补肾健脾活血方对大鼠悬尾试验性骨质疏松和肌萎缩影响的实验研究

目的:探讨补肾活血健脾方对悬尾大鼠骨密度和肌萎缩的影响。方法:采用SPF级健康SD大鼠48只,随机平均分为健脾活血方高剂量组,低剂量组,造模组和空白对照组,每组12只。除空白对照组外,其余各组均选用大鼠悬尾实验作为废用性骨质疏松和肌萎缩模型的建立动物模型造模共计28 d,造模期间,补肾健脾活血方高剂量组给予补肾健脾活血方提取物2.50 g/(kg·d)灌胃,补肾健脾活血方低剂量组给予补肾健脾活血方提取物1.25 g/(kg·d)灌胃,造模组和空白对照组给予等剂量饮用水灌胃,每天1次。28 d后,全部大鼠腹腔采血后处死,取右侧股骨以及L1~4椎骨和完整分离左右侧比目鱼肌。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清成骨标记物血清骨形成蛋白2(BMP-2)、骨钙素(OCN)及破骨标记物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)进行测定,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠股骨成骨相关基因OCN,Runx-2的表达,双能X线检测各组椎体和股骨骨密度的表达,并测量比目鱼肌湿重与横截面积测量。结果:与造模组相比,健脾活血方高剂量组大鼠右侧股骨和椎体BMD显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组血清TRAP呈显著性降低(P<0.01,P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组大鼠股骨OCN和Runx-2 mRNA的表达显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组和低剂量组左侧和右侧比目鱼肌平均湿重显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型和II型纤维横截面积显著性增高(P<0.05),健脾活血方低剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型纤维横截面积相比造模组呈显著性增高(P<0.05)。结论:补肾活血健脾方可以防止失重引起的骨密度降低和肌萎缩,为临床用于治疗废用性骨质疏松和肌萎缩奠定了理论基础。     

健脾补肾方对小鼠Lewis肺癌抑制作用及对VEGF、CD44V6表达的影响

目的观察健脾补肾方对小鼠Lewis肺癌抗肿瘤作用,并探索其抗肿瘤的相关机制。方法采用Lewis肺癌移植瘤C57BL/6小鼠模型观察健脾补肾方抗肿瘤作用,并采用免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和细胞黏附因子第6变异株(CD44V6)蛋白的表达情况。结果①环磷酰胺组(CTX)、健脾补肾方低剂量组、健脾补肾方低剂量加环磷酰胺组、健脾补肾方高剂量加环磷酰胺组对移植性Lewis肺癌小鼠瘤体的抑制率为44%、17.7%、53.9%和72.4%,以健脾补肾方高剂量加环磷酰胺组抑制作用最佳;②与对照组相比,健脾补肾方低剂量组能增加荷瘤小鼠脾指数,有统计学意义(P<0.05)。低、高剂量健脾补肾方与CTX合用,能对CTX所致荷瘤小鼠脾脏萎缩有一定的拮抗作用;③健脾补肾方与环磷酰胺联合用药表现为两药作用相加;④健脾补肾方能下调Lewis肺癌小鼠肿瘤组织VEGF、CD44V6蛋白的表达水平。结论健脾补肾方对小鼠Lewis肺癌具有显著的抗肿瘤作用,以健脾补肾方高剂量加环磷酰胺组最佳,两药合用有相加作用,其作用机制可能与该药能降低肿瘤组织VEGF、CD44V6蛋白的表达水平有关。     

基于FXR/SHP/SREBP-1c及FXR/ApoCⅡ通路探讨健脾升清方对非酒精性脂肪性肝病大鼠脂代谢的作用

目的 基于法尼酯衍生物X受体(FXR)/微小异源二聚体(SHP)/固醇调节元件结合蛋白1c (SREBP-1c)及FXR/载脂蛋白CⅡ(ApoCⅡ)通路探讨健脾升清方调控非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠脂代谢的分子机制。方法 48只SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、健脾升清方高剂量组、健脾升清方中剂量组、健脾升清方低剂量组和奥贝胆酸组。除空白组正常饲养外，其余各组予高脂饲料喂养12周建立NAFLD模型。健脾升清方高、中、低剂量组分别按15.2、7.6和3.8 g/kg剂量灌胃；奥贝胆酸组按10.0 mg/kg剂量灌胃；空白组和模型组灌胃等量生理盐水。每日1次，持续4周。比较各组大鼠体质量和Lee’s指数。使用免疫酶法检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量，光学显微镜下观察肝脏组织炎症、脂肪变性和气球样变并评分；免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测肝脏FXR、SHP、SREBP-1c及ApoCⅡ蛋白及mRNA的表达。结果 健脾升清方高、中、低剂量组大鼠体质量、Lee’s指数、血清TC均低于模型组(P<0.0...     

