小鼠GITRL基因的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA,同时对其序列分析。方法：采用RT-PCR方法,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果：扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长519hp,编码173个氨基酸残基,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论：获得小鼠GITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能提供基础。     

日本血吸虫新基因的克隆及分析

目的：克隆并分析日本血吸虫（Schistosoma japonicum,Sj）新基因,提供有效的疫苗候选分子。方法：用Sj雄虫可溶性抗原免疫家兔血清为探针筛选Sj成虫cDNA文库,将所获阳性克隆的插入片断进行PCR扩增并测序,通过互联网NCBI GenBank和蛋白质分析软件进行分析。结果：共筛选得11个阳性克隆,经分析有2个新基因,分别是Sj-P8（GenBank注册号AF517843）和Sj肌球蛋白cDNA序列（GenBank注册号AY770506）,分别编码含75个氨基酸的跨膜蛋白和含212个氨基酸的蛋白片断。结论：Sj-P8和Sj肌球蛋白cDNA序列可能为日本血吸虫疫苗的研究提供有价值的材料。     

小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的全长编码区cDNA。方法：利用RT-PCR方法,从Balb／c小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,并将其连接到pGEM-T载体上,进行测序和核酸分析。结果：扩增得到的小鼠T-bet基因cDNA全长1592bp,编码530个氨基酸,包含一个189个氨基酸残基组成的能与T盒DNA结合的结构域;blast结果分析表明,该cDNA与Genbank中发表的序列具有99．8％的同源性。结论：获得小鼠T-bet基因的克隆,为进一步研究转基因免疫干预奠定了基础。     

人hole基因的克隆和序列分析

目的 克隆人的hole基因,并进行生物信息学分析.方法 以胚胎心脏cDNA文库为模板,进行PCR扩增得到hole基因的ORF.并进行亚克隆入PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,用Xho1进行酶切和测序鉴定阳性克隆.利用Internet和GeneBank数据库对测序结果正确的hole基因进行生物信息学分析. 结果克隆了hole基因,测序结果正确;生物信息学分析表明, hole基因开放读码为960 bp,编码319个氨基酸;同源性分析表明,人的hole与鼠、鸡hole蛋白具有高度同源性.多种组织的半定量RT-PCR研究表明,该基因在心脏、肝脏、肺、脑、肾脏、脾脏、胰脏均有表达,其心脏表达最高. 结论成功克隆hole基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础.     

人GITR基因的克隆和序列分析

目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析.方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定.结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致.结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

人类Quaking基因的cDNA克隆

研究发现 ,在Ｑｕａｋｉｎｇ(ＱＫ)突变小鼠 (战栗者 )中 ,由于位于 17号染色体ＱＫ基因 (ＱＫ ,ＱＫ 1～ 7,ＧｅｎＢａｎｋ登记号Ｕ44 940 )的缺失突变或点突变 ,导致其神经系统 (包括中枢及周围神经系统 )的髓鞘形成障碍 ,临床表现为以后半身为主的震颤等 ,严重者可于胚胎早期死亡[1,2 ] 。人类ＱＫ基因尚未克隆 ,为此。我们通过同源序列分析方法以小鼠的ＱＫ 1～ 7基因的编码区序列作为信息探针 ,成功地克隆了人类ＱＫ的 6种剪接型。一、材料和方法1 信息分析方法 ;信息分析方法在ＳＵＮ工作站采用ＧＣＧ软件包进行 ,根据大规模测序提供…     

人类cyclophilin基因cDNA的克隆和序列测定

目的：克隆人类环孢霉素A受体亚型cyclophilinA(CypA)基因，对该基因进行序列测定。方法：利用EST重叠序列拼排技术，设计特异性CypA引物，以人外周血白细胞总RNA为模板，进行RT—PCR扩增，纯化PCR产物，装pGEM—T载体，进行DNA序列测定。结果：成功克隆了人类CypA基因cDNA序列的开放阅读框，经DNA序列测定证实序列正确。结论：通过克隆人CypA基因，并克隆人PGEM—T载体，为下一步的基因表达和功能研究奠定了实验基础。     

