菟丝子提取物对肾阳虚大鼠睾丸P21500rom、CYP19表达及性激素和精子的影响

目的：观察菟丝子提取物作用于腺嘌呤诱导的肾阳虚不育大鼠睾丸中P450arom、CYP19的表达、激素含量及精子数量的变化,探讨肾虚引起的雄性不育的病理机制及菟丝子提取物的作用。方法：30只雄性大鼠随机分为3组：正常对照组、模型组、治疗组,每组10只。用腺嘌呤150mg／（kg·d）,分别给模型组及治疗组大鼠灌胃30天,诱导肾阳虚不育模型。诱导模型成功后,模型组用生理盐水灌胃30天;用菟丝子提取物200mg／（kg·d）给治疗组灌胃30天;用免疫组化法和Western-blot检测P450arom及CYP19在大鼠睾丸中的表达;用扫描电镜及透射电镜观察曲细精管中精子数量的变化;精子自动检测仪扫描观察精子的密度;放射免疫的方法检测FSH、LH、T、E2含量。结果：CYP19在大鼠睾丸的间质细胞、长形精子细胞中均有表达,其免疫阳性物质位于间质细胞质和长形精子细胞的头、尾部;P450arom表达于睾丸间质细胞的细胞质中。模型组大鼠睾丸CYP19、P450arom则明显低于正常对照组（P〈0．05）,治疗组CYP19、P450arom的表达明显高于模型组（P〈0．05）,正常对照组与治疗组之间无显著差异（P〉0．05）;正常对照组及治疗组曲细精管中的精子数量及FsH、LH、T和E2的含量明显高于模型组,正常对照组与治疗组之间无显著差异（P〉0．05）。结论：P450arom及CYP19在睾丸表达的异常可能与肾虚引起的雄性大鼠不育有关,菟丝子提取物能够增加肾虚大鼠睾丸中P450arom、CYP19的表达,提高精子的数量及FSH、T、E2含量,为进一步探讨P450arom及CYP19在雄性肾虚不育模型大鼠精子生成和成熟中的作用及菟丝子提取物的作用机制提供了实验依据。     

左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶表达的影响及调节

目的研究左归饮对围绝经期大鼠卵巢P450芳香化酶(P450 arom)及CYP19 mRNA表达的影响及机制。方法采用围绝经期大鼠动物模型,分别给予低、中、高剂量左归饮灌胃处理8周。用放射免疫法(RIA)检测血清中雌二醇(E_2)含量;用RT-PCR和免疫组化法检测卵巢CYP19mRNA及P450 arom的表达。未成年大鼠注射孕马血清后收集培养颗粒细胞,用RT-PCR方法检测给予不同处理后CYP19 mRNA的表达水平。结果围绝经期大鼠血清E_2水平及卵巢P450 arom及其基因CYP19的表达明显低于青年组(P0.01),给予中、高剂量左归饮处理后,血清E_2水平及P450 arom、CYP19表达显著升高(P0.01)。培养颗粒细胞给予不同处理因素,结果显示,与对照组相比,染料木黄酮(Genistein)、福司考林(Forskolin)、左归饮提取物可促进CYP19 mRNA表达(P0.05);与单纯加入左归饮提取物相比,同时加入左归饮提取物和佛波酯或Genistein可进一步促进CYP19 mRNA的表达(P0.05)。结论中、高剂量左归饮可通过上调卵巢CYP19及其产物P450 arom的表达,使围绝经期大鼠血清E_2含量升高。左归饮对CYP19 mRNA表达的促进作用可能是通过激活PKC途径或加强Genistein的作用实现的。     

