5-Aza-CdR对胃癌细胞系BGC823生长及p27 kipl基因异常甲基化的影响

选择浓度为1×10-6mol/L的5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理体外培养的BGC823细胞后,用AO染色检测药物处理后细胞增殖情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中p27kipl的mRNA表达的变化.结果 显示,药物作用细胞增殖明显受到抑制,p27kipl基因的甲基化状态得到了逆转,p27kipl基因的mRNA表达得到增加.认为5-Aza-CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,p27kipl基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.     

5-Aza—CdR对胃癌细胞系BGC823生长及p27kip1基因异常甲基化的影响

选择浓度为1×10-6mol/L的5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理体外培养的BGC823细胞后,用AO染色检测药物处理后细胞增殖情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中p27kipl的mRNA表达的变化.结果 显示,药物作用细胞增殖明显受到抑制,p27kipl基因的甲基化状态得到了逆转,p27kipl基因的mRNA表达得到增加.认为5-Aza-CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,p27kipl基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.     

5-Aza-CdR体外诱导胃癌细胞系p16基因去甲基化及表达增强

目的: 观察去甲基化制剂--5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901 p16基因启动子区甲基化状态及表达的影响, 探讨胃癌细胞p16基因失活的机制及去甲基化制剂对p16基因表达的调控.方法:应用不同浓度的5-Aza-CdR(1×10-7, 5×10-7, 1×10-6, 5×10-6 mol/L)处理体外培养的胃癌细胞SGC7901后, MSP法检测用药前后细胞中p16基因的甲基化状态, RT-PCR及 Western-blot法检测用药前后细胞中p16基因mRNA及蛋白表达的变化.结果: p16基因在胃癌细胞系SGC7901中启动子区呈异常甲基化状态, 在mRNA及蛋白水平低表达. 经过1×10-7, 5×10-7, 1×10-6, 5×10-6 mol/L 5-Aza-CdR处理后, p16基因启动子区呈去甲基化状态, 各组mRNA及蛋白表达相应的比值分别与处理前的比例为2.21±0.36, 2.01±0.31;2.82±0.39, 2.22±0.33;2.98±0.42, 3.15±0.43及3.35±0.55, 3.75±0.61.结论:5-Aza-CdR能逆转胃癌细胞p16基因甲基化状态, 调控p16基因表达.     

5-Aza-CdR对胃癌细胞系BGC823生长及DAPK1基因甲基化的影响

目的观察5．氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-CaR）对体外培养的胃癌BGC823细胞增生和凋亡的影响及其对此细胞中DAPK1基因的甲基化状态的影响。方法选择浓度为1×10^-6的5-Aza-CdR处理体外培养的BGC823细胞后,用Annexin—v—FITC凋亡检测药物处理后细胞凋亡情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT—PCR法检测用药前后细胞中DAPKI的mRNA表达的变化。结果在药物作用24、48、72h后细胞的凋亡率分别为5．83±0．53、9．23±0．58、15．34±0．90,较对照组明显增加（P〈0．05）。DAPK1基因的甲基化状态得到了逆转,DAPK-1基因的mRNA表达得到增加。结论5-Aza—CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,并促进细胞凋亡。DAPK1基因表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人胃癌SGC-7901细胞株生长及EDNRB基因启动子异常甲基化的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞株的生长及EDNRB基因启动子异常甲基化的影响.方法:使用1、2、5、10μmol/L5-Aza-CdR干预胃癌SGC-7901细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测药物干预前后EDNRB基因的甲基化状态和EDNRB mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CdR处理的SGC-7901细胞中EDNRB基因启动子区域CpG岛高甲基化,且EDNRB mRNA不表达,经1、2、5、10μmol/L5-Aza-CdR处理4d后,EDNRB基因启动子区域高甲基化状态得到逆转,细胞中EDNRB mRNA表达恢复.4种浓度5-Aza-CdR处理的SGC-7901细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈时间和剂量依赖性;并抑制SGC-7901细胞生长周期,其细胞周期阻滞于S期,5、10μmol/L5-Aza-CdR实验组细胞凋亡率显著高于对照组,且差异有统计学意义(7.13%±0.87%,13.34%±1.12% vs 3.69%±...     

