X线诱导人脑胶质瘤细胞系凋亡及相关基因表达的实验研究

目的 探讨Ｘ－刀治疗脑胶质瘤的最佳剂量－效应关系和最佳时间－效应关系。方法 以ＢＴ３２５细胞系为实验对象,设置了阴性对照组,５Ｇｙ,１０Ｇｙ,１５Ｇｙ,２０Ｇｙ和３０Ｇｙ组,应用Ｖａｒｉａｎ直线加速器行单次大剂量分别于２ｈ,６ｈ,１２ｈ,４８ｈ,７２ｈ和９６ｈ采用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期的改变;采用免疫组化法观察ｐ５３,ＢｃＬ－２和ＰＣＮＡ基因的表达情况;采用光镜和电镜观察细胞凋亡的形态学     

脑膜瘤细胞X线敏感性实验研究

目的 为脑膜瘤Ｘ－刀的个体化治疗寻找最佳量－效关系和最佳时－效关系。方法 ８例病人的脑膜瘤细胞进行原代培养。将培养的脑膜瘤细腻分为阴性对照组、５Ｇｙ、１０Ｇｙ、１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、２５Ｇｙ组和３０Ｇｙ组，培养７－９天后采用单镒Ｘ线照射，于照射后２ｈ、６ｈ、１２ｈ、２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ采用ＦＣＭ检测细胞凋亡和细胞存活情况，采用免疫组化（ＡＢＣ）法测试ＰＣＮＡ、ＢｃＬ－２和Ｐ５３基因的表达。结果 发     

脑膜瘤细胞对X线的敏感性

立体定向放射神经外科 (ＳＲＮＳ)最大的问题是治疗剂量的选择[1] 。由于使用了与常规放射治疗根本不同的单次特大剂量 ,一些患者出现了严重的迟发性反应。因此 ,应该用多大剂量 ,一直是临床关注的问题。脑膜瘤约占颅内肿瘤的 15 %～ 2 0 % ,术后有 11%～ 2 0 %的复发率[2 ,3] 。对于某些复发性脑膜瘤、颅底脑膜瘤、有手术禁忌证的患者和恶性脑膜瘤患者 ,ＳＲＮＳ已成为其主要的治疗手段。由于其放射生物学机制尚未完全清楚[4 ] ,故对患者的最佳量 效关系仍难以确定。为此 ,我们对其进行了研究。一、对象与方法1.对象 :脑膜瘤患者 8例 ,男 …     

人脑胶质瘤凋亡的原位研究

目的　探讨不同恶性程度胶质瘤中凋亡的作用和意义 .方法　应用 TUNEL 技术对 38例胶质瘤的凋亡表达及其意义进行了研究 .其中低恶性胶质瘤 2 0例 ,高恶性 18例 .结果　 TUNEL 阳性细胞在各级别胶质瘤中均有表达 ,其在高分化的 ～ 级胶质瘤的阳性率 (凋亡指数 )明显低于 ～ 级胶质瘤 (2 .8± 0 .5 vs5 .6± 1.2 ,P<0 .0 1) ,其表达强度与胶质瘤的良、恶性程度明显相关 (P<0 .0 1) .结论　不同级别胶质瘤凋亡指数有明显差别 ,TU NEL法可辅助临床判断胶质瘤的良、恶性程度     

人脑胶质瘤克隆细胞的放射敏感性

本实验以体外集落形成单位为终点指标，观察了人脑胶质瘤细胞ＤＥＦ７Ａ的４个克隆细胞株Ｋ１、Ｋ２、Ｋ４及Ｋ５受小剂量０、０．１、０．２、０．５、１．０和２．０ＧｙＸ线照射及受大剂量０、４、８、１０和１２Ｇｙ照射后细胞的种植系数、存活分数及剂量存活曲线。结果表明，Ｋ１细胞的Ｄ０值为４．５６Ｇｙ，Ｋ２的Ｄ０值为４．４３Ｇｙ，Ｋ４的Ｄ０值为３．６３Ｇｙ，Ｋ５的Ｄ０值为４．５８Ｇｙ。说明ＤＥＦ７Ａ人脑胶质瘤的     

榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响

目的观察榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞放射敏感性的影响。方法应用MTT法检测不同浓度榄香烯对人脑胶质瘤U251细胞的增殖抑制率。采用榄香烯单独或联合放射线作用于脑胶质瘤U251细胞,用集落形成实验和单击多靶模型拟合细胞存活曲线,获得放射增敏比;应用流式细胞技术分析榄香烯对U251细胞凋亡率的影响。结果榄香烯可抑制脑胶质瘤U251细胞的增殖,且与浓度相关;97.86μmoL和195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞24 h后,联合放射的放射增敏比(SER)分别为1.179和1.429;195.72μmoL榄香烯分别作用脑胶质瘤U251细胞3 h和6 h后,联合放射的SER分别为1.139和1.356;流式细胞仪分析表明榄香烯作用24 h后,随着榄香烯浓度的增加,U251细胞凋亡率越高,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论榄香烯能够抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖,并有放射增敏作用,且放射增敏作用的大小与药物作用浓度及作用时间有关系。     

不同X线剂量照射对C6胶质瘤细胞的放射生物学效应

目的：了解体外Ｃ６细胞对不同Ｘ线剂量照射的方法。方法：采用大鼠Ｃ６细胞系，ＤＭＥＭ培养基进行细胞培养。于体外以１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、３０和４０Ｇｙ Ｘ线分别照射细胞，检测死细胞率及倍增时间；以１０Ｇｙ、１５Ｇｙ、２０Ｇｙ、２５Ｇｙ、３０和４０Ｇｙ照射，分别检测集落形成率。结果：对照组细胞倍增迅速，而受照射各组细胞均无明显增殖，但受照各组均存有存活细胞；集落形成率检测显示，１５Ｇｙ以上剂量照射各组均为     

脑胶质瘤p16基因转染对细胞生长及放射敏感性的影响

探索ｐ１７基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及ｐ１６基因与肿瘤细胞放射敏感性间的关系。方法将外源野生型ｐ１６基因导入胶质瘤细胞珠Ｕ２５１、Ｃ６，筛选阳性克 时以空载体质粒ｐＣＤＮＡ３为对照，免疫组化检测ｐ１６基因表达，用ＭＴＴ法测定细胞生长曲线及肿瘤杀伤率。结果转染Ｐ１６基因的Ｕ２５１、Ｃ６细胞有外源Ｐ２１６基因的整合及表达，克隆形成率减少，生长速度明显减慢，对辐射的敏感性增强。结论导入外源野生型     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑     

福莫司汀对人脑胶质瘤细胞株U251细胞周期的影响

目的:观察福莫司汀(Fotemustine)对人脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响。方法:通过体外培养的人脑胶质瘤细胞株U251,用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测福莫司汀诱导胶质瘤细胞凋亡及其增殖周期的分布;与对照组比较,并进行统计学处理。结果:Fotemustine诱导后,细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05);诱导后细胞,G1期数量减少,而S期和G2期数量增多,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:Fotemustine可诱导人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡;诱导细胞增殖周期分布的变化,有助于S期、G2期的化疗药物作用的发挥。     

MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系的建立

目的：建立由O^6-甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（MGMT）介导的人脑胶质瘤耐药细胞株U251／BCNU。方法：模拟卡氮芥（BCNU）的临床用药程序,采取恒定药物浓度、周期性使用的方式诱导U251的抗药性。检测U251／BCNU的耐药指数及MGMT mRNA的表达;比较U251及U251／BCNU细胞的体外增殖变化。结果：经过反复总共5次的用药过程,历时4个月,成功地建立了对BCNU具有稳定抗药性的U251／BCNU,其对BCNU的耐受程度约为U251的17倍。RT－PCR显示,U251／BCNU细胞有MGMTmRNA的表达。U251及U251／BCNU细胞的体外群体倍增时间差异无显著性。结论：在体外成功地建立了一株由MGMT介导的人脑胶质瘤耐药细胞系,为进一步探讨胶质瘤的耐药机制及逆转方式奠定了基础。     

钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制及诱导凋亡作用

目的：探讨钩吻素子体外对神经胶质瘤细胞U251的生长抑制作用及诱导凋亡的作用.方法：利用MTT法和台盼蓝拒染法观察钩吻素子对神经胶质瘤细胞U251生长抑制作用.应用激光共聚焦、流式细胞仪、电子显微镜检测钩吻素子诱导U251细胞的凋亡作用.结果：MTT结果显示钩吻素子在（5-50mg/L）的浓度范围内对人神经胶质瘤U251细胞具有显著的抑制作用.生长曲线结果显示药物的各个浓度对U251的抑制作用呈时间依赖性.流式细胞仪可以观察到明显的＂亚G1期＂峰（凋亡峰）,且凋亡率达到22.4%.激光共聚焦显微镜可以观察到典型的凋亡核形,如核固缩和核碎裂等.透射电子显微镜下见到典型的早期凋亡形态学表现.结论：在一定的浓度范围内,钩吻素子可以抑制U251细胞的生长,并呈剂量和时间依赖效应.其抗肿瘤的特性与引起肿瘤细胞的凋亡有关.     

