Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法：运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果：survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论：Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。     

Disulfiram联合铜对B淋巴细胞白血病细胞株增殖与凋亡影响机制探讨

目的 研究Disulfirum(DS)联合Cu(DS/Cu)对B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞株(nalm6细胞)增殖及凋亡的影响,并探讨其机制.方法 CCK8法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6的增殖抑制作用,Annexin V/PI法检测不同浓度DS/Cu对Nalm6细胞的诱导凋亡作用,JC-1法检测不同浓度DS/Cu处理nalm6后线粒体膜电位的变化,蛋白质印迹法检测药物处理后线粒体通路相关蛋白(Bcl-2和Bcl-xl)的表达变化.结果 0.5 μmol/L Cu作用24h后对nalm6细胞的增殖抑制率为(6.39±4.93)％,与对照组比较差异无统计学意义,t=-2.244,P=0.154.而不同浓度的(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2和6.4μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu对nalm6细胞均具有显著的增殖抑制作用,抑制率分别为(22.29±6.69)％、(48.66±11.58)％、(50.83±12.61)％、(59.24±9.43)％、(62.74±9.17)％、(66.7±7.63)％、(72.13±7.94)％和(77.86±5.43)％,与对照组比较差异均有统计学意义,P值均＜0.05;24 h的IC50为(0.18±0.08) μmol/L.Annexin V/PI检测细胞凋亡结果显示,0.5 μmol/L Cu作用24 h后nalm6细胞的凋亡比例为(7.82±5.13)％,与对照组(8.34±6.23)％比较差异无统计学意义,t=0.112,P=0.916.而不同浓度的DS/Cu对nalm6细胞均具有显著的诱导凋亡作用,0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L的DS联合Cu(0.5 μmol/L)作用24h后的凋亡率分别为(17.84±7.68)％、(31.39±5.86)％、(60.41±13.87)％、(69.26±13.29)％和(81.37±12.72)％,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.05.JC-1法检测线粒体膜电位变化结果显示,单药Cu(0.5μmol/L)组的JC-1多聚体/单体比值为1.12±0.09,与对照组(0.90±0.13)比较差异无统计学意义,t=-2.442,P=0.071.不同浓度的(0.025、0.05、0.1、0.2和0.5 μmol/L)DS联合0.5 μmol/L Cu组处理nalm6细胞12 h后,线粒体膜电位水平明显降低,表现为JC-1多聚体/单体比值随浓度的增加而逐渐降低,分别为1.4±0.32、0.32±0.13、0.14±0.09、0.1±0.02和0.06±0.005,与对照组比较差异有统计学意义,P值均＜0.001.蛋白质印迹法显示,DS/Cu处理nalm6细胞12 h后能下调Bcl-2及Bcl-xl蛋白的表达.结论 DS/Cu对BALL具有增殖抑制及诱导其凋亡的作用,其作用机制可能是通过线粒体通路实现的.     

急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤分子遗传学研究进展

急性T淋巴细胞白血病/淋巴瘤(T-cell acute lymphoblastic leukemia/lymphoma,T-ALL/LBL)是定向于T细胞系的淋巴母细胞恶性肿瘤,具有高度侵袭性.近年来,许多研究致力于了解T-ALL/LBL的发病机制,寻找新的治疗靶点,开发毒性更小、效果更强、更加有针对性的药物.本文将从...     

硼替佐米调控内质网应激诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的机制探讨

目的:探讨硼替佐米对人急性T淋巴细胞白血病（T cell acute lymphoblastic leukemia，T-ALL）细胞株Molt-4细胞凋亡的影响。方法:硼替佐米（0、100、200和400 nmol/L）处理人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞后，运用MTT法测定Molt-4细胞活力；使用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态；采用荧光定量PCR法测定Bax以及Bip mRNA水平；运用Western blot法测定Bax以及Bip蛋白水平。结果:100、200和400 nmol/L的硼替佐米处理Molt-4细胞24 h后，可浓度依赖性地降低细胞活力。100、200和400 nmol/L的硼替佐米作用细胞24 h后，Molt-4细胞核发生固缩或裂解。硼替佐米（100、200和400 nmol/L）处理细胞24 h后，Molt-4细胞的Bax mRNA和蛋白表达水平明显增加且可显著上调Bip mRNA和蛋白表达水平。结论:硼替佐米可诱导人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞凋亡，作用机制可能与它调控内质网应激有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用机制研究