益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠生精细胞凋亡、caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察益肾通络方对精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量、生精细胞、caspase-3蛋白表达、睾丸生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)的影响。方法:取清洁级雄性SD大鼠40只随机均分为5组:假手术组、精索静脉曲张模型组、益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组。模型建立4周后,假手术组及模型组均按15 m L·(kg·d)~(-1)给予去离子水,益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组、益肾通络方高剂量组分别给予益肾通络方颗粒剂混悬液1.5g·(kg·d)~(-1)、3.0 g·(kg·d)~(-1)、6.0 g·(kg·d)~(-1),灌胃,1次·d-1,持续60 d。60 d后5组大鼠均脱臼处死并分别取双侧睾丸,电子天平称取睾丸质量,并检测caspase-3在睾丸组织中的表达,生精细胞的凋亡并计算AI。结果:(1)睾丸质量的变化:5组大鼠左右两侧睾丸质量:假手术组为[(1.88±0.19)、(1.95±0.20)g]、精索静脉曲张模型组为[(0.72±0.23)、(1.31±0.34)g]、益肾通络方低剂量组[(0.73±0.28)、(1.39±0.31)g]、益肾通络方中剂量组为[(0.78±0.25)、(1.42±0.22)g]、益肾通络方高剂量组为[(1.08±0.28)、(1.64±0.33)g],假手术组、精索静脉曲张模型组与益肾通络方高剂量组大鼠两侧睾丸质量比较,差异具有统计学意义(P0.05);益肾通络方低剂量组、益肾通络方中剂量组与精索静脉曲张模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)益肾通络方各剂量组大鼠的生精细胞caspase-3蛋白表达低于精索静脉曲张模型组,高于假手术组;益肾通络方低剂量组大鼠生精细胞caspase-3蛋白表达高于中剂量组,益肾通络方中剂量组生精细胞caspase-3蛋白表达高于高剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)假手术组AI评分最低,益肾通络方干预组AI评分低于精索静脉曲张模型组;益肾通络方干预组组内比较,高剂量组低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:精索静脉曲张模型大鼠睾丸质量减轻、生精细胞caspase-3蛋白表达升高、AI增加,这可能是影响生育力的机制之一。单侧精索静脉曲张引起睾丸损害是双侧的,但右侧比左侧损害轻。益肾通络方能够降低生精细胞caspase-3蛋白表达,减少精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,对睾丸生精功能具有保护作用,进而可提高睾丸的生殖能力。     

健脾补肾解毒方醇提物对人大肠癌细胞转移及上皮-间质转化的影响

目的:探讨健脾补肾解毒方(JBJR)对大肠癌细胞转移及其对上皮-间质转化的作用。方法:1设健脾补肾解毒方醇提物0、30、60、90、120、150、180、210、240μg/ml浓度组,以CCK-8法检测各组对人大肠癌Lo Vo细胞增殖的抑制作用。2设空白细胞组、健脾补肾解毒方低剂量组(30μg/ml)、健脾补肾解毒方中剂量组(60μg/ml)、健脾补肾解毒方高剂量组(120μg/ml)、5-Fu组(15μg/ml)及桂枝汤醇提物组(120μg/ml),以Transwell法检测各组对大肠癌Lo Vo细胞侵袭转移的影响。3采用Real time PCR、Western blot、ELISA分别检测空白细胞组及健脾补肾解毒方低、中、高剂量组相关基因、特征蛋白和侵袭转移相关因子的表达情况。结果:1健脾补肾解毒方醇提物对大肠癌Lo Vo细胞有明显的增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,48 h的半数抑制浓度IC50为120μg/ml。2健脾补肾解毒方醇提物可不同程度地抑制Lo Vo细胞的转移能力,呈明显的剂量依赖性;其中高剂量组与5-Fu组的作用无统计学差异(P0.05),而桂枝汤组无明显的抑制作用。3健脾补肾解毒方作用Lo Vo细胞48 h后,可剂量依赖性地上调E-cadherin mRNA、Snail及E-cadherin蛋白表达,下调Snail mRNA与Vimentin蛋白表达,实现抑制Lo Vo细胞的上皮-间质转化;可以抑制Lo Vo细胞分泌MMP-2、MMP-9。结论:健脾补肾解毒方醇提物可抑制大肠癌细胞转移,抑制上皮-间质转化和转移相关因子。     

