蛙皮素对胃癌细胞BGC-823的生长调控作用

目的:观察蛙皮素(BBS)对人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用,测定细胞内环磷酸腺苷(cAMP)含量、蛋白激酶C(PKC)活性及PKC亚型的表达,探讨受体后信息传导途径。方法:BGC-823细胞在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,于37℃、5%CO2条件下培养,分别加入不同浓度的BBS,应用MTT法观察细胞的增殖程度;应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量;应用[γ-32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性;应用Westernblot方法分析PKC亚型α、β1、β2及ε的表达。结果:BBS能促进BGC-823细胞的生长,且与剂量呈正相关(r=0.747,P<0.05);BBS能促进细胞内cAMP的产生及PKC活性的增加,PKCα表达明显增加,而β1、β2及ε则无明显表达。结论:BBS对胃癌细胞BGC-823的生长、细胞内cAMP产生及PKC活性增加有重要作用。     

生长抑素对人胃癌细胞BGC-823生长的调控作用

目的观察生长抑素对人体分化胃癌细胞株BGC-823的生长调控作用，测定细胞内环磷酸腺苷（cAMP）含量及蛋白激酶c（PKC）活性，探讨受体后信息传导途径。方法BGC-823细胞在合10％小牛血清的RPMI1640培养液中，于37℃、5％CO2条件下培养，分别加入不同浓度的生长抑素，应用MTT法观察细胞的增殖程度。应用放射免疫分析方法测定细胞内cAMP含量，应用[γ-^32p]ATP掺入外源性底物的方法测定PKC活性。结果生长抑素能抑制BGC-823细胞的生长，且与剂量呈正相关。生长抑素能抑制细胞PKC活性，而对细胞内cAMP生成无明显影响。结论1、生长抑素能抑制胃癌细胞BGC-823的生长。2、生长抑素可降低PKC活性，提示其受体后信息传递途径可能涉及DG-PKC系统。     

胃癌耐药细胞系传统型蛋白激酶C的表达及活性

目的 观察传统型蛋白激酶C（cPKCs）在胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR1.0、耐药亚系SGC7901／VCR0.3,7901/0.7及药敏细胞系SGC7901表达及活性的变化,以及对细胞内药物浓度的影响。方法 用免疫荧光化学及蛋白印迹方法观察传统型蛋白激酶C在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系的表达;竞争蛋白结合法测定PKC的活性;应用流式细胞仪观察细胞内药物浓度的变化。结果 PKCα,PKCβⅠ,PKCβⅡ及PKCγ在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系均有表达,PKCα在耐药细胞表达呈强阳性,在药敏细胞表达呈阳性;PCKβⅠ及PKCβⅡ在耐药细胞及药敏细胞表达均为阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均为强阳性。免疫蛋白印迹实验证实,随耐药指数的增加,PKCα表达呈逐渐增高的趋势,薄层扫描蛋白印迹带的吸光度（A）分别为9584.17,9421.06,8534.64,8088.79,而PKCβⅠ、PKCβⅡ及PKCγ在耐药细胞系、耐药亚系及其药敏细胞系表达无明显变化。PKC活性检测结果提示,随耐药指数的增加,PKC活性呈逐渐增高的趋势,以细胞质及细胞核的PKC活性增高为主。结论 传统型蛋白激酶C在维持胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR的多药耐药中起重要作用且具有同工酶特异性。     

蛋白激酶C亚型在小鼠胚胎干细胞中的表达研究

【目的】研究5种蛋白激酶C(PKC)亚型PKCα、PKCβ，PKCγ，PKCδ和PKCε在小鼠胚胎干细胞(ES细胞)株ES-BALB／c的表达情况。【方法】ES-BALB／c细胞株用普通ES细胞培养液培养，分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿，培养2d和4d后分别进行PKC亚型免疫组织化学和Western印迹检测。【结果】免疫组化发现PKCα。在ES-BALB／c细胞有广泛的棕黄色的阳性表达，以细胞浆和细胞核最甚，而PKCβ，PKCγ，PKCδ和PKCε4种亚型无明显表达；Western印迹发现PKCα出现一条蛋白印迹条带，分子质量约为84ku，而PKCβ、PKCγ，PKCδ和PKCε 4种亚型无蛋白印迹条带。【结论】PKCα在ES细胞阶段即有表达，在将来的细胞分化阶段可能有非常重要的作用，而PKCβ、PKCγ、PKCδ和PKCε4种亚型在ES细胞阶段没有表达。     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

