蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为 0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后 ,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂 (t PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t PA和PAI 1活性 ,但t PA/PAI 1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能 ,发挥纤溶作用 ,提示其为纤溶促进剂。     

蝎毒素IV对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的　研究蝎毒素IV纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法　培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为0 ,1,2 ,4 ,8mg/L的蝎毒素IV孵育后,测定蝎毒素IV对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)的影响。结果　蝎毒素IV在低剂量能降低t-PA和PAI-1活性,但t-PA/PAI-1比值较对照组相比明显升高。结论　蝎毒素IV能够通过影响内皮细胞功能,发挥纤溶作用,提示其为纤溶促进剂。     

脑梗塞患者血浆t—PA和PAI活性变化的临床探讨

组织型纤溶酶原激活剂（tissue－typePlasmlnogenactlvator，t－PA）与血栓中的纤维蛋白结合，激活纤溶酶原转化成纤溶酶，水解血栓中的纤维蛋白使血栓溶解。但在正常人体内t－PA受纤溶酶原激活剂抑制物（Plasmino－g””“ctivatorinh比norPAI）的快速抑制。作者对不同病程脑梗塞患者血浆中t－PA和PAI的活性进行测定，以探讨对脑梗塞患者的临床诊断、预后及指导临床治疗的价值，报告如下。材料与方法一、对象正常对照组：29例，年龄46～76岁，平均年龄578岁。其中男18例，女11例，均属我所体检的健康人。脑梗塞组：35例，年龄47～78…     

海参糖胺聚糖抗血栓形成机制的研究

目的 :研究海参糖胺聚糖 (hGAG)抗血栓机制。方法 :观察hGAG对内皮细胞的促凝活性、组织因子 (TF)、凝血酶调节蛋白 (TM )和纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)的影响。结果 :细菌脂多糖(LPS)与内皮细胞孵育后 ,不同浓度的hGAG可使细胞促凝活性下降 ,TF抗原及mRNA转录下降 ,TM抗原表达及mRNA转录增强 ;hGAG可使内皮细胞培养上清液中的PAI 1抗原、活性、mRNA转录下降。结论 :hGAG通过下调内皮细胞TF表达 ,促进TM表达 ,降低内皮细胞PAI 1合成、分泌及抑制PAI 1mRNA转录 ,发挥抗血栓作用     

蝎毒素Ⅳ对血管内皮细胞介导纤溶作用的影响

目的：研究蝎毒素Ⅳ纤溶作用的内皮细胞介导机制。方法：培养的人脐静脉血管内皮细胞分别与剂量为0，1，2，4，8mg／L的蝎毒素Ⅳ孵育后，测定蝎毒素Ⅳ对内皮细胞释放组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、组织型纤溶酶原激活荆抑制物(PAI-1)的影响。结果：蝎毒素Ⅳ在低剂量能降低t-PA和PAI-1活性，但t-PA／PAI-1比值较对照组相比明显升高。结论：蝎毒素Ⅳ能够通过影响内皮细胞功能，发挥纤溶作用，提示其为纤溶促进剂。     

脑血栓形成患者血浆纤溶活性指标的动态观察

为了解脑血栓形成患者血浆纤溶系统活性变化,对71例脑血栓形成患者急性期(发病第3天)、亚急性期(第15天)及恢复期(第30天)的血浆组织型纤溶酶原激活物(t-pA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性水平进行动态观察,并与正常对照组比较。结果表明,脑血栓形成患者与对照组相比,急性期t-pA和PAI活性水平差异无显著意义(P>0.05);亚急性期t-pA明显升高,PAI明显降低;恢复期t-pA明显降低,PAI明显升高(P<0.01)。结论:测定恢复期血浆t-pA及PAI水平,有助于对血栓前状态的了解,并对预测脑血栓形成的复发有一定的意义。     

抗栓酶3号对家兔血浆组织型纤溶酶原激活剂及其抑制物的影响

本文采用纤溶酶特异的发色底物分解产色法对注射不同剂量抗栓酶3号(Svate-3)的家兔血浆组织型纤溶酶原激活物(tPA)及其抑制物(PAI)的活性作了检测。结果发现给药后tPA活性增高.PAI活性降低.并与给药剂量及速度有关.血纤平板纤溶面积与tPA活性呈显著正相关(r=0.861;P<0.01),与PAI活性呈负相关(r=-0.769;P<0.01)因此认为Svate—3的溶纤作用可能与血管内皮tPA释放增加及PA I活性降低有关.     