外源性FHIT基因对人胶质瘤细胞U87增殖与凋亡的影响

目的探讨外源性脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达对胶质瘤细胞系U87增殖和凋亡作用的影响。方法通过脂质体介导将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B-FHIT和空载体质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B分别转染胶质瘤细胞系U87。实验细胞分U87-FHIT组(转染FHIT基因的U87细胞)、U87-vector组(转染空载体质粒的U87细胞)和空白对照组(亲本U87细胞)。Western blot和免疫荧光染色检测外源性FHIT蛋白的表达;MTT法及流式细胞术观察转染前后细胞生长特性的变化。结果U87-FHIT组细胞的生长抑制率和凋亡率明显高于U87-vector组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性FHIT基因表达能诱导U87细胞凋亡,抑制其生长,具有抗胶质瘤作用。     

苯乙酸对胶质瘤C6细胞集落形成的作用

目的:研究诱导分化剂苯乙酸(PA)对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用,探讨此过程中PA对癌基因c-myc及抑癌基因P16蛋白水平表达的影响.方法:应用平板集落形成试验及[3H]- TdR掺入试验检测增殖抑制;以免疫组化SP染色法检测基因蛋白水平的表达.结果:应用PA后,C6细胞平板集落形成能力下降,PA 2.5 mmol*L-1处理组及5.0 mmol*L-1处理组抑制率分别达到90.4%和99.1%.同时[3H]- TdR掺入量降低;c-myc基因胞浆阳性表达下降,阳性细胞灰度值(Y值)对照组为(130.5±2.8),2.5 mmol*L-1处理组为(152.8±3.1)(P<0.01);P16基因胞浆阳性表达升高,对照组Y值为(167.1±6.2),2.5 mmol*L-1处理组为(149.2±1.5)(P<0.01).结论:PA对C6细胞增殖存在时间和剂量依赖性抑制,其机制可能与抑制癌基因c-myc对增殖的转录调节并激活了抑癌基因P16的活性有关.     

NECL1对神经胶质瘤细胞系T98G增殖的影响

目的研究神经胶质瘤中表达缺失基因NECL1对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Westernblot方法检测NECL1在1例人正常脑组织和6株人神经胶质瘤细胞系中的表达谱。选取NECL1缺失表达、转染效率相对较高的T98G细胞作为研究对象,采用细胞生长曲线、流式细胞仪、Hoechst染色等方法观察过表达NECL1对T98G细胞体外增殖能力的影响。结果NECL1在6株人神经胶质瘤细胞系中的表达明显下降或缺失。在T98G细胞中过表达NECL1,细胞生长速度较对照组明显变慢,凋亡细胞数较对照组明显增多。结论NECL1可能通过促进神经胶质瘤细胞系的凋亡而抑制其增殖。     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤细胞增殖作用的影响

目的研究抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤LN229细胞增殖作用的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测抑制eEF-2激酶后LN229细胞的增殖能力,台盼蓝染色法检测细胞的存活能力,相差显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期的分布,Western blot方法检测细胞phospho-eEF2和Cleaved Caspase-3、PARP蛋白表达水平的变化。结果抑制eEF-2激酶对人脑胶质瘤LN229细胞的增殖有显著抑制作用（P〈0.05或0.01）,呈现时间和剂量依赖性趋势;作用24 h后,随着给药浓度的增加,LN229细胞的活力逐渐降低（P〈0.05或0.01）,且细胞形态也逐渐发生明显改变;NH125（0.5μmol/L）作用24 h后,LN229在S期阻滞,且出现小凋亡峰,phospho-eEF2（Thr56）的表达明显下降,Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP的表达显著增加（P〈0.05）。结论抑制eEF-2激酶后,人脑胶质瘤LN229的细胞增殖作用明显被抑制,细胞活力降低,该作用可能与其诱导的细胞周期阻滞以及其诱导的Caspase-3、PARP激活相关细胞凋亡途径有关。