子宫内膜癌肿瘤微环境内IGFBP-3表达及其对肿瘤侵袭能力的影响

目的:探讨子宫内膜癌肿瘤微环境内IGFBP-3表达与肿瘤-间质相互作用的关系,以及IGFBP-3表达对子宫内膜癌侵袭能力的影响。方法:免疫组化法检测子宫内膜癌、正常子宫内膜组织中IGFBP-3的表达情况。肿瘤相关成纤维细胞(CAF)、正常内膜成纤维细胞(NF)与子宫内膜癌Ishikawa细胞在Transwell小室内共培养,RT-PCR、ELISA法检测IGFBP-3表达水平的改变。Transwell侵袭实验评估IGFBP-3表达改变对Ishikawa细胞侵袭能力的影响。结果:子宫内膜癌组织中IGFBP-3表达显著低于正常子宫内膜组织(P0.01)。CAF、NF与Ishikawa细胞共培养后,两种间质成纤维细胞中IGFBP-3 mRNA表达水平均显著下降(P0.01);而在Ishikawa细胞,CAF可使其IGFBP-3 mRNA表达显著降低(P0.01),但NF对其无显著影响(P0.05)。CAF、NF均能促进Ishikawa细胞的侵袭能力;与单Ishikawa细胞组和NF+Ishikawa共培养组相比,CAF共培养能显著增加Ishikawa细胞的侵袭能力(113.33±8.50 vs 65.17±10.23、75.33±8.21,P0.01)。而加入外源性重组人IGFBP-3后,能显著抑制CAF的促侵袭作用。结论:子宫内膜癌肿瘤与间质相互作用可导致肿瘤微环境内IGFBP-3表达下降,而肿瘤微环境IGFBP-3表达的改变与子宫内膜癌的生长、侵袭和转移密切相关。     

雌激素膜受体GPR30在子宫内膜癌的表达及意义

目的:探讨雌激素膜受体GPR30在子宫内膜癌的表达及意义。方法:RT-PCR和免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中GPR30mRNA和蛋白的表达,分析GPR30表达与临床病理的联系;免疫细胞化学分析GPR30蛋白在子宫内膜癌细胞系RL95-2(ER+)和KLE(ER-)的表达。结果:子宫内膜癌组织GPR30mRNA的表达水平显著高于正常子宫内膜组织(P<0.05);子宫内膜癌组织GPR30蛋白表达阳性率(21/30,70%)显著高于正常子宫内膜组织(5/17,29.41%)(χ2=7.232,P=0.007);肿瘤组织学分级越高,GPR30表达阳性率越高(P=0.003),GPR30表达与内膜癌分期、肌层浸润深度和腹水转移无关(P>0.05);ERα阳性的子宫内膜癌细胞系RL95-2和ERα阴性的细胞系KLE均表达GPR30。结论:雌激素膜受体GPR30于子宫内膜癌组织和子宫内膜癌细胞系均有表达,与肿瘤组织学高分级相关,提示GPR30可能在子宫内膜癌中发挥重要的作用。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞系E-钙粘素和核因子kappa B表达的影响

目的:探讨米非司酮(Mifepristone,MIF)对子宫内膜癌细胞中核因子kappaB(nuclear factor kappa B,NF-κB)与E-钙粘素表达的影响,及NF-κB与E-钙粘素之间的关系。方法:体外培养子宫内膜癌细胞系HHUA,以不同浓度MIF(0、0.1×10-6、0.1×10-5、1×10-5、5×10-5、1×10-4mol/L)分别作用细胞24h、48h和72h,用免疫组化法检测NF-κB p65与E-钙粘素的蛋白表达水平。结果:MIF显著抑制HHUA细胞生长。MIF显著降调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.05),增加E-钙粘素的蛋白表达水平(P<0.05)。NF-κB p65表达与E-钙粘素表达呈显著负相关(r=-0.94)。结论:MIF可抑制子宫内膜癌细胞系HHUA的生长,其机制可能通过抑制NF-κB的表达,进而增加其靶基因E-钙粘素的表达,来达到抑制子宫内膜癌细胞生长的作用。     