健脾补肾方对小鼠肠癌原位移植瘤肺转移及MMP-2蛋白表达的影响

目的:探讨健脾补肾方对肠癌原位移植瘤小鼠肺转移以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达的影响。方法:建立小鼠肠癌原位移植瘤模型,将小鼠随机分为模型组(生理盐水组)及健脾补肾方高、中、低剂量组,每组6只。各组予相应的药物每日灌胃给药1次,连续治疗14 d,于末次给药结束后处死动物,HE染色观察肺转移情况,免疫组化及Western Blot法检测MMP-2的蛋白表达。结果:健脾补肾方各剂量组的肺转移面积明显小于生理盐水组;健脾补肾方各剂量组MMP-2多呈弱或中阳性表达,而生理盐水组呈强阳性表达,MMP-2蛋白在健脾补肾方各剂量组的表达均低于生理盐水组(P<0.05)。结论:健脾补肾方具有抑制小鼠肠癌原位移植瘤模型肺转移的作用,并可能与下调MMP-2蛋白的表达有关。     

滋肾活血法联合低分子肝素改善小鼠复发性流产及对VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路的影响

目的 通过观察滋肾活血法联合低分子肝素对复发性流产小鼠流产率及蜕膜中血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体2/磷酸化的细胞外调节蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶（VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK）信号通路的影响,以探讨其作用机制。方法 68只未孕CBA/J雌鼠,26只DBA/2雄鼠,8只BALB/c雄鼠,按雌：雄=2：1,建立CBA/J×DBA/2习惯性流产小鼠模型50只,随机数字法分为模型组（蒸馏水）、LMWH组（1000U/kg）、滋肾活血方低剂量（3.9g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方中剂量（11.7g/kg）+LMWH（1000U/kg）组、滋肾活血方高剂量（35.1g/kg）+LMWH（1000U/kg）组,每组10只;建立CBA/J×BALB/c正常妊娠小鼠模型10只作为正常对照组（蒸馏水）。按照人鼠体表面积换算每日滋肾活血方灌胃药量和LMWH注射量,给药干预2周。计算各组小鼠胚胎丢失率;免疫组化法测定小鼠蜕膜中VEGF蛋白的表达;蛋白质印迹法（Western blot）测定小鼠蜕膜中VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK表达。结果 与正常对照组比较,模型组胚胎丢失率上升（38.38%比7.29%,P<0.05）,该组免疫组化VEGF蛋白平均光密度值降低[（0.22±0.07）比（0.23±0.01）,P<0.01],该组WB结果显示VEGF、VEGFR-2蛋白表达下降[VEGF：（2.01±0.08）比（2.90±0.06）;VEGFR-2：（2.62±0.01）比（3.15±0.08）,P均<0.05]。与模型组比较,LMWH组、滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组和滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率下降（23.76%、16.83%、12.75%、10.10%比38.38%,P均<0.05）,免疫组化结果显示上述4组的VEGF蛋白平均光密度值上升[（0.24±0.04）、（0.29±0.02）、（0.32±0.06）、（0.33±0.10）比（0.22±0.07）,P均<0.05],WB结果显示上述4组的VEGF、VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升[VEGF：（3.13±0.09）、（2.93±0.73）、（3.31±0.18）、（3.38±0.15）比（2.01±0.08）;VEGFR-2：（3.19±0.02）、（3.53±0.10）、（3.77±0.12）、（3.83±0.09）比（2.62±0.01）;p-ERK：（1.57±0.35）、（1.79±0.06）、（1.73±0.07）、（1.75±0.06）比（1.39±0.04）;ERK：（3.82±0.08）、（4.22±0.09）、（4.24±0.04）、（4.19±0.27）比（3.42±0.14）,P均<0.05]。与LMWH组比较,滋肾活血方低剂量+LMWH组胚胎丢失率无明显差异（P＞0.05）,滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组胚胎丢失率降低更显著（P均<0.05）;免疫组化结果显示VEGF蛋白平均光密度值在滋肾活血方低剂量+LMWH组、滋肾活血方中剂量+LMWH组、滋肾活血方高剂量+LMWH组上升（P均<0.05）;WB结果显示上述3组的VEGFR-2、p-ERK、ERK蛋白表达上升（P均<0.05）,VEGF蛋白表达无明显差异（P均>0.05）。结论 滋肾活血法联合LMWH能够改善复发性流产小鼠妊娠结局,其机制可能与激活VEGF/VEGFR-2/p-ERK/ERK信号通路有关。     

