下调 α-catulin 基因表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨抑制α-catulin基因表达对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以及可能的机制。方法培养人胃癌细胞SGC-7901，根据转染物不同将细胞分为siRNA-α-catulin组、siRNA- 对照序列组和空白对照组，MTT 法检测细胞增殖能力，Transwell 法检测细胞迁移和侵袭能力，Western blot检测细胞中α-catulin、N- 钙粘蛋白（N-cadherin）、E- 钙粘蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）表达。结果siRNA-α-catulin组细胞24、48、72及96 h时吸光度A值均低于siRNA-对照序列组和空白对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；与siRNA-对照序列组和空白对照组比较，siRNA-α-catulin组迁移细胞数和侵袭细胞数均降低，差异有统计学意义（P <0.05）；与siRNA- 对照序列组和空白对照组比较，siRNA-α-catulin 组细胞中α-catulin、N-cadherin及Vimentin 蛋白相对表达量均降低，而E-cadherin 蛋白相对表达量增加，差异有统计学意义（P <0.05）。结论特异性沉默人胃癌细胞SGC-7901 中基因表达可有效抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力，其机制可能与抑制上皮- 间质转化过程有关。     

MMP-9 过表达对骨肉瘤143B 细胞 侵袭与迁移能力的影响

目的 研究MMP-9 过表达对成骨肉瘤143B 细胞侵袭与迁移能力的影响。方法 通过慢病毒介导 MMP-9 过表达载体转染骨肉瘤143B 细胞,实验分为3 组：实验组（转染pLV-Puro MMP-9 过表达序列）、 对照组（转染pLV-Puro MMP-9-NC 序列）、空白组（PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检 测MMP-9 和VEGF mRNA 的表达;Western blot 法检测MMP-9 和VEGF 蛋白的表达;Transwell 小室侵袭 实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果 实验组MMP-9 和VEGF 的mRNA 和蛋 白表达量较对照组和空白组上调（P < 0.05）;实验组穿过人工基底膜细胞数高于对照组和空白组（P < 0.05）; 实验组划痕愈合率高于对照组和空白组（P <0.05）。结论 慢病毒介导MMP-9 过表达通过作用于VEGF 靶 基因,抑制成骨肉瘤143B 细胞侵袭及迁移能力。     

反义miR-18a对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的：分析miR-18a在乳腺癌组织中的表达情况;体外研究miR-18a反义寡核酸（antisense oligonucleotide,ASO）对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法：运用荧光定量PCR检测108例乳腺癌组织及对应癌旁乳腺组织中miR-18a的表达;通过miR-18a ASO降低乳腺癌细胞中miR-18a的表达,采用Transwell实验和划痕实验观察miR-18a ASO对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,同时运用Western blot的方法检测侵袭相关蛋白的表达变化。结果：在108例乳腺癌病例中,50.93%（55/108）的乳腺癌组织miR-18a表达明显高于对应正常组织（t=28.68,P=0.000）;与空白对照组和转染随机ASO组相比,miR-18a ASO可以明显降低miR-18a的表达（F=321.67,P=0.001;F=563.28,P=0.000）;Transwell实验和划痕实验结果显示转染miR-18a ASO后,乳腺癌细胞的侵袭迁移能力明显下降（P=0.000）,同时相关侵袭蛋白基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2和MMP9表达下降（P=0.000）。结论：miR-18a在乳腺癌组织中表达上调,降低miR-18a的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。miR-18a有可能成为乳腺癌侵袭转移调控的新靶点。     

siRNA-ΔNp63干扰质粒在体外对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究siRNA-ΔNp63干扰质粒在体外对宫颈癌HeLa细胞迁移、侵袭能力的影响。方法在体外利用siRNA-ΔNp63干扰质粒转染HeLa细胞,将实验分为空白对照组、空载体组、阴性质粒组和干扰质粒组;采用Real-time PCR、Western blot检测各实验组细胞中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达;通过Transwell侵袭实验、同质黏附实验和异质黏附实验来检测各组细胞的侵袭能力和细胞迁移能力。结果成功将siRNA-ΔNp63干扰质粒转入HeLa细胞;与空白对照组比较,阴性质粒组及空载体组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平无明显变化（P〉0.05）,siRNA-ΔNp63质粒组中ΔNp63的mRNA、蛋白的表达水平表现为降低（P〈0.05）;空载体组和阴性质粒组平均细胞穿膜数、同质黏附性和异质黏附性无明显变化（P〉0.05）;而干扰质粒组中平均细胞穿膜数明显降低（P〈0.05）,同质黏附性增加（P〈0.05）,异质黏附性明显下降（P〈0.05）。结论 siRNA-ΔNp63能明显降低HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

siRNA特异性沉默ADP核糖基化因子6对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究ADP核糖基化因子6（Arf6）对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响并初步探讨 其可能的分子作用机制。方法设计合成3条针对不同靶向区域的Arf6特异性siRNA序列,转染细胞后通过real-time PCR和 蛋白质印迹法检测其对Arf6的干扰效果,筛选出干扰效果最佳的siRNA序列;通过噻唑盐（MTT）实验、划痕实验、及transwell 细胞迁移和侵袭实验观察siRNA干扰Arf6表达对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测AKT、p-AKT、ERK1/ 2、p-ERK1/2和Rac1蛋白表达水平的变化。结果与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PC-3细胞内源性Arf6的mRNA和 蛋白表达水平无明显影响,3 条siRNA 序列均能抑制Arf6 的表达,其中siRNA-3 对PC-3 细胞Arf6 表达干扰效果最好,Arf6 mRNA和蛋白抑制率分别为（91.88±3.13）%和（86.37±0.57）%。siRNA-3干扰Arf6表达抑制PC-3细胞的增殖,且PC-3细胞体外 迁移距离和侵袭细胞数较空白和阴性对照组明显减少（P<0.05）。蛋白质印迹法检测发现转染siRNA-3的PC-3细胞p-ERK1/2 和Rac1表达水平明显降低,而AKT、p-AKT和ERK1/2表达水平较对照组差异无统计学意义。结论siRNA干扰Arf6表达可显 著抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其分子作用机制可能与p-ERK1/2和Rac1表达下调相关。     

miR-599靶向YAP1对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨miR-599靶向Yes相关蛋白1(YAP1)对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响。方法：采用qRT-PCR检测正常卵巢上皮细胞IOSE-80与卵巢癌细胞SKOV3中miR-599的表达;将SKOV3细胞分为6组：空白组、miR-NC组、miR-599 mimics组、siRNA-NC组、YAP1 siRNA组、YAP1 siRNA+miR-599 inhibitor组,划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell实验检测各组细胞侵袭;Western Blot检测各组细胞中YAP1蛋白表达;双萤光素酶实验验证miR-599与YAP1的关系。结果：miR-599在SKOV3细胞中的表达水平显著低于IOSE-80细胞（P<0.05）;过表达miR-599或沉默YAP1均可抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭;miR-599可靶向调控YAP1表达;抑制miR-599可逆转沉默YAP1对SKOV3细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论：过表达miR-599通过下调YAP1来抑制SKOV3细胞的迁移和侵袭。     

PSME3-NF-?资B途径介导三阴性乳腺癌的侵袭与转移

目的：研究蛋白酶体活化复合物3（proteasome activator complex subunit 3,PSME3）对三阴性乳腺癌侵袭及转移的影响及其机制。方法：收集临床三阴性乳腺癌患者标本,免疫组织化学检测PSME3蛋白的表达;以三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231为对象,利用慢病毒包装系统构建PSME3过表达及干扰稳定株。Real-time PCR法检测PSME3的mRNA表达,Western blot检测PSME3的蛋白表达。实验分为PSME3过表达（expression of PSME3,exPSME3）组、PSME3干扰（short hairpin RNA targeting PSME3,shPSME3）组和野生型对照组。在以Western blot法进行稳定株鉴定时,为排除载体本身对PSME3表达的影响,特增加PSME3过表达阴性对照（expression negative control,exNC）组、PSME3干扰阴性对照（short hairpin RNA targeting negative con－trol,shNC）组。划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot进一步检测迁移相关蛋白血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）在各组的表达情况。细胞爬片免疫荧光与Western blot分别检测核因子-?资B（nuclear factor-?资B,NF-?资B）及其活性基团,磷酸化的P65蛋白（phosphorylated-P65,P-P65）的表达。结果：免疫组织化学结果显示PSME3在三阴性乳腺癌患者肿瘤组织表达明显高于癌旁组织（t=36.700,P=0.000）。划痕实验结果显示exPSME3组的迁移能力高于对照组（P=0.000）,shPSME3组的迁移能力低于对照组（P=0.009）。迁移相关蛋白检测示VEGF-A、MMP9均在exPSME3组高表达,在shPSME3组低表达,与对照组相比有统计学差异。Transwell实验结果显示exPSME3组的侵袭能力高于对照组（P=0.000）,shPSME3组的侵袭能力低于对照组（P=0.000）。细胞爬片免疫荧光结果提示各组间NF-?资B蛋白表达无明显差异,而exPSME3组P-P65表达明显高于对照组（P=0.001）,shPSME3组P-P65表达低于对照组（P=0.001）,Western blot检测结果与之一致。结论：PSME3- NF-?资B途径可介导三阴性乳腺癌的侵袭及转移。     

肺鳞状细胞癌组织中血管扩张刺激磷蛋白的 临床意义及生物学功能研究

目的 探讨肺鳞状细胞癌（LSCC）组织中血管扩张刺激磷蛋白（VASP）的临床意义及对肺癌细胞 迁移侵袭的影响。方法 检测50 例LSCC 及其癌旁组织中VASP 的表达，分析肿瘤组织VASP 表达与患者临 床特征及预后间的相关性。通过siRNA 沉默肺癌细胞中VASP 的表达，采用划痕愈合试验及Transwell 小室 模型检测沉默VASP 后肺癌细胞迁移及侵袭能力的变化。结果 肺癌组织中VASP 的阳性表达率（χ2=7.853， P =0.005）及阳性表达程度（t =4.318，P =0.000）均高于对应癌旁组织，并与肿瘤淋巴结转移（χ2=6.455，P = 0.011）及高TNM 分期呈正相关（χ2=6.455，P =0.011）；肺癌组织VASP 蛋白表达阳性患者3 年总生存率（χ2= 8.311，P =0.004）及无病生存率（χ2=9.969，P =0.002）均低于VASP 蛋白表达阴性患者。在体外，沉默 VASP 的表达能够抑制肺癌细胞的迁移（t =9.021，P =0.011）及侵袭（t =4.609，P =0.041）能力。结论 肺鳞 癌组织中VASP 表达升高并与肿瘤患者较差的生存获益有关，沉默VASP 表达在体外能够实现一定的抗肿瘤 转移效应。     

长链非编码RNA SNHG6在结肠癌中的表达及其生物学意义

目的 探索核仁小分子RNA宿主基因6(SNHG6)在结肠癌组织中的表达特点,以及其对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 采用荧光定量PCR检测25例患者结肠癌组织及对应癌旁组织中SNHG6 mRNA的表达水平.将LoVo细胞分成Blank组、NC组、siRNA-1组和siRNA-2组,其中Blank组不作任何处理,另外3组依次使用Lipofectamine 2000转染NC-siRNA、SNHG6-siRNA-1及SNHG6-siRNA-2;通过CCK-8实验测定细胞增殖能力,通过Transwell实验测定细胞迁移及侵袭能力;通过荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Snail的mRNA及蛋白表达水平.结果 患者结肠癌组织SNHG6 mRNA表达水平高于对应癌旁组织(U=138.0,P=0.000 7).siRNA-1组和siRNA-2组细胞增殖活性较Blank组明显下降(P＜0.05);siRNA-1组和siRNA-2组细胞的迁移和侵袭数量较Blank组明显减少(P＜0.05);siR-NA-1组、siRNA-2组与Blank组比较,E-Cadherin mRAN及蛋白表达上调,N-Cadherin、Vimentin及SnailmRNA及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SNHG6在结肠癌组织中高表达,敲低SNHG6表达能够抑制结肠癌细胞EMT进程,进而抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力.     

