自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡

目的研究自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤 (3-methyladenine,3MA)对长春新碱(vincristine,VCR)诱导的肝癌细胞系HepG2细胞自噬性凋亡的影响.方法利用已建立的VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡之模型,采用monodansylcadaverin (MDC)染色及流式细胞术荧光强度测定方法对自噬进行定量研究,采用流式细胞术及DNA电泳检测细胞凋亡.结果 3MA可以特异性地阻止自噬泡形成,还可以部分地抑制HepG2细胞自噬性凋亡.结论自噬是VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡所必需的.     

内质网应激-IRE1-ASK1-JNK通路在奥沙利铂诱导乳腺癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激-IRE1-ASK1-JNK通路在奥沙利铂(L-OHP)介导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡中的作用.方法 体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,分为正常对照组(Control组)、奥沙利铂组(L-OHP组)、抑制剂组(4-PBA组),流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;自噬慢病毒检测各组细胞自噬水平...     

莱菔素通过阻断STAT3 信号通路杀伤三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468和MDA-MA-231

[摘要] 目的：探讨染色体区域维持因子1（CRM1）抑制剂莱菔素（LFS-01）通过抑制信号转导及转录激活因子3（STAT3）信号通路杀伤三阴性乳腺癌（TNBC）细胞的作用及其机制。方法：通过分子动力学模拟技术,验证LFS-01 是否可与CRM1 分子结构上的核输出信号（NES）口袋结合。通过CCK-8 法检测LFS-01 对4 种不同的乳腺癌细胞杀伤活力。用不同浓度的LFS-01 处理TNBC细胞MDA-MB-468 和MDA-MB-231,免疫荧光法检测CRM1 货物蛋白STAT3 以及带有NES序列的蛋白在细胞内定位的变化;WB检测LFS-01 对STAT-3 信号通路以及其下游蛋白表达的影响;WB、细胞免疫荧光和透射电镜法检测自噬的发生;通过流式细胞术检测药物对细胞周期和凋亡的影响。结果：分子动力学模拟结果表明,LFS-01 能够与CRM1 的NES口袋结合,显示其在结构上影响后者蛋白转运功能的可能性。LFS-01 能特异性杀伤TNBC 细胞MDA-MB-468 和MDA-MB-231。10 μmol/L LFS-01 处理后TNBC细胞中STAT3 和带有NES标签的蛋白均被阻滞于细胞核中,而在对照组中这些蛋白均匀分布在细胞质中。随着LFS-01 剂量的提高和处理时间的延长,MDA-MB-468 和MDA-MB-231 细胞中磷酸化STAT3 蛋白、Bcl-xL 和Cylin D1 表达均降低,细胞内自噬标志蛋白LC3B表达上升;同时出现高密度、多层的团状自噬小体;细胞周期阻滞于S 期,并且凋亡率显著升高（P<0.05 或P<0.01）。结论：LFS-01 可阻断CRM1 运载蛋白出核、进而抑制STAT3 信号通路的激活,从而促进TNBC 细胞MDA-MB-468 和MDA-MB-231 发生自噬、细胞周期阻滞和凋亡。     

表柔比星诱导的保护性自噬抑制了胃癌MGC803细胞的凋亡

目的:明确表柔比星作用胃癌MGC803细胞后自噬的存在,探讨自噬在表柔比星诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法:表柔比星处理胃癌MGC803细胞,MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白表达。结果:1.2μg/ml的表柔比星作用MGC803细胞24h,细胞凋亡率为(23.56±3.49)%,并且多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)蛋白发生了裂解。与此同时,1.2μg/ml的表柔比星导致了微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白的提高和细胞自噬体的增多。提示表柔比星同时诱导了凋亡和自噬的发生。与单药表柔比星相比,自噬抑制剂氯喹联合表柔比星明显提高了细胞增殖抑制率[(71.79±4.34)%vs(47.70±3.67%),P<0.05]。而且,氯喹联合表柔比星诱导了更明显的MGC803细胞凋亡[(43.98±4.67)%vs(25.09±3.29%),P<0.05]。结论:表柔比星诱导的保护性自噬抑制了胃癌MGC803细胞的凋亡。自噬抑制剂联合表柔比星为胃癌提供了新的治疗策略。     

