青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨青蒿素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与青蒿素组(50、100、200μmol/L)。不同浓度青蒿素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。200μmol/L青蒿素干预48 h后,划痕实验与Transwell侵袭实验检测青蒿素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中PI3K、p-Akt与pmTOR的表达。结果不同浓度青蒿素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。200μmol/L青蒿素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中PI3K的表达以及Akt和mTOR的磷酸化水平降低(P0.01)。结论青蒿素能够通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响

目的探讨紫草素对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭的影响及可能机制。方法将人膀胱癌T24细胞分为空白对照组与紫草素组(10、20、40μmol/L)。不同浓度紫草素干预48h后,MTT方法检测T24细胞的增殖活力,流式细胞术检测T24细胞的凋亡率。40μmol/L紫草素干预48 h后,Transwell实验检测紫草素对T24细胞迁移与侵袭能力的影响;Western blot实验检测T24细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3/9(Caspase-3/Caspase-9)与基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/MMP-9)的表达。结果不同浓度紫草素均能显著抑制T24细胞增殖,并促进细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P0.01)。40μmol/L紫草素干预48 h后,T24细胞迁移与侵袭能力显著降低,T24细胞中Caspase-3、Caspase-9、MMP-2与MMP-9的蛋白表达水平均显著升高(P0.01)。结论紫草素能够抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

红花多糖诱导巨噬细胞M1型极化及抑制黑色素瘤细胞侵袭迁移的实验研究

目的 探讨红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)调控巨噬细胞极化对黑色素瘤细胞迁移与侵袭能力的影响与分子机制.方法 SPS作用巨噬细胞后的上清作为条件培养基(conditioned medium,CM)用于对黑色素瘤细胞活力变化、迁移与侵袭影响的实验.CCK-8法检测SPS及CM的细胞毒性...     

肿瘤相关巨噬细胞对宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响

目的:探究THP-1来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)对宫颈癌SiHa细胞迁移和侵袭的影响及其相关分子机制。方法:佛波脂(PMA)和IL-4将THP-1细胞诱导为TAMs,流式细胞仪检测其表面CD204和CD206分子的表达;将TAMs与SiHa细胞共培养,采用划痕实验、Transwell实验检测TAMs对SiHa细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹法检测共培养后SiHa细胞上皮间质转化相关蛋白的变化,RT-PCR检测转录因子Snail/Slug mRNA表达水平。结果:PMA作用于THP-1细胞24 h,IL-4继续作用72 h后,细胞表面CD204和CD206分子表达明显增加,TAMs诱导成功;与未共培养组相比,共培养组SiHa细胞迁移和侵袭能力显著增强(P<0.001);共培养组SiHa细胞E-cadherin蛋白表达水平显著降低,N-cadherin、Vimentin蛋白、Snail/Slug mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。结论:TAMs可能通过上调转录因子Snail的表达促进SiHa细胞上皮间质转化进程,从而促进其侵袭和转移。     

M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析

通过对M1和M2型巨噬细胞表型相关指标的比较分析,评价各鉴定巨噬细胞类型的表型指标及其意义。按常规方法以IFN-γ及LPS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞,以IL-4诱导出M2型巨噬细胞。分别以RT-PCR和酶活性定量方法检测精氨酸代谢相关酶的表达和活性;以ELISA检测IL-12和IL-10的分泌;以FACS检测巨噬细胞膜分子的表达。结果显示:M1型巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达和活性水平较未刺激组明显升高,IL-12产生显著增加,CD16/32表达上调;而M2型巨噬细胞I型精氨酸酶(arginase 1,Arg-1)的表达水平和酶活性较未刺激巨噬细胞显著提高,IL-10分泌轻度增加,并且表达高水平的CD206和DECTIN-1。表型比较分析结果表明,iN-OS表达和活性、IL-12的分泌和膜蛋白CD16/32可用于鉴定M1型巨噬细胞,而Arg-1、CD206和DECTIN-1是鉴定M2型巨噬细胞较为理想的表型指标。     