抑制SLP-2对宫颈癌细胞迁移及侵袭能力的影响

【摘要】 目的 探讨抑制stomatin样蛋白2（SLP-2）对宫颈癌细胞的迁移及侵袭能力的影响。 方法 将人宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞分别分为siRNA阴性对照组（siRNA-CON）和SLP2-siRNA组。采用western blot检测转染后各组细胞SLP-2蛋白表达水平;Transwell小室试验检测细胞侵袭能力;细胞划痕试验检测细胞迁移能力;western blot检测侵袭相关蛋白Rac1、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和MMP-9表达水平。采用独立样本t检验进行统计学分析。结果 Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中SLP-2蛋白水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Transwell小室试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞侵袭能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞划痕试验结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞24h和36h迁移能力低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blot检测结果显示,SLP2-siRNA组Hela细胞和Siha细胞中Rac1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均低于siRNA-CON组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 干扰SLP-2表达后宫颈腺癌Hela细胞和鳞癌Siha细胞的侵袭能力和迁移能力明显下降,提示SLP-2在宫颈癌进展中有着重要作用,可能是潜在的转移预测标志物和治疗靶点。     

干细胞与肿瘤干细胞

目的了解干细胞、肿瘤干细胞和恶性肿瘤关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述肿瘤干细胞与干细胞的关系、肿瘤干细胞与恶性肿瘤发生发展的关系、研究现状、前景及存在的问题。结果正常干细胞和肿瘤干细胞之间存在很强的相似性,其中淋巴造血系统恶性肿瘤和少数实体瘤干细胞分离鉴定的成功有力支持了肿瘤干细胞理论。结论肿瘤干细胞理论可解释很多恶性肿瘤的生物学行为,但目前仍迫切需要相关分离、纯化、鉴定实体瘤干细胞的思路和方法。     

透明细胞乳头状肾细胞癌的研究进展

2016年WHO正式将透明细胞乳头状肾细胞癌作为一种肾细胞癌新类型。该肿瘤可以为散发性也可以发生于终末期肾病或Von Hippel?Lindau综合征（VHL综合征）,具有相对特征性的病理组织学形态、免疫表型和分子遗传学特点,诊断时应与透明细胞肾细胞癌、乳头状肾细胞癌以及Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾癌相鉴别。鉴于透明细胞乳头状肾细胞癌生物学行为相对惰性或低度恶性,因此准确诊断对指导临床治疗和判断预后具有十分重要的意义。     

肝星状细胞和胰腺星状细胞的比较

肝星状细胞和胰腺星状细胞在各自纤维化疾病中都发挥着重要作用,两者在诸多方面存在相似之处。文章就两者的生物学特性、凋亡、信号转导通路方面进行总结和比较,以探讨它们之间的关系。     

汉族人肾透明细胞癌细胞系的建立

目的:取汉族人临床标本,建立肾透明细胞癌(ccRCC)细胞系,初步研究该细胞系的生物学特性.方法:2005～2007年间共采集43例ccRCC新鲜手术标本(包括肾原位肿瘤、骨转移、淋巴结转移肿瘤及癌栓),于手术后30～60 min内用植块法进行体外培养,记录传代超过50代的细胞株的生长曲线,测定集落形成率,对细胞进行染色体分析,病理学检查,流式细胞术检测及NOD-SCID鼠荷瘤实验.结果:绝大部分原代细胞传代次数在5代内,其中5例可连续传代5代以上,4例传代超过10代.仅1例来源于骨转移组织的原代细胞(命名为RCC05-TXJ)及1例来源于原位ccRCC的原代细胞(命名为RCC05-ZYJ)可稳定连续传代.RCC05-TXJ经历21个月传110代,群体倍增时间19.2 h,染色体众数为75,集落形成率为41%;RCC05-ZYJ经历18个月传160代,群体倍增时间为16.5 h,染色体众数为55,集落形成率为37%.免疫组化显示CA9及CD133阳性,流式细胞术分析发现随细胞传代增多CA9及CD133表达明显增高(P＜0.05).两株细胞在NOD-SCID鼠体内均有良好的致瘤及转移性,但是转移倾向明显不同.结论:应用汉族人肾透明细胞癌组织成功建立了2个转移潜能不同的细胞系,随着传代次数增加,肿瘤干细胞比例增加.     