Celecoxib对胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celecoxib对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响.方法:采用MTT法测定人胃癌细胞株SGC7901分别在1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9mol/L的Celecoxib作用48h后生长抑制情况;流式细胞术(FCM)观察Celecoxib对SGC7901细胞凋亡的影响;采用免疫细胞化学染色观察Survivin的表达.结果:Celecoxib浓度为1×10-5-1×10-9mol/L时,对SGC7901细胞的生长均有抑制作用,以1×10-5mol/L浓度的抑制作用最为显著,其抑制率为30.03%;1×10-5mol/LCelecoxib作用12,24,48h后,细胞凋亡比例较对照组均明显增加,48h凋亡率达17.83%;1×10-5mol/LCelecoxib作用后,Survivin的表达自用药3h起下降,24h最明显.结论:Celecoxib可诱导SGC7901细胞的凋亡,其可能的作用机制为抑制细胞Survivin基因的表达.     

小干扰RNA SOX5对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨Y染色体上的性别决定区相关高迁移率族盒蛋白-5(SOX5)的小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞BGC823增殖及凋亡的影响。[方法]通过qRT-PCR和Western-blot分别检测胃癌细胞系(SGC7901,BGC823,AGS,HGC27)及正常胃上皮细胞GES-1中SOX5 mRNA和蛋白的表达情况;取对数生长周期的胃癌细胞BGC823,通过Lipofiectamine2000将设计合成的SOX5的特异性siRNA以及NC转染BGC823细胞,作为siSOX5组和NC组,不做任何处理的细胞作为空白对照组。qRT-PCR检测各组细胞中SOX5 mRNA的表达情况;Western-blot检测各组SOX5及CyclinD1、P21、Bax、Bcl-2蛋白的表达;MTT检测转染12 h、24 h、48 h、72 h后,各组细胞的增殖情况;流式细胞仪检测转染72 h后各组细胞的凋亡情况。[结果]与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC7901,BGC823,AGS,HGC27中SOX5 mRNA和蛋白表达升高(P0.05);转染siSOX5后,siSOX5组SOX5 mRNA及蛋白表达降低(P0.05);MTT结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞增殖受到抑制,且CyclinD1蛋白表达水平显著下降,p21蛋白表达显著升高(P0.05);流式细胞检测结果显示:与空白对照组和NC组相比,siSOX5组细胞凋亡率升高,且Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P0.05)。[结论]干扰SOX5能够降低胃癌BGC823细胞中SOX5的表达,抑制BGC823细胞的增殖并促进凋亡。     

MicroRNA-133a在5-氟尿嘧啶促进胃癌细胞BGC823及SGC7901细胞凋亡中的功能研究

[目的]研究microRNA-133a(miR-133a)在5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901凋亡中的作用。[方法]用荧光定量PCR检测经5-Fu(IC50值)处理过胃癌细胞miR-133a的表达;构建过表达miR-133a的胃癌细胞株并行细胞增殖、细胞流式验证miR-133a的生物学功能;5-Fu分别处理过表达及敲低miR-133a的胃癌细胞株后,行细胞增殖、细胞流式、Western Blot观察细胞生长及凋亡情况。[结果]5-Fu诱导BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达(50%,P0.0001,24h),miR-133a促进胃癌细胞凋亡,敲低miR-133a可以抑制5-Fu对胃癌细胞的促凋亡作用。[结论]5-Fu通过诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达,促进胃癌细胞凋亡。     

