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1.
目的 观察三氯乙烯(TCE)致人原代角质形成细胞(KC)损伤过程中caspase-8、caspase-9活力及细胞凋亡率的变化,探讨TCE引起KC凋亡的可能机制.方法 体外培养的KC分别给予0.125、0.250、0.500、1.000和2.000mmol/L的TCE染毒4、8、12、24 h,以100μmol/L的caspase-9特异抑制剂Z-LEHD-FMK预处理细胞1 h,再用2.000mmol/LTCE染毒12 h.MTT法检测细胞活力变化,分光光度法检测caspase-8及caspase-9活力变化.流式细胞仪检测细胞凋亡率变化.结果 与空白对照相比,2.000和1.000 mmol/LTCE染毒组作用8 h后细胞活力降低.染毒超过12 h,各剂量组细胞活力均降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).在不同的时间段,各剂量组的caspase-8活力与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).染毒8 h时,2.000mmol/LTCE组caspase-9活力明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);12和24h时,各剂量组caspase-9活力与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).不同剂量的TCE染毒12 h后,2.000 mmol/L TCE染毒组细胞凋亡率升高至(80.43±4.21)%,空白对照组为(9.40±2.98)%,除0.125 mmol/LTCE组外,其他各染毒组的细胞凋亡率与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),剂量-效应关系明显.Caspase-9抑制剂预处理组caspase-9活力及细胞凋亡率较2.000mmol/L TCE染毒组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论 Caspase-9的活化在TCE诱导的体外培养的人KC的凋亡过程中发挥重要作用.  相似文献   

2.
目的探讨三氯乙烯(TCE)对皮肤细胞的毒性机制。方法以不同浓度(0.125、0.500和2.000mmol/L)TCE处理体外分离培养的正常人角质形成细胞(KC),同时设培养基对照组和体积分数为1%的丙酮对照组,然后:(1)分别进行四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)试验和ATP酶活力测定来检测细胞毒性和线粒体的代谢变化;(2)采用罗丹明123染色方法,借助流式细胞仪检测线粒体膜电位变化情况;(3)通过透射电子显微镜观察线粒体形态学的改变。结果TCE染毒后,细胞活力随着时间延长和剂量的增加而减小,线粒体酶活力抑制率增加,ATP酶活力减小;线粒体膜电位水平从染毒开始到8h迅速下降2.000mmol/LTCE染毒8h后Rh123荧光强度(8.20±0.66)与对照组(18.73±0.45)相比,差异有统计学意义(P〈0.01);8h以后则变化不大,12和24h Rh123荧光强度与8h组比较,差异无统计学意义(P〉0.05),线粒体膜电位随染毒剂量的增加呈明显的剂量-效应关系。电镜下可见,TCE处理组线粒体出现肿胀,空泡变性,基质减少,部分嵴消失,对照组线粒体结构完整,基质分布均匀,可见线粒体嵴。结论TCE可以导致KC线粒体功能和形态发生明显改变,这些变化在TCE诱导的KC毒性中具有重要的意义。  相似文献   

3.
目的 观察三氯乙烯(TCE)诱导离体培养的人角质形成细胞(KC)Caspase-3活力变化及细胞凋亡情况,探讨TCE诱导KC凋亡的可能信号通路.方法 以不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mmol/L)TCE对离体分离培养的KC分别染毒至4、8、12、24 h;Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-FMK)预处理组,先用100 μmol/L Z-DEVD-FMK预处理细胞1 h,然后再用2.000 mmol/L TCE染毒12 h.用分光光度法检测细胞Caspase-3活力变化,借助Annexin-V/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与空白对照相比,TCE染毒4 h,各TCE剂量组Caspase-3活力无明显变化(P>0.05);染毒8 h,1.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力和2.000 mmol/LTCE组Caspase-3活力,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);TCE染毒12 h和24 h,各TCE剂量组Caspase-3活力明显升高,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且呈剂量-效应关系.各TCE剂量组,在TCE浓度达到0.250 mmol/L以后,细胞凋亡率与对照组相比差异有显著性(P<0.05),且明显呈剂量-效应关系.Z-DEVD-FMK预处理组,与2.000 mmol/L TCE组比较,Caspase-3活力和细胞凋亡率明显得到抑制(P<0.01),而与空白对照相比差异无显著性(P>0.01).结论 在TCE诱导离体培养的KC凋亡中,Caspase-3的活化可能发挥了重要的作用.  相似文献   

4.
目的 研究三氯乙烯(TCE)对人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成以及细胞活力的影响,探讨三氯乙烯引起皮肤细胞毒性的机制.方法 体外培养的人角质形成细胞以0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒4 h,另以诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)100 μmol/L预处理细胞30 min后再行TCE处理,分别于染毒后12 h、24 h、48 h、72 h时检测细胞上清中NO的含量,MTT法观察细胞活力.结果 低剂量的TCE不引起NO含量改变(与溶剂对照比较,P>0.05),0.5、1.0、2.0 mmol/L浓度的TCE染毒组NO含量分别在染毒后的24 h、48 h和72 h开始升高(P<0.05),对应的细胞活力则相应下降(P<0.05);AG预处理的0.5、1.0和2.0 mmol/L TCE染毒组在处理48 h后NO含量开始下降(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05),且回复到正常溶剂对照水平(P>0.05),其所对应的细胞活力逐步回升(与对应的TCE染毒组比较,P<0.05).结论 TCE以剂量和时间依赖方式诱导人KC产生NO,而过量的NO可能介导了TCE的KC细胞毒性.  相似文献   

