LncRNA MIAT靶向调节miR-128-3p对心房颤动大鼠心室重构和心肌纤维化的影响

目的 探讨保守的长链非编码RNA心肌梗死相关转录本（LncRNA MIAT）靶向调节miR-128-3p对心房颤动（AF）大鼠心室重构和心肌纤维化的影响。方法 通过舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱混合液,诱导构建AF大鼠模型,以随机数字表法将其平均分为模型组、LncRNA MIAT siRNA质粒组（MIAT组）、miR-128-3p siRNA质粒组（miR-128-3p组）、LncRNA MIAT siRNA质粒+miR-128-3p siRNA质粒组（MIAT+miR-128-3p组）、空载质粒组,每组12只。另12只大鼠舌静脉注射等剂量生理盐水,作为对照组。分组干预处理后,检测大鼠心房肌电生理水平,比较各组有效不应期（ERP）和90%动作电位时程（APD90）;计算各组大鼠左心室质量指数;天狼星红染色检测大鼠心肌组织纤维化程度,比较各组心肌胶原容积分数（CVF）;使用试剂盒测量各组大鼠血清白细胞介素（IL）-18、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织miR-128-3p表达;双荧光素酶报告基因试验检测LncRNA MIAT对miR...     

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的 探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^-1)的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁...     

高表达miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的抑制作用

目的 探究miR-25-3p对小鼠骨实质来源间充质干细胞（MSC）成脂分化的影响。方法 (1)取1周龄C57BL/6J小鼠胫骨和股骨分离培养MSC。体外培养扩增至P3代,吉姆萨染色,倒置显微镜镜下观察其形态;用流式细胞术检测其细胞表型;经成脂和成骨诱导液分别诱导分化7和14 d,分别用油红O染色和碱性磷酸酶染色检测其体外成脂和成骨分化能力,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其成脂分化关键转录因子CCAAT增强子结合蛋白α(CEBPα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)以及成骨标志性蛋白骨钙素（OCN）和成骨分化关键转录因子Runx相关转录因子2(Runx2)mRNA表达。(2)合成与MSC成脂分化相关的微RNA(miRNA)即miR-25-3p模拟物,将miR-25-3p模拟物及其对照miRNA分别瞬时转染P3代MSC,用荧光显微镜观察转染细胞Cy3红色荧光强度鉴定细胞转染效率,RT-qPCR检测转染细胞miR-25-3p表达水平。(3)将未转染、转染对照miRNA和转染miR-25-3p模拟物的P3代MSC成脂诱导分化7 d,用油红O染色检测细胞脂滴形成数目,RT...     

知母皂苷AⅢ通过miR-129-5p/STAT3轴调节肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨知母皂苷AⅢ(TAⅢ)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响机制。方法:用不同浓度的TAⅢ处理A549细胞后,CCK-8法检测TAⅢ对A549细胞的细胞毒性。体外培养A549细胞,分为对照组(Control组)、TAⅢ组(20μmol·L^-1)、TAⅢ+anti-NC组、TAⅢ+anti-miR-129-5p组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-129-5p、信号转导和转录激活因子3(STAT3)mRNA表达,蛋白质印迹(Western blot)检测STAT3及其磷酸化蛋白(p-STAT3)表达,平板克隆实验检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶实验验证miR-129-5p和STAT3的靶向关系。BALB/c裸鼠移植瘤实验检测TAIII在体内的抗肿瘤活性,免疫组织化学(IHC)法检测肿瘤组织Ki-67、p-STAT3表达。结果:低浓度TAⅢ(1,5μmol·L^-1)对A549细胞存活率无显著影响(P>0.05),高浓度TAⅢ(10,20,30,6...     

LncRNA LUCAT1靶向调控miR-937-5p/MMP13轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移能力的影响

目的 探究长链非编码核糖核酸(LncRNA)肺癌相关转录物1(LUCAT1)靶向调控微小RNA-937-5p(miR-937-5p)/基质金属蛋白酶13(MMP-13)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移的影响。方法 采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NSCLC组织和细胞中LUCAT1、miR-937-5p和MMP-13 mRNA相对表达水平。将A549细胞分为Control组、sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+anti-miR-937-5P组、sh-LUCAT1+OE-MMP-13组。并进行相应转染处理后,qRT-PCR和蛋白印迹检测转染效率,CCK-8和BrdU检测细胞活力和增殖;Transwell检测细胞迁移。双荧光素酶用于验证LUCAT1、miR-937-5p和MMP-13之间关系。异种移植肿瘤实验用于证实LUCAT1对肿瘤生长的影响,分为sh-NC组和sh-LUCAT1组。结果 LUCAT1和MMP-13 mRNA在NSCLC组织和细胞系中高表达,而miR-937-5p表达下调(P<0.05)。敲低LUCAT1在体外抑制A549...     

