肺间质纤维化大鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原的表达

目的 探讨α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在肺间质纤维化中的意义.方法 发将64只Wistar大鼠随机分为对照组和博莱霉素模型组.在第3天、第7天、第14天和第28天,HE染色观察大鼠肺组织结构的改变,免疫组织化学法测定肺组织α-SMA和Ⅰ型胶原的表达,同时用流式细胞术检测肺组织单细胞悬液α-SMA的相对含量.结果 博莱霉素模型组大鼠肺组织α-SMA和Ⅰ型胶原的表达在各时间段均高于对照组(P<0.05),并且两种因子表达呈正相关.同时,博莱霉素模型组各时间段两种因子测定结果 均结果 的差异有统计学意义(P<0.05).结论 经 肺间质纤维化大鼠肺组织α-SMA表达增高,预示肌纤维母细胞的形成,导致Ⅰ型胶原堆积,从而引起肺纤维化.     

α-生育酚对慢性胰腺炎大鼠胰腺纤维化的影响

目的 观察抗氧化剂α-生育酚对慢性胰腺炎(CP)大鼠胰腺纤维化的作用,探讨其机制.方法 雄性Wistar大鼠按完全随机法分为对照组、ANP组、α-生育酚组.采用尾静脉单次注射8 mg/kg体重二丁基二氯化锡( dibutyltindich loride,DBTC)造模.造模24h后,α-生育酚组大鼠给予800 mg/kg体重的α-生育酚灌胃,每日1次,持续4周.ANP组和对照组给予0.6 ml色拉油灌胃.4周后处死大鼠,取胰腺组织行病理评分及胶原染色,检测胰腺组织丙二醛( MDA)和羟脯氨酸水平,实时定量PCR法检测胰腺组织TGF-β1 mRNA表达.结果 灌胃4周后,α-生育酚组大鼠胰腺组织炎症、纤维沉积、异常结构等损伤均较ANP组明显减轻;胰腺组织MDA和羟脯氨酸水平较ANP组显著降低[(0.40±0.20)nmol/100mg蛋白比(1.07±0.41) nmol/100mg蛋白;(402.49±27.62) μg/g蛋白比(664.92±29.04) μg/g蛋白,P值均＜0.05];胰腺TGF-β1 mRNA表达较ANP组显著降低(2.24±0.89比3.35±0.66,P＜0.05).结论α-生育酚通过降低CP大鼠的体内氧化应激水平,降低TGF-β1 mRNA表达,从而减轻胰腺组织的炎症反应和纤维化程度.     

软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1表达和I型胶原水平的影响

目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1表达和I型胶原水平的影响。方法 40只C57小鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、软肝化坚颗粒低剂量组及高剂量组,每组10只。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测肝组织中α-SMA、TGFβ1和I型胶原的表达,同时进行肝组织纤维化评分(S)。结果各模型组肝组织α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原表达和纤维化评分与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组肝组织α-SMA和TGFβ1及Ⅰ型胶原评分和纤维化评分较模型对照组均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组和高剂量组α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原评分及肝纤维化评分之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论软肝化坚颗粒可能通过抑制C57小鼠肝组织TGFβ1的产生,进而抑制肝星状细胞(HSC)的活化,减少细胞外基质(ECM)的合成,从而降低I型胶原增生,达到预防和治疗肝纤维化的作用。     

氧化苦参碱对肝纤维化胶原代谢及其基因的影响

用大鼠四氯化碳(CCl4)中毒性肝纤维化模型,观察氧化苦参碱对肝内胶原基因的影响及组织病理改变的影响,进一步研究其在体内抗肝纤维化的作用。 1.材料与方法:(1)主要试剂:氧化苦参碱(上海生物化学试剂厂产品,纯度98％),CCl4(上海化学试剂厂产品),羟脯氨酸(Hyp)标准品(美国Sigma公司产品),RNA抽提试剂盒(上海华美公司产品),地高辛标记及检测试剂盒(德国     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