NLRC3对子宫内膜样癌作用的研究

目的:探讨NLR家族含CARD结构蛋白3(NLRC3)在子宫内膜癌组织中的表达情况及其对子宫内膜癌细胞系生物学行为的影响。方法:采用GEPIA数据库分析子宫内膜癌患者NLRC3表达水平及其与无病生存率的关系。免疫组化、Western blot法检测NLRC3在子宫内膜样癌组织、癌旁组织、对照组子宫内膜组织中的表达。Ishikawa(ISK)、KLE细胞转染过表达NLRC3慢病毒,细胞平板克隆、划痕愈伤实验、Transwell迁移及侵袭实验检测NLRC3对体外细胞增殖、迁移、侵袭的影响。Western blot实验检测过表达NLRC3对上皮间质转化(EMT)的影响。构建裸鼠皮下成瘤模型,检测过表达NLRC3对肿瘤生长的影响。结果:GEPIA数据库分析显示,NLRC3在子宫内膜癌组织中低表达,较高水平NLRC3与较好的无病生存率有关(P<0.05)。免疫组化、Western blot实验结果与数据库分析一致,NLRC3在子宫内膜样癌组织中的表达水平低于正常子宫内膜组织、配对癌旁组织(P<0.05),NLRC3表达随肿瘤病理分化程度降低而逐渐降低。ISK、KLE细胞过表达NLRC...     

RECK与MMP-9基因在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:研究RECK和MMP-9在不同子宫内膜组织中的表达,探讨两者在子宫内膜癌的发生、发展和浸润转移中的作用。方法:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)免疫组化法检测42例子宫内膜癌组织、15例子宫内膜不典型增生组织及26例正常增生期子宫内膜组织中RECK蛋白及MMP-9蛋白表达情况。结果:与正常增生期子宫内膜组织及子宫内膜不典型增生组织相比,子宫内膜癌组织中RECK蛋白阳性表达率显著降低(χ2=9.307,P<0.05),MMP-9蛋白阳性表达率显著增高(χ2=11.438,P<0.05),RECK蛋白与MMP-9蛋白在子宫内膜癌中的表达存在明显负相关(P<0.01)。RECK蛋白的表达水平与临床分期、组织学分级、肌层浸润深度及淋巴结转移密切相关(均P<0.05);MMP-9蛋白的表达水平与临床分期、组织学分级、肌层浸润深度密切相关(均P<0.05),而与淋巴结转移无关。结论:RECK蛋白的表达缺失和MMP-9的表达可能与子宫内膜癌的发生、发展及浸润转移有关。     

HOXA10在子宫内膜癌中的表达及调控机制探讨

目的:探讨HOXA10在子宫内膜癌组织中的表达情况,以及miRNA135a对HOXA10表达的调控和对子宫内膜癌细胞侵袭能力的影响。方法:通过靶基因预测确定miRNA135a与HOXA10的相关性。应用免疫组化法检测HOXA10在子宫内膜癌组织中的表达。通过脂质体转染法瞬时转染HEC-1B和Ishikawa细胞系建立瞬时过表达miRNA135a模型。Real-time PCR和Western blot法检测转染前后HOXA10 mRNA和蛋白水平表达的变化,通过划痕实验、Transwell侵袭实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化。结果:子宫内膜癌中HOXA10表达水平显著低于正常子宫内膜组织(P0.01);过表达miRNA135a后,HEC-1B和Ishikawa细胞的迁移和侵袭能力显著增强,差异有统计学意义(P0.01),两种细胞中HOXA10 mRNA和蛋白水平均显著降低(P0.01)。结论:子宫内膜癌中miRNA135a通过抑制HOXA10促进内膜癌细胞的侵袭和迁移能力,参与子宫内膜癌生物学行为的调控。     

子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达及其甲基化状态的研究

目的:研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌中孕激素受体亚型表达下调的机制。方法:(1)应用Real-Time PCR法检测子宫内膜癌及正常组织中孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA的表达及去甲基化试剂5-Aza-CdR处理Ishikawa细胞前后孕激素两种受体亚型及DNA甲基化转移酶mRNA的表达;(2)应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa中PRA、PRB的甲基化状态。结果:与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,总PR表达显著降低,与病理类型相关;PRB表达显著下降,与其临床特征无关。子宫内膜癌细胞系Ishikawa中,加入5-Aza-CdR2.5μmol/L48h后,孕激素受体亚型PRA、PRB甲基化条带均消失;孕激素受体亚型PRA、PRB mRNA表达水平增加;同时Ishikawa细胞中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3B表达下调。结论:子宫内膜癌组织中,孕激素受体亚型mRNA表达下调可能与子宫内膜癌的发生相关;孕激素受体亚型表达下调与其启动子区甲基化状态相关;去甲基化试剂5-Aza-CdR可逆转基因启动子区的甲基化状态,恢复PR基因的表达。     