姜百胃炎片对幽门螺杆菌感染模型小鼠的干预作用

目的观察姜百胃炎片对幽门螺杆菌(Hp)感染模型小鼠体内抑菌作用。方法选用Hp SS1菌株,对实验小鼠(C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠)以Na HCO3和混合抗生素预处理、灌胃菌液的方法建立Hp感染小鼠模型。Hp感染成模小鼠随机分成模型组、三联治疗组[雷尼替丁19.5mg/(kg·d),阿莫西林130mg/(kg·d),克拉霉素65mg/(kg·d)]及姜百胃炎片高剂量组[(3.12g/(kg·d)]、中剂量组[(1.56g/(kg·d)]和低剂量组[(0.78g/(kg·d)]。用细菌培养、p H指示剂法、尿素酶试验、抗体试验等评估实验小鼠Hp感染程度。统计方法采用秩和检验。结果 C57BL/6小鼠空白组、模型组、三联治疗组及姜百胃炎片高、中、低剂量组Hp感染程度尿素酶试验平均秩和(R軍i,低优指标)分别为18.50、51.33、18.50、27.32、35.68和38.14,姜百胃炎片高剂量组Hp感染程度显著低于模型组(P0.05);BALB/c小鼠空白组、模型组、三联治疗组及姜百胃炎片高、中、低剂量组的组的R軍i分别为24.00、58.73、31.17、27.58、32.08和36.58,姜百胃炎片三个剂量组Hp感染程度均显著低于模型组(P0.05)。结论姜百胃炎片对Hp感染C57BL/6和BALB/c小鼠模型有抑菌作用。     

育麟方改善老龄雌性小鼠超促排卵作用的机制研究

[目的]观察育麟方对老龄导致卵巢储备功能下降(diminished ovarian reserve,DOR)小鼠卵母细胞数量与体外受精率的影响。[方法]将70只6～7月龄的C57BL/6J雌性小鼠随机分为育麟方高剂量组、育麟方中剂量组、育麟方低剂量组、脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)组和老龄对照组;另外14只C57BL/6J性成熟雌性小鼠作为青年对照组。育麟方高、中、低剂量组分别用25.0g/kg·d、12.0g/kg·d、6.0g/kg·d育麟方浓缩液灌胃,DHEA组用10.2mg/kg·d的DHEA灌胃,青年对照组和老龄对照组每日均采用蒸馏水0.2mL/10g灌胃,共用药40d。用药第38天开始腹腔序贯注射孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)10U、人绒毛膜促性腺激素(human choionic gonadotophin,HCG)10U行控制性超促排卵,每组选择7只小鼠收集并比较卵母细胞数量;余下7只与C57BL/6J青年雄性小鼠行体外受精(in vitro fertilization,IVF),观察体外受精率;收集各组小鼠卵巢组织,并采用Western blot检测β-catenin、Wnt4蛋白表达。[结果]与青年对照组小鼠比较,老龄对照组小鼠卵巢指数、卵母细胞数量和成熟卵率显著下降,差异具有统计学意义(P0.01),受精率显著下降(P0.01)。与老龄对照组比较,育麟方高剂量组、DHEA组小鼠卵巢指数明显升高(P0.01),且育麟方高剂量组高于DEHA组(P0.01);与老龄对照组比较,育麟方高剂量组、DHEA组卵母细胞数显著上升(P0.01),且育麟方高剂量组高于DHEA组(P0.05);育麟方高剂量组小鼠卵母细胞成熟卵率高于老龄对照组(P0.05)。[结论]高剂量育麟方可以改善老龄所致的卵巢指数下降、增加卵母细胞数量和成熟卵率,从而提高体外受精率。     

