X线诱导人脑胶质瘤细胞系凋亡及相关基因表达的实验研究

目的 探讨Ｘ－刀治疗脑胶质瘤的最佳剂量－效应关系和最佳时间－效应关系。方法 以ＢＴ３２５细胞系为实验对象,设置了阴性对照组,５Ｇｙ,１０Ｇｙ,１５Ｇｙ,２０Ｇｙ和３０Ｇｙ组,应用Ｖａｒｉａｎ直线加速器行单次大剂量分别于２ｈ,６ｈ,１２ｈ,４８ｈ,７２ｈ和９６ｈ采用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期的改变;采用免疫组化法观察ｐ５３,ＢｃＬ－２和ＰＣＮＡ基因的表达情况;采用光镜和电镜观察细胞凋亡的形态学     

脑膜瘤细胞X线敏感性实验研究

目的 为脑膜瘤Ｘ－刀的个体化治疗寻找最佳量－效关系和最佳时－效关系。方法 ８例病人的脑膜瘤细胞进行原代培养。将培养的脑膜瘤细腻分为阴性对照组、５Ｇｙ、１０Ｇｙ、１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、２５Ｇｙ组和３０Ｇｙ组，培养７－９天后采用单镒Ｘ线照射，于照射后２ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ采用ＦＣＭ检测细胞凋亡和细胞存活情况，采用免疫组化（ＡＢＣ）法测试ＰＣＮＡ、ＢｃＬ－２和Ｐ５３基因的表达。结果 发     

烧伤后肠系膜淋巴结GP130基因表达与细胞凋亡

目的 观察烧伤后肠系膜淋巴结ＧＰ１３０基因表达与细胞凋亡变化的时相关系,方法 ＢＡＬＢ／ｃ种小鼠６０只,分为和伤组、正常对照组、致伤组动物予以２０％ＴＢＳＡⅢ度烧地伤后１、２、３ｄ活杀致伤组,并活杀对照组。取肠系膜淋巴结：ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－６水平,提取ＲＮＡ,ＲＴ－ＰＣＲ检测ＧＰ１３０基因表达变化;采用ＴＵＮＮＥＬ法对细胞凋亡进行观察。结果 在伤后３ｄ以内ＩＬ－６含量明显升高：ＧＰ１３０基因表达     

放疗前、中c-myc蛋白表达与宫颈癌细胞凋亡和增殖的关系

目的：探讨在放射治疗前、中宫颈癌细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达与细胞凋亡和增殖的关系。方法：对 ４８例宫颈癌患者分别于放疗前、放疗 ２０Ｇｙ／２周取活检,石蜡包埋。应用原位ＤＮＡ缺口未端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,应用免疫组化法对ｃ－ｍｙｃ蛋白、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果。 ４８例宫颈癌患者放疗前、放疗 ２０Ｇｙ凋亡阳性率分别为６７％、８５％,有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。放疗前ｃ－ｍｙｃ蛋白阳性表达率为 ７８％,ＰＣＮＡ阳性表达率为８６％,放疗２０Ｇｙ其表达率分别为４３％和５５％,放疗前、中比较均有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与凋亡有明显相关性。放疗前及放疗２０Ｇｙ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与ＰＣＮＡ表达有相关性。结论：ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与宫颈癌细胞增殖有关,亦与放射诱导宫颈癌细胞凋亡有关。     

8—Br—cAMP对肺癌NSCLC—3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人肺癌ＮＳＣＬＣ－３细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：将体外培育的ＮＳＣＬＣ－３细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对ＮＳＣＬＧ－３细胞ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达的影响。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后的实验且较未加８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ的对照组－ｃ－ｍｙｃ,ｂｃｌ－２基因表达降低（Ｐ〈０．０１）。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可下调与ＮＳＣＬＣ－３     

8—Br—cAMP和^60Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相 …

应用８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ和＾６０Ｃｏ照射体外诱导Ｈｅｌａ细胞凋亡。探讨ｂｘＬ－２,ｗｐ５３,ｍｐ５３,ｃ－ｍｙｃｉＮｏｓ的基因表达和ｉＮｏｓ,Ｆａｓ蛋白表达之间的关系、为探讨无毒性８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对宫颈癌治疗的新途径 提供依据。采用ＴＵＮＥＬ法和Ｆｅｕｌｇｅｎ法进行细胞凋亡实验;采用本实验室创新的完整细胞原位ＲＮＡ斑点印迹技术检测Ｆａｓ和ｉＮｏｓ蛋白,应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测     