隔药饼灸对子宫内膜异位症大鼠雌激素相关因子表达的影响

目的:探索隔药饼灸对子宫内膜异位症大鼠雌激素相关因子表达的影响。方法:采用自体移植法造模,成功后随机将SD大鼠分为模型组、隔药饼灸组和达那唑组,另设未造模的大鼠为空白对照组。空白对照组和模型组大鼠常规固定、暴露关元穴,不做其他处理;其余两组分别给予隔药饼灸法治疗、达那唑悬浊液灌胃,共2个疗程。待治疗结束后,用HE染色观察子宫内膜组织及异位内膜组织形态学变化;ELISA法检测血清E2水平;RT-PCR检测内膜组织芳香化酶(P450arom)和环氧化酶-2(COX-2)的mRNA表达。结果:HE染色结果显示,模型组的异位内膜上皮细胞呈柱状增生,间质细胞密集,局部纤维化,血供丰富;隔药饼灸组的异位内膜上皮细胞萎缩,呈矮立方状,间质细胞萎缩,血供减少,局部呈纤维化。与空白对照组比较,模型组大鼠血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达量显著升高(P0.05);与模型组比较,隔药饼灸组和达那唑组大鼠血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2的mRNA表达量明显降低(P0.05);与隔药饼灸组比较,达那唑组血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论:隔药饼灸可能通过改善血液循环,降低子宫内膜异位症大鼠血清E2和异位内膜组织中P450arom、COX-2的表达,从而抑制雌激素的生成代谢、抑制异位病灶的生长。     

小柴胡汤对大鼠子宫内膜异位症COX-2、P450arom表达的影响

目的探讨小柴胡汤对大鼠子宫内膜异位症(内异症)的治疗作用及其机制。方法建立大鼠内异症动物模型,随机分为空白对照组、模型对照组、小柴胡汤组、丹那唑组、联合用药组(小柴胡汤+丹那唑),利用免疫组化方法,观察分析各组大鼠在位、异位内膜中COX-2、P450 arom的表达水平。结果 COX-2、P450 arom在正常子宫内膜无表达,而在内异症内膜有强表达;小柴胡汤组和联合用药组COX-2、P450 arom的表达水平明显低于模型对照组(P<0.05);而西药丹那唑组COX-2的表达水平无明显变化,但P450 arom的表达明显低于模型组(P<0.01)。结论小柴胡汤可能通过下调异位内膜COX-2、P450 arom的表达,抑制局部雌激素的产生而达到治疗目的。     

赞育丹对不育大鼠性腺功能调节作用的实验研究

目的研究赞育丹对腺嘌呤所诱发的睾丸生精障碍性不育大鼠的影响,为中药治疗男性不育提供实验依据。方法以腺嘌呤灌胃Wistar大鼠,诱发睾丸细胞生精障碍,制造大鼠不育症模型,观察赞育丹制剂给药后实验动物精子计数、睾丸形态学及性激素(T、FSH、LH)的改变。结果赞育丹可增加睾丸生精障碍性不育大鼠精子数量;增加睾丸附睾重量。提高前列腺和精囊指数,提高性激素水平;使受损的睾丸组织明显改善。结论赞育丹对腺嘌呤诱发的大鼠睾丸生精障碍性不育有治疗作用。     

自拟补肾化痰方与补肾活血方对PCO大鼠性激素和P450arom及PAI-1的影响

目的观察自拟补肾化痰方与补肾活血方对多囊卵巢（PCO）大鼠血清性激素水平及卵巢局部因子P450arom和PAI-1表达的影响，探讨其对PCO模型大鼠的不同治疗作用并分析可能的作用机制。方法采用胰岛素联合人绒毛膜促性腺激素（HCG）造模法制备PCO模型大鼠。随机分为PCO模型组、补肾化痰组、补肾活血组、西药组（二甲双胍）和对照组。运用放射免疫法测定血清性激素、胰岛素（INS）水平；免疫组化法测定卵巢组织中P450amm和PAI-1的表达。结果补肾化痰方可以降低PCO模型大鼠血清睾酮（T）水平，升高E2、FSH水平。可上调P450arom的表达，而补肾活血方可以降低PCO模型大鼠血清T、LH和胰岛素（INS）水平，可下调PAI-1的表达。结论卵巢局部因子P450arom和PAI-1在多囊卵巢的发生、发展中起重要作用，自拟补肾化痰方与补肾活血方从不同途径调整内分泌和卵巢局部因子的表达，从而促进卵泡的发育、成熟及排卵。     