细胞黏附对干扰素、5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡的影响

目的探讨细胞黏附作用对干扰素、5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导细胞凋亡的影响。方法采用HepG2、HEK293细胞株,常规96孔板培养细胞,分为空白不加药(A组)、多聚赖氨酸包被预处理+贴壁后加药(B组)、贴壁后加药(C组)、未贴壁就加药(D组)、未贴壁就加药和Fn抗体(E组)。选用干扰素、5-Fu分别作用各组细胞,MTT法测定各组增殖抑制率和DNA Fragmentation ELISA测定凋亡率,Western blot检测干扰素诱导各组PKR蛋白水平的表达。结果经多聚赖氨酸包被预处理后,细胞对药物的敏感性减弱,MTT法显示抑制率:干扰素作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(27.24±31.77)%、(39.04±14.88)%(P<0.05);5-Fu作用G2细胞,B、C组抑制率分别为(30.61±11.26)%、(32.94±20.93)%(P<0.05);干扰素作用293细胞,B、C组抑制率分别为(32.02±23.48)%、(46.22±25.20)%(P<0.05);5-Fu作用293细胞,B、C组抑制率分别为(14.07±21.91)%、(31.61±31.49)%(P<0.05)。DNAFrag...     

高浓度腺苷通过抑制细胞增殖促进细胞存活

目的：研究危机环境下腺苷浓度增高对细胞的意义。方法：向细胞培养物中添加高浓度的腺苷来模拟危机环境,研究细胞对高浓度腺苷的生物学反应。结果：高浓度腺苷抑制细胞增殖,而不诱导细胞凋亡的发生;腺苷通过抑制细胞周期的进行而抑制细胞增殖;腺苷促进细胞在无糖环境下的存活。结论：腺苷通过抑制细胞增殖从而促进细胞在无糖环境下的存活。     

人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404的建立和生物学特性

目的:研究骨巨细胞瘤细胞体外培养的生物学特性,并建立人骨巨细胞瘤细胞系. 方法: 采用原代组织块培养法培养骨巨细胞瘤手术标本,对存活细胞进行形态学观察、免疫组织化学染色、细胞周期检查、核型分析、裸鼠移植. 结果: 建立人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404,其形态学表现、免疫组织化学染色均符合骨巨细胞瘤纤维母细胞样基质细胞的特征. 经过近1 a的体外培养,现已传代100次,细胞倍增时间39.7 h,细胞周期测定G1期为67.5%,G2期为8.9%,S期为23.6%. 染色体具有三倍体核型. 裸鼠移植成瘤率100%,无支原体污染. 结论: 人骨巨细胞瘤细胞系GCT-0404可以用于对骨巨细胞瘤的研究.     

乳腺癌干细胞耐放射性与细胞周期的关系

肿瘤的放射疗法是一种建立在细胞周期基础上的治疗方法,乳腺癌干细胞在放疗过程中出现的G2/M期阻滞、衰老途径下调、APE1水平升高及细胞周期调控相关基因p21和p53活性等改变直接或间接导致细胞周期紊乱,均与乳腺癌干细胞的耐放射性密切相关,是分子遗传学和肿瘤生物学研究的热点.     

间充质干细胞与调节性T细胞的研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）无免疫原性,且具有免疫调节的功能。调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）是一类具有负性免疫调节作用的T细胞亚群,MSCs和Treg通过复杂的作用机制维持免疫耐受,限制效应细胞的应答程度,从而纠正和防止过度免疫反应。同时大量研究表明MSCs在体外和体内都能上调Treg水平,并以此来发挥免疫抑制作用,治疗移植物抗宿主病（GVHD）、系统性红斑狼疮（SLE）、类风湿关节炎（RA）、1型糖尿病（T1DM）等自身免疫性疾病。