细胞凋亡水平及ER,p53,Bcl—2基因产物表达与乳腺癌生物学行 …

目的：探讨细胞凋亡、ＥＲ、ｐ５３及Ｂｃｌ－２基因产物表达在人类乳腺癌中的生物学意义。方法：对８６例乳腺癌和２４例乳腺良性病变行细胞凋亡检测（ＴＵＮＥＬ法）和ｐ５３、Ｂｃｌ－２、ＥＲ的免疫组化染色（Ｓ－Ｐ法）。结果：细胞凋亡水平与Ｂｃｌ－２、ＥＲ的表达和淋巴结转移;ｐ５３表达与组织学分级和ＥＲ的表达;Ｂｃｌ－２表达与组织学分级和患者的生存期差异有显著性（Ｐ〈０．０５）。细胞凋亡和ｐ５３、Ｂｃｌ－２基     

胃癌多基因表达的同步检测

胃癌多基因表达的同步检测朱日林，等。中华肿瘤杂志１９９６；１８（３）：１９９应用ＬＳＡＢ和ＡＢＣ法对７５例胃癌及癌旁组织进行了Ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ和ｒａｓ表达的研究。结果显示：１。７５例胃癌Ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ和ｒａｓ表达...     

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对血管平滑肌和心肌细胞细胞周 …

目的 观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子ＢＢ（ＰＤＧＦ－ＢＢ）对血管平滑肌细胞和心肌细胞中细胞周期素和Ｐ２７蛋白表达量的不同影响,方法 培养的血管平滑肌细胞或乳鼠心肌细胞,加入ＡｎｇⅡ１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ,ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍｌ后２４小时收集细胞,用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ,以确定细胞所处的周期,用细胞周期素（ＣｙｃｌｉｎＤ,ＣｙｃｌｉｎＥ,ＣｙｃｌｉｎＡ）或Ｐ２７蛋白的单     

脑胶质瘤中P53、Bcl—2、Bax蛋白的表达

目的：探讨Ｐ５３、Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ蛋白在脑胶质瘤表达水平以及和细胞凋亡的相关性。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ染色法检测４７例脑胶质瘤组织中Ｐ５３、Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ蛋白的表达民情况。结果：在４７例脑胶质瘤中,Ｐ５３、Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ蛋白的阳性率分别为４８．９％（２３／４７）,５７．４％（２７／４７）,１７．０２％（８／４７）（ｐ〈０．０５）;发现ＧＢＭ的Ｐ５３蛋白阳性水平要高于ＡＳ;Ｂｃｌ－２蛋白     

侵袭性骨肿瘤细胞凋亡及p53、p21、BcL-2的表达研究

目的 研究侵袭性骨肿瘤细胞凋亡及p53、p21、BcL-2的表达情况,并初步探讨其临床及生物学意义。方法 采用原位DNA末端标记法及免疫组化方法检测6种共123例侵袭性骨肿瘤中细胞凋亡及p53、p21、BcL-2的表达情况,并统计其阳性反应率。结果 发现在几种骨肿瘤中p53、p21表达较普遍。BcL-2的表达凶于部分恶性肿瘤病例,良性肿瘤不表达。恶性骨肿瘤p53、p21t BcL-2基因蛋白表达阳性率均高于良性肿瘤,差异有显著意义（P＜0.01）。恶性骨肿瘤细胞凋亡阳性率均低于良性肿瘤,差异有显著意义（P＜0.01）。结论 细胞凋亡及相关基因p53、p21的异常活动在骨肿瘤的发生、发展过程中可能起差相当重要的作用。而BcL-2的表达可作为良、恶性骨肿瘤鉴别的一个参考指征。     

BcL-2和p53在胃癌及癌前病变中的表达和相关性研究

目的 研究BcL-2、p53表达在胃癌发生、发展中的作用及二者的相关性。方法 采用免疫组化双重染色法检测了156例正常胃粘膜、不曲型增生及胃癌组织中BcL-2和p53的表达。结果 BcL-2和p53在正常胃粘膜中均呈阴性表达。BcL-2在重度不典型增生和高分化腺癌中表达率较高（分别为69.6%和73.9%）,与轻度不典型寺生及中低分化腺癌间差异显著（P＜0.05）。p53在癌中的表达显著高于胃粘膜不典型增生,且表达率随着胃癌分化程度的降低而升高（P＜0.05）。胃癌淋巴细胞转移组,BcL-2蛋白低表达,p53蛋白高表达（P＜0.05）。BcL-2与p53呈显著负相关（P＜0.01）。结论 BcL-2与p53分别作用于胃癌发生、发展的不同阶段,有助于胃癌的早期诊断及预后的判断。     

