αvβ3整合素受体靶向性超顺磁性脂质体的建立及体外磁共振观察

目的 合成以RGD短肽为亲和成分的靶向性超顺磁性长循环脂质体,并通过体外细胞学实验确定其受体靶向性,探讨其用于肿瘤受体成像的可能性.方法 采用薄膜法分别合成表面连接和不连接RGD的靶向性和非靶向性长循环脂质体;以流式细胞分析及共聚焦激光扫描显微镜观察靶向对比剂对HUVEC细胞的特异性标记.结果 ①合成的超顺磁性脂质体粒径在150 nm左右,具有较高的弛豫率;②靶向性对比剂对αvβ3整合素受体具有较高的特异性亲和力;可通过受体介导的内吞作用进入细胞内;③靶向对比剂与细胞结合后,可以明显降低细胞的信号.结论 RGD-超顺磁性长循环脂质体具有较高的弛豫率,能与αvβ3整合素受体特异性结合,在靶点特异性浓聚,并能经MR扫描证实.     

整合素靶向性超顺磁性纳米分子探针体外显像人肝癌细胞的实验研究

目的构建环状精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽(c RGDf K)超顺磁性氧化铁纳米分子探针,并检测其对高表达αVβ3整合素受体的人肝癌Hep G2细胞的显像能力。方法 SPIO氨基化后与c RGDf K偶联生成c RGDf K-SPIO,在10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml五种不同含铁浓度下对肝癌Hep G2细胞进行标记后行MR成像,观察在T2 mapping上T2弛豫时间的变化,找出最佳成像浓度。结果人肝癌Hep G2细胞在5种不同浓度c RGDf K-SPIO对比剂中培养24h后比较,各组之间的T2弛豫时间数值差异有统计学意义(F=336.389,P<0.01),各实验组与空白对照组两两比较,弛豫时间数值差异有统计学意义(P<0.01);T2值下降最大的为20μg/ml组(P<0.01)。结论 c RGDf K-SPIO可通过MRI靶向显示高表达整合素αVβ3受体的肝癌Hep G2细胞。本研究所制备的c RGDf K-SPIO分子探针在肝癌Hep G2细胞的体外最佳成像浓度是20μg/ml。     

整合素αvβ3与脑胶质瘤恶性程度的相关性研究

目的 通过检测脑胶质瘤不同组织学的整合素αvβ3情况,揭示整合素αvβ3与脑胶质瘤恶性程度之间的关系.方法 对20例脑胶质瘤标本进行常规HE染色和免疫组化分析,依据术后病理检查结果,将患者分为低度恶性组（LM）（Ⅰ-Ⅱ级）和高度恶性组（HM）（Ⅲ-Ⅳ级）.对每例切片免疫组化结果进行微血管和肿瘤细胞分析,αvβ3受体染色以棕黄色颗粒、背景清晰为阳性表达.＂–＂为无细胞着色,＂＋＂为低度表达,＂＋ ＋＂为中度表达,＂＋ ＋ ＋＂为高度表达.结果 整合素αvβ3主要表达于细胞膜、胞质、血管内皮及肿瘤周围浸润组织,呈棕黄色颗粒.肿瘤周围水肿、正常及坏死组织未见αvβ3表达.10例低度恶性胶质瘤中,αvβ3中度表达4例,低度表达6例;10例高度恶性胶质瘤中,αvβ3高度表达9例,中度表达1例.高度恶性组αvβ3的表达高于低度恶性组,两组间存在显著性差异（χ2=16.80,P=0.000,P＜0.05）.整合素αvβ3与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小等无关.结论 整合素αvβ3与脑胶质瘤恶性程度密切相关,为进一步整合素αvβ3靶向治疗提供参考.     