KBV2000细胞多药耐药蛋白激酶C亚型表达的关系

目的 探讨蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC）亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药（multidrug resistance，MDR）的关系。方法 （1）用Western blotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布；（2）流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果 （1）PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高，而PKCβ、ε无显著变化，PKCγ、ζ则未测出表达；（2）流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高，PKCβ、ε则无显著差别。结论 PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中，PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

蛋白激酶C同工酶在初发糖尿病大鼠肾小球中的细胞定位及表达

目的：探讨蛋白激酶C(PKC)同工酶α，βⅠ，βⅡ，ε在正常及初发糖尿病(DM)大鼠肾小球中的细胞定位及表达变化与糖尿病肾病(DN)发生、发展的关系。方法：腹腔注射链脲菌素(STZ)制成DM大鼠模型，采用免疫组化S-P方法检测PKC同工酶的表达。结果：PKCα在正常大鼠肾小球系膜细胞、上皮细胞、内皮细胞中均有表达；PKCβⅠ，βⅡ在系膜细胞中表达；PKCε在系膜细胞及内皮细胞中表达。初发DM状态下，PKCα在系膜细胞和内皮细胞中表达上升；PKCβⅠ，βⅡ在系膜细胞中表达明显下降；PKCε在系膜细胞及内皮L细胞中表达升高不显著。结论：PKC各同工酶在正常大鼠肾小球内的细胞定位不同。高血糖对PKC各同工酶在肾小球内的细胞表达有着不同的的调控效应。PKC各同工本科在初发DM大鼠肾脏病变中发挥不同作用。     

蛋白激酶C及其亚型在胃癌中的研究进展

蛋白激酶C（PKC）是蛋白激酶家族中的一个成员，系日本学Nishizuka等1977年在鼠脑的胞质成分中首次发现的，PKC是一种依赖磷脂和钙的蛋白激酶，广泛分布与真核细胞中，由多种具有不同生物学特性的同工酶组成，是细胞内信号传导的重要递质。PKC通常处于失活状态．被激活后可由细胞质转位到细胞膜。能够使众多蛋白质中的丝氨酸和苏氨酸发生磷酸化而发挥作用。因此，PKC的活化不仅与正常细胞和异常细胞的生长、分化、凋亡等多种生物学效应有关，更在肿瘤的发生、发展、转移和多药耐药等方面发挥重要作用。迄今为止，已经分离纯化出至少12种亚型。近年来。PKC及其亚型在胃癌中的表达及作用越来越受到人们重视。本就PKC及其亚型在胃癌中的研究进展作一综述。[第一段]     

蛋白激酶亚型在肾小球肾炎中的表达及意义

目的：检测蛋白激酶C（Protein kinase C,PKC)的α、β2、ε3种亚型在肾小班干球肾炎中的表达，并探讨其在发病机制中的意义。方法：应用免疫组织化学技术检测16例系膜增生性肾炎（MsPGN）、12例非增生性肾炎（nonPGN)病人肾穿刺标本及6例正常肾组织中PKCα、β2、ε的表达。结果：MsPGN组肾小球部位PKCβ2表达明显高于nonPGN组（P＜0.01)。结论：PKCβ2与MsPGN的发病密切相关，PKCβ2可能参与了增生性肾小球肾炎的发病机制。     

