江苏省徐州市分离的大肠杆菌O157:H7菌株携带志贺毒素2型别的变化

目的 研究我国分离的大肠杆菌O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化。方法使用针对志贺毒素2及其变种的引物对进行PCR检测、细菌染色体DNA的PstⅠ酶切后的Southern印迹实验和PCR产物的HaeⅢ、RasⅠ酶切分析,以及：PCR产物克隆后的序列分析方法以及致病性大质粒的PstⅠ酶切分析。结果1999年分离自徐州市的人的5株菌均携带slt1、slt2,而2000年从江苏省徐州市患者分离的10株和蜣螂标本分离的4株共计14株大肠杆菌O157：H7菌株仅携带slt2vha毒素基因,其致病性质粒的限制性酶切图谱与1999年的菌株相比也发生了改变。结论鉴于江苏省徐州市1999年的分离的5菌株全部携带slt1和slt2基因,结果提示该地的优势菌型发生了改变,可能当地大肠杆菌O157：H7感染的流行病学特点有关。针对slt2变异基因而设计的引物及其以此为基础进行的限制性片段长度多态性分析的方法对于研究O157：H7菌株的志贺毒素型别的变化能够满足特异性及灵敏性的要求。     

Preparation of Monoclonal Antibody and Development of Enzyme-linked Immunosorbent Assay Specific for Escherichia coil O157 in Foods

OBJECTIVE: To prepare monoclonal antibodies (MAb) and antisera specific for Escherichia coli (E. coli) O157, and to develop a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to detect E. coli O157 in foods. METHODS: Spleen cells from BALB/c mice immunized with the somatic antigen of E. coli O157:H7 were fused with murine Sp2/0 myeloma cells. The hybridoma cell line specific for E. coli O157 was established after having been subcloned. Antisera specific for E. coli O157 was prepared by intravenous injection into New Zealand rabbits with a stain of E. coli O157:H7. The sandwich ELISA was developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The inoculated ground poultry meat and pasteurized milk were tested to confirm efficiency of the method. RESULTS: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 belonged to subtype IgM. The ascetic titers of the antibody was 1:1x10(6). No cross-reactivity of the MAb was observed with strains of Salmonella spp, Yersinia enterocolitica, Shigella dysenteriae, etc. The purified polyclonal antibody had a titer of 1:1x10(5) with E. coli O157. The detection limit of this sandwich ELISA was 10(3)-10(4) cfu E. coli O157/mL in pure culture with a high specificity, which was characterized by every non-O157 strain with negative response. With 10h enrichment procedure, E. coli O157:H7 recovered well from inoculated ground poultry meat and pasteurized milk at levels of 0.1 cfu/g and 0.1 cfu/mL. CONCLUSION: MAb 3A5 specific for E. coli O157 and O113:H21 can be produced by immunizing BALB/c mice with a strain of E. coli O157:H7. Then a sandwich ELISA can be developed with the polyclonal antibody as the capture antibody and the MAb 3A5 as the detection antibody. The method is proved to be a sensitive and specific technique to detect low number of E. coli O157 in food.     

免疫磁捕获-PCR检测大肠杆菌O157

目的使用免疫BMPs,对牛粪标本中的大肠杆菌O157进行免疫磁捕获,再对捕获物进行PCR检测,研究免疫磁捕获-PCR检测牛粪标本中大肠杆菌O157的方法。方法从磁性细菌中获取BMPs,将大肠杆菌O157抗体接种于BMPs表面,制成免疫BMPs。使用免疫BMPs,对大肠杆菌O157∶H7浓度为1×103cfu/g的牛粪标本,进行免疫磁捕获,对捕获物以vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测。作为对照,相同牛粪标本,直接对牛粪标本以vt1、vt2为增扩对象,进行同样PCR检测。结果相同牛粪标本,经免疫BMPs捕获处理,捕获物的PCR结果显示vt1及vt2基因阳性。而未经免疫磁捕获处理的牛粪标本,直接PCR检测的结果显示阴性。结论对牛粪标本,利用免疫BMPs,可捕获目标抗原,同时还可去除牛粪中存在的PCR反应抑制物等影响因素,提高检测敏感度。     