目的:通过细胞水平和动物模型探讨Wnt/β-catenin信号通路在白藜芦醇体内外抗急性T淋巴细胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL）中的作用及其可能机制。方法:细胞实验（人淋巴细胞白血病Molt-4和Jurkat细胞）分为空白对照组（Control组）、二甲基亚砜组（DMSO组）和白藜芦醇处理组（Res组）,动物实验分为正常对照组（Control组）、T-ALL模型组（T-ALL组）和白藜芦醇处理组（Res组）。采用CCK-8法检测白藜芦醇对Molt-4和Jurkat细胞增殖能力的影响,选取适合的给药浓度进行后续实验;尾静脉注射ICN1-GFP+ T-ALL细胞建立T-ALL小鼠模型;采用流式细胞术检测小鼠外周血中ICN1-GFP+ T-ALL细胞百分比,监测T-ALL小鼠造模后的一般情况;应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA的表达水平;应用蛋白免疫印迹法（Western Blot法）分别检测细胞和小鼠脾脏组织中β-catenin、TCF-1、LEF-1、c-Myc和Cyclin D1的蛋白表达水平。结果:白藜芦醇明显抑制Molt-4和Jurkat细胞增殖能力（P＜0.01）,抑制作用随白藜芦醇浓度增加逐渐增强（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,Molt-4和Jurkat细胞中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及其靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平均显著降低（P＜0.05）;T-ALL小鼠脾脏组织中c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平显著增高（P＜0.01）,β-catenin、TCF-1、LEF-1及靶蛋白c-Myc和Cyclin D1表达水平显著升高（P＜0.01）;经白藜芦醇处理后,小鼠外周血中GFP+白血病细胞比例明显下降（P＜0.01）,c-Myc和Cyclin D1 mRNA表达水平明显降低（P＜0.01）,各蛋白表达水平明显下调（P＜0.01）。结论:在T-ALL细胞株和动物模型中,白藜芦醇可能通过下调Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、TCF-1和LEF-1的表达进而抑制靶蛋白c-Myc和Cyclin D1水平,发挥抗急性T淋巴细胞白血病作用。     

Wnt信号通路在急性T淋巴细胞白血病中作用机制的研究进展

急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）起源于前体T细胞恶性转变和克隆性增殖。T-ALL的发生通常与基因突变和（或）染色体易位有关,从而导致T细胞发育中的T细胞生存、增殖和祖细胞分化的通路发生改变。研究表明,Wnt信号通路对造血干细胞调节和正常T细胞发育至关重要,在T-ALL中也发生异常改变。文章就近年Wnt信号通路在T-ALL发展中作用机制的研究进展进行综述。     

Notch信号通路对急性B淋巴细胞白血病患者CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞的调控作用

摘 要：［目的］ 观察急性B淋巴细胞白血病（B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL）患者外周血Notch信号通路分子表达和CD4+CD25+CD127dim/-调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）水平,评估Notch信号通路对B-ALL患者Treg活性的影响。 ［方法］ 入组31例B-ALL患者和20名对照者,分选血浆和外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,纯化CD4+CD25+CD127dim/- Treg。实时定量PCR法检测PBMC中Notch1~4、Hes1、Hes5 mRNA相对表达量,流式细胞术检测CD4+CD25+CD127dim/- Treg比例,酶联免疫吸附实验检测血浆白细胞介素10（interleukin-10,IL-10）和IL-35水平。使用Notch信号通路抑制剂GSI刺激B-ALL患者分选的PBMC,检测细胞增殖、Treg比例、IL-10和IL-35表达变化。使用GSI刺激B-ALL患者纯化的Treg,与自体PBMC以1∶10比例共培养,检测细胞增殖、IL-10、IL-35、干扰素-γ水平变化。两组间比较采用独立样本t检验或配对t检验。［结果］ B-ALL患者PBMC中Notch受体（包括Notch1、Notch2、Notch3、Notch4）和Notch下游信号分子Hes1、Hes5 mRNA相对表达量均较对照者升高（P<0.001）。B-ALL患者CD4+CD25+CD127dim/- Treg比例高于对照者（8.90%±2.41% vs 4.68%±1.01%,P<0.001）。B-ALL患者外周血IL-10和IL-35水平均高于对照者（P<0.05）。GSI刺激后B-ALL患者PBMC增殖水平与无GSI刺激组差异无统计学意义（P=0.689）,但GSI刺激后Treg比例和IL-10、IL-35水平均较无GSI刺激组降低（P<0.05）。使用GSI刺激Treg后与自体PBMC共培养,其抑制PBMC增殖的能力减弱（P<0.001）,IL-10和IL-35水平减少（P<0.05）,但干扰素-γ水平增加（P<0.001）。［结论］ B-ALL患者外周血中Notch受体表达升高可能诱导CD4+CD25+CD127dim/- Treg数量增加和免疫抑制活性增强。     