肿胀激活状态下蛋白激酶C同工酶亚型在胃癌耐药细胞系的亚细胞分布变化及其意义

目的 探讨肿胀激活状态下，传统型蛋白激酶C（cPKC)同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞系SGC7901/VCR的表达，亚细胞分布变化及其意义。方法 采用免疫荧光及免疫印迹方法，观察正常状态及持续低渗灌流不同时间cPKC同工酶亚型的亚细胞分布变化，利用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKCα与-P-糖蛋白（Pgp)的共表达。结果 在正常状态下，cPKC的4种同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞SCG7901/VCR细胞质及细胞膜均有表达：PKCα在耐药细胞表达呈强阳恬药敏细胞表达呈强阳性，PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均呈强阳性。持续低渗灌流，在耐药系10min已发现有PKCα、PKCγ的移位及细胞体积的增大；30minPKCα几乎全部移位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积较前增大1-2倍；60min时PKCα及PKCγ基本恢复至正常位置。细胞体积也恢复正常；在药敏细胞系10-20minPKCα及PKCγ几乎全部一笔勾销 位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积也恢复正常；在药敏细胞系10-20minPKCα几乎全部移位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积较前增大1-2倍；40minPKCα及PKCγ基本恢复至正常位置，细胞体积也恢复正常，而PKCβ1及PKCβα在耐药细胞及药敏细胞的亚细胞分布无明显变化。共聚焦显微镜提示PKCα及PKCγ同工酶亚型参与了Pgp与低渗刺激下细胞共表达，以耐药细胞表达明显。结论 只有PKCα及Pgp表达量有关，而PKCβ1及PKCβⅡ可能与这一过程无关。βββ     

锦鸡丙素对两株人肺癌细胞株蛋白激酶和同工酶活性的影响

目的　研究锦鸡丙素对两种人肺癌细胞株中不同组分的蛋白激酶C(PKC)活性及其同工酶分布的影响 ,探讨两种细胞株对锦鸡丙素的细胞生长抑制作用表现出敏感性差异的原因。方法　梯度离心法、32 P掺入法及蛋白印迹法。结果　①A5 4 9及HCI H4 46细胞所有组分中的PKC活性均可被锦鸡丙素所抑制 ,两种细胞胞质及颗粒组分中PKC活性完全受抑所需时间相同 ,A5 4 9细胞全细胞组分及核组分所需时间均长于NCI H4 46细胞 ;②A5 4 9细胞胞质组分中PKC的活性不可逆转 ,而HCI H4 46细胞为核组分 ;③ 5 4 9细胞中主要表达PKC α、ε和ζ ,胞质中三者都存在 ,颗粒组分中只检测到α且锦鸡丙素处理后α消失 ,而胞质及全细胞组分中的α含量增加 ;NCI H4 46细胞胞质中主要存在PKC ζ和ε,颗粒组分中仅检测到PKC ζ且锦鸡丙素处理后胞质中 ζ增加而颗粒组分中则减少。结论　锦鸡丙素体内外均可抑制PKC的活性并可降低PKC α在颗粒组分中的含量使其膜转位受阻 ,但这种抑制作用与肿瘤细胞生长的抑制之间并没有直接的联系 ;PKC α可能是A5 4 9细胞信号传导系统中最主要的PKC同工酶形式 ,锦鸡丙素抑制其活性并阻碍其膜转位将可能影响A5 4 9肺癌细胞的增殖并与A5 4 9细胞对锦鸡丙素敏感性较高有着密切的关系。     

大肠杆菌脂多糖对人红细胞蛋白激酶C活性的影响

正常成人红细胞与大肠杆菌脂多糖温育后,胞膜蛋白激酶C活性显著增加,脂多糖这种作用呈现剂量和时间依赖性。结果提示脂多糖能激活红细胞蛋白激酶C。     

蛋白激酶C在糖尿病周围神经病变中的表达及中药干预的实验研究

目的　蛋白激酶C(PKC)与糖尿病(DM)及其并发症的关系已成为研究的焦点,本实验检测了DM大鼠坐骨神经及腓肠肌PKC -beta表达及活性变化,探讨PKC在糖尿病周围神经病变(DPN)发病中的作用,并观察中药对其影响。方法　利用(γ -32P)ATP底物磷酸化方法检测实验对照组、中药组DM大鼠及正常组大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC-beta活性,并行免疫印迹分析PKC- beta在神经肌肉组织中的表达。结果　实验 2个月,两组DM大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC beta活性与正常组大鼠比较均增高,实验对照组增高明显,中药组稍高于正常组。PKC- beta表达与活性测定结果相一致。结果提示实验对照组坐骨神经及腓肠肌部位PKC- beta表达明显增加,活性明显增高,而中药组接近正常组。结论　实验性 2个月DM大鼠周围神经病变中的PKC- beta表达及活性明显增加,本中药复方对其有一定抑制作用。     