靶向肝癌细胞自噬提高大黄素的毒性杀伤作用

背景与目的:大黄素处理肝癌细胞后能够诱导内质网应激和凋亡.鉴于内质网应激与自噬之间的关联及后者作为细胞对抗应激环境的一种自我防御机制,该研究拟探讨通过抑制肝癌细胞自噬信号通路的策略提高大黄素对肿瘤细胞的毒性杀伤作用.方法:大黄素处理肝癌细胞后,应用CYTO-ID自噬检测试剂盒和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测大黄素诱发细胞自噬情况;利用细胞自噬抑制剂(氯喹)预先抑制肝癌细胞自噬的产生,然后用大黄素处理肝癌细胞,最后通过ATPlite试验和细胞克隆形成实验检测肿瘤细胞存活;通过流式细胞术检测氯喹和大黄素联合处理诱导肝癌细胞发生凋亡的凋亡率,采用Western blot检测凋亡效应蛋白caspase-3活化断裂后产生活性片段的水平.结果:大黄素处理肝癌细胞后能够诱导肝癌细胞自噬;利用氯喹抑制肝癌细胞自噬能够显著能够提高大黄素对肝癌细胞克隆存活的抑制作用;氯喹和大黄素联合处理肝癌细胞能够显著提高细胞周期sub-G1期和活化caspase-3蛋白的表达水平.结论:靶向肝癌细胞自噬能够提高大黄素的毒性杀伤作用.     

lncRNA DRAIC通过调控自噬影响结直肠癌细胞增殖与凋亡

目的:探讨lncRNA DRAIC对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞自噬、增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:使用GEPIA 2.0数据库分析DRAIC在CRC组织中的表达及预后价值。受试者工作特征(ROC)曲线评估DRAIC在CRC中的诊断价值。利用UALCAN在线数据库分析DRAIC的表达与CRC临床病理指标的关系。在CRC细胞系HCT-116和HT-29中转染DRAIC过表达质粒(OE-DRAIC)以过表达DRAIC,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞技术和TUNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测LC3B、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和AKT/mTOR通路蛋白的表达。转染OE-DRAIC并加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)后,再采用同上方法分别检测CRC细胞的增殖、凋亡情况,以及LC3B、Cleaved caspase-3和Cleaved PARP蛋白的表达。结果:DRAIC在CRC组织中表达显著下调,ROC曲线下面积(AUC)为0.781。低表达DRAIC的CRC患者总生存率...     

酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞作用的机制探讨

目的:探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)的小分子酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin AG1478对乳腺癌细胞的作用机制.方法:以乳腺癌细胞MCF-7(EGFR-/+)和MDA-MB-468(EGFR+++)为研究对象,采用MTT及克隆形成实验检测AG1478对乳腺癌MCF-7和MDA-MB-468细胞增殖和生长效应的影响;Western 印迹法测定EGFR、Akt和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的表达及活化水平;进一步应用FCM检测AG1478对MDA-MB-468细胞早期凋亡的影响.结果:AG1478 可抑制MDA-MB-468细胞的增殖和生长(P＜0.05),对MCF-7细胞增殖则无明显的抑制效应(P＞0.05);同时,MDA-MB-468细胞经AG1478处理后,细胞中磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化MAPK(p-MAPK)的表达水平明显降低(P＜0.05);FCM检测结果表明,AG1478可增加MDA-MB-468细胞的早期凋亡水平(P＜0.05).结论:AG1478可下调PI3K/Akt及Ras/Raf/MAPK信号通路,从而抑制乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖及生长,并促进细胞凋亡;但其对MCF-7细胞无明显作用.     