精索静脉曲张对大鼠睾丸间质细胞超微结构及凋亡的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)对大鼠睾丸间质细胞超微结构及凋亡的影响,探究VC造成男子不育的机理。方法:采用雄性SD大鼠左侧精索静脉曲张模型,将20只大鼠随机分为VC组(n=10)和对照组(n=10),建模90d后一并处死,放射性免疫检测大鼠血液中垂体分泌卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮的含量,电镜观察大鼠睾丸间质细胞的超微结构,细胞流式术检测大鼠睾丸间质细胞的凋亡率。结果:与对照组相比,VC组血清中的FSH和LH含量显著升高(P<0.05),睾酮含量显著显著下降(P<0.05);电镜观察下VC组大鼠睾丸间质细胞出现了细胞核萎缩、染色质块状凝集、染色质核周积聚、核仁不清及胞质溶解呈空泡样;VC组与对照组相比,大鼠睾丸间质细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:精索静脉曲张对大鼠睾丸间质细胞造成了严重损伤,进而引起大鼠性激素分泌的紊乱。     

补肾活血化痰方改善雄激素致不孕大鼠高雄激素血症的机制探讨

目的观察补肾活血化痰方(BHHR)对雄激素致不孕大鼠(ASR)高雄激素血症的治疗作用及治疗前后ASR卵巢内雄激素合成酶和代谢酶的表达量的变化,并探讨其可能的作用机制。方法 SD雌性大鼠于9日龄在颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮(1.25 mg)制备ASR模型。将造模成功的ASR随机分为3组,分别为模型组(蒸馏水10 mL/kg灌胃)、二甲双胍治疗组(0.1 g/kg灌胃)和BHHR治疗组(10 mL/kg灌胃),每组各13只。另设正常对照组(n=10)。疗程(28 d)结束后观察大鼠的性周期恢复情况、体质量及卵巢质量/体质量比值。采用放射免疫分析法测定血清睾酮(T)水平;免疫组织化学定量方法检测卵巢3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 17α-羟化酶/17,20-裂解酶和P450芳香化酶的表达量。结果 (1)性周期恢复:BHHR治疗组及二甲双胍治疗组中恢复性周期的大鼠数量多于模型组(P<0.01)。(2)体质量:模型组大鼠体质量高于正常对照组(P<0.01);BHHR治疗组与二甲双胍治疗组大鼠体质量均较模型组降低(P<0.01)。(3)卵巢质量/体质量比值:模型组大鼠卵巢质量/体质量比值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(4)血清T水平:模型组大鼠血清T值高于正常对照组、BHHR治疗组及二甲双胍治疗组(P<0.01)。(5)免疫组织化学结果:与模型组和正常对照组相比,BHHR治疗组大鼠P450arom表达升高(P<0.01);BHHR治疗组3β-羟甾脱氢酶、细胞色素P450 1 7α-羟化酶/17,20-裂解酶的表达与模型组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BHHR可以降低ASR模型大鼠血清T水平,其机制可能是通过上调雄激素代谢酶P450arom的表达而实现的。     