大肠杆菌O157∶H7异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价

目的:制备高效价、高纯度、特异性好、荧光强度高及稳定的抗大肠杆菌O157∶H7 异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体,初步探讨其在大肠杆菌荧光免疫检测试验中的应用。方法：复苏培养E.coli O157∶H7标准菌株,甲醛灭活制备疫苗免疫家兔。4次免疫后,颈动脉采血分离血清,经辛酸-饱和硫酸铵法粗提后应用蛋白亲和层析柱HiTrap Protein G HP进行 gG纯化,借助SDS-PAGE电泳、BCA试剂盒法、间接ELISA法分别对蛋白纯度、蛋白含量及抗体效价进行测定。应用不同FITC与蛋白量比值以及不同标记反应条件对多克隆抗体进行标记。比较荧光抗体F485/535,结合差异性显著分析对FITC与蛋白量比值及反应条件进行合
理选择,应用标记抗体与E.coli O157∶H7和金黄色葡萄球菌混合菌液反应验证标记效果。结果：HiTrap Protein G进行E.coli O157∶H7多克隆抗体纯化的最佳纯化方法为35%、100%二梯度洗脱,制备抗体效价为1∶25　600,与沙门氏菌、阴沟肠杆菌等8种肠杆菌无交叉反应,最佳FITC与蛋白量比值为1∶10,最佳标记反应条件为20℃、2 h。由最佳条件制得的荧光抗体与E.coliO157∶H7反应明显 ,强荧光连续照射15 min后仍显示高亮度荧光反应,且不与金黄色葡
萄球菌反应。结论：本实验首次制备出纯度高、荧光强度高、持续时间长的E.coli O157：H7 FITC标记多克隆抗体,为E.coli O157：H7荧光免疫检测方法的建立完成了关键步骤。
     

商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中E.coli O157:H7的鉴定

目的：对商丘市、济源市腹泻患者、家禽、家畜粪便中首次分离的E.coliO157:H7进行生物学特性等方面的研究。方法：采集疫区患者，外环境，家畜和家禽粪便标本1895份，采用mEC肉汤增菌，胶体金免疫卡快速测定法，免疫磁珠集菌法，CHROMAGAR-O157：H7菌株，在CHROMAGAR-O157：H7显色培养基生长形态，颜色，生化反应出现多样化，rfbO157,stx2,hlyA,eaeA基因检测均阳性的有58株，stx2阳性1株，eaeA阳性4株，72株无毒力基因。结论：为本省实验室诊断E.coliO157:H7提供了理论依据；不同种类的家禽，家畜分离的产毒菌株比例差别显著，以波尔山羊最为突出；为今后在制定对该菌的诊断标准，传染源的追踪和控制及细菌毒力学等方面的研究提供了重要线索。     

河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC O157:H7)感染之流行与基因特征研究

目的 :了解河南省肠出血性大肠杆菌 (enterohemorrhagicescherichiacoli,EHEC)的流行状况与流行菌株的志贺毒素基因型。方法 :采集河南省 14个监测点上腹泻病人、家畜家禽粪便和肉食品等标本分离E HEC菌株。应用分子生物学技术检测EHEC菌株的rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、stx2 和stx1等毒力基因和志贺毒素基因亚型 ,应用细胞培养技术检测菌株Vero细胞毒性。结果 :从腹泻病人、家畜家禽、肉食品、苍蝇、蜣螂中均分离出EHECO15 7:H7菌株 ,波尔山羊的带菌率最高达到 2 9.8%。 13 8株携带志贺毒素基因的菌株中 ,EHECO15 7:H7计 95株 ,占产毒菌株的 68.8% ;EHEC非O15 7菌株 43株 ,占 3 1.2 %。菌株可分为 5种毒素基因型 ,EHECO15 7:H 7仅含stx2 基因 ,以stx2 vha亚型为主 ,不含有stx1基因。EHEC非O15 7血清型毒素基因型较复杂。携带stx1和 /或stx2 的菌株均具有Vero细胞毒性。结论 :河南省腹泻病人和家畜家禽中存在EHEC感染。EHECO15 7:H7血清型是优势菌型 ,羊是主要宿主动物。目前河南省EHECO15 7:H7菌株毒素基因型为stx2 并以stx2 vha亚型为主。     