整合素αvβ3与胃癌腹膜转移机制的研究进展

胃癌是我国常见的消化道恶性肿瘤之一，虽然采取广泛淋巴结清扫的胃癌根治术，但术后5年生存率仅35％左右。腹膜转移是术后复发转移的常见方式。献报道嘲在胃癌术后复发的诸类型中，腹膜种植性复发占50％以上，且系多数复发患致死的直接因素，目前胃癌腹膜种植转移的机制尚不十分清楚，但多数认为是胃癌腹膜种植性播散，胃癌腹膜种植性播散主要来源于腹腔游离癌细胞或微转移灶，其途径是癌细胞浸润出胃壁浆膜层并脱离癌组织母体进入腹腔，成为有生物活性的脱落癌细胞，粘附于腹膜并增殖形成种植转移灶，即细胞的脱落、附着、增殖3个阶段，研究显示：E-钙粘素、β1整合素在癌细胞脱落、附着过程中发挥重要作用，在增殖阶段，整合素中的某些亚家族与其配体结合，造成癌细胞侵袭处的腹膜组织炎症反应、毛细血管形成，新形成的毛细血管提供了癌灶所需的营养，使癌细胞继续增殖，成为了腹膜种植转移结节。而新生血管生成过程所依赖的血管内皮细胞增殖、迁移和侵袭均受到细胞粘附分子受体的调控，整合素αvβ3受体在其中发挥重要作用。[第一段]     

血管生成靶向微泡的鉴定及黏附实验

目的 体外评价"亲和素-生物素"法制备靶向整合素αvβ3的微泡(MBαvβ3)及其黏附人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的效能.方法 "亲和素-生物素"法桥连αvβ3抗体于磷脂微泡,体外荧光法鉴定其表面"生物素-亲和素-生物素"结构,应用平行平板流动腔(PPFC)技术评价MBαvβ3特异性黏附HUVECs的效能.结果 加入荧光标记的亲和素后,生物素化微泡(MBB)表面可见明亮荧光,普通微泡未见荧光;MBB加入荧光标记的蛋白A也未见荧光;MBB结合亲和素后,再加入荧光标记的生物素或蛋白A,前者表面可见明亮荧光,后者未见荧光.PPFC内,MBαvβ3组和普通微泡组结合数分别为(9.9±3.1)微泡/HUVEC和(0.8±0.3)微泡/HUVEC(P<0.05).结论 "生物素-亲和素"法能成功制备MBαvβ3,具有特异黏附血管内皮细胞的能力.

Abstract：

Objective To identify microbubbles targeted (MBt) to alpha(v)beta(3) (αvβ3) via biotin-avidin bridge and evaluate the adhesion to human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) in vitro.Methods MBt produced via biotin-avidin bridge were validated using fluorescence in vitro.Adhesion of αvβ3-integrin targeted MBt (MBαvβ3) to HUVECs was tested using the parallel plate flow chamber (PPFC) test.Results Bright green fluorescence was observed on the biotinylated microbubbles(MBB) incubated with fluorescein isothiocyanate labeled streptavidin (FITC-SA) and on MBB-SA incubated with FITC labeled biotin.There was no fluorescence seen on non-targeted control microbubbles,MBB incubated with FITC labeled protein A and MBB-SA incubated with FITC labeled protein A. The adherent rate of MBαvβ3 was significantly higher than MBt with non-specific antibody (MBN) in PPFC test,with 9.9±3.1 of MBαvβ3 and 0.8±0.3 of MBN adhered to HUVECs,respectively(P<0.05).Conclusions Avβ3 targeted microbubbles using biotin-avidin bridging method is highly efficient and reliable for HUVECs.     

整合素αvβ3受体靶向载药脂质体的制备及体外靶向性

背景:含RGD序列的多肽是多种整合素的识别位点,以其相对分子质量小、稳定、易于制备,且无免疫原性等优点被广泛用于纳米靶向药物传递系统的设计.目的:制备以RGD环五肽为配基的整合素αvβ3载药脂质体,通过体外细胞学实验证实其受体靶向性.方法:使用人工合成的RGD环五肽作为靶向分子探针,通过高压均质法制备靶向整合素αvβ3载药脂质体,采用扫描电镜和激光粒度分析仪检测纳米颗粒形态和粒径;以流式细胞分析观察其对血管平滑肌细胞的特异性标记,并考察荷载药物的离体缓释能力以及体外靶向能力.结果与结论:合成的靶向载药脂质体粒径为(175±6) nm,包封率为(96.33±1.02)%,体外溶出时间超过5 d.靶向载药脂质体对整合素αvβ3具有较高的特异性亲和力,可通过受体介导的内吞作用进入细胞内.提示制备的靶向整合素αvβ3载药脂质体,具有较高的药物包封率及缓释性,能与整合素αvβ3受体特异性结合,是一种新型的受体介导靶向制剂.     