hCTB006联合伊立替康对胃癌细胞BGC823、SGC7901协同杀伤的作用机制

目的:研究人死亡受体(death receptor5,DR5)激动型抗体hCTB006联合伊立替康对不同分化程度胃癌细胞BGC823、SGC7901的体外抑瘤作用,并对其诱导胃癌细胞凋亡的机制进行初步探讨.方法:实验将BGC823、SGC7901细胞分为伊立替康组、hCTB006组和两者联合应用组,应用ATPlite法研究各组药物的体外抑瘤作用;采用ELISA法研究伊立替康处理胃癌细胞前后DR5表达的变化.采用Western blot技术检测药物处理前后BGC823、SGC7901细胞X-联锁凋亡抑制蛋白(X-chromosome-linked inhibitory of apoptosis protein,XIAP)的表达变化情况.结果:BGC823对hCTB006中度敏感,对SGC7901不敏感,伊立替康对胃癌细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性,与hCTB006联合用药后对BGC823具有良好的协同抑制作用,但对SGC7901协同作用不明显.ELISA测得伊立替康处理后胃癌细胞DR5的表达量无明显变化.但伊立替康和hCTB006联合用药可使胃癌细胞BGC823内XIAP水平明显降低,而对SGC7901细胞内XIAP没有明显作用.结论:伊立替康联合hCTB006后对低分化胃癌细胞BGC823的增殖有明显协同抑制作用,而对中度分化的SGC7901细胞呈拮抗作用,这种诱导胃癌细胞凋亡的机制可能与其DR5的表达无关,而与联合作用后细胞抑凋亡蛋白XIAP的表达水平有关.     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法

目的 对神经母细胞瘤(NB)进行体外培养，探讨神经母细胞瘤(NB)体外建系的方法。方法 NB患儿新鲜手术标本，采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系；用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化；从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定，证实所培养细胞是否为NB细胞。结果 两种细胞培养法均可培养出NB细胞，纯化后可得形态均一的细胞系。结论 可采用适当的细胞培养方法建立神经母细胞瘤的体外细胞系。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的探讨趋化因子配体16（CXCL16）对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响。方法取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加入50、1013、200ng／ml的重组人CXCL16（rhCXCL16）和抗CXCL16抗体处理4h,以不加rhCLCL16作为对照。采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果100ng／ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0．264±0．021、（91．4±8．6）％、1．246±0．216、1．361±0．276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的（20．6±3．2）％、0．259±0．013、0．199±0．008（P〈0．01）,对细胞的增殖不影响;2130ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到（92．1±6．3）％、1．511±0．174、1．600±0．208（P〈0．05）。结论CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性。     

趋化因子配体16对人胰腺癌细胞株PANC1生物学行为的影响

目的 探讨趋化因子配体16(CXCL16)对人胰腺癌细胞PANC1生物学行为的影响.方法 取对数生长期的人胰腺癌细胞PANC1,分别加人50、100、200 ng/ml的重组人CXCL16(rhCXCL16)和抗CXCL16 抗体处理4 h,以不加rhCLCL16作为对照.采用MTT法检测细胞增殖,采用Mqrtigel基质检测细胞的黏附率,采用Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力.结果 100 ng/ml rhCXCL16处理PANC1细胞后,细胞增殖、对基质的黏附率、侵袭和迁移能力分别为0.264±0.021、(91.4±8.6)%、1.246±0.216、1.361±0.276,其中细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力均显著高于对照组的(20.6±3.2)%、0.259±0.013、0.199±0.1308(P<0.01),对细胞的增殖不影响;200ng/ml rhCXCL16处理后,细胞对基质的黏附率、侵袭和迁移能力进一步提高到(92.1±6.3)%、1.511±0.174、1.600±0.20s(P<0.05).结论 CXCL16可诱导人胰腺癌细胞PANC1增强对基质的黏附性、侵袭性和迁移性.     