PD-1 在急性T淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨PD-1 分子在急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）患者来源的肿瘤细胞（T-ALL细胞）中的表达及其临床意义。方法：选用2015 年12 月江苏省中医院血液科提供的1 例T-ALL细胞、4 例健康志愿者提供的PBMC和博生吉医药科技（苏州）有限公司提供的人293T/PD-1 细胞,将T-ALL细胞经尾静脉注射到B-NDG小鼠构建T-ALL细胞异种移植瘤模型,用流式细胞术检测移植瘤小鼠脾中获得的细胞是否主要是由T-ALL细胞组成。用流式细胞术检测T-ALL细胞中PD-1 蛋白的表达,用RT-PCR进一步验证T-ALL细胞中PD-1 mRNA表达水平。对T-ALL细胞中PD-1 基因进行SNP测序,以检测PD-1 基因DNA序列是否发生改变。在体外使用PD-1 抑制剂研究其对T-ALL细胞增殖、凋亡以及相关因子mRNA表达水平的影响。结果：成功构建小鼠TALL细胞异种移植瘤模型,用流式细胞术确认了该例疾病是T-ALL。T-ALL 细胞中PD-1 mRNA和蛋白均高表达（均P<0.01）。PD-1 基因的第5 个外显子的一个碱基由胞嘧啶突变成胸腺嘧啶。在体外PD-1 抑制剂对T-ALL细胞的增殖和凋亡均无明显影响;PD-1 抑制剂上调抑癌蛋白IGFBP3 mRNA表达,降低促癌蛋白SULT1A3 mRNA表达（均P<0.01）。结论：PD-1 在T-ALL细胞中高表达,PD-1可作为临床上T-ALL诊断及治疗的靶点。     

成人早期前体T急性淋巴细胞白血病（ETP-ALL）与非ETP-ALL的临床特点对比

目的:对比分析成人早期前体T急性淋巴细胞白血病（ETP-ALL）与非早期前体T急性淋巴细胞白血病（non-ETP-ALL）的临床特点。方法:回顾性分析于我科系统诊治的成人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）患者19例,其中ETP-ALL 6例,non-ETP-ALL 13例,对比两组患者临床基本状况、血液及骨髓检测结果、免疫分型结果及诱导治疗后缓解情况。结果:ETP-ALL组患者白细胞水平显著低于non-ETP-ALL组患者,血小板水平显著高于non-ETP-AL组患者,主要见于pro-T-ALL,首次诱导治疗后完全缓解或接近完全缓解（CR/CRi）率显著低于后者。结论:ETP-ALL患者具有较独特的临床特点,对常规诱导治疗反应差,有必要积极探索新的治疗方法和药物。     

RNA interference-mediated silencing of NANOG leads to reduced proliferation and self-renewal,cell cycle arrest and apoptosis in T-cell acute lymphoblastic leukemia cells via the p53 signaling pathway

NANOG is critical for maintaining the self-renewal and proliferative properties of embryonic stem cells. Here we found that cultured T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) cells, as well as human primary T-ALL cells, express a functional variant of NANOG. NANOG mRNA is derived predominantly from a retrogene locus termed NANOGP8. Furthermore, we showed that RNA interference-mediated NANOG knockdown inhibited cell proliferation, reduced self-renewal, promoted apoptosis and arrested the cell cycle through a p53-mediated pathway in leukemic cells. These findings demonstrate the oncogenic potential of this pluripotent gene in human T-ALL cells.     

Accessory role of autologous T lymphocytes and adherent cells for the in vitro proliferation of T-cell colony-forming cells from patients with T-cell acute lymphoblastic leukemia

Peripheral blood T colony-forming cells (T-CFC) from patients with T-cell malignancies can proliferate in methylcellulose in the absence of added growth factors or mitogenic stimulation. Mononuclear cells (MNC) from 7 patients with T-cell acute lymphoblastic leukemia were separated into cells forming rosettes with sheep erythrocytes (E+) or not (E-). E- cells were further depleted by complement-mediated cytotoxicity with OKT3 monoclonal antibody (E-OKT3- cells). The study of their spontaneous T-cell colony-forming ability suggested that proliferation of T-CFC in the absence of added growth factors requires cellular cooperation because: (1) No colony growth was observed at low cell concentrations (up to 2 X 10(4) cells/ml) whereas at higher cell densities the number of colonies increased exponentially; (2) The plating efficiency from unfractionated MNC was higher than that from E-OKT3- or E+ cells. Irradiated autologous E+ cells enhanced the plating efficiency from blast-enriched cell fractions (E-OKT3-) when co-cultured either directly in methylcellulose or separately in a two layer assay (agar-methylcellulose), suggesting that their activity could be due to diffusible factors; (3) Adherent-cell depletion of MNC decreased colony formation. Autologous irradiated adherent cells were able to restore the plating efficiency from MNCA- cells when co-cultured directly in methylcellulose but not in separate layers; however, media conditioned by patients' A+ cells could enhance the colony growth from patients' MNCA- cells, indicating that their activity could also be mediated by constitutively released soluble factors.     