PKC和TPK在血小板激活中的作用

目的为了研究蛋白激酶（PKC）和酪氨酸蛋白激酶（TPK）在血小板激活中的作用。方法用卟啉酸肉豆蔻乙酸酯（PMA）,凝血酶,前列腺素E1（PGE1）和环磷酸腺苷（db－cAMP）,在含二磷酸腺苷（ADP）清除剂的缓冲剂中去激发经阿司匹林切断,32P－NaH2PO4标记冲洗后的牛血小板。40KD（PKC的底物）的磷酸化程度随PMA或凝血酶的浓度而增加。同样26KD、38KD的磷酸也是如此。由于PMA诱导的血小板聚集的同时伴随PKC活化。PGE（腺苷环化酶激活物）不能抑制由50nmol/1PMA诱导的血小板聚集,db-cAMP,腺苷不能抑制PKC引起的蛋白磷酸化。结果在碱处理的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGEgel）中发现40KD和57KD多肽比其他多肽更有抗碱力。40KD和57KD多肽的磷酸氨基酸分析指出含有磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸和磷酸酪氨酸。结论在PMA、凝血酶激活的血小板中,PKC、TPK都发生激活作用,40KD废物是PKC的底物又是TPK的底物,PKC和TPK在血小板聚集中起着重要调节作用。     

人体甲状腺癌组织中蛋白激酶C和蛋白激酶A活性水平的测定

目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲状腺癌发生过程中的作用.方法利用酶的放射分析方法测定手术切除经病理证实的18例甲状腺癌患者和17例甲状腺癌患者手术切除的肿瘤组织中PKC和PKA活性水平.结果甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为7.280±2.380和7.397±4.065,PKA活性水平为1.716±0.923.甲状腺癌组织中胞膜和胞浆PKC活性分别为0.515±0.676和0.347±0.332,PKA活性水平为0.646±0.324.胞浆部分PKC与PKA活性比值甲状腺癌组织为4.3;甲状腺癌组织为0.53.结论PKC与PKA均参入甲状腺癌细胞的增殖过程.     

冠心病血小板蛋白激酶C及其抑制剂活性的变化

目的：探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）及蛋白激酶Ｃ抑制剂（ＰＫＣＩ）在冠心病发病中的作用。方法：测定４２例心绞痛患者（ＡＰ）、４１例急性心肌梗塞（ＡＭＩ）患者、４０例正常对照者（ＮＣ）血小板胞浆ＰＫＣ及ＰＫＣＩ活性，血小板胞膜ＰＫＣ活性。结果：心绞痛及急性心肌梗塞患者血小板胞浆中ＰＫＣ活性显著低于正常对照组，其中心绞痛组低于急性心肌梗塞组，心绞痛及急性心肌梗塞患者血小板胞浆中ＰＫＣＩ活性低于正常对照组，其中心绞痛组低于急性心肌梗塞组；心绞痛及急性心肌梗塞患者血小板胞膜ＰＫＣ活性显著高于正常对照组，心绞痛组高于急性心肌梗塞组。结论：ＰＫＣ可能与冠心病发病有关。     

蛋白激酶C在心肌细胞肥大中的作用

目的 :要探讨蛋白激酶 C(PKC)在心肌细胞肥大中的作用机制。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和 [3 H] -Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表现积和 [3H] -L eu的掺入量 ,PKC抑制剂 (Calphostin C)可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和 [3 H] -L eu掺入量增加。结论 :PKC在肾上腺素诱导的心肌细胞肥大反应中起重要作用     

bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的：研究gemistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响，探索使用genitein防治后发性白内障。方法：兔晶体上皮细胞培养，应用Casnctllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化；同位素掺入法检测gemistein及bFGF作用后，兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果：不同浓度genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降，genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高，genistein对PKC活性无明显抑制作用，但可抑制bF(求诱导的PKC活性升高。结论：gerristein在体外可通过抑制生长因子激活的蛋白激酶活性升高而抑制兔晶体上皮细胞增殖。     

DMSO诱导下蛋白激酶C与HL—60细胞分化的关系

HL-60细胞在DMSO诱导下沿粒细胞方向分化,120h NBT~ 细胞达84％。细胞经诱导24h蛋白激酶C活性增加,72h为未诱导细胞的2.7倍。酶活性的增加,主要是由于细胞浆部分而不是细胞膜部分可溶性酶活性改变的结果。分化诱导剂DMSO本身不能直接激活蛋白激酶C,提示DMSO对酶活性的影响是间接的。