温阳通络方抗胶原诱导性关节炎小鼠滑膜新生血管形成的机制研究

探讨温阳通络方对抗胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）小鼠滑膜新生血管形成的作用机制。方法 复制胶原诱导型关节炎小鼠,随机分为甲氨蝶呤组、模型组、空白对照组、温阳通络方高、中、低剂量组,每组5只。测量足趾容积,采用HE染色、免疫组化、Western blot检测滑膜组织中Ang-2、VEGF蛋白表达情况。结果 造模前（0 d）、造模35 d,各组DBA/1小鼠足趾容积差异无统计学意义;造模48 d,各组足趾容积与空白对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。空白组、甲氨蝶呤组、温阳通络方高、中、低剂量组与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。空白组、模型组、温阳通络方低、中剂量组与甲氨蝶呤组比较,差异有统计学意义（P<0.01）,温阳通络高剂量组与甲氨蝶呤组比较,差异无统计学意义。模型组滑膜组织HE染色提示有大量淋巴细胞浸润及滑膜细胞增生;甲氨蝶呤组、温阳通络方高、中、低剂量组仅有少量淋巴细胞,未见明显滑膜细胞增生。模型组小鼠滑膜组织中有大量Ang-2、VEGF蛋白表达,而甲氨蝶呤组、温阳通络方高、中、低剂量组中Ang-2、VEGF蛋白表达明显减少（P<0.01）。Western blot检测,空白组、甲氨蝶呤组、温阳通络方高、中、低剂量组Ang-2、VEGF蛋白表达水平均较模型组明显降低。结论 温阳通络方能抗胶原诱导性关节炎小鼠滑膜组织新生血管形成,进而减轻滑膜炎症。     

鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(kg.d)、中剂量组14.2 g/(kg.d)、低剂量组7.1 g/(kg.d)灌胃治疗并且以复方鳖甲软肝片灌胃0.6 g/(kg.d)作阳性对照组治疗6周。以复制模型同样方式与用量于右后腿皮下注射橄榄油及生理盐水灌胃(10 ml/kg.d)作空白对照组。苏木精-伊红(HE)染色观察各组8周后肝纤维化变化程度,RT-PCR检测其转化生长因子β1(transforming growth factor beta one,TGF-β1)、Smad3及Smad7变化,免疫组化(S-P法)观测TGF-β1、smad3、smad7表达情况。结果 8周后,与模型组比较,鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组肝小叶结构破坏明显减轻,部分肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润与少量胶原纤维形成;肝组织TGF-β1与Smad3的mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.01),smad7 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)且鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组疗效并无显著差异。结论鳖甲煎改良方能显著改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β/smad信号通路有关。     

补肾活血方治疗大鼠糖尿病性勃起功能障碍的机理

目的研究补肾活血方对糖尿病(DM)性勃起功能障碍(ED)大鼠勃起功能的疗效及其作用机理。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、糖尿病模型组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方高剂量组,每组10只。糖尿病模型组、补肾活血方低剂量组、补肾活血方高剂量组3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ),构建糖尿病大鼠模型。正常组和糖尿病模型组进行生理盐水灌胃,补肾活血方低剂量组(3 g/kg)和高剂量组(6 g/kg)进行补肾活血方灌胃,疗程8周,8周后取材测定阴茎脏器指数和一抗、二抗浓度,采用Biopack电生理仪检测阴茎海绵体内压(ICP),蛋白印迹法检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p AKT)表达,TUNEL法检测阴茎组织凋亡,Masson三色染色观察阴茎组织病理改变。结果与糖尿病模型组比较,补肾活血方低、高剂量组阴茎脏器指数无明显差异(P0.05),补肾活血方高剂量组ICP和ICP与平均动脉压(MAP)的比值明显升高(P0.05)。与糖尿病模型组比较,补肾活血方低、高剂量组p AKT、AKT表达显著增加(P0.05),并且阴茎海绵体平滑肌凋亡率均有所下降,但差异无显著性意义(P0.05)。补肾活血方低剂量组与糖尿病模型组相比,胶原纤维比例显著下降(P0.05)。结论补肾活血方可增加糖尿病大鼠阴茎ICP,其机理与提高p AKT表达、抑制阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡、降低胶原纤维的生成有关。     