转化生长因子β1Ⅱ型受体在大鼠慢性胰腺炎中的表达及氧化苦参碱对其的影响

目的:探讨转化生长因子β1Ⅱ型受体(TβRⅡ)在慢性胰腺炎(CP)纤维化病理进程中的作用,研究氧化苦参碱(OM)对胰腺纤维化的作用机制.方法:40只Wistar♂大鼠随机分为4组,即阴性对照组(NC组,n=10),CP模型组(CP组,n=10),OM干预组(OP组,n=10)和OM治疗组(OT组,n=10).NC组隔日给予腹腔注射生理盐水300mg/kg;其他每组均隔日腹腔注射二乙基硫代氨基甲酸盐(DDC)700mg/kg,30d停止.另外OP组于注射DDC同日开始每日腹腔注射OM100mg/kg,OT组于注射DDC1wk后开始每日腹腔注射OM100mg/kg,分别于注射DDC20d、40d后处死动物.胰腺组织行HE染色和Masson胶原染色并进行病理学评分,Western blot检测胰腺组织TβRⅡ的表达.结果:Masson染色测定结果显示,在20d、40d时CP组胶原纤维含量显著高于其余各组(20d:22.54%±4.45%vs13.16%±1.84%,19.58%±2.78%,2.45±0.24%;40d:35.14%±3.27%vs25.14%±3.67%,28.68%±2.55%,3.0%±0.3...     

α-SMA在慢性乙型病毒性肝炎肝组织中的表达

探讨慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者肝组织中,α-SMA的表达对肝脏炎性损伤和肝纤维化程度的病理诊断意义。采用免疫组化技术,观察12 7例CHB患者肝穿刺组织中α-SMA的表达,结果与现行病理诊断标准慢性肝炎分级、分期及Knodell-HAI评分系统进行统计学比较。另有6例作为对照,其中急性肝炎3例,静止性肝硬化3例。α-SMA在CHB、急性肝炎及静止性硬化三组中均有表达。主要定位在扩大的汇管区及其周围,以及小叶内点灶状坏死部位。且α-SMA表达与慢性肝炎病理分级(G)、分期(S)及Knodell-HAI评分呈显著正相关。α-SMA是判断慢性乙型肝炎肝损伤程度及纤维化程度的一个重要指标。     

氧化苦参碱对胰腺星状细胞中脂多糖诱导的NF-κB表达的影响

目的:观察氧化苦参碱(oxymatrine,OM)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导胰腺星状细胞(LTC-14细胞株)中核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)表达和核易位的影响.方法:体外培养LTC-14细胞,分别用相应浓度的LPS和/或OM刺激后,检测NF-κB的表达.用MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学技术检测LTC-14细胞胞浆和胞核内NF-κB的表达,实时荧光定量PCR检测细胞内NF-κB mRNA的表达,Western blot法检测NF-κB蛋白含量.结果:OM呈时间-剂量依赖性地抑制LTC-14细胞增殖,LPS(10μg/mL)刺激LTC-14细胞引起NF-κB mRNA及其蛋白表达量增高,NF-κB核内易位量明显增加,OM干预后可以下调NF-κB mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB核内易位.结论:对LPS诱导的LTC-14细胞NF-κB mRNA、蛋白表达及NF-κB向核内易位抑制作用可能是OM治疗胰腺纤维化的机制之一.     

氧化苦参碱在防治胰腺纤维化的研究前景及临床应用价值

研究证实胰腺星状细胞激活是胰腺疾病胰腺纤维化(pancreatic fibrosis, PF)起始与发展的中心环节,但是PF的具体机制尚不清楚,针对PF也无特异性治疗措施.部分基础研究证实中药成分氧化苦参碱(oxymatrine, OMT)对PF有一定的治疗作用,但需要进一步深入研究.可以预见OMT对防治PF具有深远的研究前景和良好的临床应用价值,也有利于更好地开发和利用传统中草药苦参.     

姜黄素激活PPARγ下调肝星状细胞α-SMA和Ⅰ型胶原的基因表达

[目的]研究姜黄素抑制大鼠肝星状细胞（HSC）活化作用与过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）信号转导途径之间的关系。[方法]肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心方法分离培养大鼠HSC，并使用姜黄素对细胞进行相应处理，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法检测姜黄素对细胞增殖的影响。收集裂解细胞并抽提细胞总RNA，采用半定量RT-PCR检测姜黄素处理对α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原的基因表达水平的影响。[结果]姜黄素在10-50μmol／L范围内呈剂量依赖性抑制体外培养大鼠传代HSC的增殖，且能在基因水平显著降低α-SMA（P〈0．05）和Ⅰ型胶原的基因表达水平（P〈0．01）。这些作用均可以被PPARγ特异性阻断剂GW9662阻断。[结论]姜黄素抑制HSC增殖、活化和合成Ⅰ型胶原的作用依赖于PPARγ信号转导途径的激活。     

实验性慢性肾缺血模型肾小管-间质细胞a-平滑肌肌动蛋白的表达和意义

目的:观察单侧肾动脉狭窄(RAS)大鼠模型慢性肾缺血组织中肾小管-间质a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达和意义。 方法:建立Goldblatt单侧RAS大鼠模型,观察大鼠慢性缺血肾脏在90天内不同阶段的病理改变;应用免疫组化法检测肾小管-间质a-SMA及波形蛋白(vimentin)在不同时间点的表达;应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察细胞角蛋白(cytokeratin,CK)与a-SMA在肾小管上皮细胞中的共定位情况。 结果:RAS术后第5天首先出现肾小管vimentin阳性,术后第7天肾间质可见少量的a-SMA阳性细胞并随时间递增。通过连续切片观察到,vimentin阳性的肾小管周围肾间质细胞a-SMA表达增强,并与肾小管间质纤维化程度基本一致。当慢性缺血状态持续存在时,后期(术后第45天至90天)少数损伤的肾小管上皮细胞表达a-SMA。应用免疫荧光双标记激光共聚焦显微镜观察发现,部分a-SMA阳性的肾小管上皮细胞同时表达CK,并且个别细胞还有向间质游走的趋势。 结论:在慢性肾缺血早期Vimentin阳性的肾小管上皮细胞本身可能诱导了肾间质固有细胞发生肌成纤维细胞转分化,参与肾间质纤维化的发生和发展;在慢性肾缺血后期,肾小管上皮细胞转分化可能是导致肾纤维化进行性发展的关键环节。     

骨形成蛋白-7在慢性胰腺炎中的表达及意义

目的 研究骨形成蛋白-7(BMP-7)在大鼠CP组织中的表达,探讨其在胰腺纤维化形成中的意义.方法 每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate, DDC)建立大鼠CP模型.HE染色观察正常组及造模后2、4、6、8周时大鼠胰腺病理学变化,VG染色观察胶原纤维含量,免疫组化检测BMP-7、TGF-β1、Smad2/3的表达.结果 (1)正常组BMP-7在腺泡细胞的胞质中表达.造模后4周腺泡细胞及部分炎性细胞BMP-7阳性面积比及阳性灰度值较正常组减少(P＜0.05).造模后8周腺体萎缩几乎无BMP-7表达,残留腺泡中表达量较正常胰腺显著减少[阳性面积比:(5.63±1.65)% vs (36.51±3.76)%, P＜0.01;灰度值:144.20±5.67 vs 174.54±1.22, P＜0.01].(2)TGF-β1和Smad2/3的表达在纤维化进展中变化一致.对照组小叶间结缔组织和部分腺泡间有少量表达.8周时小叶内纤维化区域及残留腺泡细胞间可见大量TGF-β1和Smad2/3表达,TGF-β1为(22.66±6.73)%;Smad2/3为(24.58±4.35)%,较正常组增加(P＜0.01).(3)TGF-β1与Smad2/3表达呈正相关(r = 0.61, P = 0.005), BMP-7与TGF-β1、Smad2/3表达均呈负相关(r值分别为-0.69和-0.68,P = 0.001).结论 胰腺纤维化过程中TGF-β1/Smad2/3信号通路活化,可促进细胞外基质沉积和腺泡细胞萎缩.BMP-7的表达量可反映残存腺泡细胞的数量,可能对CP的进展具有潜在的保护作用.     

