肿瘤标志物的检测进展

肿瘤发生过程是一种多基因多阶段多因子的复杂过程,大多数肿瘤早期往往无明显症状,影像诊断、细胞病理学诊断、X线检查都不能在肿瘤早期做出诊断,而肿瘤标志物的检测则可以在肿瘤的早期完成。这对肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗起了重要作用。1放射免疫分析法放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)是利用特异抗体与标记抗原的竞争结合反应,通过测定放射性复合物来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。它是Berson和Yalow在研究胰岛素的抗体时发展起来的。放射免疫分析技术是一种超微量分析技术,具有很高的精密度、灵敏度和准确…     

免疫学检验中的酶免疫技术

20世纪中期，以放射免疫技术为代表的标记免疫技术相继问世，它将某种可微量或超微量测定的物质(如放射性核素、荧光素、酶、化学发光剂等)标记于抗原(抗体)上制成标记物，加入到抗原抗体的反应体系中与相应的抗体(抗原)反应，以检测标记物的有无及含量间接反映被测物的存在与多少。这些将标记技术与抗原抗体反应结合起来的免疫学检测技术以其敏感性高、准确性好、操作简便、     

一种使用抗RhD单抗测定临床用免疫球蛋白制品抗-D能力的竞争性放射免疫测定法

作者建立了一种使用单克隆抗-D的竞争性放射免疫测定法,利用标记的抗-D单抗和未标记的抗-D制品竞争结合抗原,从而测定预防用免疫球蛋白制品的抗-D能力。采用三种人单克隆抗-DFog-1,Brad-3和Brad-5作为~(125)I标记标准,对多种抗-D制品进行了检测,并将检测结果与自动分析法进行了比较。 首先需通过红细胞稀释曲线求得放射免疫法(RIA)中应采用的红细胞浓度。以确保一定抗原浓度。红细胞以1:1为起始浓度,进行5倍连续稀释,将110μl各稀释度的红细胞分别与10μl~(125)I标记的单克隆抗-D于37℃孵育1小时,洗涤。离心后,用γ-计数器测定结合到细胞上的放射活性,以结合的放射百分数对     

人体甲胎蛋白的酶-免疫测定

无脑畸形和脊柱裂等神经管缺损,可通过羊水和母体血清中甲胎蛋白含量的测定进行诊断。但测定母体血清中这种低浓度的蛋白质,需要一个象酶-免疫测定法那样灵敏和特异的检测方法。该法的主要试剂是酶标记的抗原或抗体。异种双功能试剂m-顺丁烯咪唑苯甲酰-N-羟琥珀酰亚胺酯(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester)作为β-半乳糖苷酶标记抗体,与其他酶标记抗体操作相比较,能发现产生活性最高的结合物。本文目的在于评价用这种操作制备的结合物在甲胎蛋白酶-免疫测定法中的性能。对家兔的特异抗人甲胎蛋白抗血清的免疫球蛋白G组分(1mg溶于1ml缓冲液中),用m-顺丁烯咪唑     

血浆 C 蛋白快速均相酶免疫测定法

近年来,C 蛋白抗原是用免疫测定法(Laurell)、夹层酶免疫测定法(EIA)和放射免疫测定法(RIA)进行定量的。这些方法不仅费时,还需要将结合和游离的抗原分离。在RIA 中,使用放射性同位素时,不仅需要特殊的设备,同时对物品也要进行认真的去污处理。作者报告的快速均相EIA(H-EIA)测定法克服了上述的缺点。这种方法是基于酶标记抗原与抗体结合时酶活性的变化,而且无需分离结合和游离的蛋白。     

荧光免疫分析技术及其应用

近十多年来,放射免疫分析技术已成为微量测定体内各种激素、药物及蛋白质等物质的标准方法。其优点是特异性强、灵敏度高。但由于有的放射性同位素标记品半衰期较短,以致运输及保存比较困难,而且操作费时。近年出现了以荧光素取代放射性同位素标记抗原的一种新技术〔荧光免疫分析(Fluorescent immunoassay)和以荧光素标记抗体的免疫荧光分析(Immunofluoroassay)〕。其优点是:①无放射性、②贮存期长,可制成长期使用的试剂盒、③所需仪器设备较少。基于以上优点,目前已出现荧光免疫分析逐渐取代放射免疫分析的趋势。     

因子ⅢⅤ相类抗原的酶免疫测定法

因子Ⅷ相关抗原(FⅧRAg)能表示抗原决定簇与Vou Willebraud因子蛋白质的关系,该抗原可用抗纯化因子Ⅷ制备异种抗血清来测定。在VonWillebrand’s病(乙型血管性假血友病)人血清中,此种抗原的浓度减低或测不出,但在典型的血友病人则正常或增加,故可用FⅧRAg定量测定来鉴别这两种疾病。在血友病A携带者,因子Ⅷ凝血活性与FⅦRAg的比率低于正常,因此ⅧRAg的测定也广泛用于女性血友病A携带者的检查。对于FⅧRAg的测定目前广泛采用Laurell’s免疫电泳法,以及放射免疫、荧光免疫测定法等。作者介绍了一种使用商品辣根过氧化物酶标记抗体的酶联免     

