胞系DU 145中存在具有肿瘤干细胞特性的侧群细胞。     

上调miR-200a表达对人肝癌细胞MHCC97中边缘群细胞干细胞特性的影响

目的:探讨转染miR-200a mimics对人肝癌细胞系MHCC97中边缘群细胞(SP)干细胞特性的影响。方法:利用流式细胞技术从MHCC97细胞中分离出SP细胞。转染组为应用脂质体介导转染miR-200a mimics的SP细胞,对照组为未接受转染的SP细胞。采用实时荧光定量RT-PCR检测两组SP细胞miR-200a的表达情况。四甲基偶氮唑盐(MTT)和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖情况。Transwell小室检测细胞迁移能力。裸鼠成瘤实验检测细胞体外成瘤能力。结果:转染miR-200a mimics可明显上调SP细胞miR-200a的表达。MTT结果显示转染组SP细胞的增殖能力明显低于对照组(P<0.05),转染组软琼脂中克隆形成率(24.70±5.54)%明显低于对照组(51.63±7.11)%（P<0.05)。Transwell实验显示转染组细胞穿膜数为(18.52±4.27)个,明显少于对照组(63.34±7.41)个(P<0.05)。裸鼠成瘤实验中转染组成瘤数(1/8)也低于对照组(8/8)（P<0.05)。结论:上调人肝癌细胞系MHCC97中SP细胞miR-200a的表达,能够抑制SP细胞的增殖和迁移,降低体外成瘤能力,即抑制SP细胞的干细胞特性。     

The side population of ovarian cancer cells defines a heterogeneous compartment exhibiting stem cell characteristics

Cancer stem cells (CSC) are believed to be involved in tumor evasion of classical antitumor therapies and have thus become an attractive target for further improvement of anticancer strategies. However, the existence and identity of CSC are still a matter of controversy. In a systematic screen of 13 ovarian cancer cell lines we show that cells with stem cell properties are reliably detectable as a minor population, characterized by ABC transporter expression resulting in the side population (SP) phenotype. In different cell lines, either ABCG2 or ABCB1 was found to be responsible for this effect. Purified SP cells featured virtually all characteristics of bona fide CSC, including clonogenicity, asymmetric division and high tumorigenicity in vivo. Using in-depth phenotyping by multicolor flow cytometry, we found that among the investigated ovarian cancer cell lines the SP compartment exhibits tremendous heterogeneity and is composed of multiple phenotypically distinct subpopulations. Thus, our study confirms previous results showing that CSC are contained within the SP. However, the exact identity of the CSC is still disguised by the high complexity of the CSC-containing compartment. Further functional studies are needed to determine whether a single cellular subset can unambiguously be defined as CSC or whether multiple stem cell-like cells with different properties coexist. Moreover, the observed heterogeneity may reflect a high level of plasticity and likely influences tumor progression, escape from immune-surveillance and development of resistance to anticancer therapies and should therefore be considered in the development of new treatment strategies.