具核梭杆菌促进食管癌细胞增殖的研究

目的研究具核梭杆菌（Fusobacteriumnucleatum,n）对食管癌细胞粘附入侵和增殖的作用,探讨其作用机制。方法本实验应用具核梭杆菌标准株ATCC25586与食管癌Eca-109细胞共培养,建立具核梭杆菌与食管癌细胞体外的肿瘤微环境模型。采用细胞免疫组化染色法检测细菌对细胞的粘附入侵能力[3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐]MTF及流式细胞仪检测Eca-109细胞的增殖,酶联免疫吸附试验方法（ELISA）检测观察正常对照组、细菌与细胞共培养模型组的细胞培养液中IL-6的浓度,Westernblot检测STAT3和p-STAT3的蛋白表达。结果具核梭杆菌可粘附和入侵到Eca-109细胞内。与对照组比较,加入具核梭杆菌的实验组作用后第1—4天Eca-109细胞增殖加快,48h内其细胞培养液内IL-6浓度也是对照组的4倍。Westernblot结果显示,与对照组相比,具核梭杆菌处理组p-STAT3蛋白表达增加,STAT3蛋白表达没有明显改变。中和IL-6受体蛋白后,具核梭杆菌处理组p-STAT3、STAT3蛋白表达量均不变。结论具核梭杆菌通过刺激IL．6的产生促进食管癌细胞的增殖。     

构建具核梭杆菌诱导的实验性根尖周炎小鼠模型

背景:根尖周炎是常见的口腔炎症性疾病,针对该疾病的动物模型研究已经广泛开展,但模型建立方法尚不统一。目的:建立具核梭杆菌诱导的小鼠实验性根尖周炎模型。方法:25只BALB/c小鼠分为对照组和1,3,5,7 d实验组,每组5只,对照组小鼠不进行处理,实验组小鼠双侧下颌第一磨牙开髓后在根管内导入具核梭杆菌菌液,暂封膏封闭牙冠部,分别在术后1,3,5,7 d时收取下颌骨样本,对照组在0 d时收集下颌骨样本。Micro-CT检测根尖牙槽骨吸收情况,苏木精-伊红染色观察根尖区组织变化,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察根尖区破骨细胞的表达。结果与结论:(1)Micro-CT扫描结果显示,术后3 d小鼠下颌第一磨牙根尖牙周膜间隙开始增宽,7 d时出现明显的牙槽骨吸收;根尖区三维重建结果显示,与对照组比较,术后7 d根尖区骨体积分数降低,骨小梁分离度增加(P <0.05);(2)苏木精-伊红染色结果显示,术后3 d根尖区观察到明显的炎细胞浸润,之后浸润范围逐渐扩大;(3)抗酒石酸酸性磷酸酶染色结果显示,术后3,5,7 d根尖区破骨细胞数量持续增加;(4)结果表明,在根管内导入具核梭杆菌的方法成功建立了...     

具核梭杆菌通过NF-κB信号通路促进结直肠癌细胞HCT116中TNF-α诱导的炎症性改变

目的:探讨具核梭杆菌( Fusobacterium nucleatum, Fn)感染促进TNF-α诱导的结直肠癌细胞HCT116炎症改变的机制。 方法:建立 Fn感染细胞及TNF-α炎症诱导模型并分为4组,即未感染对照组、 Fn感染组、TNF-α诱导组、 ...     

牡荆素调控miR-219a-5p表达对LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的影响

慢性气道炎症性疾病是多种细胞因子引起的慢性呼吸系统疾病,支气管上皮细胞在维持气道微环境稳态中起重要作用,支气管上皮细胞损伤与感染性疾病的发生密切相关[1-2].牡荆素是一种天然黄酮类化合物,可通过抗神经凋亡、调节炎症因子对神经系统起保护作用[3].牡荆素还可通过减少心肌细胞凋亡,降低炎症因子水平保护心肌炎症细胞免受CV...     

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达

目的 :检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞 β 防御素 2基因的激活作用及其活性组分。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法和Northern杂交检测HT 2 9细胞hBD 2mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成份。结果 :RT PCR和Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下HT 2 9细胞无可见的hBD 2mRNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的hBD 2mRNA表达。结论双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD 2基因的表达 ,双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用的活性组分。双…     

槟榔碱诱导上皮细胞凋亡

目的:观察槟榔碱对上皮细胞Hacat凋亡的影响.方法:用0,25,50,75,100,125 μg/mL槟榔碱刺激上皮细胞Hacat 24 h,抽提DNA进行琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测.结果:100和125 μg/mL槟榔碱刺激后上皮细胞Hacat DNA梯状条带明显;50,75,100,125 μg/mL槟榔碱诱...     