网状分枝扩增技术快速检测大肠埃希菌O157∶H7及其他产志贺样毒素大肠埃希菌

目的：建立一种简便、快速、灵敏和特异的检测食品和临床标本中大肠埃希菌O157∶H7及其他产志贺样毒大肠埃希菌(STEC)的方法。方法：设计并合成了检测志贺毒素2(stx2)基因特异的环形探针和捕获探针，确定网状分枝扩增方法（RAM）的灵敏度；含有stx2基因的不同血清型的菌株包括O46∶H38、O22∶H8 、O111∶NM，用于RAM特异度的测定。用RAM检测所有分离的菌株，并进一步对瞬时RAM进行研究。结果：RAM最低能检测10个拷贝的stx2合成靶基因和临床分离的菌株，表明RAM与PCR具有一样的灵敏度。特异度的测定结果表明不同血清型的大肠埃希菌均为stx2阳性，而非致病性大肠埃希菌ATCC23716则为阴性。在32株菌株中，28株细菌含有stx2基因，其余则为阴性， 与PCR检测结果100%一致。瞬时RAM结果也表明最低能检测10个细菌，检测信号的出现依赖于样品的浓度。 结论：RAM的简便和等温扩增特点可替代PCR检测各种标本中大肠埃希菌O157∶H7和STEC。     

南平市2007-2009年食源性致病菌污染状况

目的了解南平市市售食品中食源性致病菌污染状况及分布和高危食品种类。方法在全国食品污染物监测网与食源性疾病监测网控制体系下,2007-2009年采集4个监测点内的7大类市售食品共计208份,对沙门菌、单核细胞增生性李斯特菌、O157∶H7出血性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及副溶血性弧菌5种食源性致病菌进行监测分析。结果 208份食品样品中,分离出目标菌38株,总检出率18.27%。其中生肉类、水产品检出率最高,分别为38.46%（15/39）和73.08%（19/26）,其次为速冻米面,检出率20.00%（4/20）。监测的5种食源性致病菌均有检出,各类食品中沙门菌和副溶血性弧菌的检出率最高,分别为33.33%和50.00%;O157∶H7检出率为0.68%;金黄色葡萄球菌及单核细胞增生性李斯特菌检出率为4.22%和1.79%。O157∶H7经毒力检测存在产志贺毒素。结论通过连续3年对南平市市售食品中食源性致病菌的主动监测,掌握了食源性致病菌的污染状况、高危食品以及5种食源性致病菌在不同食品中的分布情况。     

大肠埃希菌O157：H7分离鉴定及毒素基因多重PCR检测

目的了解大肠埃希菌O157：H7（EHEC O157：H7）在云南战区感染性腹泻患者及猪粪便中检出情况。方法将标本接种mEC增菌液中增菌,免疫磁珠磁珠富集后,分别接种科玛嘉显O157显色琼脂和山梨醇麦康凯（S-MAC）琼脂平板培养,MUG初筛,肠杆菌科细菌生化鉴定编码系列（API-20E）和VITEK32全自动微生物生化分析仪鉴定。应用多重PCR扩增检测志贺毒素1、2（SLT1/SLT2）和侵袭相关基因。小白鼠腹腔注射法测定其毒力。K-B法做抗生素药敏试验。结果从腹泻患者和猪中均检出EHEC O157：H7,具有志贺毒素SLT1/SLT2和侵袭相关基因的三个毒素基因。毒力试验使小白鼠发病死亡。药敏试验对14种抗生素敏感。结论云南战区存在EHEC O157：H7感染。建立和优化的多重PCR方法,能快速、敏感特异的检测EHEC O157：H7毒素基因,为重大食源性疾病处理、诊治及流行病学调查提供了强有力的技术手段。     

Studies on the chick-lethal toxin of Eecherichia coli

A toxin which is lethal for two week old chicks has been recovered from strains of Escherichia coli O78:K80 of bovine and avian origin and from avian isolates of serogroups O2, O45 and O109. The toxin is heat-labile, antigenic, high in protein, inactivated by pronase, trypsin, amylase, and pancreatic lipase. The toxin may be precipitated by ammonium sulfate or TCA treatment from the supernatant obtained by repeated centrifugation of sonicated cells. Considerable purification has been obtained by column chromatography using Sepharose 6B.     