急性非淋巴细胞白血病患者血清组织多肽抗原的临床意义

27例急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者(男14例,女13例,中数年龄45岁)中10例M_2,7例M_3,5例M_4、M_0、M_1、M_5、M_6及未分类各1例。诊断时中数血红蛋白值86g/L,中数白细胞数8.5×10~9/L,外周血及骨髓涂片中原始细胞中数百分率分别为63％、48.6％,中数血小板数57.5×10~9/L。患者均接受联合化疗。外周血细胞数正常、骨髓中细胞数正常。原始细胞<5％为完全缓解(CR),其他患者视为治疗反应差(PR)。组织多肽抗原(TPA)血清浓度用双—抗体放射免疫法重复测定,抗原用~(125)I标记。对照组为明显健康的个体。     

放射性同位素技术在临床检验中应用的现状

放射性同位素技术的应用,对临床医学的发展起了巨大的促进作用。使用同位素标记物质的测量方法可以检测出患者标本所含的微量物质,已在临床检验中广泛应用。例如,目前应用很广的放射免疫分析法(RIA),当初只能测定一些蛋白类激素,现在却能测定一些可以作为半抗原而制得相应抗体的低分子物质。现能用放射免疫分析法测量的物质有:激素、微量活性物质(环核苷酸等)、药物、酶、病毒、肿瘤抗原、各种抗体及血清蛋白成份等。而且,更多种物质的新测定     

免疫学测定的发展趋势和关注热点

免疫学测定(immunoassay)是利用抗原抗体反应产生免疫复合物的原理分析体内微量(或超微量)活性物质的一种手段。从20世纪50年代美国学者Berson和Yallow发明了放射免疫测定技术检测胰岛素起．免疫学测定技术在过去的几十年里得到了长足的发展。目前免疫学测定已扩展并渗入到临床医学实验的各个专业，如血液学、微生物学、毒理学等。人们已很难在实验室内把免疫学测定与其他专业分开。     

标记免疫测定技术的研究进展

近年来检验医学迅速发展,临床实验室使用的免疫测定技术也日新月异。作为临床免疫测定技术的一个重要分支———标记免疫测定技术是最为活跃的,也是发展最快的,其基本原理是利用抗原抗体反应的高度特异性,加上各种标记物的可测量性来达到方便敏感地检测体内各种微量生物活性物质的目的。美国学者Yalow和Berson于1959年建立了放射免疫测定(R IA),开创标记免疫分析的先河[1]。R IA采用放射性核素作为标记物,一般分3个步骤:抗原抗体的竞争抑制反应、结合态(B)与游离态(F)的分离及放射性的测量。其后在R IA基础上又出现了免疫放射测定(IR…     

免疫技术在蛋白质定性定量上的应用 三、酶连接免疫吸附测定法

在标记的抗原抗体检测法中,最先发展起来的是免疫荧光技术,随后是放射免疫测定法,这两种标记的检测法一经建立就充分地显示出它们具有高度敏感性,所以一直沿用到现在。由于放射免疫测定法试剂较贵,同位素的半寿期短,需要复杂的设备来判读结果,在运送和操作过程中还必须有特殊的防护措施等问题,因而放射免疫测定法通常都在设备条件较好的实验中心进行。在放射免疫测定法的基础上发展起来的酶免疫     

用免疫酶标分析法测定纤维蛋白原降解物(FDP)

应用酶标抗原竞争法测定血清FDP,灵敏度高于血凝抑制技术,与放射免疫分析法一致.其原理是将待测的FDP抗原和已标记过氧化物酶的FDP混合,再与兔抗人纤维蛋白原(Fg)的抗血清一起保温,待测FDP和已标记酶的FDP在与抗体结合时发生竞争,应用免疫吸附剂(羊抗兔丙种球蛋白,即第二抗体敏化的玻璃细珠)把已结合上抗体的酶标记FDP复合物与游离的未结合抗体的标记FDP分离,结合到免疫吸附剂上的标记抗原,可在过氧化氢和邻联茴香胺(orthodianiside)存在下,测定过氧化物酶活性.材料制备:(一)抗人Fg血清,免疫电泳上出现清晰D、E碎片;(二)FDP是以Fg10mg加20U链激酶,37℃孵育30分钟,用Kunitz抑制剂终止反应,得早期FDP,使凝血酶时间延长至2分     

免疫组织化学技术在切片中的应用

免疫组织化学是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）,对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学。根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法等。     