MG132联合自噬抑制剂对A2870卵巢癌细胞抗肿瘤效应的研究

目的:研究蛋白酶体抑制剂MG132联合自噬抑制剂对A2870卵巢癌细胞的毒性作用。方法:不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132处理A2870细胞,MTT及Hoechst33258核染色方法检测细胞的存活率及凋亡形态学改变;吖啶橙(AO)染色和蛋白质印迹法检测酸性自噬泡的形成及自噬特异性蛋白LC3的变化。多种自噬抑制剂联合MG132处理后,MTT法检测细胞的存活率。结果:与空白对照组比较,1、2、5和10μmol/L浓度的MG132作用24 h均能明显抑制A2870细胞的生长,细胞存活率分别为(84.38±0.53)%、(65.86±2.34)%、(54.63±2.36)%和(52.16±1.27)%,P值均<0.05;同时,5μmol/L的MG132处理后,A2870细胞出现染色质浓缩和核碎片等凋亡特征性形态学改变,且细胞内酸性囊泡细胞器明显蓄积;不同浓度MG132处理细胞,蛋白质印迹法证实,1μmol/L MG132即明显增加A2870细胞中LC3-Ⅱ蛋白表达,且随MG132浓度增加,LC3-Ⅱ表达呈剂量依赖性增加。与MG132单独作用后A2870细胞存活率(58.32±1.46)%比较,早期自噬抑制剂3-MA和渥曼青霉素能显著增强MG132抑制A2870细胞的增殖作用,细胞存活率分别为(43.40±2.02)%和(45.35±2.27)%,P值均<0.05。晚期自噬抑制剂巴佛洛霉素和氯喹则无增强作用,细胞存活率分别为(58.11±2.70)%和(56.76±1.15)%,P值分别为0.558和0.667。结论:蛋白酶体抑制剂MG132抑制A2870卵巢癌细胞增殖并诱导自噬。早期自噬抑制剂能增加MG132抗A2870卵巢癌细胞的作用,而晚期自噬抑制剂无明显作用。     

二甲双胍联合多西他赛对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的:通过二甲双胍联合多西他赛观察对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的抑制作用。方法:实验分为4组:多西他赛联合二甲双胍组、单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组。平板克隆实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克隆形成能力的影响,MTT实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克增殖能力的影响,流式细胞仪检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞凋亡能力的影响。结果:平板克隆实验、MTT实验和流式细胞仪凋亡检测实验结果分别显示:多西他赛联合二甲双胍中细胞的克隆率、增殖能力下降高于单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组（P<0.05）,而凋亡率多西他赛联合二甲双胍组亦高于其它各对照组（P<0.05）。结论:二甲双胍联合多西他赛能够显著降低乳腺癌细胞MDA-MB-231的克隆和增殖能力,同时增加MDA-MB-231的凋亡能力,两者的联合具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。     

人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA MB 231细胞凋亡及其可能的机制

目的:研究人参皂苷Rg3通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞人乳腺珠蛋白A(mammaglobin-A,MGBA)的表达从而抑制细胞增殖的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测5、10、15 μg/ml Rg3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,Westernblotting检测对乳腺癌细胞内MGBA表达的影响;Rg3和siRNA-MGBA单独或联合处理MDA-MB-231细胞,MTT法和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞MGBA表达的影响,敏感硫电极法检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞H2S分泌的影响.结果:作用细胞48 h后,与对照组相比,5、10、15 μg/ml Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显增高[(18.78±0.82)％、(33.25±1.17)％、(35.11±0.94)％vs(9.72±0.91)％,均P＜0.05],Rg3可促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05),也明显增强MDA-MB-231细胞内MGBA蛋白的表达(P＜0.05).与对照组相比,Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显升高[(30.12±1.01)％ vs(10.66 ±0.59)％,P＜0.05],Rg3+ siRNA-MGBA组和siRNA-MGBA组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显降低[(6.61±0.63)％、(7.02±0.46)％ vs (10.66±0.59)％,均P＜0.05];Rg3组MGBA和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达和H2S的分泌明显增强,而Rg3+ siRNA-MGBA组、siRNA-MGBA组明显抑制(均P ＜0.05).结论:Rg3可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过增强MGBA蛋白的表达并激活H2S/CSE系统得以实现的.     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.