RIP1介导的坏死性凋亡通过NF-κB通路调节肾小管上皮细胞炎症反应

目的:探讨受体相互作用蛋白1(RIP1)介导的坏死性凋亡对肾小管上皮细胞炎症的影响及其机制。方法:体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,应用肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合Z-VAD-FMK刺激24 h。乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞坏死百分比,Western blot检测观察RIP1、IKK-α和NF-κB p65的表达,Western blot和ELISA测定白细胞介素1β(IL-1β)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,real-time PCR检测NF-κB p65的mRNA表达水平。进一步应用RIP1抑制剂necrostatin-1(Nec-1)和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)进行干预,检测上述指标。结果:与对照组比较,TNF-α联合Z-VAD-FMK刺激组(T/Z组)的HK-2细胞中cleaved RIP1蛋白水平明显升高,IKK-α和NF-κB p65的蛋白水平明显增高,LDH释放明显增多(P<0. 01)。Western blot和ELISA检测炎症相关指标IL-1β和MCP-1的水平均有明显升高,real-time PCR检...     

肠粘膜上皮细胞的免疫学功能

肠道是人体重要的消化和吸收器官,同时也是表面积最大的免疫器官,肠粘膜上皮细胞处于机体与外界抗原接触的第一线,表面表达一系列表面分子,在生理及病理情况下能分泌一系列细胞因子,在感染防御及抗原吸收、转运、提呈等方面具有重要作用,本文重点介绍肠上皮细胞的免疫学功能。     

双歧杆菌胞壁蛋白诱导人肠腺上皮细胞β-防御素2(hBD-2)mRNA的表达

目的 :检测双歧杆菌对人肠腺上皮细胞 β -防御素 - 2基因的激活作用及其活性组分。 方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)法和Northern杂交检测HT - 2 9细胞hBD - 2mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、超速离心、蛋白萃取等方法分离双歧杆菌胞壁蛋白质成份。结果 :RT -PCR和Northern杂交分析显示 ,在正常培养条件下HT - 2 9细胞无可见的hBD - 2mRNA表达信号 ,但在双歧杆菌菌体、细胞壁和胞壁蛋白刺激下均检测出显著的hBD - 2mRNA表达。结论 :双歧杆菌能诱导人肠腺上皮细胞hBD - 2基因的表达 ,双歧杆菌胞壁蛋白可能是其诱导作用…     

茶黄素通过调控miR-190表达对LPS诱导的结肠上皮细胞炎症损伤的影响

目的:研究茶黄素是否通过调控miR-190表达影响脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞炎症损伤.方法:采用LPS诱导结肠上皮细胞NCM460损伤,并给予16、32、64μmol/L浓度的茶黄素.ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot分析Bcl-2和Ba...     

双岐杆菌胞壁蛋白诱导人肠上皮细胞β-防御素-2基因的表达及NF-κB的活化

本研究应用超声破碎和离心法分离获得双岐杆菌胞壁，2％SDS提取其胞壁蛋白．superdex-200柱层析获得多个蛋白组分。RT-PCR和Northem杂交检测到双岐杆菌全菌、胞壁、胞蛋白均可诱导人肠上皮细胞株HT-29 and Caco-2细胞表达人β-防御素-2(HBD-2)mRNA的显著表达。为了在蛋白质水平上检测其基因的增强表达。构建了HBD-2基因原核表达载体，并制备获得其重组制品的多克隆抗体，ELISA、     

青蒿素减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤的实验研究

目的:探究青蒿素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肠上皮IEC-6细胞屏障功能损伤的影响。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为5组:对照组、LPS(100 mg/L)组和LPS+青蒿素(30、50和100μmol/L)组,MTT法检测各组细胞毒性变化,ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化,电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER),酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1和occludin)以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达的变化。结果:LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC-6细胞均无毒性。与对照组相比,LPS处理下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB的mRNA和蛋白表达明显增加,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达升高(P0.05),均呈现浓度依赖性。结论:青蒿素可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。     

miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用北大核心CSCD

目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡

目的 探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制.方法 将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50 μmol/L4-HNE作用4 h组,观察4-HNE作用4 h后的细胞凋亡情况.Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况.结果 细胞经30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变.对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50μmol/L 4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45.30 μmol/L和50 μmol/L 4-HNE组与对照组及10 μmol/L 4-HNE组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10 μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 30、50 μmol/L 4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡.     