黄芪莪术联合5-氟尿嘧啶对CT26.WT原位移植瘤小鼠CXCL10/CXCR3轴和CCL3/CCR5轴表达的影响

目的探讨黄芪莪术配伍联合5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗结肠癌的作用机制。方法采用1只BALB/c雄性小鼠作为种鼠,生成原位瘤体,80只BALB/c雄性小鼠采用移植种鼠瘤体的方法建立CT26.WT原位移植瘤小鼠模型。将80只BALB/c雄性小鼠随机分为模型组、5-FU组(25 mg/kg)、黄芪莪术高剂量组(12 g/kg)、黄芪莪术中剂量组(6 g/kg)、黄芪莪术低剂量组(3 g/kg)、联合高剂量组(12 g/kg+25 mg/kg)、联合中剂量组(6 g/kg+25 mg/kg)、联合低剂量组(3 g/kg+25 mg/kg),每组10只,连续给药3周。处死小鼠取肿瘤组织,计算抑瘤率。采用Western blot和Real-time PCR法分别检测各组小鼠肿瘤组织、淋巴组织和肝脏组织中CXC趋化因子配体10(CXCL10)、CXC趋化因子受体3(CXCR3)、C-C趋化因子配体3(CCL3)、C-C趋化因子受体5(CCR5)蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,各给药组的抑瘤率均升高(P<0.01)。与5-FU组比较,黄芪莪术高、中、低剂量组,联合高、中、低剂量组抑瘤率均降...     

补肾消渴方对糖尿病肾病模型大鼠TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的:观察中药补肾消渴方煎剂对高脂高糖联合链脲菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病模型大鼠肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响,探讨其作用的机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(6只)给予常规饲料和生理盐水灌胃,模型对照组、补肾消渴方组和肾炎康复片组采用高脂高糖联合小剂量STZ(30 mg/kg)腹腔注射的方法建立糖尿病肾病模型大鼠。模型对照组(6只)给予生理盐水灌胃;补肾消渴方组(7只)给予补肾消渴方水煎剂浓缩液灌胃4.2 g/(kg·d);肾炎康复片组(7只)将肾炎康复片研磨溶于生理盐水中灌胃2.4 g/(kg·d)。灌胃8周末收集大鼠尿液,测定24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER);处死大鼠,腹主动脉采血测定血清中的肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)含量;光镜观察HE染色肾脏病理改变;应用免疫组化和Western blot检测肾组织转化生长因子(TGF-β_1)、Smad2、Smad 3、P-Smad2、P-Smad3、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达。结果:补肾消渴方组大鼠血Scr、BUN和24 h UAER较模型对照组明显下降(P0.01)。肾脏病理结果显示补肾消渴方组肾组织病理改变较模型对照组明显减轻。肾组织免疫组化显示补肾消渴方肾组织TGF-β_1、α-SMA蛋白的表达较模型对照组均有降低(P0.01)。肾组织Western blot实验结果显示补肾消渴方组较模型对照组肾组织TGF-β_1、P-Smad2、P-Smad3、α-SMA蛋白表达明显降低(P0.01)。结论:补肾消渴方可能是通过抑制糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β_1/Smad信号通路、下调TGF-β_1、P-Smad2、P-Smad3、α-SMA蛋白的表达而起到降低蛋白尿、改善肾脏肾功能的作用。     

