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1.
目的:探讨胡桃醌通过p38/c-Jun氨基末端激酶(JNK)丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路调控口腔鳞癌Tac8113细胞增殖和凋亡。方法:体外培养口腔鳞癌Tac8113细胞,分别给予终浓度为0,5,10,20μmol·L^-1的胡桃醌,继续培养24 h,检测细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平,同时检测Tac8113细胞中p38、p-p38、JNK、p-JNK和Caspase-3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞增殖率降低,Tac8113细胞凋亡率和ROS水平增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,细胞增殖率、凋亡率和ROS变化越显著(P<0.05)。与空白对照组比较,给予胡桃醌处理后,Tac8113细胞p38和JNK蛋白表达变化不显著(P>0.05);p-p38、p-JNK和Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05),且随着胡桃醌剂量增加,增加越显著(P<0.05)。结论:胡桃醌可能通过激活p38/JNK MAPK信号通路来诱导Tac8113细胞凋亡,从而达到抑制Tac8113细胞的目的。 相似文献
3.
目的明确酪酸梭菌对人结肠腺癌细胞HT-29细胞水通道蛋白3(AQP3)m RNA和蛋白表达的影响以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38信号转导通路对其表达的调控作用。方法用酪酸梭菌上清液作用于HT-29细胞后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹方法检测AQP3 m RNA和蛋白表达水平。AQP3表达水平有差异后测定总JNK、p38以及磷酸化的JNK(P-JNK)和磷酸化的p38(P-p38)蛋白表达水平。后分别加用JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580后测定AQP3蛋白表达量,观察JNK和p38对AQP3表达的调控作用。统计学处理采用单因素方差分析。结果实时定量RT-PCR和蛋白印迹法结果显示酪酸梭菌上清液不同浓度(1∶4和1∶8组)作用HT-29细胞12 h以及同一浓度1∶4作用不同时间(24、12、6 h组)的AQP3 m RNA和蛋白表达水平均较无酪酸梭菌上清液作用组明显上调(P均<0.05)。蛋白印迹法结果显示酪酸梭菌上清液组的Pp38/p38和P-JNK/JNK蛋白相对量较空白对照组表达水平明显上调(F=26.065和65.034,P<0.05)。蛋白印迹法结果显示加入p38抑制剂SB203580 10μg/ml组和20μg/ml的AQP3蛋白表达相对量为(0.7±0.4)和(0.6±0.6)、加入JNK抑制剂SP600125 10μg/ml组和20μg/ml的AQP3蛋白表达相对量为(0.7±0.4)和(0.5±0.4)均较未加入抑制剂组(1.1±0.7)AQP3蛋白表达水平明显下调(F=36.225,P<0.05)。结论酪酸梭菌上清液能够上调HT-29细胞的AQP3表达进而调节肠道的水代谢。JNK和p38信号转导通路可能参与调控AQP3的表达。 相似文献
5.
目的观察肺纤维化中肺组织caspase-3和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白表达的变化,并探讨JNK信号转导通路对肺纤维化的调控作用。方法 72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、肺纤维化模型组(M组),肺纤维化+JNK抑制剂干预组(I组),每组24只,分别于第3、7、14、28天处死,每组6只。留取肺组织,对其行苏木素-伊红(HE)染色,观察其病理学改变,碱水解法测定其中羟脯氨酸的含量,免疫组织化学法测肺组织中caspase-3和p-JNK的变化。结果模型组早期肺泡炎症明显,后期肺组织实变,caspase-3和p-JNK蛋白表达含量均显著增加(P<0.05),14d时达峰值。干预组能明显阻断JNK的激活(P<0.05),干预组caspase-3表达较模型组显著减少(P<0.05),14d时减少最明显。结论细胞凋亡是肺纤维化的一个重要病理组织学特点。JNK信号转导通路在肺纤维化中被激活,发挥促细胞凋亡效应。 相似文献
6.