携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管靶向效应的研究

目的 探讨携抗αvβ3-整合素单抗靶向微泡对肿瘤新生血管的靶向效应.方法 通过生物素桥接法制成携抗αvβ3-整合素单抗的靶向脂质微泡(MBa)、对照微泡携同型抗体脂质微泡(MBc);选取12只HepG2皮下移植瘤裸鼠模型(肿瘤组)和正常对照裸鼠(对照组),经尾静脉随机注射MBa、MBc和RGDfvV封闭10 min后再注射MBa(Blocking+MBa),并行对比超声检查,测量声强度(VI).分别取肿瘤组肿瘤组织和对照组正常骨骼肌组织行病理学和免疫组化检查.结果 肿瘤组中MBa的VI值(17.43±3.30)U,较MBc的VI值(5.88±1.04)U增大近3倍,差异有统计学意义(P <0.01),应用RGDfvV封闭αvβ3-整合素后MBa的VI值降至(6.14±2.25)U,与MBc及对照组的各VI值比较差异均无统计学意义.免疫组化检查显示:肿瘤组织的新生血管内皮有大量αvβ3-整合素显色,可被RGDfvV封闭;而骨骼肌中仅有少量αvβ3-整合素显色.结论 携抗αvβ3-整合素单抗的靶向微泡对肿瘤新生血管具有明显的靶向效应,有望用于肿瘤的诊断和疗效评估.     

超顺磁性氧化铁对肝脏MR成像效果的影响

目的 观察超顺磁性氧化铁(SPIO)对肝脏MR成像效果的影响.方法 用化学共沉淀法制备具有肝脏特异性的MR对比剂SPIO,分别将生理盐水、SPIO样品及目前临床广泛使用的Gd-DTPA注入30只大白兔体内,5 min、30 min、60 min后进行MR成像,分别测量肝脏和背部肌肉的信号强度并计算相对信号强度比(相对信号强度比＝肝脏信号强度/肌肉信号强度).结果 Gd-DTPA使肝脏T1WI相对信号强度比(ENH)显著升高,但30 min即开始恢复,持续时间短,SPIO使肝脏T2WI相对信号强度比显著降低,60 min仍能维持高ENH,持续时间长.结论 SPIO具有良好的晶体结构和均匀的纳米尺寸,能显著降低肝脏MR T2WI相对信号强度比,可作为MRI阴性对比剂.     

叶酸靶向超顺磁性氧化铁-多巴胺-叶酸纳米复合物的制备及体外MR成像

目的 探讨叶酸靶向超顺磁性氧化铁-多巴胺-叶酸(NP-DPA-FA)纳米复合物对叶酸受体(FR)阳性肝癌细胞的靶向性及利用MRI对其进行监测的可行性。方法 ①制备NP-DPA-FA纳米复合物。②对Bel-7402细胞进行普鲁士蓝染色及体外竞争抑制试验。③将NP-DPA-FA复合物与Bel-7402人肝癌细胞及HL-7702正常人肝细胞孵育2 h后,进行普鲁士蓝染色及体外MR成像,观察其T2WI信号强度变化,并计算信号强度变化率。结果 普鲁士蓝染色显示Bel-7402细胞内可见大量铁颗粒沉积,HL-7702细胞内铁颗粒沉积少见。Bel-7402细胞抑制竞争试验显示细胞内铁颗粒极少。铁浓度不同的NP-DPA-FA复合物分别与Bel-7402细胞及HL-7702细胞孵育后,MRI显示Bel-7402细胞的信号强度随NP-DPA-FA复合物铁浓度的升高而明显减低,HL-7702细胞信号强度减低相对不明显。结论 叶酸介导的磁性纳米颗粒复合物对Bel-7402人肝癌细胞具有靶向性,应用MRI可对其进行监测。     

超顺磁性纳米氧化铁颗粒标记胰腺癌细胞的MR分子成像

目的 探讨超顺磁性纳米氧化铁颗粒（SPION）靶向标记胰腺癌细胞（BxPC-3）行MR分子成像的可行性。方法 制备黏蛋白1（MUC1）靶向修饰的探针MUC1-SPION（靶向组）,并以牛血清蛋白（BSA）制备非靶向探针BSA-SPION（非靶向组）。采过噻唑蓝（MTT）法测试不同MUC1-SPION浓度下（铁浓度为0、6.25、12.50、25、50、100、200 μg/ml）的细胞毒性。并分别于铁浓度为50、100、200 μg/ml条件下,对靶向组及对照组与BxPC-3细胞共同孵育2 h后的细胞悬液进行MR成像,测定横向弛豫时间（T2）,计算T2强化率。以普鲁士蓝染色观察靶向探针与细胞结合情况。结果 MTT法细胞毒性实验显示,不同MUC1-SPION浓度下BXPC-3细胞增殖率差异无统计学意义（F=1.74,P=0.183）。铁浓度50、100、200 μg/ml条件下,2组间T2值和T2强化率的差异均有统计学意义（P均<0.05）。普鲁士蓝染色显示靶向组的蓝染颗粒更多。结论 MUC1-SPION对BxPC-3细胞具有良好的靶向性,以SPION靶向标记BxPC-3细胞进行MRI安全、可行。     