HLA抗体所致溶血性输血反应

至今未能肯定HLA抗体是否引起溶血性输血反应。作者在9例均因严重贫血需反复输注红细胞后产出HLA抗体的患者中测定了~(51)Cr标记的红细胞寿命及其破坏部位。供者的ABO、Rh血型及其他的红细胞特异性抗原系统均与患者相同,唯各种HLA抗原不同。用盐水、白蛋白、酶介及间接抗人球蛋白试验进行红细胞血清学试验。放射免疫抗人球蛋白试验(RIAT)作为患者血清与相应供者红细胞洗脱物的交叉试验。用淋巴细胞毒试验过滤患者血清及红细胞洗脱物的HLA抗体。输血后立即注入~(51)Cr标记的红细胞,并于注入后0.5小时以及随后间隔1、24小时心前区、肝脾区闪烁扫描,测定红细胞破坏部     

测定人肌红蛋白的快速而敏感的放射免疫法

肌红蛋白是骨髂肌和心肌的一个主要成分。在挤压伤、心肌梗塞、烧伤等情况下,血液和尿中的肌红蛋白含量增高。用敏感的放射免疫法测定血液或尿中的肌红蛋白,对诊断心肌梗塞很有价值。但以往文献报导的放射免疫测定所需的时间长达5～24小时,不如诊断心肌梗死的酶谱分析那样快速。作者用~(125)I标记的酯,即N-琥珀酰亚胺基-3-(4-羟基,5-〔~(125)I〕碘苯基)丙酸酯,来标记纯化的肌红蛋白,所得标记物的专一性活性比用改良氯胺T法提高约二倍。使用普通的商品抗肌红蛋白血清,并用分子量6000的聚乙二醇沉淀抗原抗体复合物,在1小时之内就可以完成整个测定。测定方法将100微升样品、对照或标准液分别与等体积的抗肌红蛋白血清稀释液以及200微升     

名词注释

用放射性同位素标记已知抗原(或抗体),利用抗原抗体的特异性反应,检测待检样本中的相应抗体(或抗原)的免疫学方法。结果借助于放射性强度显示。以定量的放射性同位素标记的抗原和待测样本中的抗原,与对应抗体的作用,使这两种抗原与抗体竞争性结合。通过测定抗原和抗体复合物(B)和游离抗     

关于标本因素对ELISA检测结果影响的分析

ELISA(enzymelinkedimmunosorbentassay)即酶联免疫吸附试验 ,是一种常用的固相酶免疫测定方法。ELISA的基本原理是 :①使抗原 (或抗体 )结合到某种固相载体表面 ,并保持其免疫活性 ;②使抗原 (或抗体 )与某种酶联结成酶标抗原 (或抗体 ) ,而且此酶标抗原 (或抗体 )既保留其免疫活性 ,又保留其酶活性 ;③测定时将待测标本 (抗体或抗原 )和酶标抗原(或抗体 )按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应 ,再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开 ,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比…     

毛细管电泳竞争免疫分析法测定异体干细胞移植患者尿液中小肽分子

目的制备人类白蛋白来源一段小分子多肽的多克隆抗体,建立毛细管电泳检测该小肽方法,为临床早期诊断GVHD提供新的手段.方法人工合成序列为LVRYTKKVPQVSTPTL的16个氨基酸残基的人来源多肽,按兔100μg/kg体重肽抗原标准制成免疫原.按常规方法,每次取2.5 ml抗原悬液,在脊柱两侧皮下和腹股沟处多点注射,分3次免疫动物,制备多克隆抗体.采用异硫氰酸酯荧光素(FTTC)标记小肽抗原,用获得的抗体通过LIF-CE-IA建立该肽的检测方案.结果获得该肽的多克隆抗体的效价为1∶1000,且它与正常人血清、尿液以及牛血清间没有交叉反应;标记抗原出峰时间为5.93 min,抗原-抗体复合物分离时间为6.47 min,所建立的检测方法的线性范围为16～512 ng/ml,最低检出限为10 ng/ml.结论实验所获得的多克隆抗体具有较高的滴度和特异性,所建立多肽的检测方法简便、快速,可为今后临床早期诊断GVHD提供一种新的手段.     

蛋白质和多肽的放射性标记方法研究进展

蛋白质和多肽的放射性标记广泛用于药代动力学研究,医学影像检查[1], 抗体标记,二维电泳[2]等方面,在医学和药学领域是一种重要的技术.蛋白质和多肽的标记常用125I或131I标记[3-4]酪氨酸.标记方法一般是用氯氨T法进行碘放射性标记,用柱层析法和离心超滤法对标记物分离纯化,同时用三氯乙酸沉淀法和SDS-PAGE电泳法鉴定纯化后的标记化合物放射化学纯度,用MTT比色法测定标记物的生物学活性.例如徐贤坤等[5]改进的双相氯氨T法标记了聚乙二醇化重组人白细胞介素6标记率可达74.5%, 高于常规氯氨T 法的62.3%, 放射性比活度分别为5.151 3×109和4.161×109 BqPμg.