IL-22诱导胃上皮细胞释放炎症因子并促进淋巴细胞趋化

为探讨IL-22在胃部炎症中的作用,我们采用流式细胞术和组织免疫荧光染色检测胃上皮细胞系AGS细胞及胃组织中IL-22受体的表达;采用IL22刺激胃上皮细胞系AGS及GES-1细胞,定量PCR检测其S100钙结合蛋白(S100)A8、S100A9、IL-8、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-10的表达;通过Transwell细胞趋化试验检测IL-22对淋巴细胞的趋化作用。结果发现,胃上皮细胞系及胃组织中有IL-22R1表达,并且IL-22能够诱导胃上皮细胞产生炎症因子及MMP,某些因子可促进淋巴细胞趋化。据此说明IL-22通过调控胃上皮细胞产生炎症因子并趋化淋巴细胞浸润,参与胃部炎症反应。     

骨髓间充质干细胞通过调控miR-142-3p保护LPS诱导大鼠肺上皮细胞RLE-6TN的炎症损伤与凋亡

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对脂多糖(LPS)介导的大鼠肺上皮细胞RLE-6TN炎症损伤与凋亡的作用及其可能机制.方法:CCK8法筛选LPS干预大鼠肺上皮细胞RLE-6TN的浓度与时间,qPCR检测细胞miR-142-3p表达水平.将RLE-6TN细胞分为6组:对照组、LPS组、BMSCs培养液(DMEM/...     

激活TLR2通过促进神经细胞死亡诱导假激酶表达诱导肺上皮细胞凋亡

目的探讨特异性激活Toll样受体2(TLR2)对于小鼠MLE-12肺上皮细胞发生细胞凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法应用(0、1、3.3、10、33)ng/mL的TLR2特异性配基PAM3CYS4处理24 h或用33 ng/mL PAM3CYS4处理0、8、16、24、36、48 h,激活肺上皮细胞MLE-12的TLR2,使用Western blot法检测神经细胞死亡诱导假激酶(NIPK)和活性caspase-3的蛋白表达,用TUNEL凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果与正常培养的MLE-12细胞相比,特异性激活TLR2可以促进NIPK和活性caspase-3的表达增加,细胞凋亡的阳性细胞数目增加;使用siRNA技术特异性抑制NIPK的表达后,显著抑制活性caspase-3表达,凋亡细胞数减少。结论特异性激活TLR2可增加NIPK的表达,促进肺上皮细胞发生凋亡。     

lncRNA CTBP1-AS2靶向miR-205-5p影响髓核细胞凋亡及炎症反应的分子机制研究

目的：探讨lncRNA CTBP1-AS2对IL-1β诱导的大鼠髓核细胞凋亡及炎症反应的影响及可能作用机制。方法：采用IL-1β诱导大鼠髓核细胞建立细胞损伤模型,随机分为：对照组、模型组、si-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+模型组、miR-NC+模型组、miR-205-5p+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-NC+模型组、si-lncRNA CTBP1-AS2+anti-miR-205-5p+模型组;qRT-PCR检测lncRNA CTBP1-AS2、miR-205-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测lncRNA CTBP1-AS2与miR-205-5p的靶向关系;Western blot检测Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组lncRNA CTBP1-AS2表达、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、TNF-α、IL-6水平及细胞凋亡率均明显升高,miR-205-5p表达降低（P<0.05）;与si-NC...     

C-反应蛋白诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨与微炎症状态相应的C-反应蛋白(CRP)水平是否诱导肾小管上皮细胞凋亡。方法:以微炎症状态相应的CRP浓度刺激HK-2细胞。采用AnnexinⅤ-FITC、PI染色和流式细胞术检测凋亡细胞的百分率。采用Hoechst 33258染色观察肾小管上皮细胞凋亡的形态学改变。比色法检测细胞caspase-3活性。Real-time PCR检测促凋亡基因bax、抗凋亡基因bcl-2的mRNA表达。结果:CRP呈剂量和时间依赖性地诱导HK-2细胞凋亡,细胞凋亡在CRP浓度为10 mg/L时达高峰,在20 mg/L时则以晚期凋亡和坏死为主。Hoechst 33258细胞核染色显示CRP作用的HK-2细胞呈现染色质浓缩、碎裂或染色质边集等细胞凋亡的特点。CRP增高细胞caspase-3的酶活性、上调促凋亡基因bax的表达和下调抗凋亡基因bcl-2的表达。结论:CRP轻度增高可诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

结核分支杆菌培养上清诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

目的：观察呼吸道上皮细胞对结核杆菌产物产生的炎症反应，探讨炎症反应信号传递的机制。方法：制备结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清，用培养上清刺激肺上皮细胞株SPC-A-1和A549，酶联免疫吸附实验检测细胞IL-8表达量。用突变MyD88表达重组质粒转染SPC-A-1细胞，观察MyD88与结核杆菌培养上清诱导上皮细胞炎症反应信号传递的关系。结果：结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清明显增加SPC-A-1和A549细胞IL-8的表达。用突变MyD88表达重组质粒pcDNA3．1-MyD88转染SPC-A-1。结果显著抑制了结核杆菌培养上清对SPC-A-l细胞的炎症刺激作用。结论：结核杆菌培养上清能够诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达，，Toll／IL-1受体信号通路及MyD88分子与细胞炎症反应的信号传递相关，提示在肺结核病发病过程中。结核杆菌的代谢产物可能刺激肺上皮细胞产生炎症细胞因子，参与肺结核炎症病变的形成。