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为：control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC...     

LncRNA TMPO-AS1调节miR-340-5p/RUNX1轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA TMPO反义RNA1(LncRNA TMPO-AS1)调控miR-340-5p/RUNT相关转录因子1(RUNX1)轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、人CRC细胞SW480、HCT116、LOVO、HT-29中TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1表达;将HCT116细胞随机分为：si-ctrl组、si-TMPO-AS1组、mimics NC组、miR-340-5p组、si-TMPO-AS1+anti-miR-ctrl组、si-TMPO-AS1+anti-miR-340-5p组;qRT-PCR检测6组HCT116细胞TMPO-AS1、miR-340-5p、RUNX1水平;CCK-8法检测HCT116细胞活力;EDU法检测HCT116细胞增殖;Transwell检测HCT116细胞迁移和侵袭;western blot检测HCT116细胞RUNX1、PCNA、MMP-2表达;双荧光素酶报告基因实验分别验证TMPO-AS1和miR-340-5p、miR-340-5p和RUNX1的...     

小檗碱联合miR-328-3p对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

目的:探讨小檗碱对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及可能机制.方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,分为对照组、不同剂量(低、中、高)小檗碱组、miR-NC组、miR-328-3p组、高剂量+anti-miR-NC组和高剂量+anti-miR-328-3p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时...     

LncRNA GAS5对结直肠癌5-FU耐药的作用研究

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)对结直肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的作用。方法 选取人结肠癌细胞系HCT-8和SW480,建立5-FU耐药细胞株,构建LncRNA GAS5过表达结直肠癌细胞模型。反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测LncRNA GAS5在结直肠癌5-FU耐药细胞系中表达;CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 RT-PCR检测显示, LncRNA GAS5在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中的表达水平低于正常结肠细胞,差异有统计学意义(P<0.05);LV5-GAS5组HCT-8细胞、SW480细胞中LncRNA GAS5表达高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8实验检测显示, LncRNA GAS5能明显抑制HCT-8细胞和SW480细胞的增殖(P<0.05)。AnnexinV/PI双重染色及流式细胞术结果显示,在结直肠癌HCT-8细胞与SW480细胞中LV5-GAS5组的细胞凋亡比例高于Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 L...     

LncRNA XIST靶向miR-511-3p调控食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨LncRNA XIST通过靶向miR-511-3p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 体外培养食管癌细胞Eca109,将细胞分组,分别为:si-NC组(转染si-NC)、si-XIST组(转染si-NC)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-511-3p组(转染miR-511-3p)、si-XI...     

lncRNA OIP5-AS1调节miR-942-5p/CHEK1轴对脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)OPA相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响机制。方法 收集33例胶质瘤患者（低级别胶质瘤14例、高级别胶质瘤19例）和33例颅脑损伤患者的组织标本。实时荧光定量PCR(qPCR)检测组织和细胞中OIP5-AS1、微小RNA-942-5p(miR-942-5p)和检查点激酶1(CHEK1)mRNA表达,分析胶质瘤组织中OIP5-AS1、miR-942-5p和CHEK1 mRNA表达水平的相关性。体外培养人脑胶质瘤细胞系U87、SHG-44、U251、H4和正常人星形胶质细胞NHA,Western blot检测细胞中CHEK1蛋白表达。将U87细胞分为对照（NC）组、siRNA阴性对照（si-NC）组、OIP5-AS1 siRNA(si-OIP5-AS1)组、siOIP5-AS1+inhibitor阴性对照（si-OIP5-AS1+anti-NC）组、si-OIP5-AS1+miR-942-5p抑制剂（si-OIP5-AS1+anti-miR-942-5p）组,采用Lipofectamine 30...     

LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的　探讨LincRNA-P21通过靶向miR-17-3p对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞迁移和侵袭作用的影响。方法　qPCR检测30例TNBC患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及6种乳腺细胞（乳腺正常细胞MCF-10A,乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468、BT549、T47D）LincRNA-P21和miR-17-3p的表达。取MDA-MB-231细胞,单独过表达LincRNA-P21（实验设对照组、pcDNA3.1空白组、pcDNA-LincRNA-P21组）,抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p空白组、miR-17-3p抑制剂组）,过表达LincRNA-P21+抑制miR-17-3p表达（实验设对照组、miR-17-3p抑制剂组和pcDNA-LincRNA-P21+miR-17-3p inhibitor组）。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖,集落形成实验检测细胞的集落数量,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果　TNBC患者组织中LincRNA-P21的表达明显低于癌旁组织（0.48±0.03 vs. 1.03±0.06,t=11.714,P＜0.01）,miR-17-3p的表达显著高于癌旁组织（2.93±0.17 vs. 1.02±0.04,t=15.593,P＜0.01）。乳腺癌细胞系中LincRNA-P21表达量明显低于MCF-10A,miR-17-3p表达量高于MCF-10A（P＜0.01）。单独过表达LincRNA-P21或抑制miR-17-3p后,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力均明显下降。过表达LincRNA-P21的同时抑制miR-17-3p,MDA-MB-231细胞增殖能力、集落形成数量、迁移和侵袭能力出现进一步下降,且上调E-cadherin的表达,抑制Vimentin的表达（P＜0.05）。结论　LincRNA-P21通过竞争性结合miR-17-3p来抑制MDA-MB-231细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭。     

LncRNA PVT1通过竞争miR-149-5p上调CHI3L1并影响变应性鼻炎进展的研究

目的　探讨长链非编码RNA（LncRNA）PVT1对变应性鼻炎（AR）进展的影响及其相关作用机制。方法　24只BALB/c小鼠,其中6只作为对照组,余18只采用卵白蛋白和氢氧化铝建立AR模型并采用随机数字表法均分为模型组、AR+NC组（尾静脉注射空载体慢病毒）、AR+shPVT1组（尾静脉注射LncRNA PVT1干扰载体慢病毒）,每组6只。采用行为学评分评估各组小鼠过敏症状;HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织病理学改变;实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织中LncRNA PVT1、miR-149-5p和几丁质酶-3样蛋白1（CHI3L1）mRNA的表达;Western blot检测CHI3L1蛋白表达;ELISA分析各组小鼠血清IgE、白细胞介素（IL）-5、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平。构建LncRNA PVT1和CHI3L1的野生型（WT）和突变型（MT）荧光素酶报告质粒,单独或同时与miR-149-5p mimic共转染293T细胞,采用双荧光素酶实验分析并计算各组细胞荧光素酶相对活性。结果　与模型组相比,AR+shPVT1组小鼠行为学评分降低;血清中IgE、IL-5和TNF-α水平降低;鼻黏膜组织中LncRNA PVT1 mRNA表达水平降低,miR-149-5p mRNA表达水平升高,CHI3L1 mRNA及蛋白水平均降低,鼻黏膜组织炎症反应减轻。双荧光素酶实验证实LncRNA PVT1通过竞争性结合miR-149-5p,上调miR-149-5p靶基因CHI3L1的表达。结论　在AR模型小鼠中异常高表达的LncRNA PVT1通过发挥竞争性内源RNA作用抑制miR-149-5p表达而上调CHI3L1的表达,引发小鼠鼻黏膜组织的炎性症状并促进过敏反应。     

长链非编码RNA SNHG16靶向微小RNA-7-5p对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA SNHG16对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制.方法 选取2016年10月至2018年12月重庆医科大学附属第三医院收治的25例喉癌病人,于术中切取喉癌组织及其相应癌旁组织并冻存.体外培养喉癌Hep-2细胞,Hep-2细胞,按照随机数字表法分为si-NC组(转染无意义干扰序列si-...     

lncRNA HOXB-AS3靶向miR-379-5p调节类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒蛋白B8基因反义RNA3(HOXB-AS3)对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制.方法 实时定量 PCR( RT-qPCR)检测 HOXB-AS3 和miR-379-5p在健康对照者、RA患者滑膜组织中的表达.双荧光素酶报告实验和RT-q...     