膀胱癌细胞凋亡和细胞增殖的表达及意义

目的 观察膀胱癌细胞凋亡与细胞增殖的表达,探讨细胞凋亡指数和细胞增殖指数的比值(AI/PI)与膀胱癌病理分级、分期及预后的关系。方法 利用原位末端标记技术(TUNEL),增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组织化学染色,观察48例膀胱癌患者细胞凋亡与细胞增殖的表达。结果AI/PI随肿瘤病理分级和分期升高而增高,各分级和分期的AI/PI比较,差异有统计学意义(P<0.05)。AI/PI>0.01者的生存时间比AI/PI<0.01者明显延长,差异有显著性意义(P<0.01)。结论AI/PI可作为判断肿瘤恶性程度及预后的重要指标。     

普罗布考对糖尿病小鼠脂肪间充质干细胞功能的影响

目的探讨普罗布考对糖尿病鼠脂肪来源的间充质干细胞（ADSC）功能的影响。方法体外分离培养ADSC,应用流式细胞术对3～5代细胞表面抗原CD34、CD45、CD90、CD105进行表型鉴定。将ADSC分为：①正常ADSC对照组;②正常ADSC+普罗布考组;③糖尿病ADSC对照组;④糖尿病ADSC+普罗布考组;⑤正常ADSC+高糖（30mmol/L）组;⑥正常ADSC+高糖+普罗布考组。应用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况。应用ELISA和实时定量PCR检测各组细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）蛋白和mRNA表达水平。应用二氯醋酸荧光素探针检测各组细胞活性氧（ROS）含量。结果ADSC表达CD90和CD105,不表达CD34和CD45;与正常ADSC对照组相比,糖尿病ADSC增殖能力和迁移能力下降,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平降低。与糖尿病ADSC对照组相比,糖尿病ADSC+普罗布考组增殖能力和迁移能力增加,VEGF、HGF、IGF-1蛋白和mRNA表达水平上升。结论糖尿病能损伤ADSC的生物学特性。普罗布考对糖尿病鼠ADSC增殖、迁移和分泌能力具有保护作用。     

Determination of growth fraction and cell density to evaluate the potential growth of human oligodendroglial and astrocytic tumours

The object of this work was Purpose: to develop a methodology that enables net tumour growth, a balance between actual tumour growth and tumour cell loss, to be approximately evaluated. Methods: The methodology proposed relies on detecting the growth fraction immunohistochemically by means of MIB-1 antibody labelling combined with cell density determination, carried out on 5-μm-thick Feulgen-stained histological sections with computer-assisted microscopy. The series investigated included 25 oligodendrogliomas (OLG-II), 9 anaplastic oligodendrogliomas (OLG-III), 13 astrocytomas (AST), 14 anaplastic astrocytomas (ANA) and 8 mixed oligoastrocytomas (OLG-AST). Results: The results show that the biological characteristics of some cases were in total accordance with their histopathological diagnoses. This was the case for the “weakly proliferating weakly dense” OLG-II and AST-II tumours, and for the “highly proliferating highly dense” OLG-III and AST-III ones. In contrast, the biological characteristics of some cases seemed to contradict the histopathological case labels. This was the case for the “highly proliferating highly dense” OLG-II and AST-II tumours, the biological aggressiveness of which would be undervalued on the basis of the morphology-based grading system alone, and also for the “weakly proliferating weakly dense” OLG-III and AST-III tumours, the aggressiveness of which would be overvalued. Conclusions: Combining the determinations of the MIB-1 and the cell density variables appears to be satisfactory in terms of the cell kinetic characterization of glial tumours as a complement to the prognostic information given by a morphology-based grading system alone. Received: 6 January 1998 / Accepted: 3 April 1998     