来曲唑对大鼠子宫内膜异位症的作用及对异位内膜细胞凋亡的影响

目的:初步探讨第3 代芳香化酶抑制剂来曲唑治疗大鼠子宫内膜异位症(endometriosis, EM) 模型异位病灶的作用机制, 及对异位内膜细胞凋亡的影响。方法:用自体子宫内膜移植方法建立大鼠EM 模型, 选择建模成功的大鼠随机分为来曲唑组(n=15) 和对照组(n=15), 比较治疗前后两组大鼠异位病灶的体积、外观变化、病理组织学差异, 并采用免疫组织化学法和RT-PCR 法检测异位病灶中P450 芳香化酶(P450arom)、环氧合酶-2(COX-2)、bcl-2及bax 的表达。结果:与对照组比较, 来曲唑组异位病灶体积明显缩小(P<0.05), 异位病灶中P450arom 和COX-2的蛋白及mRNA 表达均明显减低(P<0.05)。P450arom 与COX-2 在异位病灶中的表达呈正相关(r=0.943, P<0.001;r=0.913, P<0.001)。异位病灶中bcl-2 的蛋白及mRNA 表达较对照组均明显减低(P<0.05), bax 的蛋白及mRNA 表达较对照组明显增高(P<0.05), 来曲唑组bax/bcl-2 的比值较对照组显著增加(P<0.05)。结论:来曲唑可明显缩小异位病灶体积, 可能通过降低异位病灶局部P450arom, COX-2 的表达, 抑制雌激素生成及异位病灶的增殖, 从而促进异位病灶细胞凋亡, 达到治疗目的。     

不同剂量腺嘌呤诱导肾阳虚不育大鼠模型实验研究

目的探讨不同剂量腺嘌呤诱导肾阳虚不育大鼠模型的量效关系。方法将20只成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组,腺嘌呤低（每日100mg／kg）、中（每日150mg／kg）、高（每日200mg／kg）剂量组,每组5只。用腺嘌呤给予大鼠灌胃30d,诱导肾阳虚不育模型。观察大鼠体征、血清性激素水平、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、血清肌酐（serum creatinine,SCr）及睾丸、肾脏的形态学变化。结果与正常对照组相比,腺嘌呤各剂量组睾酮（testosterone,T）、雌二醇（estradiol,E2）显著降低（P〈0．05）,卵泡刺激素（follicle stimulating hormone,FSH）、促黄体激素（luteotrophic hormone,LH）水平无显著性变化（P〉0．05）,SCr、BUN水平显著升高（P〈0．05）。腺嘌呤各剂量组大鼠睾丸均出现生精小管中生精细胞排列紊乱,细胞疏松,精曲小管之间的结缔组织增多,间质细胞数量明显减少,管腔内生殖上皮变薄,精子数目减少,大部分管腔中可见脱落的精子细胞;肾小管内有大量结晶物沉着,且有异物肉芽肿形成,占据整个管腔,肾小管上皮肿胀、坏死、脱落,肾小管显著扩张成囊状,皮质、髓质间质纤维组织增生,大量炎性细胞浸润,可见纤维素样坏死。结论低剂量腺嘌呤可导致大鼠睾丸形态学改变,而且肾脏的损害程度较轻,可成功地诱导肾阳虚不育模型。     

Cdyl、G9a、及HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达

目的 观察Cdyl、G9a、HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达,探讨Cdyl及相关因子引起雄性大鼠肾阳虚的机制.方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为空白组与模型组,模型组采用环磷酰胺50 mg/kg·d腹腔注射,空白组给予等量生理盐水注射.大鼠造模后第6天,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾进行相关指标检测. 结果 与空白组比较,模型组大鼠精子浓度、活力及活率明显降低;模型组大鼠睾丸组织Cdyl、G9a表达明显降低(P<0.01),HDAC1表达明显升高(P<0.01). 结论 Cdyl、G9a表达降低,HDAC1表达升高与雄性大鼠肾阳虚相关.     