动脉粥样硬化与血栓形成的相关研究

目的探讨脂蛋白（a）（Lp（a））、纤维蛋白原（Fg）、组织纤溶酶原激活物（t—PA）、纤溶酶原激活抑制物（PAI）与动脉粥样硬化（AS）的关系。方法检测75例As患者血清（Lp（a）和血浆Fg、t—PA、PAI的浓度。另外选择健康人群65例作为对照组（CG）。结果（1）AS患者Lp（a）、Fg、PAI浓度明显高于健康对照组（CG）（P〈0．01）;（2）AS患者t-PA浓度明显低于健康对照组（CG）（P〈0．05）。结论测定脂蛋白（a）、纤维蛋白原、组织纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活抑制物有助于了解AS患者的病情变化和指导临床治疗及判断预后。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体对家兔纤溶和凝血系统活性的影响

目的 :观察重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体 (reteplase ,Ret)对家兔纤溶和凝血系统活性的影响。方法 :采用常规方法测定家兔血液纤溶和凝血系统相关参数指标。结果 :Ret(3.75、7.5 0、15 .0MIU·kg-1)可明显降低纤溶酶原含量 ,使血浆纤维蛋白降解产物转呈阳性反应 ,缩短优球蛋白溶解时间 ,同时延长血浆凝血酶时间 ,凝血酶原时间及活化部分凝血活酶时间。结论 :Ret可促进血液纤溶系统活性和抑制凝血系统活性     

慢性肾功能不全病人纤溶活性、内皮素及D-二聚体的临床观察

为探讨慢性肾功能不全病人心血管病发生危险性增加的原因，根据血压的高低将43例分为轻度高血压组22例(舒张压＜100mmHg)和中度高血压组21例(舒张压≥100mmHg)，分别检测血纤溶酶原活性抑制物(PAI)、组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)、D-二聚体(DDi)及内皮素(ET)的水平。结果表明，与正常对照组比较，轻度和中度高血压组t—PA明显下降(P均＜0．05)；PAI、DDi及ET水平显升高(轻度组P均＜0．05，中度组P均＜0．01)。中度组与轻度组比较，PAI、DDi和ET水平显升高(PAI、DDiP均＜0．05，ETP＜0．01)；t—PA水平略降低(P＞0．05)。43例慢性肾衰病人平均动脉压与ET之间呈正相关(P＜0．01)；与PAI及DDi之间呈正相关(P均＜0．05)。结论：慢性肾衰肾实质性高血压与血管收缩、血液高凝状态和纤溶活性降低有关，推测慢性肾衰血管内皮损伤致血液高凝状态和纤溶活性降低可能增加心血管疾病发生的危险性。     

人脐静脉内皮细胞 1-磷酸鞘氨醇受体鉴定及其应用探讨

摘要： 目的 鉴定人脐静脉内皮融合细胞株 EA.hy926 和人脐静脉内皮细胞 （HUVEC） CRL-1730 1-磷酸鞘氨醇受体 （S1PR） 亚型和胞浆中 C-myc 及 His 标签蛋白的表达情况, 为研究载脂蛋白 M （ApoM） -1-磷酸鞘氨醇轴 （ApoMS1P 轴） 的功能提供参考。方法 体外培养 EA.hy926 及 CRL-1730 至细胞密度达到 60%～70%时, 采用细胞免疫荧光技术鉴定内皮细胞标志凝血八因子（FⅧ）、 ApoM、 S1PR1~S1PR5、 C-myc 和 His 标签蛋白。结果 （1）两种细胞均表达 FⅧ和 ApoM, FⅧ在 CRL-1730 中呈散在颗粒状分布, 在 EA.hy926 中呈均匀分布。（2）两种细胞均主要表达 S1PR1, 少量表达 S1PR2 和 S1PR3, 不表达 S1PR4 和 S1PR5。（3）两种细胞胞浆中均有 C-myc 和 His 标签蛋白的表达。结论 两种细胞都具有内皮细胞的特性; 因其自身表达 ApoM、 C-myc 和 His 标签蛋白, 在应用这两种细胞研究 ApoM-S1P 轴的功能时, 不适合选用带有 C-myc 和 （或） His 标签的重组 ApoM 蛋白。     

人脐静脉内皮细胞的培养观察与鉴定

目的探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养、观察及鉴定方法,建立人血管内皮细胞的培养模型,为体外研究动脉硬化发病机制提供重要的实验手段。方法采用终浓度为0．125%胰蛋白酶+0．01% EDTA或0．1%Ⅱ型胶原酶消化、分离脐静脉内皮细胞进行培养,以0．25%胰蛋白酶进行消化传代,并用光镜、电镜和免疫组化等方法进行内皮细胞的形态观察和鉴定。结果原代培养的内皮细胞在接种后约1h开始贴壁生长,5～7d融合成单层。光镜下内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列；免疫组化可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应；电镜下可见胞浆巾有W-P小体,证实培养的细胞为内皮细胞。结论用酶灌注消化法消化脐静脉可获得高纯度的内皮细胞,细胞存活率高。本方法为血管内皮细胞的研究提供了实验模型。     