EGFR过表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)过表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:选取子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞株,利用脂质体将携带EGFR基因的质粒转染到Ishikawa细胞株建立EGFR过表达的Ishikawa细胞株,应用RT-PCR、Western blot检测上述3种细胞中EMT相关指标E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin的表达量。结果:低分化、高侵袭性的KLE细胞中EGFR呈高表达,且KLE细胞中上皮标志物E-cadherin和α-catenin的蛋白表达量均低于Ishikawa细胞(P<0.01),间质标志物N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量则高于Ishikawa细胞(P<0.01),EGFR过表达处理后,Ishikawa细胞E-cadherin、α-catenin mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01),N-cadherin、Vimentin mRNA及蛋白表达量则显著升高(P<0.01)。结论:EGFR过表达引起子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化。     

eIF-4E和PDGF在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:探讨子宫内膜癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eIF-4E)及血小板衍生生长因子(PDGF)蛋白的表达及临床意义。方法:用免疫组化法检测51例子宫内膜癌组织、35例子宫内膜癌周2 cm组织及42例正常子宫内膜组织中eIF-4E及PDGF蛋白的表达,分析其与子宫内膜癌临床病理特征的关系。结果:eIF-4E蛋白在正常子宫内膜与子宫内膜癌周组织中的表达差异无统计学意义(P0.05),其在子宫内膜癌组织中的表达明显高于正常子宫内膜组织及子宫内膜癌周组织(P0.05);eIF-4E蛋白在子宫内膜癌高中分化组和低分化组中的阳性表达差异无统计学意义(P0.05)。PDGF蛋白在正常子宫内膜与子宫内膜癌周组织中的表达差异无统计学意义(P0.05),其在子宫内膜癌中的表达明显高于正常内膜和子宫内膜癌周组织(P0.05);PDGF蛋白在子宫内膜癌低分化组的表达高于高中分化组织(P0.05)。结论:在子宫内膜癌中eIF-4E和PDGF表达增高。PDGF在低分化癌组织的表达高于高中分化癌组织,其在子宫内膜癌形成的早期阶段可能起一定作用;而eIF-4E在癌组织中呈持续表达,可能可作为一种新的肿瘤标志物。     

生长抑制因子1在子宫内膜异位症的表达

目的:探讨生长抑制因子1(ING1)在子宫内膜异位症(EMs)发病机制中的作用。方法:采用免疫组化SABC法检测40例患者(EMs)在位及异位子宫内膜组织ING1的表达,并与20例正常子宫内膜(对照组)进行比较。结果:ING1在EMs组异位腺体的表达分别低于在位腺体及对照组(P<0.05),在异位间质的表达低于对照组间质(P<0.05);ING1在EMs组、对照组增生期与分泌期的表达及在EMs组I-Ⅱ期与Ⅲ-IV期异位腺体和间质间的表达均无明显差异(P>0.05)。结论:ING1在异位内膜的腺体及间质中的低表达可能在EMs的发病中起重要作用。ING1表达量与EMs的严重程度无关。     

华蟾素与子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的实验研究

目的：探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的影响和意义。方法：体外培养内膜癌HHUA细胞,以0.25、2.5和25 g/L的华蟾素干预后,四唑盐比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应检测CD44s表达,transwell小室分析细胞的体外侵袭力。结果：华蟾素对内膜癌HHUA细胞的半数抑制浓度（IC50）为华蟾素生药（0.79±0.21） g/L。对照组CD44s mRNA表达为1.31±0.25、侵袭细胞数为60.50±2.52;0.25 g/L华蟾素对内膜癌HHUA细胞CD44smRNA表达和侵袭力无影响（均P＞0.05）;2.5 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为1.02±0.23、侵袭细胞数为30.50±3.95,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为0.97±0.39、侵袭细胞数为22.50±4.22,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L和2.5 g/L华蟾素2个浓度组差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：2.5 g/L华蟾素可抑制内膜癌HHUA细胞的侵袭性生长。     

子宫内膜癌Dickkopf1表达及对内膜癌侵袭力的影响

目的:研究Dickkopf1在子宫内膜癌组织和Ishikawa细胞系的表达及对子宫内膜癌侵袭力的影响。方法:应用免疫组化和免疫荧光法检测子宫内膜癌组织和Ish-ikawa细胞系中Dickkopf1的表达定位;向子宫内膜癌Ishikawa细胞系施加外源性Dickko-pf1,应用Transwellchamber法进行体外侵袭试验,检测它对内膜癌侵袭能力的影响。结果:Dickkopf1在子宫内膜癌腺上皮和基质组织中均有表达,腺上皮的表达高于基质;Dickkopf1主要表达于内膜癌细胞浆和细胞膜中;施加外源性Dickkopf1后,子宫内膜癌细胞的侵袭能力下降。结论:Dickkopf1能减弱子宫内膜癌的侵袭能力,它有望作为内膜癌的治疗靶点。     