槐耳清膏对结肠癌细胞生长和迁移的影响及其作用机制

目的中药槐耳清膏具有抗肿瘤效应,但其对结肠癌的作用及机制尚不清楚。本研究旨在探讨槐耳清膏对人结肠癌细胞生长和迁移的影响及作用机制。 方法体外培养人结肠癌细胞系HCT116,采用MTT法检测槐耳清膏对肿瘤细胞生长的抑制作用;采用Boyden趋化小室检测槐耳清膏对肿瘤细胞迁移能力的影响;采用荧光定量PCR法检测药物对MMP-9表达的影响;应用流式细胞技术检测药物对细胞凋亡和细胞周期的影响。 结果槐耳清膏对HCT116细胞生长有明显的抑制作用,该抑制作用具有药物剂量和时间依赖性。与细胞共培养96小时后,槐耳淸膏的抑制作用最强;与对照组相比,10 mg/mL、20 mg/mL和30 mg/mL槐耳淸膏对肿瘤细胞的抑制作用分别为25%(P＝0.025),42%(P＝0.032)和67%(P＝0.018)。槐耳清膏能明显抑制肿瘤细胞的迁移,11 mg/mL药物的抑制率为63%(P＝0.01);槐耳清膏(8mg/mL和11mg/mL)处理后的肿瘤细胞中MMP-9的表达量下降(2.73±0.32 vs 4.8±0.36,P＝0.02;1.46±0.25 vs 4.8±0.36,P＝0.004);槐耳清膏可阻滞细胞停留在S期,但对细胞凋亡无明显影响。 结论体外试验证实槐耳清膏对结肠癌细胞的生长及迁移能力具有抑制作用,其作用机制可能是阻滞细胞停留在S期和下调MMP-9的表达。     

改良的乳猪肝细胞微载体粘附培养方法

目的改进常用的肝细胞手工震荡微载体粘附培养技术,提高肝细胞粘附率.方法用磁力悬浮培养容器使肝细胞轻度聚集,然后加入微载体Cytodex-3培养,在控制低转速的情况下使肝细胞更易粘附在微载体上.结果磁力搅拌粘附培养的肝细胞粘附率高(90.3%±7.7%)且较稳定(变异系数8.6%),明显优于手工震荡粘附培养(粘附率69.5%±18.3%,变异系数26.4%,P＜0.005);前2周内的白蛋白合成功能亦强于手工震荡粘附培养(P＜0.05).结论磁力搅拌粘附培养肝细胞粘附率高、重复性强、稳定性好、操作方便,且减少了肝细胞受污染的机会.     

A comprehensive meta‐analysis of stem cell therapy for chronic angina

Background

A substantial proportion of patients with coronary artery disease do not achieve complete revascularization and continue to experience refractory angina despite optimal medical therapy. Recently, stem cell therapy has emerged as a potential therapeutic option for these patients. However, findings of individual trials have been scrutinized because of their small sample sizes and lack of statistical power. Therefore, we conducted an updated comprehensive meta‐analysis of available randomized controlled trials (RCTs) with the largest sample size ever reported on this subject.

Hypothesis

In patients with chronic angina stem cell therapy improves clinical outcomes.

Methods

Scientific databases and websites were searched for RCTs. Data were independently collected by 2 investigators, and disagreements were resolved by consensus. Data from 10 trials including 658 patients were analyzed.

Results

Stem cell therapy improved Canadian Cardiovascular Society angina class (risk ratio: 1.53, 95% CI: 1.09 to 2.15, P = 0.013), exercise capacity (standardized mean difference [SMD]: 0.56, 95% CI: 0.23 to 0.88, P = 0.001), and left ventricular ejection fraction (SMD: 0.63, 95% CI: 0.27 to 1.00, P = 0.001) compared with placebo. It also decreased anginal episodes (SMD: –1.21, 95% CI: –2.40 to ?0.02, P = 0.045) and myocardial perfusion defects (SMD: –0.70, 95% CI: –1.11 to ?0.29, P = 0.001). However, no improvements in all‐cause mortality were observed after a relatively short follow‐up.

Conclusions

In patients with chronic angina on optimal medical therapy, stem cell therapy improves symptoms, exercise capacity, and left ventricular ejection fraction. These findings warrant confirmation using larger trials.