Effect of X-rays on expression of caspase-3 and p53 in EL-4 cells and its biological implications

Objective To investigate the effect of X-rays on expression of caspase-3 and p53 protein in EL-4 cells and its implications in induction of apoptosis and polyploid cells. Methods Mouse lymphoma cell line （EL-4 cells） was used. Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for measurement of protein expression, apoptosis, cell cycle, and polyploid cells. Results The expression of caspase-3 protein increased significantly at 8 h and 12 h, compared with that of sham-irradiated control （P〈0.05, respectively） and the expression of p53 protein increased significantly at 2, 4, 8, 12, and 24 h, compared with that of sham-irradiated control （P〈0.05-P〈0.01） in EL-4 cells after 4.0 Gy X-irradiation. Apoptosis of EL-4 cells was increased significantly at 2, 4, 8, 12, 24, 48, and 72 h after 4.0Gy exposure, compared with that of sham-irradiated control （P〈0.05-P〈0.001）. G2 phase cells were increased significantly at 4, 8, 12, 24, 48, and 72 h （P〈0,05-P〈0.001）. However, no marked change in the number of 8 C polyploid cells was found from 2 to 48 h after 4.0 Gy exposure. Conclusion The expressions of caspase-3 and p53 protein in EL-4 cells are induced by X-rays, which might play an important role in the induction of apoptosis, and the molecular pathway for polyploid formation might be p53-independent.     

G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X-Ray Irradiation G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X-Ray Irradiation

Objective　To investigate the molecular regulation of G1 arrest of mouse thymocytes induced by ionizing radiation. Methods　Cell cycle was analyzed by flow cytometry (FCM) following staining of cells with proidium iodide. Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for measurement of protein expression. Results　It was demonstrated that G1 phase of mouse thymocytes increased significantly at 12h after whole body irradiation (WBI) with the doses of 0.5, 1.0 and 2.0 Gy, and at 24h following 2.0Gy exposure, measured by FCM. In the time course experiment, it was found that G1 phase of thymocytes increased significantly at 4h, reached a peak level at 24h and came down toward 48h after WBI with 2.0Gy X-rays. The results also showed that after 2.0Gy exposure, the expression of proteins in mouse thymocytes increased significantlty from 1h to 8h for p53, for p21 from 4h to 48h, and for MDM2 at 4h and 8h, measured by FCM. But no change was found for GADD45 protein expression. Conclusion　These results suggest that G1 arrest could be induced by a single dose of 0.5 Gy, 1.0Gy or 2.0Gy, and its molecular control might be established through the p53-p21 pathway.     

G1 Arrest and Relative Protein Expressions in Mouse Thymocytes Induced by Whole Body X—Ray Irradiation

Objective:To investigate the molecular regulation of G1 arrest of mouse thymocytes induced by ionizing radiation.Methods:Cell cycle was analyzed by flow cytomtry(FCM)following staining of cells with proidium iodide.Fluorescent staining and flow cytometry analysis were employed for measurement of protein expression.Results:it was demonstrated that G1 phase of mouse thymocytes increased significantly at 12h after whole body irradiation(WBI)with the doses of 0.5,1.0 and 2.0Gy,and at 24h following 2.0Gy exposure,measured by FCM.In the time course experiment,it was found that G1 phase of thymocytes increased significantly at 4h,reached a peak level at 24h and came down toward 48h after WBI with 2.0Gy X-rays.The results also showed that after 2.0Gy exposure,the expression of proteins in mouse thymocytes increased significantlty from 1h to 8h for p53,for p21 from 4h to 48h ,and for MDM2 at 4h and 8h.measured by FCM,But no change was found for GADD45 protein expression.Conclusion;These results suggest that G1 arrest could be induced by a single dose of 0.5Gy,1.0Gy or 2.0Gy,and its molecular control might be established through the p53-p21 pathway.     

姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。     

miR-34a在辐射损伤时对细胞周期的调控作用

目的探讨60Coγ射线诱发大鼠肝脏BRL细胞辐射损伤时p53激活诱导的miR-34a改变对细胞周期的调控作用。方法以大鼠BRL肝细胞为研究对象,予4 Gy60Coγ射线照射后,分别培养4、12、24、48 h。采用流式细胞技术检测各组BRL细胞周期的变化,实时定量PCR检测各组细胞中miR-34a mRNA和c-myc mRNA表达水平的变化,Western blot方法检测各组细胞中p53蛋白和Myc蛋白的表达。结果 60Coγ射线4 Gy照射后4 h即出现G2期阻滞（P〈0.05）,至照射后24 h,G2期阻滞恢复;照射后12 h起,S期细胞减少（P〈0.05）,出现G1阻滞,48 h仍未恢复。照射后4 h p53蛋白和miR-34a mRNA表达增加（P〈0.05）,12 h均有下降（P〈0.05）,24 h和48 h已基本回至正常水平,而c-myc在照射后4 h开始呈持续降低趋势,48 h有所恢复。结论细胞在电离辐射引起DNA损伤后,早期即激活了p53蛋白,p53蛋白调节miR-34a表达,可能再经由miR-34a的靶基因c-myc介导,使细胞阻滞于G1和（或）G2期进行DNA修复。     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞p53、p21、GADD45及MDM2蛋白表达的影响

目的：观察电离辐射全身照射对小鼠胸腺细胞ｐ５３、ｐ２１、ＧＡＤＤ４５ 及ＭＤＭ２ 蛋白表达的影响。方法：采用间接免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果：２ Ｇｙ Ｘ射线照射后１～８ ｈ ｐ５３ 蛋白表达显著增高;照射后４～４８ ｈ ｐ２１ 蛋白表达显著增高;ＭＤＭ２ 蛋白在照后４ ｈ 及８ ｈ 显著增高;而ＧＡＤＤ４５ 蛋白表达在照后１～４８ ｈ 内无明显变化。结论：电离辐射可诱导胸腺细胞ｐ５３、ｐ２１ 及ＭＤＭ２ 蛋白表达增高。此结果将对辐射诱导胸腺细胞Ｇ１ 期阻滞的分子通路研究有重要意义。     

离子辐射通过caspase途径而非p53途径诱导Jurkat细胞凋亡

目的:研究离子辐射诱导Jurkat细胞凋亡的动态趋势及其机制。方法:分别以5、10、20Gy的辐射量照射Jurkat细胞,其中一份样本在照射前加入zVAD.fmk,在照射后培养6、12、24、36和48h收获细胞,应用AnVPI双染和呈现subG1峰技术,在流式细胞仪上定量测定凋亡细胞。采用WesternBlot技术检测p53蛋白的表达。结果:细胞受照射后,凋亡细胞数随培养时间的延长和辐射量的加大而增加。在6h,只有20Gy才诱导细胞显著凋亡(P<0.005),5Gy的照射要到24h才出现明显的凋亡(P<0.05)。在48h,20Gy照射诱导的凋亡细胞数是所有时间点和剂量强度中最高的(P<0.001)。加有zVAD.fmk的细胞,尽管都是10Gy照射,比未加zVAD.fmk的细胞表现出凋亡细胞明显减少(P<0.005),但与未加zVAD.fmk、照射量是5Gy的细胞相比,凋亡细胞数仍显著增加(P<0.005)。Jurkat细胞在照射前后都没有p53表达。结论:离子辐射诱导细胞凋亡呈现出时间和剂量效应关系;capase抑制剂zVAD.fmk部分抑制离子辐射诱导细胞凋亡;离子辐射诱导细胞凋亡的机制独立于肿瘤抑制基因p53,caspase可能在其中起重要作用。     

姜黄素对人卵巢癌SK细胞增殖活性及PCNA、P53 mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素抗卵巢癌SK细胞增殖活性的作用及机制。方法培养好的人卵巢癌SK细胞,分别加入10、20、30、40、50μmol/L姜黄素,对照组加等量溶剂二甲基亚砜(DMSO),分别孵育24、48 h,应用MTT方法和细胞计数方法测定SK细胞生长抑制率。40μmol/L姜黄素孵育48 h后,收集细胞,RT-PCR方法测定PCNA和P53 mRNA的表达。结果姜黄素对SK细胞增殖具有明显的抑制作用。在10～50μmol/L浓度范围内,姜黄素对SK细胞增殖的抑制率随浓度增高和时间延长而增加。40μmol/L姜黄素处理SK细胞48 h后,PCNA mRNA表达显著下降(P<0.01),P53 mRNA表达显著上升(P<0.01)。结论姜黄素可通过下调PCNA表达、上调P53 mRNA表达,发挥其抑制卵巢癌SK细胞增殖的作用。