肠出血性大肠杆菌O157P:H7紧密黏附素的基因克隆、表达及功能研究

目的 获得高纯度的eae基因表达蛋白紧密黏附素(Intimin),研究其黏附作用.方法 从肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7全基因组中扩增出eae基因,T-A克隆后,将eae插入载体pET28a(+),并转化至E.coli BL21(DE3)中表达;用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出重组蛋白;SDS-PAGE检测目的 蛋白相对分子质量,免疫印记分析其免疫反应性,免疫荧光检测其黏附性.结果 获得了大小约2805 bp的eae片段;构建r重组载体pET28a(+)-eae,并在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达Intimin,Mr约97 000;Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化出Intimin;大肠杆菌O157:H7多抗血清在Mr约97 000处检测出一条特异性Intimin带;Intimin可黏附在HEp-2细胞表面.结论 高纯度的重组蛋白Intimin具有一定的免疫反应性,能与HEp-2细胞黏附,为进一步研究Intimin蛋白与宿主受体蛋白的相互作用奠定基础.     

检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7的环介导等温扩增和PCR法比较

目的建立基于环介导等温扩增(LAMP)技术的肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7快速简便检测方法,并与PCR进行比较。方法针对EHEC O157:H7保守的rfbE基因序列,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术并优化其反应条件,比较这两种检测方法的灵敏度、特异性和对实际样品的检测结果。结果成功建立了LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限低至10 cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对39株近源菌进行检测,结果显示,LAMP法仅7株EHEC O157:H7得到阳性结果,非EHEC O157:H7菌株均为阴性,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP法特异性比PCR法高。对于32份猪肉样品的检测,LAMP和PCR与常规检测结果一致,3份样品检测阳性。结论 LAMP检测技术的特异性和灵敏度较PCR高,并且操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速准确检测EHEC O157:H7的有效手段。     

2003—2012年中国肠出血性大肠杆菌O157：H7病原微生物学文献计量学分析

目的：从文献计量学的角度分析2003-2012年间国内肠出血性大肠杆菌O157：H7的病原微生物学研究状况。方法：利用中国科学引文数据库为统计源,检索2003-2012年国内肠出血性大肠杆菌O157：H7病原微生物学工作的研究文献,利用文献计量学方法进行统计分析。结果：在中国科学引文数据库中共收集关于肠出血性大肠杆菌O157：H7病原微生物学研究工作相关文献279篇,其年度间变化呈逐渐上升趋势,《中华微生物学和免疫学杂志》、《中国人兽共患病学报》是刊载此类文献数量较多的期刊,张雪寒和宋宏新是报道相关文献最多的专家,《2001年中国食源性致病菌及其耐药性主动监测研究》为单篇被引频次最高的文献,所有研究中基因技术研究最多,肠出血性大肠杆菌O157：H7的免疫学研究也占有较大比例。结论：肠出血性大肠杆菌O157：H7基因技术和免疫学研究工作是相关科研工作者研究的重点。     

长沙市岳麓地区大肠埃希菌O157∶H7宿主动物带菌情况调查

目的:调查湖南省长沙市岳麓地区不同乡镇大肠埃希菌O157:H7宿主动物带菌情况.方法:2011年5月采集长沙市岳麓地区境内鸡、鸭、猪、牛等家畜家禽的粪便标本307份,按国标常规培养法检测大肠埃希菌O157:H7.并采用PCR对分离菌株O157的抗原特异性基因rfb EO157进行检测.结果:307份标本中共检出阳性标本6份,总阳性率为1.95％(6/307),其中散放的鸡、鸭、猪带菌阳性率分别为1.67％(3/180)、14.29％(1/7)、2％(2/100).且分离的6株大肠埃希菌O157:H7特异性基因rfb EO157均为阳性.结论:长沙市岳麓地区家畜家禽已存在大肠埃希菌O157:H7感染,应引起足够的重视.提示加强宿主动物大肠埃希菌O157:H7监测,对疫情的分析和疫情预测具有重要意义.     