肾阳虚大鼠生殖细胞凋亡及Bcl-xl和Bad蛋白的表达

目的:观察实验性肾阳虚大鼠生殖细胞凋亡及Bcl-xl、Bad蛋白表达的变化。方法:12只成年健康雄性SD大鼠随机分成肾阳虚组(n=6)和对照组(n=6)。建立单侧肾阳虚动物模型后,取睾丸,对照组同侧取材。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-xl、Bad蛋白表达。结果:凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。肾阳虚组生殖细胞凋亡指数高于对照组(P<0.05);肾阳虚组Bcl-xl蛋白表达低于对照组(P<0.05);Bad蛋白表达高于对照组(P<0.05)。结论:实验性肾阳虚大鼠生殖细胞凋亡明显增多,可能与Bcl-xl蛋白表达降低、Bad蛋白表达升高相关。生殖细胞凋亡可能是肾阳虚所致生殖功能障碍的一个重要原因。     

雌激素及其受体、芳香化酶在子宫腺肌病中的作用

目的 探讨雌激素、雌激素受体(ER)及芳香化酶(P450arom)在子宫腺肌病中的作用.方法 收集子宫腺肌病患者病灶组织及石蜡切片,通过酶联免疫法、免疫组织化学法检测雌激素、ER、P450arom在子宫腺肌病组织中的水平,以宫颈CINIII为对照组.通过体外培养子宫腺肌病病灶细胞,采用CCK-8法观察雌激素激活组、ER抑制剂组、ER抑制剂+E2激活组、雌激素剥夺组、雌激素剥夺+ER抑制剂组各组状态下子宫腺肌病病灶细胞的增殖抑制率.结果 与对照组子宫肌层及内膜相比较,子宫腺肌病异位病灶、在位内膜中雌激素、ER、P450arom表达水平明显升高(P＜0.05);子宫腺肌病异位病灶与在位内膜比较雌激素、P450arom表达水平无明显差异(P＞0.05),但ER表达水平明显升高(P＜0.05).ER抑制剂组及ER抑制剂+雌激素激活组均能抑制子宫腺肌病病灶细胞增殖,两组之间抑制率差异无统计学意义(P＞0.05),雌激素剥夺组与雌激素剥夺+ER抑制剂组均能抑制子宫腺肌病病灶细胞增殖,其中雌激素剥夺+ER抑制剂组抑制效果大于雌激素剥夺组(P＜0.05).结论 通过雌激素激活及剥夺状态下证实子宫腺肌病异位病灶及在位内膜过高表达的雌激素、ER、P450arom促进子宫腺肌病病灶细胞增殖,其中雌激素通过与ER结合发挥生物学效应,ER除与雌激素结合外,还可通过其他途径促进子宫腺肌病发生发展.     

子宫腺肌病患者UAE治疗前后子宫内膜中ER、P450arom表达的变化

目的:研究子宫腺肌病子宫动脉栓塞术(UAE)治疗前后子宫内膜中ER、P450arom表达的变化。方法:采用免疫组化法测定33例子宫腺肌病患者治疗前、后30d及90d内膜中ER、P450arom表达的变化及阳性人数的变化,与30例正常对照组患者比较。结果:30例子宫腺肌病组中有78.8%患者内膜中P450arom高表达,表达强度为18.6±3.45,明显高于正常对照组(P<0.01);100%患者ER表达,表达强度为16.1±2.67,明显高于对照组的4.51±0.98(P<0.01);UAE治疗后内膜中ER表达由治疗前的16.1±2.67降低到治疗后的6.23±0.98,ER阳性人数百分比由治疗前的100%降低到治疗后的39.4%;P450arom表达由治疗前的18.6±3.45降低至治疗后的5.3±1.66,阳性人数百分比由78.8%降低至39.4%,各组比较差异有显著性意义(P<0.01)。治疗后1个月ER、P450arom表达开始逐渐下降,治疗后3个月降低最明显。结论:高表达的ER、P450arom在子宫腺肌病发生、发展中发挥重要的作用;UAE主要通过减少子宫腺肌病病灶血供和抑制内膜中ER、P450arom表达发挥其治疗效果;ER、P450arom可作为子宫腺肌病疗效判断和预后的指标之一。     

