血液抗精子抗体与精子表面抗体的相关性

目的 统计分析男性不育患者血液抗精子抗体与精子表面抗体的结果,并进行比较,对它们在男性免疫性不育的临床价值进行评价.方法 运用酶联免疫吸附法(ELISA)对2055例男性不育患者进行血液抗精子抗体检测.运用混合抗球蛋白反应试验(MAR)对1672例男性不育患者进行精子表面抗精子抗体检测,运用SPSS 25.0统计软件,...     

抗精子抗体与早期自然流产的相关性分析

目的:探讨抗精子抗体(AsAb)对早期自然流产的影响.方法:早期自然流产者112例,其中继发于人工流产术后52例,首次妊娠自然流产者60例,用ELISA方法检测其血清中AsAb,并与50例正常生育妇女对照.结果:早期自然流产组AsAb阳性率(30.35 %)显著高于正常生育组(6.0 %,P<0.01),继发于人工流产术后组的AsAb阳性率(36.54 %)高于首次妊娠流产组的(20.0 %,P<0.01).结论:AsAb是与早期自然流产密切关系的重要免疫因素,是导致人工流产术后继发自然流产的重要原因.     

抗精子抗体与早期自然流产的相关性分析

目的 :探讨抗精子抗体 (As Ab)对早期自然流产的影响。方法 :早期自然流产者 112例 ,其中继发于人工流产术后5 2例 ,首次妊娠自然流产者 6 0例 ,用 EL ISA方法检测其血清中 As Ab,并与 5 0例正常生育妇女对照。结果 :早期自然流产组 As Ab阳性率 (30 .35 % )显著高于正常生育组 (6 .0 % ,P<0 .0 1) ,继发于人工流产术后组的 As Ab阳性率 (36 .5 4 % )高于首次妊娠流产组的 (2 0 .0 % ,P<0 .0 1)。结论 :As Ab是与早期自然流产密切关系的重要免疫因素 ,是导致人工流产术后继发自然流产的重要原因。     

抗精子抗体ELISA检测法及其应用

建立了用精子可溶性抗原包被的ELISA法,检测了100例处女血清,均为阴性,17例有生育能力者和1000例不育患者血清的阳性率分别为5.9％和22％,抗体检出率符合国外多数学者的结果。重复性试验定性符合率达97％。表明用该法检测抗精子抗体具有敏感、特异、稳定等特点,可获较为满意的结果。     

人流、药流继发不孕与抗精子抗体、抗子宫内膜抗体的关系

目的 探讨人工流产及药物流产后抗精子抗体（AsAb）、抗子宫内膜抗体（EmAb）的产生与继发不孕的关系.方法 用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测正常组40例、人工流产组87例、药物流产组52例的血清AsAb、EmAb及宫颈粘液AsAb-IgG、AsAb-IgA.结果 人流后继发不孕组血清AsAb、EmAb及宫颈粘液AsAb阳性率与正常组比较有显著性差异（P＜0.05）.药流后继发不孕组血清AsAb、EmAb及宫颈粘液AsAb阳性率与正常组比较差异无显著性（P＞0.05）.结论 人工流产时由于宫腔、腹腔内负压可导致宫腔内血逆流及手术对子宫内膜及宫颈内膜机械创伤,为子宫内膜异位症及产生EmAb提供了条件;患者在子宫内膜未修复前过早进行性生活,精子通过破损处进入子宫内膜激发免疫系统产生AsAb,继发免疫性不孕;药物流产由于子宫内膜及宫颈创伤小,与AsAb、EmAb无明显关系,故药物流产是未婚、初孕患者的首选.     

二种酶标记免疫技术检测抗精子抗体的比较

目的：用金标免疫斑点试验与酶联免疫吸附试验检测血清、宫颈粘液中抗精子抗体的比较。方法：199例男性不育患者的血清，139例女性不孕患者的宫颈粘液用2种不同检测方法后结果比较。结论：金标免疫斑点试验特异，敏感、简便、快速更具推广价值。     

超声粉碎精子作抗原包被测定抗精子抗体

采用高能超声粉碎精子作包被抗原,使用酶联免疫吸附测定技术(ELISA),检测52对不育夫妇、10对有生育能力夫妇血清中的抗精子抗体(Antisperm Antilodies,ASA)。不育组中阳性率为37.5％(39/104),对照组阳性率为5％(1/20),有显著性差异。本实验改进了传统的精子抗原包被方法,实验费用低,操作简单,实为一种高效实用的检测血清抗精子抗体的新方法。     