雌、孕激素对人子宫内膜Pbx2蛋白表达的影响

目的:探讨人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞中雌、孕激素对Pbx2蛋白表达的影响。方法:采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)连接法检测人增生期、分泌中期和蜕膜期子宫内膜中Pbx2的表达和分布;体外培养人子宫内膜基质细胞和高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别加入雌激素、孕激素、雌、孕激素联合刺激48 h,并以不加雌、孕激素的基质细胞核和Ishikawa细胞为对照组,采用免疫组织化学、免疫印迹法测定各种条件下Ishikawa细胞中Pbx2蛋白的表达。结果:①在人各期子宫内膜组织中,Pbx2表达于腺上皮细胞和基质细胞的细胞核中;Pbx2在分泌中期和蜕膜期基质细胞中的表达显著高于增生期,但在腺上皮细胞中增生期组织的表达高于分泌中期和蜕膜期,差异均具有统计学意义(P<0.05)。②Western blotting结果显示,在孕激素和雌、孕激素联合处理Ishikawa细胞组中,Pbx2的表达显著低于对照组(P<0.05),雌激素处理后Pbx2的表达与其他各组间的表达无显著性差异(P>0.05),在人子宫内膜基质细胞(ESC)中,Pbx2的表达在雌、孕激素处理各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:在人子宫内膜腺上皮Ishikawa细胞中孕激素对Pbx2的表达具有下调作用,在人子宫内膜基质细胞中,Pbx2的调控可能是非雌、孕激素依赖性的。     

PGP9.5在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的 :研究蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)在子宫内膜癌组织中的表达,并探讨其与子宫内膜癌的发生、发展和侵袭、转移的关系。方法:采用免疫组织化学二步法检测60例子宫内膜癌及10例正常子宫内膜中PGP9.5的表达。结果:在60例子宫内膜癌组织中有45例(75.0%)表达PGP9.5,而正常子宫内膜细胞中仅2例(20%)表达PGP9.5。PGP9.5的表达与子宫内膜癌的分期、分化程度及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、子宫内膜癌的组织学类型无关(P>0.05)。结论:PGP9.5在子宫内膜癌侵袭及转移过程中可能发挥重要作用,PGP9.5的表达可作为肿瘤组织侵袭子宫内膜的一个分子标记物。     

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

Normal endometrial stromal cells regulate 17β-estradiol-induced epithelial-mesenchymal transition via slug and E-cadherin in endometrial adenocarcinoma cells in vitro

Stroma–tumor communication participates in the pathogenesis of endometrial carcinomas. In previous studies, we found that normal stromal cells inhibited the growth of endometrial carcinoma cells. Here, we investigated the role of normal stromal cells in the epithelial-mesenchymal transition (EMT) of endometrial carcinoma cells and explored the possible mechanism implied. We found that conditioned medium (CM) by normal endometrial stromal cells (NSC) reduced cell growth and induced cell apoptosis in Ishikawa cells. CM by NSC inhibited 17β-estradiol-induced cell growth and apoptosis decrease in Ishikawa cells. Moreover, CM by NSC inhibited the migration and invasion, and 17β-estradiol-induced migration and invasion in Ishikawa cells. Meanwhile, CM by NSC decreased Slug expression and 17β-estradiol-induced Slug expression, increased E-cadherin expression and abolished 17β-estradiol-induced E-cadherin reduction in Ishikawa cells. In conclusion, normal stromal factors can inhibit 17β-estradiol-induced cell proliferation and apoptosis inhibition, and abolished 17β-estradiol-induced EMT in endometrial cancer cell via regulating E-cadherin and Slug expression.     

17β-雌二醇对人子宫内膜癌细胞的增殖及P21ras和p-Erk表达的研究

目的:探讨17β-雌二醇(E2)对人子宫内膜腺癌雌激素受体(ER)阳性的Ishikawa和ER阴性的HEC-1A细胞增殖,细胞周期及其对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白P21ras和p-Erk表达的影响及意义。方法:用MTT法,流式细胞技术检测不同浓度E2作用Ishikawa和HEC-1A细胞不同时间的细胞吸光度值及细胞周期,用免疫细胞化学法检测上述细胞中P21ras和p-Erk的表达。结果:随E2浓度增加,Ishikawa细胞吸光度值上升并呈时间依赖性(P<0.01),G0～G1期比例下降(P<0.01),S期比例升高(P<0.01);HEC-1A细胞吸光度值及细胞周期无明显变化(P>0.05);10-6mol/LE2作用于Ishikawa细胞30min时,P21ras和p-Erk活化表达最强,作用于HEC-1A细胞15min时,P21ras和p-Erk即有明显表达而且达高峰,随着E2浓度增加两种细胞中P21ras和p-Erk表达均逐渐增加,呈浓度依赖性。结论:E2可促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和周期进展,而且可以促进Ishikawa和HEC-1A中P21ras和p-Erk表达增加。