LncRNA PVT1调控miR-1207-5p/FMNL2对HL-60细胞凋亡及化疗敏感性的影响

目的 探讨长链非编码RNA浆细胞瘤转化迁移基因1(LncRNA PVT1)对HL-60细胞生物学行为及柔红霉素敏感性的影响。方法 将HL-60细胞分为对照组、miR-NC组、PVT1-siRNA组、miR-1207-5p inhibitor组和miR-1207-5p mimic组。除对照组细胞不处理外,其余各组细胞分别将miR-NC,PVT1-siRNA,miR-1207-5p inhibitor,miR-1207-5p mimic转染到HL-60细胞中。采用萤光素酶检测试剂分析LncRNA PVT1对微小RNA-1207-5p(miR-1207-5p)和同源形成素样蛋白2(FMNL2)的调控作用,CCK-8法检测细胞存活率,改良Matrigel Boyden室测定法测定细胞侵袭性,划痕实验检测细胞迁移力,流式细胞术检测细胞凋亡率,MTT法检测细胞对柔红霉素敏感性,实时逆转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测miR-1207-5p和FMNL2 mRNA表达水平,免疫印迹（Western blot）法检测FMNL2蛋白表达水平。结果 萤光素酶分析结果显示,LncRNA PVT1与...     

LncRNA KCNQ1OT1通过调控 miR-506-3p表达调节喉鳞状细胞癌细胞的生物学行为

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对喉鳞状细胞癌细胞生物学的影响及作用机制.方法 于2019年5月至2020年2月,采用RT-qPCR法检测了45例来自山东大学齐鲁医院桓台分院喉鳞状细胞癌病人的癌组织和癌旁组织及购自上海研生实业有限公司的人胚肺成纤维细胞WI-38和购自中国科学院上海细胞库的喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1和miR-506-3p表达.以HCC345细胞为研究对象,转染KCNQ1OT1小干扰RNA或共转染KCNQ1OT1小干扰RNA与miR-506-3p抑制剂至HCC345细胞后,MTT法、流式细胞术、Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-506-3p的调控关系.结果 喉鳞状细胞癌组织中KCNQ1OT1表达高于癌旁组织[(0.81±0.09)比(0.27±0.08)],miR-506-3p表达低于癌旁组织[(0.24±0.08)比(0.83±0.09)].喉鳞状细胞癌细胞系(EV-SCC-18、AMC-HN-8和HCC345)中KCNQ1OT1表达均高于WI-38细胞[(2.44±0.22)、(2.69±0.21)、(3.61±0.24)比(1.00±0.13)],miR-506-3p表达均低于WI-38细胞[(0.41±0.13)、(0.30±0.12)、(0.22±0.11)比(1.00±0.12)].与未敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞比较,敲减KCNQ1OT1的HCC345细胞活力[(0.41±0.06)比(0.81±0.12)]、迁移数[(86.32±15.21)个比(162.31±20.23)个]和侵袭数[(65.23±12.05)个比(140.26±18.27)个]均降低,细胞凋亡率升高[(34.13±3.60)％比(3.79±2.37)％].KCNQ1OT1在HCC345细胞中负调控miR-506-3p表达.敲减miR-506-3p逆转敲减KCNQ1OT1对HCC345细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论 KCNQ1OT1在喉鳞状细胞癌组织和细胞系中表达升高,其通过靶向miR-506-3p促进喉鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为.     

lncRNA FENDRR靶向miR-362-5p抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨FOXF1毗连非编码发育调控RNA(FENDRR)对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其机制是否与调控miR-362-5p表达有关.方法:qRT-PCR检测胶质母细胞瘤组织、细胞以及人脑正常胶质细胞HEB中FENDRR和miR-362-5p表达.以LN229细胞为研究对象,分别构建过表达FENDRR...     

miR-144-3p mimic对泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼骨量的影响

目的 通过观察miR-144-3p模拟物（miR-144-3p mimic）对泼尼松龙诱导的骨质疏松斑马鱼骨量及骨密度的影响,探讨miR-144-3p在骨质疏松治疗中的作用。方法 选择最合适的miR-144-3p mimic给药浓度,构建泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型,实验分5组：空白对照组、mimic negative control组、mimic组、mimic+泼尼松龙组、泼尼松龙组。茜素红进行骨骼染色,AxioVision Rel 4.6成像软件拍摄,Image pro plus 6.0图片分析软件分析斑马鱼骨量的变化。结果 注射0.08pmol/尾的幼鱼出现心包水肿、心率减慢、死亡现象,心包水肿发生率较其他组差异具有统计学意义（P<0.05）,选择0.04pmol/尾为最大检测剂量（MTD）;q-PCR检测注射miR-144-3p mimic 36h和72h后,miR-144-3p的表达量与空白对照组相比分别增加,差异具有统计学意义（P<0.001）;mimic组较空白对照组骨染色面积明显增加,骨密度增加,差异有统计学意义（P<0.05）;mimic+泼尼松...