ELISA检测抗精子抗体并与间接血凝法比较

本文结果表明,188份结扎兔血清中,ELISA抗精子抗体阳性者为85.1％,间接血凝(IHT)为62.8％,差异显著(P<0.005),以118份IHT阳性血清的抗体滴度对数值与相对应的ELISA光密度值相关分析结果表明,二者有非带显著的正相关(P<0.001)。我们认为,ELISA检测抗精子抗体是一种灵敏度高、方便、迅速且易于操作的免疫学方法。     

重组LBP真核表达载体免疫制备兔抗人LBP抗体的研究

目的：制备兔人脂多糖结合蛋白（LBP）多抗，并研究其生物学特性。方法：用LBP基因的真核表达载体pEFBOS-LBP作为抗原免疫制备兔抗人LBP的抗血清，用饱和硫酸铵盐析纯化后，通过ELISA检测抗体的效价：Western blot鉴定其特异性；流式细胞术观察LBP及其抗体对荧光标记脂多糖（LPS）与单核细胞结合的影响；ELISA检测LBP及其抗体对LPS诱导肺泡巨噬细胞分泌TNFα的影响。结果：用LBP基因免疫制备的兔抗LBP多抗与LBP具有良好的结合活性。有较高的效价；LBP增强LPS与单核细胞结合的作用能被该抗体阻断，LBP增强LPS诱导肺泡巨噬细胞分泌TNFα的作用也能被该抗体阻断。结论：用LBP基因免疫制备的兔抗人LBP多抗具有较好的生物学特性。     

应用Protein A亲和层析法制备及纯化R1JHL单克隆抗体

[目的]制备、纯化N-甲基D-门冬氨酸受体（NMDAR,NR）主亚基RIJHL单克隆抗体。[方法]NR1杂交瘤细胞腹腔注射BalB／C小鼠制备抗体,Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析纯化单抗,Western-blot鉴定该单抗特异性。[结果]纯化后单抗识别大鼠脑组织膜蛋白中约115kD大小的单一条带。[结论]制备、纯化了具有高度特异性的抗NR1单克隆抗体,为进一步研究NMDA受体提供了工具。     

人精子蛋白FSCB的表达、纯化和多克隆抗体制备

目的：构建表达重组人精子蛋白FSCB的重组质粒,获得其纯化重组蛋白并制备其多克隆抗体.方法：分别成功构建了表达人精子全长FSCB蛋白和截短FSCB（FSCBt）蛋白的重组菌株BL21,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法和分子筛层析法纯化目的蛋白FSCBt,免疫接种雌性家兔制备多克隆抗体.结果：重组菌成功诱导表达了重组蛋白FSCB和FSCBt,相对表观分子量分别为230000和30000,重组蛋白FSCBt经纯化后纯度达到95%,制备的多克隆抗体效价达到1∶105,Western Blot显示多克隆抗体与重组蛋白FSCB和FSCBt均具有良好的反应性.结论：人精子蛋白FSCB在重组菌株中得到表达,成功制备高效价的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在人体组织中的表达、分布以及生物学功能奠定了实验基础.     

制备抗人血清白蛋白抗体的简单高效方法

以简单的酸乙醇法纯化人血清白蛋白(HSA)作为抗原,采用一个高效、经济、快速的免疫方案免疫家兔,得到高效价的抗血清。最后利用ProteinA-Sepharose 4B亲和层析法纯化IgG抗体。     

小鼠腹水中抗人食管癌单克隆抗体的纯化

研究目的从小鼠腹水中纯化抗人食管癌单克隆抗体。处理方法小鼠腹水通过羟基磷灰石柱层析后(层析环境温度15℃,起始缓冲液pH6.8,0.01MPB。流速1ml/min,线性梯度洗脱液500ml,0.1～0.5MPB)。由酶联免疫过滤法(EIF)鉴别出抗体活性部分。然后以SDS-PAGE鉴定所得抗体的分子量及其纯度(10％聚丙烯酰胺凝胶,电极缓冲液pH8.3,上样量约50/μg,电流3.5mA/管,考马斯亮兰R-250染色)。研究结果层析洗脱液经紫外监测A_(280nm)得出三个吸收峰;由EIF作抗体活性鉴定,确证第3个峰为活性部分;SDS-PAGE中于分子量约75KD及30KD处显示两个单一色带,相当于该单抗的重链和轻链。结论本法纯化所得抗人食管癌单克隆抗体纯度良好。     

兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用

目的：采用已构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒纯化重组蛋白,制备兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶（PTP-oc）多克隆抗体并鉴定其性能。方法：将构建的pET28a-ΔPTP-oc重组质粒转化至BL21（DE3）中,应用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达。表达产物经过Q柱阴阳离子交换和Ni柱亲和层析获得纯化的PTP-oc重组蛋白,将纯化的重组蛋白作为抗原免疫家兔,获得PTP-oc多克隆抗体。采用间接ELISA法检测抗体效价,Western blotting法检测抗体的特异性。结果：成功纯化出PTP-oc重组蛋白。间接ELISA法检测,采用纯化诱导后的重组蛋白免疫家兔获得了兔抗PTP-oc多克隆抗体,多克隆抗体效价达1∶32000以上,Western blotting法检测,所得多克隆抗体有较高的特异性。结论：成功纯化了PTP-oc重组蛋白,制备出PTP-oc多克隆抗体。     

用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体

目的用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体。方法提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hOAT3载体,再从pCR2.1-hOAT3中用特异性内切酶BclI和XmaI切下hOAT3基因片段,亚克隆到载体pBQAP-TT中构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,酶切及序列分析鉴定正确后,用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fit3L同时免疫小鼠,12周后分离血清,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功扩增出228bp的hOAT3细胞内亲水序列片段,构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,经酶切及序列分析鉴定正确。Western blot结果显示小鼠抗hOAT3多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白57kD的hOAT3。免疫组化结果显示hOAT3定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜。结论用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT3多克隆抗体。     

Pax6variant新基因的原核表达蛋白纯化和多克隆抗体制备

目的 构建花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)转录因子Pax6 variant的原核表达载体,纯化融合蛋白His-Pax6 variant并以其为抗原免疫家兔,制备花背蟾蜍转录因子Pax6 variant多克隆抗体.方法 RT-PCR扩增得到花背蟾蜍胚胎组织的Pax6 variant基因,并将此片段与原核...     

多西环素多克隆抗体的制备及鉴定

目的:采用人工偶联方法构建多西环素完全抗原,制备多克隆抗体。方法:分别采用直接偶联法、甲醛一步法、重氮法+混合酸酐法和重氮法+碳二亚胺法等4种方法将多西环素与牛血清白蛋白(bull serum albumin,BSA)或鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)分别偶联,构建人工完全抗原。选择最好偶联效果制备的抗原免疫BALB/c小鼠,通过直接ELISA法检测多克隆抗体效价,竞争抑制ELISA法分析其灵敏性及特异性。结果:重氮法+碳二亚胺法偶联的多西环素人工完全抗原效果最好,其与BSA的偶联比为8.37∶1,与OVA的偶联比为4.92∶1。采用该方法偶联的抗原免疫小鼠获得的多克隆抗体效价在1∶8 000以上;该抗体对多西环素的半数抑制浓度(IC50)为98.89~120.32μg/L,与其他四环素类药物的交叉反应性较低。结论:重氮法+碳二亚胺法的偶联效率最高,获得的多西环素多克隆抗体效价较高,特异性和灵敏度均较理想。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶多克隆抗体的制备

目的：克隆单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)基因,并在大肠杆菌中表达,通过免疫家兔,获得HSV-TK多克隆抗体,为进一步研究HSV-TK 的功能奠定基础。方法：从纯化的单纯疱疹病毒(HSV)中提取病毒基因组,用PCR特异性扩增HSV-TK全长基因,克隆入表达载体pRSET B中进行表达,以纯化的表达产物免疫家兔制备多克隆抗血清,进行Western blotting 鉴定。结果：用IPTG诱导后,表达出相对分子质量（Mr）约43 000的融合蛋白,免疫家兔制备的兔血清,第2～5周每周采血1次,Western blotting检测均获得特异性蛋白带;最后一次样品3个稀释度（1∶1 000、1∶3 000、1∶5 000）的Western blotting分析仍可以检出蛋白质带。结论：成功获得了特异性强和滴度高的HSV-TK多克隆抗体。