M2型巨噬细胞来源外泌体对乳腺癌细胞系4T1干性特征的影响

目的探讨M2型巨噬细胞来源的外泌体对乳腺癌细胞系4T1细胞肿瘤干性特征的影响。方法用超速离心法分离M2型巨噬细胞来源的外泌体;用透射电子显微镜、纳米粒子追踪技术,Western blot等对其进行鉴定;然后以乳腺癌细胞系4T1为肿瘤模型,使用Dil染料标记M2型巨噬细胞来源的外泌体,通过免疫荧光技术观察其能否进入4T1细胞。此外,用流式细胞计量术、共培养体系和Transwell实验探究在M2型巨噬细胞来源的外泌体影响下的4T1细胞的干性特征。结果 M2型巨噬细胞在体外被成功诱导,分离并鉴定了M2型巨噬细胞来源的外泌体。通过免疫荧光,看到Dil标记的外泌体可成功进入4T1细胞。M2型巨噬细胞来源的外泌体与4T1细胞共孵育后,可明显增强4T1细胞的迁移能力(P0.001)和成球能力(P0.05);外泌体抑制剂GW4869可明显抑制4T1细胞的成球能力(P0.05)。同时,M2型巨噬细胞来源的外泌体可明显增加4T1细胞中CD44~(high)CD24~(low)细胞的比例(P0.001)。结论 M2型巨噬细胞来源的外泌体能够促进4T1肿瘤细胞的迁移和成球能力,并明显增加4T1细胞中肿瘤干细胞的比例。     

Gpnmb在小鼠M1和M2型骨髓源性巨噬细胞中表达的差异

目的了解小鼠M1和M2型骨髓源性巨噬细胞（ BMMφs）中非转移性黑色素瘤糖蛋白b（ Gpnmb）表达的差异。方法原代培养小鼠BMMφs,免疫荧光染色F4/80和流式细胞仪检测CD11b鉴定巨噬细胞;用IFN-γ和LPS诱导BMMφs向M1型分化,用IL-4诱导向M2型分化。实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标志物（ TNF-α、iNOS）、M2型巨噬细胞标志物（ MMR、Arg-1）和Gpn-mb的mRNA表达;免疫荧光双染色、Western印迹、流式细胞仪检测Gpnmb与MMR的蛋白表达。结果（1）免疫荧光染色结果示BMMφs中F4/80高表达;流式细胞仪检测结果示BMMφs中有（92．7±6．1）％细胞表达CD11b,提示BMMφs培养成功;（2）相对于未分化的M0型BMMφs,TNF-α、iNOS mRNA在M1型BMMφs中高表达（P均＜0．01）,而MMR、Arg-1 mRNA在M2型BMMφs中高表达（P均＜0．01）,提示原代M1、M2型BMMφs分化成功;（3）M2型BMMφs 的Gpnmb mRNA和蛋白表达均较M0型和M1型BMMφs显著增高（P均＜0．01）;免疫荧光双染色及流式细胞仪结果显示,BMMφs中Gpnmb与MMR共表达,在M2型BMMφs中MMR阳性BMMφs有（83．2±9．7）％表达Gpnmb。结论 M2型BMMφs的Gpnmb表达较M1型BMMφs显著增高,提示Gpnmb可能作为鉴别M1、M2型巨噬细胞的标志物,在巨噬细胞的表型分化中起作用。     

沉默UHMK1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨干扰乳腺癌细胞系中UHMK1的表达对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 应用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰乳腺癌细胞株MDA-MB-231中UHMK1的表达,分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测shRNA的干扰效率.应用MTT实验检测细胞活力...     