人卵泡抑素基因全长cDNA的克隆

目的 克隆人卵泡抑素(FS)全长cDNA基因。方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中扩增FS cDNA。构建PMD18-T载体，采用BamHⅠ、HindⅢ双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果 RT-PCR扩增长度为968bp的基因片段，BamHⅠ、HindⅢ双酶切结果显示重组T载体中含有目的基因片段，测序结果显示编码区无基因突变。结论 人FS全长cDNA基因克隆成功，并构建了重组PMD18-T载体。     

大鼠脑RC3基因的cDNA克隆及序列分析

目的：为研究脑特异性基因-RC3的功能，克隆该基因的cDNA。方法：以大鼠脑为材料提取总RNA并分离纯化poly(A)^ RNA，用作模板以嵌套式逆转录PCR方法克隆RC3cDNA，并将其重组入pUC18质粒，然后用双脱氧末端终止法进行碱基序列分析。结果：大鼠脑RC3cDNA序列有一个碱基差别，但不涉及氨基酸的改变。结论：为进一步研究RC3的功能提供了实验基础。     

中国人丙型肝炎病毒2a型基因组C区基因cDNA的克隆及序列分析

测定陕西地区丙型肝炎病毒的Ｃ区基因序列，为进一步研究ＨＣＶ的流行病学和开展ＨＣＶ的诊治打下基础。方法；自行设计合成了两条正向引物和两条反向引物，用反转录ＰＣＲ法从陕西地区１例ＮＡＮＢ型肝炎患者血清中扩增出４３６ｂｐ的片段，将此片段克隆于ＰＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）中用全自动序列分析仪测序。     

人CD4分子cDNA的克隆及序列分析

目的：克隆人的CD4基因，为进一步研究病毒感染CD4^ 细胞的分子机制奠定基础。方法：用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出SupT1细胞株的编码CD4蛋白分子全长的基因，克隆至质粒pAS2—1中，并转入大肠杆菌DF15α。通过Amp抗性筛选、PCR及限制性内切酶EcoRⅠ，BamH Ⅰ双酶切等鉴定重组质粒并测定其中编码CD4片段的核苷酸序列。结果：克隆出编码CD4蛋白分子全长的cDNA，测序结果与文献报道进行同源比较，序列基本一致。结论：本实验成功克隆了编码人CD4蛋白全长的cDNA片段。     

人幽门螺杆菌HspA亚单位的基因克隆及序列分析

目的:获取幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A( HspA)亚单位基因并进行核苷酸序列分析和同源性比较.方法:获取幽门螺杆菌的染色体DNA,PCR技术扩增获取HspA基因,将其定向插入pGEX-4T-1原核表达载体中进行核苷酸序列分析.结果:经酶切鉴定及基因序列证实Hp HspA基因克隆成功,DNA序列与Genbank 公布的序列比较有13个碱基存在差异,同源性为96%;由碱基序列推定编码的氨基酸残基序列没有发生变异,同源性为100%.结论:成功地将Hp HspA基因克隆到了pGEX 4T-1原核表达载体,为HspA的表达和研究奠定了实验基础.     

人CD40基因的克隆及其胞外段的原核有效表达

目的克隆人CD40基因并原核高效表达其胞外段。方法采用RT-PCR法,从高表达人CD40抗原的XG-2细胞中扩增CD40全长基因,并将其插入pMD18-T载体中进行测序验证。用特异引物扩增CD40抗原分子的胞外段基因（可溶性CD40、sCD40基因片段）,再亚克隆至原核表达载体pGEX-5x-3,将测序正确的重组表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达,Western blot检测目的蛋白。结果 RT-PCR能从XG-2细胞总RNA中扩增出特异的目的基因,测序结果显示与GenBank中登录的完全一致,构建的原核表达重组载体pGEX-5x-3/hCD40ECD在表达宿主菌BL21（DE3）中经IPTG诱导能获得有效表达,Western blot证实了目的蛋白条带的特异性。结论获得了人CD40分子的基因及其胞外段原核表达产物,为进一步研究CD40分子的功能和sCD40的应用奠定了良好的基础。     