鼠李糖乳杆菌效应蛋白HM0539增强小鼠对大肠杆菌O157:H7肠道感染的抵抗力

目的 探究鼠李糖乳杆菌LGG的效应蛋白HM0539对大肠杆菌O157∶H7肠道感染的预防效果。方法 采用黏附、侵袭实验评价HM0539处理后,大肠杆菌O157∶H7对HT-29细胞的黏附侵袭能力。通过免疫荧光、免疫印迹等方法进一步检测在使用HM0539治疗过程中对HT-29细胞中黏蛋白（MUC2）、紧密连接蛋白（ZO-1）表达的影响;通过动物实验,观察小鼠的生存率及体质量变化,检测攻毒小鼠的肠道病理及肠道屏障功能的改变。结果 HM0539呈浓度依赖性地抑制大肠杆菌O157∶H7黏附和侵袭HT-29,且HM0539的预处理效果优于共同处理（P<0.05）;免疫荧光和免疫印迹等结果显示,HM0539不仅可以明显降低大肠杆菌O157∶H7感染后MUC2的表达水平（P<0.05）,还可显著抑制其对细胞间紧密连接蛋白的破坏（P<0.05）。动物实验结果证 明HM0539可抑制攻毒小鼠的体质量下降（P<0.05）和空肠的损伤;HM0539可抑制大肠杆菌O157∶H7诱导的空肠杯状细胞的破坏（P<0.05）;此外,HM0539可上调攻毒小鼠空肠中的MUC2、ZO-1蛋白的表达（P<0.05）。结论 HM0539可抑制大肠杆菌O157∶H7黏附和侵袭HT-29细胞,而且增强了小鼠对大肠杆菌O157∶H7感染的抵抗力,其机制可能是通过抑制大肠杆菌O157∶ H7破坏黏蛋白和细胞间紧密连接蛋白。     

肠出血型大肠埃希菌免疫PCR检测方法的建立

目的建立检测肠出血型大肠埃希菌O157：H7的免疫PCR技术,确定该方法的灵敏度和特异性。方法链亲和素桥联生物素化的二抗和双链DNA指示分子,构建桥联系统,进而建立免疫PCR技术,通过PCR扩增指示分子检测O157：H7。结果免疫-PCR技术最少可检测到10 CFU/ml的纯培养菌,灵敏度较ELISA提高103倍,非O157：H7菌株检测结果均为阴性。结论免疫-PCR技术具有较高的灵敏度和特异性,操作简便、快速,可作为肠出血型大肠埃希菌O157：H7的检测方法。     

Lectins in fruits having gastrointestinal activity: their participation in the hemagglutinating property of Escherichia coli O157:H7.

BACKGROUND: In fruits with therapeutic properties for antidiarrheal and laxative uses, the presence of lectins may be the bioactive properties that interfere with bacterial adhesion, thought to be competition for glycoside signal sites in the attachment. METHODS: This study identifies lectins in crude extracts from fruits such as Tamarindus indica (tamarind), Spontia vulgaris (plum), Psidium guava (guava), Mangifera indica (mango), Cydonia vulgaris (quince), and Crataegus mexicanus (tejocote). To verify the procedures, extracts from Ricinus communis (castor bean), Glycine max (soybean), Phaseolus vulgaris (beans), Vicia fava (fava bean), and Solanum tuberosum (potato) were used as controls for lectin activity. Both sources of lectins were analyzed to determine their participation in the host-parasite interaction, using as a model the hemagglutinating properties of Escherichia coli O157:H7 (EHA). RESULTS: All extracts showed hemagglutination to group O erythrocytes test (HA) with the exception of mango. Two new galactose-specific lectins were identified from tamarind and guava. When analyzed for participation in EHA, only guava lectins inhibited this, while soybean lectin induced hemolysis; as both lectins bind to galactose, it is probable that their recognition occurs in different domains. Sugars involved in the attachment between Escherichia coli O157:H7 and red cells were identified and again, galactose in addition to mannose was found to be related in EHA. On the other hand, guava lectins also agglutinated E. coli O157:H7, perhaps due to the same galactose-specific lectin or to another type of lectin. CONCLUSIONS: In summary, guava has a galactose-specific lectin that prevents adhesion of E. coli O157:H7 to red cells; this lectin is mediated by galactose. Prevention could also be due to their capacity of agglutinating E. coli by guava lectins. Soybean lectin induced hemolysis only when bacteria was present, but not with floating secretions. This finding showed that guava is a source of lectin that can be explored to prevent adhesion of E. coli to epithelial intestinal cells; contrariwise, soya must be studied to see its participation in the uremia caused during E. coli O157:H7 pathogenesis.     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株的细胞毒性比较

