脐血造血干细胞短期冻存效果的评价

为了探讨脐血造血干细胞在液氮中短期冻存复苏后的效果，分别将各自为8例冻存6个月、1年、2年的脐血千细胞进行复苏，观察造血干细胞活性。有核细胞(NC)计数采用自动血细胞分析仪测定，CD34^ 细胞采用流式细胞技术测定，用体外造血细胞培养技术分析粒一巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)产率，台盼蓝染色法判断造血细胞存活率。结果表明：脐血造血干细胞在液氮中冻存6个月、1年、2年后解冻，其有核细胞、CD34^ 细胞、细胞活率、CFU-GM产率在3个不同冻存时间的差异无显著性。结论：脐血干细胞于液氯中短期冻存，其干细胞数量和细胞活性没有明显的变化，冻存效果较好。     

深低温冻存脐血的回输及护理

目的 探讨如何做好深低温冻存脐血的安全有效输注和护理.方法 对78例患者111份脐血经不同输注途径回输过程中出现的不良反应进行观察及护理.结果 静脉回输途径:67例中1例发生急性溶血反应;1例突发意识丧失,全身抽搐;4例发生剧烈头痛,伴呼吸困难、血压急剧升高;46例发生部分及不同程度的手脚、颜面部麻木,恶心呕吐,腹痛伴便意,呼吸困难伴胸部压迫感,血压升高,心率减慢或血压降低、心率加快,其中1例出现无症状性频发早搏;大部分病例出现回输后肉眼血红蛋白尿.骨髓腔注射回输途径:11例患者在注射过程仅发生局部及双下肢放射性酸胀,血红蛋白尿症状轻或无血红蛋白尿症状.78例患者111份脐血均成功输完,患者生命安全.结论 静脉回输脐血不良反应以严重的全身反应为主,病情变化快且复杂,护理重点为充分预防准备,严密病情观察和积极有效对症处理;骨髓腔注射脐血不良反应以局部胀痛为主,护理重点为严格遵守无菌操作,掌握脐血注射时间.     

重组人脱氧核糖核酸酶预防冻存复苏后脐血造血干细胞凝集

自1988年Gluckman等[1]用脐血移植治疗Fanconi贫血患儿并获得成功后,脐血已经作为一种重要的可替代的造血干细胞来源广泛应用于治疗某些恶性及非恶性血液病、某些遗传病、重症免疫缺陷等疾病[1～3].脐血库的建立日益受到重视,如何经济、高效地体外保存造血干细胞,使干细胞的损伤降到最低限度,提高脐带血干细胞移植的成功率,一直是人们关注的焦点.许多研究证明脐带血保存前的浓缩,是提高临床移植应用效率的关键,但是复苏过程会造成干细胞的损伤,尤其是冷冻和复苏时粒细胞受损释放的DNA及细胞碎片易形成凝块和微凝集导致干细胞损失从而影响移植效果.Eichler等[4]报道重组人脱氧核糖核酸酶(rhDNase)能特异性裂解DNA.笔者采用不同浓度的rhDNase处理复苏后的脐血干细胞,观察其抑制凝集的效果,并且运用免疫荧光直接四色标记和流式细胞术检测不同浓度rhDNase对相关黏附分子表达的影响,现报道如下.     

深低温冻存自体造血干细胞回输副反应的观察及护理

目的探讨深低温冻存自体造血干细胞解冻回输过程中如何确保干细胞回输顺利实现。方法回顾性总结了76例次自体造血干细胞移植患者在干细胞解冻回输过程中出现的副反应的观察及护理措施。结果76例次中64.4%发生不同程度的恶心、呕吐、呼吸困难等副反应,此外3l例次(40.7%)出现了心率减慢,38例次(50%)有血压升高等心血管变化。通过有效护理,76例次干细胞回输均顺利完成。结论有效的心理护理、严格的无菌操作、完善的物品准备、操作中严密的观察与护理,是确保深低温冻存自体造血干细胞顺利回输的关键。     

深低温冻存脐血复苏后输注临床移植相关护理的研究进展

脐血造血干细胞移植是治疗血液系统恶性及非恶性疾病的一种有效方法,其作为一种安全、可靠和有效的移植方式已被广泛认可.脐血冻存在-196℃液氮中,移植时需要快速复温、及时回输给患者并确保安全.本文就脐血的复温、输注等相关技术和护理对策,综述如下.     

低温冻存对人脐血淋巴细胞免疫活性的影响

低温冻存对人脐血淋巴细胞免疫活性的影响孙成文，韩颖，孔繁华我们利用单向混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）方法，研究了低温冻存对脐血淋巴细胞的影响，并比较了脐血和成人外周血淋巴细胞免疫活性的差异。材料和方法１标本采集１．１脐血：取自正常分娩足月儿脐带血２０份，...     

深低温冻存不同时间对脐血细胞质量的影响

本研究旨在探讨不同冻存时间的脐血干细胞复苏后的回收率,并分析冷冻复苏的细胞对患者植入速度的影响。20份经-196℃液氮低温保存1-10年的脐血干细胞标本,比较冻存前（脐血库提供资料）和复苏后的细胞活率、总有核细胞数（TNC）、CD34＋细胞和粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）的数量,并分析复苏后的细胞回收对移植受者植入速度的影响。结果表明,不同冻存时间对复苏后干细胞的回收率没有影响。经冻存复苏后,细胞活存率为（92．75±2．55）％,TNC、CD34＋细胞数和CFU-GM的回收率分别为89．9％、84．8％和84．3％,与冻存前相比明显减少（P=0．000）,但细胞数量的下降对移植患者中性粒细胞和血小板的植入时间均无影响。冻存后TNC和CD34＋细胞数量与冻存前数量有很大的相关性（r=0．954;r=0．931,P=0．000）,而CFU-GM的相关性弱（r=0．285,P=0．223）。结论：冻存和复温过程会-定程度上损伤脐血干细胞,导致细胞丢失,但不会影响移植的效果。     

外周血造血干细胞的采集及冻存

20世纪印年代末发现人外周血中存在有造血干细胞(PBSC)，到20世纪80年代对恶性肿瘤患者进行化疗结合自身外周血造血干细胞移植(PBSCT)获得成功以来，PBSCT在临床应用日益广泛，其成功的关键在于采集足够量的干／祖细胞并有效地进行保存，回输后方能获得成功的造血功能重建。我站于2003年开始进行外周血干细胞采集、冻存工作，共进行了3例5人次的采集及冰冻保存，回输3例，均获得成功。现报告如下。     

造血干细胞体外冻存的效果评价

目的探讨不同冻存环境和不同冻存时间对外周血造血干细胞活性的影响。方法采用每份终浓度为10%二甲亚砜、5%人血白蛋白作为细胞冷冻保存液对45份采集的干细胞分别进行冰箱转液氮组和冰箱组冻存,并观察冻存1、2、3年后单个核细胞(MNC)、CD34+细胞计数及细胞回收率,细胞活力。结果冰箱组冻存干细胞2、3年后单个核细     

脐血造血干/祖细胞冻存方法研究进展

已有许多国家先后建立起地区或国立性的脐血干细胞库,希望为无关供体移植物的存放进行国际联网,发展成为一个庞大而种族平衡良好的脐血干细胞库。而建立脐血干细胞库、进行干细胞移植的关键是冻存脐血干/祖细胞。本文就脐血干/祖细胞冻存方法研究进展作一综述。     

人脐血粒单系造血祖细胞冻存研究

在低温下有效地长期保存移植用造血干细胞,对实现骨髓造血重建具有重要意义。脐血作为骨髓替代物实现造血重建已完全获得成功。我们着重观察了在不同温区保存脐血时粒单系造血祖细胞损伤的表现,并讨论了损伤的可能原因。     

脐血造血干／祖细胞冻存方法研究进展

已有许多国家先后建立起地区或国立性的脐血干细胞库,希望为无关供体移植物的存放进行国际联网,发展成为一个庞大而种族平衡良好的脐血干细胞库。而建立脐血干细胞库、进行干细胞移植的关键是冻存脐血干/祖细胞。本就脐血干/祖细胞冻存方法研究进展作一综述。     

二甲基亚砜联合羟乙基淀粉的非程控降温法冻存脐血造血干细胞研究

为了探索有效低温保存脐血造血干／祖细胞的冷冻保护剂和技术，进行了二种方法试验。第一种方法联合使用二甲基亚砜(DMSO)和羟乙基淀粉(HES)(分子量120000)作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻技术；第二种方法只使用DMSO作为冷冻保护剂并用程控降温仪冷冻技术保存脐血。对二种方法的效果进行比较。结果表明：15份脐血冻存后细胞存活率、CFU—GM回收率，无论在使用非程控降温的第一种方法和使用程控降温仪的第二种方法均无显著性差异。183份脐血质量检测结果及21例临床移植结果也显示两种方法无显著性差异。结论：联合使用DMSO和HES作为冷冻保护剂并用非程控降温冷冻的方法对脐血造血干细胞有良好的保护作用，是一种简单易行、省时省力、适合于脐血造血干细胞库大批量冻存脐血的方法。     

人脐血造血干细胞深低温保存效果观察

人脐血造血干细胞深低温保存效果观察朱为国，邢献志，吴霭，武大林迄今为止，未见到－８０℃保存人脐带血造血干细胞（ＣＢＳＣ）的报道。若能应用－８０Ｃ冰箱较长时间有效地保存ＣＢＳＣ，将有利于ＣＢＳＣ移植的广泛推广使用。我们探讨了－８０℃冰箱保存ＣＢＳＣ的可...     

人脐带间充质干细胞低温冻存后生物学鉴定

目的观察人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)经低温冻存复苏后的生物学特性,验证其是否仍具有间充质干细胞的基本特征。方法用胶原酶和胰蛋白酶消化脐带,分离诱导获得HUC-MSCs,传代培养,取第3代细胞加入冷冻保护剂(10%DMSO+40%FBS+50%DMEM/F12)后将其冻存于-80℃冰箱过夜,再转入液氮气相中保存1个月后复苏。采用倒置显微镜观察复苏后贴壁生长细胞的形态;台盼蓝拒染法比较冻存前后细胞活力;MTT法测定HUC-MSCs的增殖活性,比较冻存前后HUC-MSCs增殖活性的差异;流式细胞仪检测HUC-MSCs经冻存复苏后表面抗原的表达情况;复苏后HUC-MSCs进行成骨诱导分化培养,检验其是否仍具有多向分化潜能。结果 HUC-MSCs经低温保存复苏后,细胞仍保持贴壁生长等外形特征,复苏后HUC-MSCs存活率为91.17%;增殖活性与未冻存细胞比较,差异无统计学意义;细胞表面高表达CD105、CD73、CD71、CD90、CD29、CD44、CD13抗原,低表达或不表达CD34、CD133、CD45、CD14,HLA-DR、CD86、CD83、CD80、CD1α;复苏后HUC-MSCs具有向成骨细胞诱导分化能力,细胞经茜素红、ALP和Von-Kossa′s染色呈阳性反应。结论经冻存复苏后的HUC-MSCs保持了间充质干细胞的基本形态,其表型满足间充质干细胞的基本要求,仍具有向成骨细胞分化的潜能。     

-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响

目的探讨-80℃下不同冻存时间对脐血造血干细胞保存效果的影响。方法对-80℃下分别冻存1、2、3、4、8、16、32 w的脐血细胞进行复苏,比较各组间有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率的差异。结果脐血细胞在-80℃下保存1、2、3、4、8 w后,各组的有核细胞数和CD34^＋数的差异无统计学意义,而在冻存16、32 w后较1 w的差异有统计学意义（P〈0.05）。台盼蓝拒染率在8、16、32 w较1 w的差异均有统计学意义（P〈0.05）,1、2、3、4 w各组间的差异无统计学意义。结论-80℃直接冻存对于短期（〈8 w）脐血细胞的活性（有核细胞数、CD34^＋数和台盼蓝拒染率）无明显影响,但对于需要长期保存的脐血细胞的效果有影响。     

组织深低温冻存中保护剂的应用

背景：深低温冻存可以使离体组织的活性及功能最大限度的保留,对医学研究、临床治疗起到巨大能动作用。但在复合组织深低温冻存中,保护剂及应用还存在着很多问题有待解决。目的：综述近年国内外深低温冻存中保护剂应用的研究进展。方法：第一作者应用计算机检索2003年1月至2012年12月PubMed数据库、中国期刊全文数据』万方数据库相关文章,英文检索词为“cryopreservation,cryoprotectant,compositetissues,vitrificatiion,transplantation”;中文检索词为“深低温保存,保护剂,复合组织,玻璃化,移植”。共检索到1篇相关文献,67篇文献符合纳入标准。结果与结论：自上世纪开始国内外许多学者经过大量动物细胞和组织的基础实验研究,不断探寻各科胞组织的冻存方法,采用了多种多样的冻存技术,使用的保护剂种类繁多,取得一定的研究成果,发保护剂的应用在深低温组织冻存中起到了至关重要的作用,深低温冻存在组织工程、生殖医学、移植领域已有广泛的应用。但目前复合组织深低温冻存保护剂的应用尚处于研究阶段,保护剂的种类、浓以及导入洗脱方法均直接影响最终组织保存的成败。     

脐血造血细胞的分离冻存

目的 探讨不同条件对脐血造血细胞回收的影响。方法 运用6％羟乙基淀粉(HES)沉降法分离脐血,以程序降温法冻存脐 血造血细胞。结果 HES两次离心法分离脐血,造血细胞回收率高,活力好,费时短。脐血分离前在4℃或室温下可放置24小时而不影响细胞活力。HES终浓度以1％～2％为宜。以0．9％生理盐水 DMSO做保护剂对脐血造血细胞损伤小。复苏后脐血造血细胞可放置60分钟,洗涤会造成约10％的细胞损失,但能延长放置时间达120分钟以上。结论 HES两次离心法分离脐血简便实用。