摘 要 目的:探讨芦荟大黄素(AE)对胃癌SGC-7901细胞凋亡、自噬及p53蛋白(p53)/磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。 方法: 实验分为对照组(AE 0 μmol·L-1)、AE低(10 μmol·L-1)、中(30 μmol·L-1)、高(50 μmol·L-1)剂量组和自噬阻断剂3 甲基腺嘌呤(3 MA)+ AE组(20 μmol·L-1+50 μmol·L-1)。CCK 8法检测各组细胞增殖抑制率,采用透射电镜及单丹磺酰尸胺(MDC)染色观察各组细胞自噬体及自噬溶酶体的变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定(TUNEL)法观察各组细胞凋亡率变化,Western blot法检测各组细胞p53、AMPK、mTOR信号通路蛋白及自噬标致蛋白Beclin 1蛋白(Beclin 1)、微管相关轻链蛋白Ⅰ(LC3Ⅰ)及微管相关轻链蛋白Ⅱ(LC3Ⅱ)表达情况。 结果: 与对照组相比,AE各剂量组及3 MA+AE组细胞的增殖抑制率、凋亡指数(AI)显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;AE中、高剂量组的增殖抑制率和AI与3 MA+AE组相比差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,AE各剂量组细胞自噬体、自噬空泡增多,溶酶体积分光密度(IOD)/所选区域面积(Area)值及p53、AMPK、Beclin 1表达显著升高,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性;3 MA+AE组细胞自噬体、自噬空包等超微结构减少,IOD/Area值及p53、AMPK及Beclin 1表达显著降低,mTOR表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ比值显著升高(P<0.05)。 结论: AE可通过提高胃癌SGC-7901细胞自噬水平,诱导SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与促进p53/AMPK/mTOR信号通路表达有关。 相似文献
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目的 针对三种不同的阻断剂在人绒毛滋养层细胞中p38MAPK信号传导通路的作用进行比较,探讨人绒毛滋养层细胞受阻断剂对其侵袭性的影响程度.方法 分别对阻断剂影响EMMPRIN表达的程度采用RT-PCR及Western blot方法分别进行观察.人绒毛滋养层细胞在浓度不同佛波酯作用下,对其中p38MAPK活性变化采用ELISA方法进行检测,人绒毛滋养层细胞侵袭作用采用trans well细胞侵入系统进行检测,将浓度不同的p38 MAPK抑制剂加入其中,对阻断剂影响人绒毛滋养层细胞侵袭性的效果进行观察.结果 p38MAPK抑制剂分别由5、10、15及20 μmol·L-1浓度持续24h作用后,对EMMPIRN分别达到7.4%、24.5%、31.7%及39.2%的的抑制率;p38MAPK抑制剂10μmol· L-1浓度进行24h培养后,能够对EMM PRIN基因和蛋白表达具有21.5%的抑制率,培养48h与72h可分别达到45.5%和75.9%的抑制率.分别采用佛波酯0.1、1、10 μmol·L-浓度加入培养细胞中持续30min作用,采用时间剂量依赖方式将p38MAPK激活,p38MAPK抑制剂采用时间剂量依赖方式对佛波酯激活p38MAPK进行抑制.结论 在人绒毛人绒毛滋养层细胞中EMMPRIN表达中体现出p38MAPK信号传导途径,该通路对于侵袭人绒毛滋养层细胞的行为具有重要作用,p38MAPK抑制剂在防治子痫前期-子痫中将发挥重要作用. 相似文献
8.
目的 探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法 通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28-5p和BECN1的靶向关系。结果 TUNEL染色和caspase-3蛋白水平检测:与对照组比较,姜黄素明显增加凋亡细胞百分比并表达裂解蛋白caspase-3(P<0.05)。相比姜黄素单独作用,细胞凋亡被miR-28-5p显著减弱抑制(P<0.05)。与对照组比较,姜黄素组beclin1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著降低、P62蛋白表达明显升高(P<0.05);与姜黄素组比较,姜黄素+miR-28-5p抑制剂组beclin1表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高、P62蛋白表达明显降低(P<0.05)。通过在线数据库预测:miR-28-5p与BECN1存在靶向的关系;双荧光素酶报告基因实验显示:与阴性对照组比较,miR-28-5p模拟物显著降低BECN1-wt组的荧光素酶... 相似文献
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目的 探讨欧前胡素(IMP)对急性髓系白血病(AML)细胞恶性生物学行为的影响以及对MAPK/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制。方法 将人AML细胞HL-60进行培养传代,并分为对照组(未处理组),ERK抑制剂组(PD98059组),IMP低、中、高剂量组,IMP高剂量+ERK激活剂组(IMP高+Cearoin组),每组均设置6个重复。MTT法检测IMP对HL-60细胞的毒性;MTT法、软琼脂克隆形成实验检测HL-60细胞的增殖活性;流式细胞仪术检测HL-60细胞凋亡;Transwell小室检测HL-60细胞迁移和侵袭能力;ELISA检测HL-60细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;Western blot检测通路相关蛋白及Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达。结果 与未处理组比较,PD98059组和IMP低、中、高剂量组HL-60细胞的存活率、克隆形成数量、迁移和侵袭数量、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及ERK1/2、mTOR、p70S6K磷酸化水平、Bcl-2表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬相关蛋白Becl... 相似文献