成年人T细胞急性淋巴细胞白血病中Ikaros6表达及其临床意义

目的 检测成年T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）患者Ikaros6的表达,并探讨其临床意义.方法 提取成年T-ALL患者初发时骨髓单个核细胞的RNA,反转录为cDNA,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增技术进行检测,测序进一步确定结果,并结合患者临床资料分析临床特点及其预后.结果 74例初发成年人T-ALL中,Ikaros6阳性率为21.6％（16例）,另外阳性患者较阴性患者更易发生髓外浸润（x2=4.084,P=0.043）,且外周血白细胞计数高（103.15×109/L比15.60×109/L）、贫血更严重（血红蛋白75.95 g/L比107.00 g/L）和血小板计数低（26.0×109/L比67.0×109/L）,但差异均无统计学意义（均P＞ 0.05）.Ikaros6阳性患者生存期短和具有高复发风险.结论 Ikaros6在成年人T-ALL中表达率较高,阳性患者具有外周血白细胞计数高和易出现髓外浸润等临床特点,预后差,具有高复发风险.Ikaros6可考虑作为成年人T-ALL分层治疗或预后判断的分子指标.     

布罗莫结构域4抑制剂JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞增殖的抑制作用和机制研究

目的 观察布罗莫结构域4(brd4)抑制剂JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)细胞株SUP-B15的增殖抑制、凋亡作用及对brd4及其下游基因myc、p53表达的影响,探讨其是否对bcr-abl有逆转作用.方法 采用不同浓度的JQ1处理SUP-B15细胞.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖抑制率;AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测bcr-abl、brd4 、myc 、p53的mRNA表达.结果 不同浓度的JQ1均能抑制SUP-B15细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,凋亡率较对照组明显增高,并呈时间-剂量依赖性,作用72 h半数抑制浓度为1.0 μmol/L.同时JQ1可以使bcr-abl、 brd4、 myc的mRNA水平下降,而使p53 mRNA的水平升高.结论 brd4抑制剂JQ1可通过下调brd4的表达,影响其下游基因myc及p53的表达,同时逆转bcr-abl表达,达到抑制Ph+ ALL细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用.     

miR-204通过靶向调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、侵袭的体外实验研究

目的:探讨miR-204对急性淋巴细胞白血病(ALL)CEM/C1细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与SOX4的靶向关系。方法:选取ALL细胞株CEM/C1,对CEM/C1细胞进行转染,分为NC组(无处理)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-204组(转染miR-204-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-SOX4组(转染si-SOX4)、miR-204+pcDNA组(转染miR-204-mimic+pcDNA)及miR-204+pcDNA-SOX4组(转染miR-204-mimic+pcDNA-SOX4)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-204表达水平,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞SOX4表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光素酶实验验证miR-204与SOX4的靶向关系。结果:转染细胞48 h和72 h时,miR-204组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、miR-NC组(P＜0.05),凋亡率高于NC组、miR-NC组(P＜0.05)。si-SOX4组细胞活力、迁移和侵袭数量均明显低于NC组、si-NC组(P＜0.05),凋亡率高于NC组、si-NC组(P＜0.05)。miR-204+pcDNA-SOX4组细胞48 h、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量均明显高于miR-204+pcDNA组、miR-204组（P＜0.05）,凋亡率低于miR-204+pcDNA组、miR-204组（P＜0.05）。与对照组相比,SOX4野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P＜0.05),SOX4突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P>0.05)。结论:miR-204可负性调控SOX4抑制急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖、迁移和侵袭。     

The landscape of alterations affecting epigenetic regulators in T-cell acute lymphoblastic leukemia: Roles in leukemogenesis and therapeutic opportunities

T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive malignancy accounting for 10%–15% of pediatric and 20%–25% of adult ALL cases. Epigenetic irregularities in T-ALL include alterations in both DNA methylation and the post-translational modifications on histones which together play a critical role in the initiation and development of T-ALL. Characterizing the oncogenic mutations that result in these epigenetic changes combined with the reversibility of epigenetic modifications represents an opportunity for the development of epigenetic therapies. Oncogenic mutations and deregulated expression of DNA methyltransferases (DNMTs), Ten-Eleven Translocation dioxygenases (TETs), Histone acetyltransferases (HATs) and members of Polycomb Repressor Complex 2 (PRC2) have all been identified in T-ALL. This review focuses on the current understanding of how these mutations lead to epigenetic changes in T-ALL, their association with disease pathogenesis and the current efforts to exploit these clinically through the development of epigenetic therapies in T-ALL treatment.