骨形成蛋白-7在慢性胰腺炎中的表达及意义

目的研究骨形成蛋白-7(BMP-7)在大鼠CP组织中的表达,探讨其在胰腺纤维化形成中的意义。方法每周2次腹腔内注射二乙基二硫代氨基甲酸盐(diethyldithiocarbamate,DDC)建立大鼠CP模型。HE染色观察正常组及造模后2、4、6、8周时大鼠胰腺病理学变化,VG染色观察胶原纤维含量,免疫组化检测BMP-7、TGF-β1、Smad2/3的表达。结果(1)正常组BMP-7在腺泡细胞的胞质中表达。造模后4周腺泡细胞及部分炎性细胞BMP-7阳性面积比及阳性灰度值较正常组减少(P<0.05)。造模后8周腺体萎缩几乎无BMP-7表达,残留腺泡中表达量较正常胰腺显著减少[阳性面积比:(5.63±1.65)%vs(36.51±3.76)%,P<0.01;灰度值:144.20±5.67vs174.54±1.22,P<0.01]。(2)TGF-β1和Smad2/3的表达在纤维化进展中变化一致。对照组小叶间结缔组织和部分腺泡间有少量表达。8周时小叶内纤维化区域及残留腺泡细胞间可见大量TGF-β1和Smad2/3表达,TGF-β1为(22.66±6.73)%;Smad2/3为(24.58±4.35)%,较正常组增加(P<0.01)。(3)TGF-β1与Smad2/3表达呈正相关(r=0.61,P=0.005),BMP-7与TGF-β1、Smad2/3表达均呈负相关(r值分别为-0.69和-0.68,P=0.001)。结论胰腺纤维化过程中TGF-β1/Smad2/3信号通路活化,可促进细胞外基质沉积和腺泡细胞萎缩。BMP-7的表达量可反映残存腺泡细胞的数量,可能对CP的进展具有潜在的保护作用。     

Ⅲ型、Ⅳ型胶原在慢性胰腺炎组织中的表达

目的 检测Ⅲ、Ⅳ型胶原在CP及正常胰腺组织中的表达水平,研究其在胰腺间质纤维化形成中的作用.方法 免疫组织化学方法检测16例CP标本及6例正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达.结果 16例CP中,Ⅲ型、Ⅳ型胶原表达均为轻度以上深染,其中重度深染50%(8/16),中度深染31.25%(5/16);而正常胰腺组织Ⅲ、Ⅳ型胶原表达均为浅染.正常胰腺组织中Ⅲ、Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,Ⅲ型胶原以间质纤维表达最明显,Ⅳ型胶原以基底膜表达最明显.CP组织中Ⅲ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以间质纤维最明显;Ⅳ型胶原表达于基底膜、间质纤维、导管壁、血管壁,以基底膜最明显.结论 Ⅲ、Ⅳ型胶原的表达增强在胰腺纤维化的形成中可能有重要作用.     

Subclinical chronic pancreatitis in type I hyperlipoproteinemia

Severe pancreatic exocrine insufficiency was demonstrated in a 41 year old man with familial type I hyperlipoproteinemia (fat-induced hyperlipemia). Plasma triglyceride concentration failed to increase significantly with increased dietary fat intake, and fecal fat excretion was markedly increased. Indices of intestinal function were normal. Pancreatic enzyme therapy resulted in reduced fat excretion and increased plasma triglyceride concentration. Secretin stimulation tests revealed impaired duodenal fluid volume, bicarbonate and pancreatic enzyme responses. Insulin-dependent diabetes mellitus had been diagnosed three years earlier. No attacks of acute pancreatitis had occurred in the preceding 20 years, and it is suggested that pancreatic damage may have resulted from repeated subclinical pancreatic insults due to elevated plasma lipid levels. This report is the first to indicate that pancreatic exocrine insufficiency may occur as a late complication of hyperlipemic disorders in the absence of recurrent acute pancreatitis. Steatorrhea may not be apparent because of therapeutic restriction of dietary fat, and the first manifestation of pancreatic exocrine disease may be an amelioration of fat-induced hyperlipemia.     