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目的研究p38MAPK/14-3-3γ通路在LPS预处理对抗缺氧/复氧(A/R)损伤中的作用。方法采用原代培养乳鼠心肌细胞,建立A/R损伤模型及APC、LPS预处理保护模型。实验结束后测定p38MAPK磷酸化蛋白表达及14-3-3γ蛋白表达,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡、线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放、流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 LPS预处理对随后心肌A/R损伤有类似APC的保护作用,同时伴随p38MAPK的磷酸化水平升高和14-3-3γ蛋白表达升高;给予SB203850特异性阻断p38MAPK通路,则14-3-3γ蛋白表达明显下调,并且心肌细胞LDH值升高,细胞存活率下降,心肌细胞的凋亡指数升高,mPTP开放加剧,线粒体膜电位降低。结论 LPS预处理对心肌细胞A/R损伤有保护作用,其机制可能是通过激活p38 MAPK,上调14-3-3γ的表达实现。 相似文献
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目的基于AMPK/mTOR信号通路探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)对大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡、自噬的调控作用和机制。方法使用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导体外培养的大鼠FLS来构建类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)模型。MTT实验检测TNF-α诱导FLS以及3-BrPA治疗FLS的适宜浓度,划痕实验和Transwell实验检测3-BrPA对FLS迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术和JC-1线粒体膜电位实验检测FLS的凋亡情况,mCherry-EGFP-LC3B过表达质粒检测FLS自噬流变化,Western blot检测FLS凋亡/自噬相关蛋白及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达。结果3-BrPA(15μmol·L^(-1))明显抑制了TNF-α(25μg·L^(-1))刺激下FLS的增殖、迁移和侵袭。此外,还促进FLS凋亡、下调FLS线粒体膜电位并阻断FLS的自噬流。Western blot检测结果显示,相比于TNF-α组,3-BrPA上调caspase-3、Bax、P62和p-mTOR/mTOR的表达,下调LC3B、Beclin1、Bcl-2和p-AMPK/AMPK的表达。结论3-BrPA能够在体外调节大鼠FLS凋亡/自噬失衡来抑制其异常活化,其机制可能与抑制AMPK/mTOR信号通路有关。 相似文献
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目的:探讨连翘苷(PHN)对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症损伤的影响及分子机制。方法:人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)随机分为对照组、oxLDL组(50 mg·ml -1)、oxLDL(50 mg·ml -1)+PHN低(1μmol·L -1)、中(10μmol·L -1)、高(100μmol·L -1)剂量组、oxLDL(50 mg·ml -1)+anti-miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml -1)+anti-miR-NC组、oxLDL(50 mg·ml -1)+PHN(100μmol·L -1)+miR-483-3p组、oxLDL(50 mg·ml -1)+PHN(100μmol·L -1)+miR-NC组。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot法检测活化的半胱胺酸蛋白酶(Cleaved-Caspa... 相似文献
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目的 探究芍药苷(paeoniflorin,PF)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠心功能障碍及心肌细胞损伤的保护作用。 方法SD雄性大鼠随机分为对照组、CDDP组、CDDP+PF低剂量组及CDDP+PF高剂量组,PowerLab多功能记录仪进行左心室插管检测心功能相关指标[左室内压峰值(left ventricular peak pressure,LVSP)、左室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)、左室内压变化速率(±dp/dt)]的数值变化;取各组大鼠血清,检测炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平;取心肌组织染色,观察组织结构变化。H9c2心肌细胞分为对照组、CDDP组、PF组及CDDP+PF组,CCK-8法测各组细胞活性;流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡情况;Western blotting检测心肌细胞中MAPK信号通路相关蛋白p38、ERK、JNK及其磷酸化蛋白表达和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casp3、Cl-casp3的表达情况。 结果与对照组相比,CDDP组LVSP、±dp/dt明显下降(P<0.01),LVEDP明显升高 (P<0.01);与CDDP组比较,PF低、高剂量预处理均可升高LVSP及±dp/dt水平 (P <0.05或P<0.01),降低LVEDP水平 (P<0.01),降低大鼠血清中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6 含量 (P<0.01)。细胞水平结果显示,与对照组相比,CDDP组细胞活性下降,凋亡相关蛋白Bax 、Cl-casp3表达增加(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.01),MAPK通路p38及ERK磷酸化表达升高(P<0.01);与CDDP组相比,PF可恢复细胞活性,下调凋亡相关蛋白Bax、Cl-casp3表达(P<0.05或P<0.01),增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.01),抑制MAPK通路p38及ERK磷酸化表达(P<0.01)。 结论PF可恢复CDDP诱导大鼠心功能障碍及心肌细胞损伤,其作用可能通过调控ERK/p38 MAPK信号抑制炎症反应和细胞凋亡。 相似文献