目的 比较肠出血性大肠埃希菌流行菌株的细胞毒性,筛选强毒株,为进一步研究细菌的致病机理提供理论依据.方法 采用PCR技术鉴定菌株的毒力基因E-hlyA、stx2、stxl,Giemsa染色观察细菌的黏附情况,通过测定感染后Vero细胞的乳酸脱氢酶释放情况了解细菌的Vero细胞毒性强弱.结果 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7菌株含有的毒力基因不同,均具有较强的黏附能力和Vero细胞毒性,其中国际菌株933W/O,中国流行菌株882364、01H112和日本菌株Cua9的Vero细胞毒性较强.结论 筛选出的流行菌株强毒株,可用于进一步的细菌感染模型构建和毒力基因致病机制研究.     

大肠杆菌O157:H7体内多聚磷酸盐的DAPI荧光定量检测

目的应用荧光剂DAPI探索一种直接定量大肠杆菌O157:H7无机多聚磷酸盐（polyP）的可靠方法。方法提取并纯化大 肠杆菌O157:H7 野生株DNA,DAPI与DNA、polyP45结合,测定360 nm和415 nm激发光的发射光谱;应用共聚焦显微镜,观察 细菌DAPI-DNA和DAPI-polyP复合物荧光,验证DAPI检测polyP的可行性;细菌液氮速冻溶解、-80 ℃速冻溶解、-20 ℃速冻溶 解、60 ℃加热10 min、Triton x-100作用、室温下放置后倍比稀释涂平板,观察6种方法对细菌存活的影响;与DAPI作用后,测定 荧光值,确定细胞膜通透性的最佳前处理方法;建立标准曲线,测定EHEC野生株、ppk1 两个突变株polyP 含量。结果应用 360 nm 激发波长,DAPI-DNA最大发射波长为460 nm;应用415 nm 激发波长,DAPI-polyP 最大发射波长为550 nm;应用 405 nm激发光,收集DAPI-DNA蓝色荧光（425~475 nm）,应用488 nm激发光,收集DAPI-polyP绿色荧光（500~560 nm）;最佳 细菌前处理方法为-80 ℃速冻后室温下自然溶解;标准曲线为Y=1849X+127.5（R2=0.991）,测定各株菌polyP量,其中野生株显 著高于ppk1缺失突变株。结论DAPI荧光定量检测方法具有直接、可靠、易于操作、定量检测等特点,可为进一步研究polyP在 肠出血型大肠埃希菌O157:H7中的作用提供技术支持。     

肠出血性大肠埃希菌O157:H7菌影生物学活性的初步研究

目的制备肠出血性大肠埃希菌O157∶H7细菌菌影,在细胞及动物水平对其生物学活性进行初步评价。方法将包含噬菌体phiX174裂解基因E的重组质粒pLSE转化肠出血性大肠埃希菌O157∶H7 EDL933及大肠埃希菌DH5α,42℃诱导制备菌影。利用间接免疫荧光实验观察菌影主要抗原结构,并利用电镜观察菌影对Hep-2细胞的黏附。将菌影免疫小鼠后,采用间接ELISA法检测小鼠特异性抗体,并通过小鼠攻毒实验考察菌影的保护效果。结果成功构建了重组质粒pLSE,制备出O157∶H7及DH5α菌影。O157∶H7菌影保留了病原菌的主要外膜抗原,能紧密黏附细胞Hep-2但并不侵入细胞。O157∶H7菌影免疫雄性BALB/c小鼠诱导特异性IgG抗体的产生。攻击试验结果显示小鼠对致死剂量O157∶H7 EDL933强毒株的保护率达到80%。结论 O157∶H7菌影的成功制备及生物学活性的初步析为研制O157∶H7菌影疫苗奠定了基础。