RGD肽类肿瘤靶向受体显像的研究现状及前景

RGD肽是一类含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)的小分子多肽,与整合素ανβ3受体有高度的选择性和亲和力.RGD肽与整合素ανβ3受体的特异性结合可介导多种病理生理过程的发生,尤其在肿瘤细胞的黏附、转移和肿瘤新生血管生成中起重要作用.因此,整合素ανβ3受体有望成为新型放射性药物的靶点,而放射性核素标记的RGD肽也可能成为潜在的肿瘤受体显像剂而应用于临床.本文对RGD肽类肿瘤靶向受体显像的研究现状及前景进行综述.     

叶酸介导APTMS包被的超小超顺磁性氧化铁的制备及体外MR成像

目的探究叶酸介导的超小超顺磁性氧化铁(USPIO)对于人乳腺癌MCF-7细胞表面叶酸受体的靶向性及MR成像的可行性。方法①制备叶酸介导的耦联3-氨基丙基-三甲氧基硅烷(APTMS)的USPIO(FA-APTMS-US-PIO),通过TEM、FTIR等技术对其进行表征。②USPIO组、竞争抑制组(FA-APTMS-USPIO+叶酸)及叶酸介导的耦联APTMS的靶向组(FA-APTMS-USPIO)分别与MCF-7细胞孵育不同时间,通过普鲁士蓝染色观察不同组别铁颗粒的摄取情况。③对与纳米铁孵育后的细胞采用3.0TMR仪进行体外MR成像。④采用MTT法进行细胞活性检测。结果透射电镜照片显示FA-APTMS-USPIO外形较规则。普鲁士蓝染色观察,靶向组细胞摄取的氧化铁较多,可见大量蓝色沉淀。竞争抑制组与USPIO组细胞内蓝色颗粒较少。体外MRI结果显示,与MCF-7孵育的靶向组T2信号降低显著,竞争抑制组和USPIO组无明显变化。MTT实验显示,靶向组不同时间对细胞生存能力无显著影响。结论 FA-APT-MS-USPIO对MCF-7细胞有良好的靶向性,对早期诊断乳腺癌具有重大应用潜力。     

NP-DA-Dextra-FA靶向纳米分子探针对人肝癌细胞的体外磁共振成像研究

目的利用叶酸受体(folate receptor,FR)阳性的Bel7402人肝癌细胞及磁共振成像系统来探讨超顺磁性氧化铁-多巴胺-葡聚糖-叶酸(NP-DA-Dextra-FA)靶向纳米复合物的细胞靶向性并监测其体外成像的可行性。材料与方法研制叶酸靶向纳米分子探针(NP-DA-Dextra-FA)及非靶向纳米分子探针(NP-DADextran)。将人肝癌细胞Bel7402与叶酸靶向纳米分子探针及非靶向探针分别孵育2h后,行普鲁士蓝染色实验及细胞MR成像扫描,分析其T2WI信号强度及信号强度变化率的改变,并行竞争抑制实验。结果不同Fe浓度NP-DA-DextraFA及NP-DA-Dextran纳米分子探针分别与Bel7402细胞孵育后,靶向分子探针组结果显示Bel7402细胞T2信号强度随着铁浓度的升高明显减低,普鲁士蓝染色实验表明大量蓝色铁颗粒沉积位于Bel7402细胞内;非靶向组结果表明Bel7402细胞信号强度减低相对不明显,普鲁士蓝染色示Bel7402细胞内仅见少量蓝色铁颗粒沉积。竞争抑制实验结果表明随着叶酸浓度的升高,T2信号强度逐渐升高。结论叶酸靶向磁性纳米分子探针对人肝癌细胞Bel7402有靶向性,体外磁共振成像可对其靶向性监测。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞的磁共振成像研究