龙杞方治疗糖尿病肾脏病的作用机制：基于网络药理学和大鼠验证实验

目的 基于GEO数据库和网络药理学方法研究龙杞方治疗糖尿病肾脏病（DKD）的作用机制，并通过动物实验进一步验证龙杞方治疗DKD的信号通路。方法 利用GEO、TCMSP、CNKI、ChemDraw 、SwissTarget Prediction等数据库获得龙杞方和DKD靶点，VENNY获得龙杞方-DKD交集靶点，String进行蛋白互作分析，R包进行KEGG和GO富集分析，Cytoscape 3.7.2软件构建网络图。动物实验验证分析，40只健康雄性SD大鼠随机分为5组（8只/组），采用腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱导的DKD大鼠模型，龙杞方低剂量组（1 g·kg-1·d-1），龙杞方中剂量组（2 g·kg-1·d-1），龙杞方高剂量组（2 g·kg-1·d-1），空白组和模型组采用等体积水灌胃；HE染色观察大鼠肾脏形态，检测肾功能情况；Western blot检测炎症指标NF-κB、p-NF-κB蛋白表达水平。结果 龙杞方共760个主要靶点，通过GEO数据库获得差异基因共1026个，通过VENNY数据库获得龙杞方-DKD交集靶点共61个，通过PPI网络互作获得的核心靶点为MYC、EGF、CASP3、VEGFA、CCL2、SPP1、VCAM1、ICAM1。GO分析龙杞方主要与核受体活性、配体激活转录因子活性等有关，KEGG发现龙杞方主要通过干预NF-κB、TNF、PI3K-AKT等炎症信号通路有关。动物实验显示龙杞方高、中、低剂量干预后DKD大鼠的肾功能指标（Scr、BUN、UALB、UACR）与模型组比较有显著改善（P<0.05）；HE染色观察出龙杞方高、中、低剂量干预DKD大鼠与模型组对照，肾小球和肾小管结构和排列改善明显，效应强度为：龙杞方高剂量组>中剂量组>低剂量组；Western blot结果显示龙杞方高、中、低剂量干预DKD大鼠，与模型组比较，可以使NF-κB、p-NF-κB表达显著下调，效应强度为：龙杞方高剂量组>中剂量组>低剂量组。结论 龙杞方通过多成分、多靶点、多信号通路治疗DKD，龙杞方可能通过抑制炎症信号通路NF-κB起到保护肾功能的作用。     

如达溃疡散对吲哚美辛法大鼠胃溃疡的作用机制研究

目的研究如达溃疡散对胃溃疡大鼠的作用及作用机制,为临床遣方用药提供实验依据。方法采用吲哚美辛法复制大鼠胃溃疡模型,将SD大鼠60只随机分为模型组、奥美拉唑组、如达溃疡散中剂量组、如达溃疡散低剂量组、如达溃疡散高剂量组,除模型组给予生理盐水外,其余各组均灌胃给药,奥美拉唑组给予奥美拉唑0.0036g/(kg·d),如达溃疡散低、中、高分别给予如达溃疡散0.5g/(kg·d)、1g/(kg·d)、2g/(kg·d),连续给药15d后处死大鼠,测量溃疡指数、血清中EGF、PGE2的含量。结果与模型组比较,如达溃疡散各剂量组均能明显减少大鼠溃疡指数,显著增加大鼠血清EGF及PGE2含量;与奥美拉唑组比较,其低剂量组较之无明显差异,而优于中、高剂量组。结论如达溃疡散各剂量组对胃溃疡有明显治疗作用,通过增加表皮生长因子、前列腺素E2,促进溃疡愈合。     