中国长白山乌苏里蝮蛇降纤酶基因克隆和结构分析

目的 :克隆乌苏里蝮蛇 ( Gloydius ussuriensis)降纤酶 ( Difibrase)基因 ,为用基因工程方法生产降纤酶打下基础。方法 :从乌苏里蝮蛇毒腺制备总 RNA,经 RT- PCR扩增、克隆和顺序测定。结果 :降纤酶 c DNA开框读码序列全长 70 2个核苷酸 ,编码 2 34个氨基酸 ,推测其活性中心为His41、Asp86和 Ser180 ,含有 6对二硫键。结论 :确定乌苏里蝮蛇降纤酶 c DNA顺序 ,推导出其氨基酸顺序和活性中心结构。     

小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建

目的：构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体。方法：利用RT-PCR方法，从Balb／C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA，经测序证实后插入Pzac2．1质粒。用磷酸钙沉淀法．与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞，包装成重组的病毒颗粒。并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成．设立eGFP基因为对照。结果：1592bp的小鼠T-bet基因被成功克隆。分析表明．与Genbank中发表的序列相比具有99．8％的同源性。重组质粒Pzac2．1-T-bet的PCR及酶切鉴定表明T-bet基因被定向插入，与pAddehaF6及p5E18质粒共转染293细胞包装成病毒后，经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测，证实已完成对重组病毒的包装。结论：成功构建了小鼠T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet，为免疫紊乱性疾病的T-bet基因干预治疗奠定了基础．     

Echinococcus granulosus钙结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的：获得细粒棘球蚴Calcium-binding protein(CaBPs)基因序列资料，进行序列分析，为包虫病免疫预防研究奠定基础。方法：从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴（protoscolices)，提取RNA，逆转录成cDNA，用特异引物扩增CaBPs基因；并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。然后登录Cene/Bank数据库。结果：以cDNA为模板获得3个核苷酸长度不同的基因，分别是CaBP1为914bp,CaBP2为1095bp,CaBP3为1039bp。同源性比较结果表明：来自新疆羊源CaBPs基因序列和巴西（Brazil)羊源基因CaBPs同源性为90％以上；从cDNA获得的3个CaBPs基因序列的比较分析说明钙结合蛋白可能存在一个家族，有不同的成员组成。结论：CaBPs在E.granulosus虫体发育过程中具有十分重要的功能，到目前为止其机理尚不完全明了，CaBPs基因的获得为进一步研究其结构和功能，以及对包虫病的防治具有重要作用。     

结核分枝杆菌phoS2基因的克隆及序列分析

目的 扩增结核分枝杆菌phoS2基因,并将其克隆至质粒pGEMT中进行核苷酸序列特性分析.方法 以结核菌标准菌株H3TRv为模板,通过PCR技术扩增出结核分枝杆菌phoS2抗原基因,将其重组到pGEM-T载体后进行酶切鉴定及序列测定和生物信息学分析.结果 成功扩增出结核分枝杆菌phoS2抗原基因,测序表明该片段开放阅读框为927bp,与已发表基因核苷酸序列相比,同源性为81%,推导编码氨基酸序列同源性为87%.结论 成功克隆phoS2基因,为结核病原核表达及相关研究奠定了基础.     

家蝇幼虫抗菌肽Defensins基因的克隆与序列分析

目的：克隆家蝇幼虫的抗菌肽defensins基因并对其进行序列分析。方法：提取家蝇幼虫总RNA，根据家蝇成虫defensins基因cDNA序列设计一对引物，RT-PCR扩增目的基因片段，T-A克隆后测序，应用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果：RT—PCR扩增出一条约310bp的目的片段，序列分析表明，其与家蝇成虫防御素基因同源性高达97％，核酸序列变异主要发生在信号肽区域。结论：成功克隆及分析了家蝇幼虫防御素基因全长编码区cDNA序列，为其下一步的重组表达和生物活性研究奠定了基础。