棕榈酸刺激的巨噬细胞对HepG2细胞侵袭和迁移的影响

目的:研究棕榈酸刺激的巨噬细胞对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并进一步探讨其作用机制。方法:应用棕榈酸(0.16 mmol/L)刺激人急性单核细胞白血病细胞系THP-1来源的巨噬细胞,并取其上清液处理HepG2细胞。细胞迁移实验检测巨噬细胞的迁移能力,侵袭实验和划痕实验分别观察HepG2细胞的纵向迁移能力和横向迁移能力;RT-qPCR检测巨噬细胞和HepG2细胞的炎症/趋化因子及HepG2细胞上皮-间充质转化标志蛋白(E-cadherin和N-cadherin)的mRNA表达水平。结果:棕榈酸促进了巨噬细胞迁移,显著上调巨噬细胞白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的mRNA表达;用棕榈酸刺激巨噬细胞的上清液处理HepG2细胞,其纵向迁移能力和横向迁移力明显强于未经棕榈酸处理组,且HepG2细胞的多种炎症因子和N-cadherin表达上调,E-cadherin表达下调。结论:棕榈酸可以增强巨噬细胞的迁移能力,刺激巨噬细胞产生大量炎症因子/趋化因子,进一步通过旁分泌/内分泌作用于HepG2细胞,促进HepG2细胞的上皮-间充质转化,增强HepG2细胞的侵袭与迁移能力。     

载脂蛋白M对肾癌细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用

目的:研究人载脂蛋白M(apolipoprotein M,ApoM)对肾透明细胞癌细胞株(ACHN、769-P和786-O)增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:采用装载人ApoM基因的慢病毒和阴性对照组慢病毒分别感染肾癌细胞株,建立ApoM过表达组(ApoM-OE组)和阴性对照组(NC组)细胞模型.应用CCK-8增殖实验...     

淫羊藿苷对前列腺癌细胞株活力、迁移与侵袭的作用

目的:探讨淫羊藿苷对前列腺癌细胞株Du145与PC3的存活、迁移与侵袭能力的影响,并初步研究其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度淫羊藿苷(0、5、10、20、40和80μmol/L)对Du145细胞与PC3细胞活力的影响;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白水平。结果:MTT法检测结果显示淫羊藿苷呈浓度依赖性抑制Du145与PC3细胞的活力,当浓度到达40μmol/L时,抑制作用达到最大;经淫羊藿苷干预后,Du145和PC3细胞迁移和侵袭能力显著下降,Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白表达水平显著下降。结论:淫羊藿苷具有抑制前列腺癌细胞株Du145与PC3生长、迁移和侵袭的作用,其作用机制可能与淫羊藿苷抑制Notch-1、MMP-2、MMP-9和Hes-1蛋白的表达有关。     

青藤碱抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭

目的:观察青藤碱对人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能的分子机制。方法:分别采用不同浓度的青藤碱处理SKOV3细胞12、24和48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Transwell实验检测细胞迁移率和侵袭率,同时采用Western blot法检测细胞周期素(cyclin)A、cyclin D1、E-cadherin和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平。结果 :随着青藤碱作用浓度和作用时间的增加,SKOV3和IOSE80细胞活力逐渐降低,青藤碱作用SKOV3和IOSE80细胞48 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为2.12 mmol/L和17.35 mmol/L;青藤碱可呈剂量依赖性地诱导SKOV3细胞发生G_0/G_1期和S期阻滞(P0.05),抑制SKOV3细胞迁移和侵袭(P0.05),下调cyclin A、cyclin D1和MMP-9蛋白水平(P0.05),并上调E-cadherin蛋白水平(P0.05)。结论 :青藤碱可在体外抑制人卵巢癌SKOV3细胞活力、迁移和侵袭,这可能与其下调cyclin D1、cyclin A和MMP-9蛋白水平,以及上调E-cadherin蛋白水平有关。     