脾虚1号方对功能性消化不良脾虚证大鼠胃体组织MLC蛋白与基因表达的影响

目的探讨功能性消化不良(FD)脾虚证大鼠胃体组织肌球蛋白轻链(MLC)蛋白与mRNA表达及脾虚1号方的干预作用。方法 60只7 d龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=10)、FD脾虚证模型组(n=50)。正常组给予2%蔗糖溶液灌胃,FD脾虚证模型组给予0.1%蔗糖碘乙酰胺溶液灌胃,0.2 m L/(只·d),连续6 d。FD脾虚证模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14 d。造模结束后随机分为模型组、多潘立酮组、脾虚1号方低、中、高剂量组,各10只,连同正常组,分别给予蒸馏水10 m L/(kg·d)、多潘立酮3.125 mg/(kg·d)、脾虚1号方1.275、2.550、5.100 g/(kg·d),灌胃14 d。采用免疫组化、蛋白质印迹(Western blot)和RT-PCR方法检测胃体组织MLC蛋白及mRNA表达量。结果与正常组相比,免疫组化检测模型组大鼠胃体肌层MLC蛋白定位表达降低;Western blot检测模型组胃体组织MLC蛋白表达量降低;RT-PCR检测模型组大鼠胃体组织MLC mRNA表达量降低,差异均有统计学意义(P0.01)。与模型组相比,免疫组化检测脾虚1号方低、中、高剂量组大鼠胃体肌层MLC蛋白定位表达增加,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);Western blot检测脾虚1号方中、高剂量组大鼠胃体MLC蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P0.01);RT-PCR检测脾虚1号方高剂量组MLC mRNA表达量升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论 FD脾虚证模型大鼠存在胃体组织MLC蛋白及基因表达的降低,而脾虚1号方能够上调MLC蛋白及基因的表达。     

息风定喘方对哮喘豚鼠血清VEGF、EGF、TGF-β2的调节作用

目的 研究息风定喘方对哮喘豚鼠血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（EGF）、转化生长因子β2（TGF-β2）的调节作用,探讨其作用机制。方法 将72只普通级雄性豚鼠按照随机数字表法分为正常对照组、寒哮模型组、息风定喘方高剂量组[22.72 g/（kg·d）]、息风定喘方中剂量组[11.36 g/（kg·d）]、息风定喘方低剂量组[5.68 g/（kg·d）],地塞米松组[（0.5 mg/（kg·d）],每组12只。除正常对照组外利用卵清蛋白致敏+寒冷刺激复制寒性哮喘豚鼠模型,正常对照组给予等剂量生理盐水,造模成功后于实验第29天起,息风定喘方高、中、低剂量组灌胃给药,正常对照组和寒哮模型组予生理盐水。观察各组豚鼠的一般情况,HE染色法检测息风定喘方对寒性哮喘豚鼠模型的治疗效果;酶联免疫吸附试验分析血清VEGF、EGF、TGF-β2的含量。结果 息风定喘方高剂量组豚鼠症状改善情况优于息风定喘方中、低剂量组。与寒哮模型组比较,息风定喘方各剂量组气道改变均有减轻,有不同程度炎症细胞浸润,肺泡间隔厚度降低。与正常对照组比较,寒哮模型组血清中VEGF、EGF、TGF-β2含量显著升高,差...     

健脾解毒方对湿热证结肠癌小鼠肿瘤血管新生的抑制作用

  目的：探索健脾解毒方对湿热证结肠癌小鼠肿瘤血管新生的影响。  方法：将Balb/c小鼠随机分为对照组、模型组及健脾解毒方低、中、高剂量组,对照组复制结肠癌原位模型,其余各组建立小鼠湿热证结肠癌模型。健脾解毒方低、中、高剂量组分别灌胃给药(250 、500、1 000 mg·kg-1·d-1),对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,均干预28 d。干预结束,每组各处死部分荷瘤鼠,测量瘤体质量,免疫组化法检测各组瘤体的Ki67和肿瘤微血管密度(MVD)表达,ELISA测定血清中血管内皮生长因子(VEGF)表达;剩余小鼠用于观察生存时间。  结果：健脾解毒方各剂量组的瘤体质量均较模型组显著减小(P<0.01),荷瘤鼠中位生存时间均较模型组明显延长(P<0.01),且中、高剂量组的瘤重抑制率和生命延长率均高于低剂量组(P<0.01)。检测结果显示,模型组肿瘤MVD及VEGF表达水平较对照组显著提高(P<0.01),健脾解毒方各剂量组肿瘤细胞Ki67指数、MVD计数及VEGF水平均较模型组显著降低(P<0.01),且中、高剂量组明显低于低剂量组(P<0.01),呈剂量依赖效应。  结论：健脾解毒方能够抑制湿热证结肠癌小鼠肿瘤的生长、延长荷瘤鼠生存时间,其机制可能与下调VEGF表达从而抑制肿瘤血管新生有关。