目的明确顺磁性氧化铁纳米粒子(SPIO)体外标记兔骨髓间充质干细胞(MSCs)的适当浓度和不同标记浓度对细胞的生物学活性影响,以及经MR成像的特征和可成像的最低标记细胞量等。方法分离、纯化、培养兔MSCs,体外不同浓度SPIO标记,荧光显微镜观察铁颗粒在细胞内的位置、不同标记浓度下的最佳孵育时间、不同标记浓度细胞形态的改变、细胞内铁颗粒的分布及标记率;测量并绘制未标记细胞和标记细胞的MTT生长曲线;选取适当浓度标记量,对不同细胞量组进行标记后MR成像,测量不同扫描序列标记细胞管的信号强度改变,并进行统计学分析。结果标记后的铁颗粒均位于细胞质内;20～50μgFe/ml培养液是SPIO标记干细胞的适当浓度阈值,超过50μgFe/ml培养液浓度可使细胞的变形增殖能力受到不同程度的抑制;在此浓度阈值标记后孵育18～24h即可有效标记细胞97%～100%;细胞对铁颗粒的吸收与细胞的数量、标记浓度和孵育时间呈正相关;SPIO标记的MSCs在T2WI尤其是FFE(T2WI)序列信号明显降低;在35μgFe/ml培养液标记浓度下,MR可成像的最低细胞量为5×104;35μgFe/ml培养液浓度时,标记细胞1×105和5×104MR成像可使T2WI、FFE图像信号均降低,而且没有使靶灶扩大的磁敏感伪影。结论SPIO可以简便标记MSCs并且在适当浓度下对MSCs的生物学活性没有影响,MRT2WI和T2WI序列可敏感显像磁性标记的干细胞。     

采用自制超小超顺磁性氧化铁行兔VX2肿瘤MR成像

目的 观察自制USPIO在兔VX2肿瘤MR成像中的价值.方法 以一步法实现葡聚糖对Fe_3O_4纳米粒子的表面包裹,制备USPIO.7只新西兰大白兔双侧大腿肌肉内接种VX2肿瘤;6只于接种后2周分别行Gd-DTPA和USPIO T2~*WI增强扫描.1只未注射对比剂的实验兔留电镜和元素分析作对照研究.计算不同对比剂的病灶对比度噪声比(CNR)和增强对比度.MR成像结束后,行普鲁士蓝染色、电镜及元素分析.结果 经傅立叶变换红外光谱仪证实,葡聚糖成功包裹到Fe_3O_4磁性纳米粒子的表面;且合成USPIO大小在10～20 nm,分散性较好.增强扫描中两种对比剂的CNR差异有统计学意义(P<0.005).病理、电镜及元素分析共同证实肿瘤组织与正常肌肉USPIO的含量有显著差异.结论 VX2肿瘤血管基底膜对USPIO具有高通透性.USPIO T2~*WI增强扫描可以提高肿瘤组织的增强效果.自制USPIO可被肿瘤细胞吞噬,是用于肿瘤成像的理想对比剂.     

骨母细胞瘤的MRI表现

目的探讨骨母细胞瘤的MRI表现及MRI的诊断价值.方法经病理证实的骨母细胞瘤9例,良性5例,恶性4例,全部行MRI检查,3例同时行CT检查.结果MRI主要表现:T1WI呈等或稍低信号,T2WI呈以高信号为主的混杂信号;瘤内有钙化和骨化(5/9),囊变(6/9)及少量出血(2/9),线样低信号间隔(7/9)并可强化(3/7);瘤周有低信号的骨性包壳(9例);增强扫描肿瘤多明显强化.当肿瘤形态不规则,瘤内散在坏死和出血灶,不均匀强化,伴有骨膜反应、软组织肿块时,提示恶性可能.结论MRI有助于骨母细胞瘤的定位及定性诊断,并对肿瘤的良恶性鉴别有一定提示作用.     

MR输卵管水成像

目的探讨MR输卵管水成像的技术和临床应用。方法用重T2加权MR水成像技术做输卵管水成像28例,23例为超声发现附件区囊性病灶患者,5例为健康未婚女青年自愿者,采用快速自旋回波（FSE）,图像经三维（3D）最大信号强度投影（MIP）后处理。结果23例附件区囊性病灶患者中,输卵管积水7例,表现为纡曲腊肠状影。卵巢囊性病灶16例,表现为附件区类圆形囊状影;5例自愿者均没能很好显示输卵管。结论MR输卵管水成像能显示积水扩张的输卵管,对输卵管积水扩张与附件区囊肿的鉴别有重要意义。