Increased awareness enhances physician recognition of the role of smoking in chronic pancreatitis

BackgroundWe have previously reported that physicians under-recognize smoking as a chronic pancreatitis (CP) risk factor. We hypothesized that availability of empiric data will influence physician recognition of this relationship.MethodsWe analyzed data from 508 CP patients prospectively enrolled in the North American Pancreatitis Study-2 Continuation and Validation (NAPS2-CV) or NAPS2-Ancillary (AS) studies (2008–2014) from 26 US centers who self-reported ever-smoking. Information on smoking status, physician-defined etiology and identification of smoking as a CP risk factor was obtained from structured patient and physician questionnaires. We compared how often physician identified smoking as a CP risk factor in NAPS2-CV/NAPS2-AS studies with NAPS2-original study (2000–2006).ResultsEnrolling physician identified smoking as a risk factor in significantly (all p < 0.001) greater proportion of patients in NAPS2-CV/AS studies when compared with NAPS2-original study among ever (80.7 vs. 45.3%), current (91.3 vs. 53%), past (60.3 vs. 30.2%) smokers, in those who smoked ≤1 pack/day (79.3 vs. 39.5%) or ≥1 packs/day (83 vs. 49.8%). In multivariable analyses, the enrolling physician was 3.32–8.49 times more likely to cite smoking as a CP risk factor in the NAPS2-CV/NAPS2-AS studies based on smoking status and amount after controlling for age, sex, race and alcohol etiology. The effect was independent of enrolling site in a sub-analysis limited to sites participating in both phases of enrollment.ConclusionsAvailability of empiric data likely enhanced physician recognition of the association between smoking and CP. Wide-spread dissemination of this information could potentially curtail smoking rates in subjects with and those at risk of CP.     

Regulation of fibrillar collagen types I and III and basement membrane type IV collagen gene expression in pressure overloaded rat myocardium

Left ventricular hypertrophy is based on cardiac myocyte growth. The hypertrophic process can be considered heterogeneous based on whether it also includes a remodeling and accumulation of fibrillar types I and III collagens that are responsible for impaired myocardial stiffness. In the heart, the messenger RNA (mRNA) for fibrillar collagen types I and III has been detected only in cardiac fibroblasts, whereas mRNA for basement membrane collagen type IV is present in both fibroblasts and myocytes. We studied the early and long-term expression of these collagenous proteins in rat myocardium after abdominal aortic banding with renal ischemia. Complementary DNA probes for rat pro-alpha 2 (I), mouse type III and mouse type IV collagens, and chicken beta-actin were used. Northern and dot blot analysis on total RNA extracted from left ventricular tissue indicated a sixfold increase in steady-state levels of mRNA for collagen type I on day 3 of abdominal aortic banding, which had declined to control levels by day 7 where it remained rather constant at 4 and 8 weeks. Type III collagen showed a similar pattern of gene expression after banding. mRNA levels for type IV collagen, on the other hand, were elevated on day 1 after banding, returning to control at day 7 and remaining constant. Actin mRNA levels also increased on day 1 of banding, followed by a rapid return to control levels. Monospecific antibody to types I and III collagens and immunofluorescent light microscopy on frozen sections of the myocardium revealed that at 1 week after banding, the distribution and density of these collagens were similar to those of control animals.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

温和灸对去卵巢大鼠股骨I型胶原表达的影响及意义

目的观察去卵巢大鼠骨I型胶原表达变化及温和灸、苯甲酸雌二醇注射液（BE2）的干预效果,探讨“补虚化瘀”灸法治疗绝经后骨质疏松症（PMO）的机制。方法将50只8月龄雌性Wistar大鼠随机分为假手术组10只和去势组40只,后者行双侧卵巢切除术,并于90d后随机分为模型组、雌激素组、艾灸组和艾灸＋雌激素组各10只,其后假手术组和模型组正常饲养,雌激素组予BE2后肢肌肉注射、艾灸组按“补虚化瘀法”取穴行温和灸治疗,艾灸＋雌激素组同时给予BE2注射和艾灸治疗。疗程结合后处死大鼠,分别以免疫组化法和原位杂交法检测右股骨I型胶原mRNA表达。结果模型组大鼠右股骨I型胶原蛋白及mRNA表达均明显低于假手术组及各治疗组,各治疗组中仅艾灸＋雌激素组mRNA表达阳性反应面积明显大于艾灸组（P〈0．05或0．01）,余各指标比较无显著差异。结论温和灸可明显增强去卵巢大鼠股骨I型胶原表达（效果与BE2相似）,此可能为“补虚化瘀”灸法治疗PMO的机制之一。