ELMO1在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用

目的:探讨吞噬和细胞运动蛋白1(ELMO1)的表达在胃癌细胞侵袭和迁移中的作用和功能。方法:用Western blot和实时荧光定量PCR实验检测5种胃癌细胞和1种人正常胃黏膜上皮细胞ELMO1的蛋白和mRNA表达水平,并筛选出ELMO1表达量高的胃癌细胞株;用细胞转染实验沉默胃癌细胞株的ELMO1;用细胞划痕实验以及Trenswell小室迁移和侵袭实验检测抑制该基因的表达对胃癌细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:胃癌细胞中ELMO1的表达量明显高于人正常胃黏膜上皮细胞(P0.01),其中SGC7901细胞的ELMO1表达量最高;在SGC7901细胞中ELMO1-siRNA可显著沉默ELMO1的表达(P0.05);沉默ELMO1可显著降低胃癌细胞侵袭和转移的能力(P0.01)。结论:ELMO1在胃癌细胞中高表达,并可促进胃癌细胞的侵袭和迁移。     

HOXB7基因沉默对人胃癌细胞活力、迁移和侵袭的影响

目的:探讨靶向沉默HOXB7基因对人胃癌SGC-7901细胞活力、迁移和侵袭作用的影响及潜在机制。方法:设计靶向HOXB7的siRNA,然后瞬时转染胃癌SGC-7901细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测siRNA靶向沉默的效果。MTT法检测细胞的活力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1蛋白的表达水平,Transwell小室侵袭实验检测SGC-7901细胞的侵袭能力,实时荧光定量PCR和Western blot法检测胃癌SGC-7901细胞PTEN和VEGF的表达水平以及p-AKT的蛋白水平。结果:胃癌组织中HOXB7基因在mRNA和蛋白水平的表达均显著高于对照组织。siRNA可有效靶向沉默SGC-7901细胞中HOXB7的表达,且沉默HOXB7表达后SGC-7901细胞活力明显下降,同时细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D1的表达亦下调。靶向沉默HOXB7可明显抑制SGC-7901细胞中AKT的磷酸化水平,抑制胃癌细胞的侵袭转移,同时下调VEGF的表达水平,抑制胃癌组织中的肿瘤血管生成。结论:HOXB7作为一个癌基因,可上调细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1和侵袭相关分子VEGF的表达,上调AKT的磷酸化水平,进而抑制PTEN的功能,促进胃癌细胞SGC-7901的生长、迁移和侵袭能力。     

毛钩藤碱对缺氧乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察毛钩藤碱对缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取MCF-7细胞作为研究对象,采用CCK-8法检测毛钩藤碱的细胞毒性作用;采用细胞划痕实验测量细胞迁移率;采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力;采用Western blot法检测缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达水平;采用RT-PCR法检测HIF-1α的mRNA水平。结果:自32μmol/L开始,随着毛钩藤碱浓度的升高,MCF-7细胞存活率明显降低(P0.05),IC_(50)为62.82μmol/L;在缺氧条件下,MCF-7细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05),HIF-α、Snail和MMP-9蛋白表达水平明显升高(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显下降(P0.05),HIF-1α的mRNA水平也显著升高(P0.05);除缺氧MCF-7细胞中HIF-α的mRNA水平未受影响外,上述效应均被毛钩藤碱(16μmol/L)明显抑制(P0.05)。结论:毛钩藤碱可在体外抑制缺氧诱导的人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭,这可能与毛钩藤碱下调HIF-1α、Snail和MMP-9蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平有关。     

Bmi-1 regulates epithelial-to-mesenchymal transition to promote migration and invasion of breast cancer cells

Breast cancer is a highly invasive and metastatic disease. Recent studies report that breast cancer cells that have undergo epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) obtain malignant characteristic, however, the molecular mechanism underlying this transition are poorly understood. Here, we found that over-expression associated with the process of breast cancer and that high B-cell-specific moloney murine leukemia virus insertion site 1 (Bmi-1) levels predict shorter survival of breast cancer patients. We demonstrate that Bmi-1 regulates EMT and the migration of breast cancer cells. RNA interference-mediated knockdown Bmi-1 expression restored E-cadherin expression and cell-cell junction formation in breast cancer cells, suppressing cell migration and invasion. In contrast, the over-expression of Bmi-1 decreased the expression of the epithelial mark (E-cadherin) but increased the mesenchymal makers (N-cadherin and vimentin) in breast cancer cells.     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC...