桂皮酸诱导NB_4细胞凋亡

目的 :研究桂皮酸 (cinnamates ,CINN)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4 凋亡的能力 ,并探讨其机制。方法 :采用光镜形态学观察、凋亡细胞DNA片段原位末端标记法 (TUNEL)以及流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡 ;应用EnvisionTM免疫组化的方法检测凋亡抑制基因Bcl 2编码蛋白的表达。结果 :桂皮酸作用NB4 细胞后 ,出现典型的凋亡形态学改变 ;TUNEL标记也证实凋亡的发生 ;流式细胞仪检测有亚二倍体细胞峰的存在。在桂皮酸诱导NB4 细胞凋亡的过程中 ,Bcl 2基因蛋白表达水平逐渐下调。结论 :桂皮酸具有诱导NB4 细胞凋亡的作用 ;Bcl 2基因表达水平的下调 ,可能是NB4 细胞走向凋亡的重要条件。     

硒化壳聚糖诱导NB4细胞凋亡过程中下调了survivin的表达

目的:研究硒化壳聚糖对NB4细胞凋亡及周期阻断作用,探讨这种作用与survivin蛋白表达的关系。方法:细胞分为三个浓度组(空白对照组、50mg/L组、100mg/L组),激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察药物对细胞凋亡及周期阻断作用;Western blot法检测survivin蛋白含量的变化。结果:硒化壳聚糖可诱导NB4细胞凋亡并阻断细胞于G0G1期,还可降低细胞survivin蛋白含量。结论:硒化壳聚糖可通过下调NB4细胞survivin蛋白含量,进而诱导细胞发生凋亡。     

As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与活性氧水平相关

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导NB4细胞凋亡的周期性选择与细胞 活性氧（reactive oxygen species,ROS)水平的关系。方法 以碘化丙啶（PI）标记DNA,流式细胞仪检测As2O3单独或联用二甲萘醌（DMNQ）作用后细胞周期的变化,以7－氨基放线菌素D（7AAD）标记DNA,双氢罗丹明123（DHR）或双氢－乙酰乙酸二氯荧光黄（DCFH－DA）捕获ROS,流式细胞仪双参数法检测细胞周期不同阶段ROS水平。结果 2μmol/L As2O3可选择性诱导NB4 G2／M期细胞凋亡,DMNQ可增强这一效应;G2／M期细胞ROS水平明显高于G1、S期。结论 As2O3诱导NB4 G2／M期细胞凋亡与G2／M期ROS水平较高相关。As2O3诱导NB4细胞凋亡的周期选择性与细胞ROS水平有关。     

柠檬醛抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖并诱导其凋亡的作用

目的 探讨柠檬醛(citral)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 采用CCK-8比色法检测citrall对细胞生长的抑制作用;光学显微镜观察citral作用后细胞形态的变化;DNA Ladder检测药物作用后NB4-细胞有无断裂DNA;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度citral作用后细胞凋亡的比例.结果 Citral对NB4细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性.NB4细胞经10～20 μg/ml citral作用16 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;流式细胞术结果 表明,细胞凋亡率在citral作用16 h时随着药物浓度的增加而逐步增高.结论 Citral抑制NB4细胞增殖呈时间和剂量依赖性,并诱导NB4细胞凋亡.     

硒化壳聚糖诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖和凋亡的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和survivin蛋白的关系。方法MTT法检测细胞增殖;细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;western blot法检测survivin蛋白含量。结果50~200mg/L硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,诱导其凋亡,降低端粒酶活性和下调survivin蛋白含量。结论 硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调survivin蛋白含量,诱导细胞凋亡从而抑制体外培养的NB4细胞增殖。     

树突状细胞对APL凋亡细胞溶解抗原交叉提呈诱导产生的抗白血病效应

目的:研究树突状细胞(DC)在体外对恶性肿瘤凋亡细胞溶解抗原交叉提呈的可能性及由此诱导产生的抗瘤效应.方法:用As2O3体外诱导急性早幼粒白血病(APL)细胞凋亡.取患者完全缓解期(CR)外周血单个核细胞(PBMNC)体外诱导DC,体外进行APL凋亡细胞溶解抗原(ALA)负载,并设APL细胞溶解抗原(CLA)负载对照,ALA-DC激自体T细胞,流式细胞术分析DC,T细胞免疫表型.51Cr释放法测定T细胞对APL细胞杀伤活性.结果:APL细胞经2 μmol/LAs2O3体外诱导5 d,凋亡率为(86±4)%;自体T细胞被DC激化前,CD2 ,CD3 ,CD8 T细胞百分率为(27±5)%;被ALA-DC激活后,CD2 ,CD3 ,CD8 T细胞百分率上升至(50±12)%,对照组下降至(22±4)%.细胞毒性实验示ALA-DC激活的自体T细胞对APL细胞的杀伤活性明显强于对照组(P＜0.01).结论:APL凋亡细胞溶解抗原能被DC交叉提呈,激活CD8 CTL细胞,其诱导的抗白血病效应强于非凋亡细胞溶解抗原致敏的DC.     

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的体内研究

细胞凋亡已成为当前肿瘤研究的热点之一［１］,氧化砷和硫化砷等砷化合物治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）为促进凋亡治疗恶性肿瘤这一新的治疗途径提供了成功的范例［２］。我院自１９９４年１２月起应用三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗了３６例ＡＰＬ复发的患者,其中...     

RNA干扰对NB4细胞凋亡的影响

目的:探讨靶向PML-RARαmRNA的siRNAs对急性早幼粒白血病NB4细胞株凋亡的影响。方法:体外培养人白血病细胞株NB4细胞,以不同浓度的siRNAs分别转染细胞,MTT法检测siR-NAs对NB4细胞的抑制作用,细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:siRNA转染NB4细胞后,对细胞的增殖有明显的抑制,siRNA1244的24hIC50为46.578nM;细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡现象,流式细胞仪检测也证明转染siRNA后细胞凋亡率增加,转染50nM siRNA1244的NB4细胞,24h后凋亡率从4.29%增至59.35%。结论:siRNA1244诱导NB4细胞凋亡效果最为明显,并且与抑制细胞增殖的效应一致,具有抗急性早幼粒细胞白血病效应,它的作用分子机制很可能是下调PML-RARα基因的表达而抑制增殖并诱导凋亡。     

高三尖杉酯碱对急性白血病NB4细胞凋亡机制的影响

目的 观察高三尖杉酯碱(HHT)对急性早幼粒细胞白血病(APL)NB4细胞凋亡的作用及对PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 将不同浓度(5、10、50、100、500 μg/L)HHT作用于NB4细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞生长的抑制作用,...     

四硫化四砷诱导急性早幼粒细胞凋亡的机制

目的:研究四硫化四砷在抗急性早幼粒细胞白血病中诱导细胞凋亡的分子机制.方法:应用cDNA微矩阵技术检测四硫化四砷作用前后NB4细胞基因表达图谱.筛选出有差异表达的与细胞凋亡相关蛋白类基因,合成相应的引物,用RT-PCR方法检测口服四硫化四砷的急性早幼粒细胞白血病(APL)患者缓解前后外周血细胞凋亡相关蛋白类基因的表达,分析四硫化四砷诱导早幼粒细胞凋亡的途径.结果:通过基因微矩阵技术分析发现,四硫化四砷作用NB4细胞有差异表达的细胞凋亡相关蛋白类基因包括编码凋亡蛋白酶活化因子基因(Apaf1),比值为2.910;编码细胞凋亡相关蛋白PNAS-2基因,比值为0.420.RT-PCR检测口服四硫化四砷APL患者缓解前后外周血Apaf1比值2.33,caspase-9比值3.21,PNAS-2比值0.99.结论:四硫化四砷对NB4细胞的细胞凋亡效应主要涉及两个基因表达的改变:细胞凋亡蛋白酶活化因子(Apaf1)基因的表达上调和细胞凋亡相关蛋白PNAS-2基因表达的下调.APL患者PNAS-2基因表达没有明显的改变,可能与使用其他药物的影响有关.Apaf1和caspase-9表达相应的增高提示,四硫化四砷诱导APL细胞凋亡可能是通过以线粒体介导的凋亡通路为主的活化途径,而不是通过死亡受体途径.     

硒化壳聚糖对NB4细胞血管内皮生长因子表达及分泌的影响

目的:探讨硒化壳聚糖对白血病细胞株NB4细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌的变化。方法:应用RT-PCR法和ELISA法研究硒化壳聚糖对NB4细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌的影响。结果:NB4细胞中有VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌,硒化壳聚糖在体外能下调VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌,呈剂量依赖关系。结论:硒化壳聚糖除可通过诱导NB4细胞分化或诱导其凋亡外,还可通过抑制促血管新生达到发挥抗白血病的效应。     

维生素K2诱导白血病细胞凋亡的体外研究

目的：研究维生素K2（VK2）对白血病细胞生长及凋亡的诱导作用。方法：通过四唑盐比色法、镜下观察凋亡细胞形态及流式细胞仪检测细胞早期凋亡率研究维生素K2对急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4）及白血病患者骨髓单个核细胞（BMNC）的影响。结果：NB4细胞经VK2作用后增殖受到抑制。VK2作用NB4细胞72h后，部分细胞呈现凋亡细胞的特征。5、10、50μmol／LVK：作用NB4细胞72h后细胞早期凋亡率分别为8．06％、20．02％、29．60％，与对照组比较及两两比较差异均有极显著性（P〈0．01）。10μmol／LVK。作用白血病细胞及正常对照BMNC48h后，正常人及淋系白血病患者BMNC细胞早期凋亡率较空白对照组无明显增高（P〉0．05），慢性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组增高（P〈0．05），急性髓系白血病患者BMNC早期凋亡率较空白对照组明显增高（P〈0．01）。结论：VK2对白血病有生长抑制作用，可选择性诱导髓系白血病细胞凋亡，且呈剂量依赖性。     

硒化壳聚糖对NB4细胞增殖的影响及其与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系

目的:研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和hTERT基因表达的关系。方法:MTT法检测对细胞生长的抑制作用;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERTmRNA水平。结果:硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,50～200mg/L硒化壳聚糖作用NB4细胞48h,可明显降低端粒酶活性和hTERTmRNA水平。结论:硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调hTERT基因表达来抑制NB4细胞的增殖。     

硒化壳聚糖与阿霉素联合及序贯给药对NB4细胞增殖的影响

目的研究硒化壳聚糖与ADM联合应用对NB4细胞增殖的影响,探讨两药序贯给药的不同效果。方法硒化壳聚糖（50,100mg／L）及ADM（0．5,1,2mg／L）同时或者序贯给药（先给予硒化壳聚糖后给予ADM或先给予ADM后给予硒化壳聚糖）作用于NB4细胞,MTT法检测药物对细胞增殖的影响;金氏公式评价两药的协同效果。结果硒化壳聚糖与ADM单独作用均可抑制NB4细胞增殖,二者联合应用呈协同作用;先给予硒化壳聚糖作用24h,再给ADM作用24h,对NB4细胞的抑制呈协同作用;先给予ADM作用24h,再给硒化壳聚糖作用24h,呈拮抗及单独相加作用。结论硒化壳聚糖与不同浓度的ADM（0．5—2mg／L）联合应用可协同抑制NB4细胞增殖;序贯应用硒化壳聚糖和ADM时,先给予硒化壳聚糖再给予ADM比先给予ADM再给予硒化壳聚糖协同效果好。     

三尖杉酯碱通过下调Mcl-1蛋白诱导NB4细胞凋亡

［摘要］目的：考察三尖杉酯碱（HT）对人急性早幼粒白血病（APL）细胞株NB4细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其杀伤白血病细胞的作用机制。方法：采用台盼兰染色法,细胞计数,考察HT对NB4细胞的生长抑制作用和细胞毒性作用;采用AO-EB荧光染色法和细胞形态学观察,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用PI染色的流式细胞术,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用Western Blotting技术,考察HT对NB4细胞凋亡相关蛋白的影响;采用siRNA干扰技术,沉默目的蛋白证明推论;提取APL患者血液样本,验证HT的凋亡诱导作用及作用机制。结果：HT能够呈剂量依赖和时间依赖地抑制NB4细胞生长并杀伤NB4细胞,HT处理72h后GI50为（32.0±2.5） nmol/L;HT能够呈现剂量依赖和时间依赖的诱导NB4细胞凋亡,HT处理6h后其诱导凋亡百分率为66%;HT诱导NB4细胞凋亡,引起PARP蛋白裂解,并不下调Bcl-2,不影响Bax和Bak的表达,但显著下调Mcl-1蛋白水平;siRNA沉默Mcl-1的蛋白表达可以显著提高HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;HT诱导APL患者白血病样本细胞凋亡,并下调Mcl-1蛋白。结论：HT通过抑制细胞生长和诱导细胞凋亡杀伤NB4细胞,HT可能通过下调Mcl-1蛋白发挥诱导NB4细胞凋亡的抗白血病作用。     

硒化壳聚糖对K562细胞的作用及其与NF-КB信号分子的关系

目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响,并且探讨这种影响与NF-КB信号分子的关系。方法:MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,AO/EB荧光染色用来观察药物对细胞的凋亡作用。Westernblot的方法检测蛋白含量的变化。结果:硒化壳聚糖对K562细胞抑制作用呈量效、时效关系,硒化壳聚糖200mg/L作用48h对K562细胞的抑制率高达90.7±10%;并使细胞出现明显的凋亡现象。Westernblot的实验结果表明硒化壳聚糖使K562细胞NF-КB蛋白含量明显减少,且呈量效关系。结论:硒化壳聚糖可减少进入细胞核内NF-КB的蛋白含量从而下调其下游基因表达,最终抑制K562细胞增殖,诱导细胞发生凋亡。     

EGCG通过下调Bcl-2诱导KG1A白血病细胞凋亡

目的研究EGCG对KG1A白血病细胞的作用,探讨其作用机制。方法使用人的白血病细胞株KG1A细胞。MTT细胞毒性测定评价对白血病细胞的作用,使用annexin v染料标记细胞,应用流式细胞仪检测细胞凋亡。RT-PCR检测KG1A细胞Bcl-2家族mRNA的表达。结果EGCG引起KG1A细胞活性的下降。EGCG诱导KG1A细胞凋亡,且呈时间依赖性。EGCG诱导凋亡与下调Bcl-2和Bcl-xl有关。结论EGCG可以通过下调Bcl-2和BCl-xl诱导KG1A细胞凋亡。这些结果有助于提供新的有效联合方案,尤其是针对复发难治白血病的治疗。     

Effects of Corticosterone,. cAMP, cGMP, Ca^2＋, and Protein Kinase C on Apoptosis of Mouse Thymocytes Induced by X-ray Irradiation

Objective To observe the effects of signal factors of corticosterone （CS）, cAMP, cGMP, Ca^2＋ and protein kinase C （PKC） on lymphocyte apoptosis in mouse thymus induced by X-rays of 4 Gy in vitro. Methods The DNA lyric rate for thymocytes was measured by fluomspectrophotometry. Results The DNA lyric rate for thymocytes 4-8 hours after irradiation with 2-8 Gy was significantly higher than that in the control （P〈0.01）. As compared with the control, the DNA lyric rate for thymocytes treated with 0.01 μnol/L CS （P〈0.01）, 50 ng/mL cAMP （P〈0.01）, 0.05-0.4 μg/mL ionomycin （Iono, P〈0.05 or P〈0.01） or 0.05-0.4 ng/mL phorbol myristate acetate （PMA, P〈0.05 or P〈0.01）, respectively, was significantly increased, while the rate for thymocytes treated with 50 ng/mL cGMP was not significantly increased. The DNA lyric rate for thymocytes treated with 0.01 μmol/L CS （P〈0.01）, 50 ng/mL cAMP （P〈0.01）, 0.2 and 0.4 μg/mL Iono （P〈0.05）, and 0.2 and 0.4 ng/mL PMA （P〈0.05） plus 4-Gy irradiation, respectively, was significantly higher than that treated with single 4-Gy irradiation, while the rate for thymocytes treated with 50 ng/mL cGMP plus 4-Gy irradiation was not increased. When both 0.4 I.tg/mL Iono and 0.4 ng/mL PMA acted on the thymocytes, the DNA lyric rate for thymocytes was significantly higher than that in the control （P〈0.01）, the DNA lytic rate for thymocytes treated with both 0.4 μg/mL Iono and 0.4 ng/mL PMA plus 4-Gy irradiation was significantly higher than that treated with single 4-Gy irradiation （P〈0.05）, but was Iono plus 4-Gy irradiation or 0.4 ng/mL PMA plus 4-Gy irradiation. can promote thymocyte apoptosis induced by larger dose X-rays. not significantly higher than that treated with 0.4 μg/mL Conclusion CS, cAMP, Ca^2＋, and PKC signal factors can promote thymocyte apoptosis induced by larger dose X-rays.     

三氧化二砷对NB4细胞珠端粒酶活性的影响

目的:观察三氧化二砷(As2O3)对NB4细胞珠端粒酶活性的影响,并探讨与细胞增殖、分化及细胞周期之间的关系。方法:应用MTT法、BNT法检测细胞的增殖抑制率、细胞分化率、流式细胞仪检测CD11b的表达率、细胞周期时相比率,以PCR为基础的TRAP法检测端粒酶活性。结果:As2O3能有效地使NB4细胞增殖抑制、诱导分化,伴随着端粒酶活性的变化为活性降低。细胞周期分析发现,G0/G1期高或S期低对应低水平端粒酶活性,G0/G1期低或S期高对应高水平端粒酶活性。结论:As2O3可抑制NB4细胞端粒酶活性,并与细胞分化、细胞周期时相有关。