血浆t—PA、PAI活性在恶性淋巴瘤患者中测定的临床意义

应用发色底物比色分析法,对42例正常人和52例恶性淋巴瘤病人血浆组织纤溶酶原激活剂(t—PA)及其抑制剂(PAI)活性进行了检测。结果显示,恶性淋巴瘤病人血浆t—PA活性较正常组显著降低,而PAI活性则明显升高;且t—PA、PAI活性与恶性淋巴瘤的分型及分期有关。提示恶性淋巴瘤病人存在纤溶系统的损伤。     

Effects of rhizoxin,a microbial angiogenesis inhibitor,on angiogenic endothelial cell functions

Our previous study revealed that rhizoxin ([1S-[1R*,3R*,5S*,8R*(1R*,2S*,3E,5E,7E),10R*,11S*,13S*,14E,16S*,17S*]]-10-hydroxy-8-[2-methoxy-1,3,7-trimethyl-8-(2-methyl-4-oxazolyl)-3,5,7-octatrienyl]-11,16-dimethyl-4,7,12,18-tetraoxatetracyclo[15.3.1.03,5.011,13]heneicos-14-ene-6,19-dione) has a potent inhibitory effect on in vivo angiogenesis. However, little is known regarding the mechanism by which rhizoxin exhibits antiangiogenic activity. In this study, we examined its effects on the functions of endothelial cells associated with neovascular formation in vivo, using cultured vascular endothelial cells. Rhizoxin concentration-dependently inhibited the proliferation of bovine carotid artery endothelial cells, human umbilical vein endothelial cells and human dermal microvascular endothelial cells, the IC(50) values being 7, 5 and 0.4 nM, respectively. In addition, it reduced the extracellular plasminogen activator level in bovine vascular endothelial cells in the low nM range, and suppressed the migration of human dermal microvascular endothelial cells in the pM range. Furthermore, it blocked the tubular morphogenesis of human umbilical vein endothelial cells and human dermal microvascular endothelial cells on Matrigel in a concentration-dependent manner; the IC(50) values being 40 and 130 pM, respectively. These results suggest that rhizoxin exhibits antiangiogenic activity through the combined inhibition of some functions of endothelial cells responsible for induction of in vivo angiogenesis.     

MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响

目的　观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法　采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果　对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

Inhibitory effect of lead on the release of tissue plasminogen activator from human vascular endothelial cells in culture.

To evaluate the toxicity of lead on the blood fibrinolytic system, vascular endothelial cells from human umbilical vein were cultured in the presence of lead and the content of tissue plasminogen activator antigen (t-PA:Ag) released into the medium was determined by enzyme immunoassay. It was found that lead significantly decreased the t-PA:Ag release from the cells. Although heavy metals including cadmium, mercury, cobalt, manganese, nickel, zinc and copper as well as lead each had an inhibitory effect, lead was the potent inhibitor. Lead significantly disturbed thrombin up-regulation of t-PA:Ag release and significantly amplified endothelin-1 down-regulation of it. Incorporation of [3H]thymidine into the acid-insoluble fraction of the cell layer was significantly increased by lead; however, that of [14C]leucine was unchanged by the metal. In lead-treated cells, a significant accumulation of lead was observed but calcium content was increased slightly. From these results, it was suggested that lead decreased the release of t-PA:Ag from cultured endothelial cells without nonspecific inhibition of protein synthesis; lead may stimulate the calcium-dependent down-regulation of endothelial cell t-PA:Ag release by calcium or by mimicking calcium.     

EFFECT OF HOMOCYSTEINE ON THE PRODUCTION OF NITRIC OXIDE IN ENDOTHELIAL CELLS

1. Homocysteine decreased the release of nitric oxide in cultured human umbilical vein endothelial cells. 2. Homocysteine did not affect constitutive and inducible nitric oxide synthase activity.     

Selective promotion of plasminogen activator inhibitor-1 secretion by activation of proteinase-activated receptor-1 in cultured human brain microvascular pericytes: comparison with endothelial cells

Microvessels are composed of endothelial cells that cover the luminal surface and pericytes that wrap around and along endothelial cells. In the present study, we investigated the regulation of fibrinolysis in cultured human brain microvascular pericytes and endothelial cells after exposure to thrombin. It was found that the regulation in pericytes is different from that in endothelial cells. Specifically, thrombin increases the secretion of fibrinolytic proteins (tissue- and urokinase-type plasminogen activators and plasminogen activator inhibitor-1), resulting in an enhancement of plasminogen activator activity in endothelial cells, whereas the proteinase increases the secretion of only plasminogen activator inhibitor-1 by activation of proteinase-activated receptor-1 and induces suppression of plasminogen activator activity in pericytes. The present data suggest that thrombin regulation of fibrinolytic activity in endothelial cells and pericytes may be involved in the removal of intravascular thrombi and the maintenance of hemostasis, respectively, in human brain microvessels.