阿那曲唑对子宫内膜异位症芳香化酶P450、雌二醇及雌激素受体的影响

目的探讨阿那曲唑对子宫内膜异位症（EMs）患者细胞色素芳香化酶P450（P450arom）、雌二醇（E2）和雌激素受体（ER）的影响。方法子宫内膜异位症患者20例采用阿那曲唑治疗3个月为治疗组,子宫内膜异位症未采取药物治疗的20例为对照组,用放射免疫法检测血清中E2水平,用免疫组化方法检测两组患者在位内膜和异位子宫内膜组织中P450arom、ER的表达。结果治疗组与对照组相比血循环中E2、P450arom和ER表达下降,差异有统计学意义（P〈0．01o结论阿那曲唑治疗EMs,可能通过降低血E2,减少异位内膜的P450arom和ER表达而起到使异位内膜病灶萎缩的作用。     

细胞色素芳香化酶及环氧合酶-2在子宫内膜异位症的表达

目的 探讨细胞色素芳香化酶(P450arom)及环氧合酶-2(COX-2)在子宫内膜异位症(内异症)患者异位及在位子宫内膜组织中的表达及其意义.方法 采用免疫组化法检测内异症患者在位及异位子宫内膜及对照组正常子宫内膜中P450arom,COX-2的表达情况.结果 P450arom在内异症患者异位及在位子宫内膜中均有强表达,正常子宫内膜无表达,增生期、分泌期差异无显著性(P＞0.05).COX-2在内异症患者异位及在位子宫内膜亦有强表达,增生期、分泌期差异无显著性(P＞0.05);正常子宫内膜弱表达,分泌期表达强于增生期(P＜0.05).P450arom与COX-2在异位内膜中的表达呈正相关.结论 内异症组织中芳香化酶、COX-2的高表达可能是病变发生发展的重要因素,因此,抑制芳香化酶及COX-2活性可为内异症治疗提供新靶点,对在位内膜芳香化酶的检测也可能成为内异症辅助诊断的重要手段.     

益精方对腺嘌呤不育症大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子和闭合小环蛋白表达的作用

目的观察益精方对腺嘌呤不育症肾阳虚大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子(JAM)及闭合小环蛋白(ZO)表达的影响。方法选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,按随机数字表法,平均分为正常组、模型组、复方玄驹组、益精方组,每组12只。造模成功后,各给药组灌胃相应药物,连续20 d。然后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化方法测定大鼠睾丸支持细胞间JAM及ZO表达。结果与正常组比较,模型组精子密度、精子活动率、JAM及ZO表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,复方玄驹组和益精方组精子活动率、精子密度均显著升高(P0.05),益精方组JAM及ZO表达显著增加(P0.05)。结论益精方能够通过调控JAM及ZO的表达,修复腺嘌呤法诱导的肾阳虚模型大鼠的睾丸支持细胞紧密连接蛋白的损伤。     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜细胞色素P450的表达

目的 :探讨细胞色素P45 0芳香化酶 (aromatasecytochromeP45 0 ,P45 0arom)mRNA及蛋白在多囊卵巢综合征 (polycysticovarysyndrome ,PCOS)患者子宫内膜上的表达及意义。 方法 :分别用原位杂交和免疫组织化学及Westernblotting方法检测 31例PCOS患者和 30例因输卵管不通而不孕或男性不孕的对照组 (15例增殖期 ,15例分泌期 )的子宫内膜上的P45 0arommRNA及蛋白的表达。结果 :PCOS患者子宫内膜上P45 0arommRNA呈强阳性表达 ,而对照组为弱表达或阴性表达 ;PCOS患者子宫内膜上P45 0arom蛋白呈弱到强阳性表达 ,对照组为阴性到阳性表达 ,两者比较差异有显著性 ;PCOS患者增殖期与单纯增生比较 ,P45 0arom蛋白表达 ,差异无显著性。结论 :PCOS患者子宫内膜上P45 0arom的异常升高可能促进雄激素在子宫内膜局部转化为雌激素 ,在子宫内膜病变中起一定作用