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目的研究迷迭香酸衍生物RAD-9诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用及其机制。方法 MTT法观察RAD-9对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞的凋亡;Hoechst 33258染色法观察RAD-9对MGC-803细胞核凋亡形态学的影响;Western blot检测RAD-9干预MGC-803细胞36 h后,对Akt、p-Akt、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的影响。结果MTT结果显示,RAD-9呈时间、浓度依赖性抑制胃癌MGC-803细胞增殖;流式细胞术结果显示,RAD-9对胃癌MGC-803细胞有明显的促凋亡作用(P<0.01);Hoechst 33258染色实验结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,细胞核呈现典型凋亡形态学改变;Western blot结果显示,RAD-9干预胃癌MGC-803细胞36 h后,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,Bax、caspase-3蛋白表达水平明显提高,Akt、p-Akt蛋白表达水平明显下调,p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平明显上调(P<0.01)。结论 RAD-9能抑制胃癌MGC-803细胞生长,且能诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt和激活p38 MAPK信号通路相关。 相似文献
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目的 探讨槲皮素(QE)对胃癌相关p53/AMPK/mTOR信号通路的影响。方法 将胃癌细胞分为QE组和溶剂组,QE组以DMSO为溶剂按配制QE浓度分别为0.02、0.04、0.06及0.08 mmol/L,对细胞进行干预,分别为QEA、QEB、QEC、QED组,溶剂组加入等量不含QE的溶剂。MTT实验检测槲皮素对胃癌细胞增殖的影响;MDC染色法检测槲皮素对胃癌细胞自噬的影响;双染法检测槲皮素对胃癌细胞凋亡的影响;实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内p53、AMPK及mTOR的mRNA相对表达水平;Western blot检测细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P53、AMPK、mTOR蛋白表达差异。结果 与溶剂组相比,QE各剂量组胃癌细胞的自噬程度和凋亡率均显著增加,细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量上调,p53、AMPK mRNA和蛋白水平均上调,mTOR的mRNA和蛋白表达量均下调(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论 QE可以抑制胃癌细胞增殖,诱导其发生自噬、促进其凋亡,其作用机制可能与p53/AMPK/mTOR信号通路有关。 相似文献
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目的:研究槲皮素通过p38MAPK信号通路调节Aβ 25-35引起PC12细胞线粒体损伤的作用。方法:20μmol·L –1的Aβ 25-35作用PC12细胞作为AD细胞毒性损伤模型,0.1μmol·L –1的17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E 2)和50μmol·L –1金雀异黄素(Genistein,Gen)作为阳性对照药,分别给予低剂量槲皮素(40μmol·L –1)、中剂量槲皮素(60μmol·L –1)和高剂量槲皮素(80μmol·L –1),同时设定SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)预处理组(Aβ 25-35+10μmol·L –1 SB203580)。线粒体荧光探针(Mito-Tracker-red)检测线粒体形态;JC-1检测线粒体膜电位;荧光素酶发光法检测ATP含量;免疫荧光染色法检测pp38MAPK蛋白的表达;West... 相似文献
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目的 探讨长链非编码RNA核富集丰富转录本1(lncRNA Neat 1)通过miR-204-3p介导p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路调控白蛋白诱导HK-2细胞凋亡的机制。方法 将HK-2细胞分为对照组(正常培养)、模型组(白蛋白损伤模型)、p38抑制药组(10μmol·L -1p38抑制药SB203580处理后造模)、OV-Neat 1组(转染Neat 1过表达质粒后造模)和OV-Neat 1+p38抑制药组(转染Neat 1过表达质粒,再用p38抑制药SB203580处理后造模)。用细胞计数法-8(CCK-8)检测细胞增殖活力,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-204-3p、B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达水平;用蛋白质印迹法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达水平。结果 对照组、模型组、p38抑制药组、OV-Neat 1组和OV-Neat 1+p38抑制药组的细胞增殖活性分别为0.95±0.02、0.70±0.01、0.78±0.0... 相似文献
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目的基于p38MAPK/NF-κB信号通路,探讨麻黄汤对哮喘大鼠气道重塑、气道高反应的改善作用。方法首先通过网络药理学筛选麻黄汤治疗哮喘的潜在信号通路,然后复制哮喘大鼠模型,检测气道反应性,观察麻黄汤给药后大鼠气道粘液分泌及胶原沉积情况,检测大鼠血清中相关指标含量和肺组织中关键基因水平。结果网络药理学共筛选出麻黄汤186个候选靶点,通路分析发现其治疗哮喘的机制主要涉及Toll样受体、MAPK、T细胞受体等。麻黄汤可降低哮喘大鼠气道反应性,减少气道杯状细胞分泌,改善气道上皮下胶原沉积情况;并可降低血清中VEGF、TGF-β1、ET-1、OPN、bFGF的分泌,抑制大鼠因OVA致敏激发而上调的p38MAPK、NF-κB p65、VEGF mRNA表达量。结论麻黄汤可降低哮喘大鼠气道反应性,改善气道重塑情况,其机制可能与下调VEGF、TGF-β1、ET-1、OPN、bFGF含量以及p38MAPK/NF-κB信号通路上的关键基因表达有关。 相似文献
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