5.
目的研究三氯乙烯(TCE)对体外培养的人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)表达及活力的影响,探讨TCE的皮肤细胞毒性机制。方法无血清培养的正常人KC与0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE共培养4h,分别于染毒后12、24、48、72h测定培养液中NO含量和NOS活力,分析其时间—剂量—效应关系,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导型NOS(iNOS)mRNA的表达情况。结果低剂量组(0.125和0.25mmol/L)NO含量与iNOS活力在染毒后各时点与对照组相比均无差异;0.5mmol/L组NO含量与iNOS活力均在染毒后48h开始升高,分别为(32.19±4.75)μmol/L[对照组:(23.70±3.11)μmol/L,P<0.05]和(1.15±0.02)×103U/L[对照组:(0.77±0.06)×103U/L,P<0.05],随着染毒浓度的升高,0.5~2.0mmol/L组NO量与iNOS活力呈上升趋势,而且上升出现的时间提前,1.0和2.0mmol/L组分别于染毒后24和12h出现升高;NO释放的增加总是与iNOS活力升高一致,而结构型NOS(cNOS)活力在各剂量组的各时点均无变化;RT-PCR结果显示TCE可以诱导iNOSmRNA转录水平增高。结论TCE可以诱导人角质形成细胞NO合成增加,大量产生的NO与iNOS基因的上调有关,这一机制可能参与了TCE的皮肤细胞毒性。  相似文献   

6.
目的建立细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因高表达肝细胞株(L02),并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法 PCR扩增CYP2C9基因并将其克隆到慢病毒表达载体中,然后转染293T细胞,收集病毒上清,感染正常L02细胞。采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9高表达细胞株。分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株染毒24h,同时设置二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组即0mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因高表达细胞株细胞增殖能力的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化。结果酶切和测序结果证明CYP2C9基因成功插入PCDH-MCS-EF1-GFP-T2A-PURO载体。CYP2C9高表达细胞株的CYP2C9 mRNA和蛋白相对表达水平分别较对照普通L02细胞升高107.3%和257.9%。TCE染毒后,2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞抑制率与L02细胞相比,低于相同浓度TCE处理的L02细胞。TCE染毒后,通过荧光定量PCR和WB检测,发现TCE 2.0和8.0mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因高表达细胞的Bcl-2表达水平低于相应染毒剂量组L02细胞,而TCE 0.0、0.5、2.0、8.0 mmol/L剂量组CYP2C9基因高表达细胞的caspase-3表达水平高于普通L02细胞。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉高表达细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系。  相似文献   

7.
目的探讨有机溶剂三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)、四氯乙烯(perchloroethylene,PCE)对体外培养的皮肤角质形成细胞(keratinocyte,KC)的脂质过氧化的作用。方法利用中性红吸附(neutral red uptake,NRU)实验确定TCE和PCE对人KC的中性红半数吸收浓度(50%neutral red uptake,NR50),并根据此确定染毒浓度。分别使用2.0、1.0、0.5、0.25、0.125 mmol/L的TCE或0.8、0.4、0.2、0.1、0.05 mmol/L的PCE对体外培养的人KC染毒4 h,利用MDA、SOD和ROS试剂盒测定细胞中MDA、SOD和ROS水平。结果TCE、PCE对人KC的NR50分别为4.53 mmol/L和2.16 mmol/L。经不同浓度TCE、PCE作用4 h后,细胞内MDA水平和ROS水平随TCE或PCE浓度增加呈上升趋势,而SOD活性呈下降趋势,与溶剂对照组相比较差异有显著性,且存在浓度-反应关系。结论TCE、PCE对人KC有氧化损伤作用。  相似文献   

8.
目的建立细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)基因沉默正常肝细胞株(L02)并观察其对三氯乙烯(TCE)毒性的影响。方法设计合成短发卡RNA(shRNA)将其连接到PLVX-shRNA2P质粒中构建CYP2C9 shRNA慢病毒表达载体,感染L02细胞。采用荧光定量PCR和western blot筛选鉴定CYP2C9沉默细胞株。分别采用浓度为0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mmol/L的TCE染毒剂量组对L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株染毒24 h,同时设置二甲基亚砜溶剂对照组即0 mmol/L染毒剂量组,观察L02细胞和CYP2C9基因沉默细胞株细胞周期的变化以及凋亡基因Bcl-2和caspase-3表达变化。结果酶切和测序结果证明插入PLVX-shRNA2P载体的CYP2C9基因干扰序列与设计的shRNA序列一致。CYP2C9沉默细胞株的CYP2C9 m RNA和蛋白相对表达水平分别较shRNAc沉默对照细胞下降76.0%和78.6%。TCE染毒后,0.5、2.0、8.0 mmol/L 3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞和L02细胞周期没有发生显著变化。TCE染毒后,2.0和8.0 mmol/L染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的Bcl-2表达水平均高于相应染毒剂量组L02细胞,而0.5、2.0、8.0 mmol/L 3个染毒剂量组CYP2C9基因沉默细胞的caspase-3表达水平没有显著变化。结论三氯乙烯对正常肝细胞和CYP2C9基因沉默细胞凋亡基因Bcl-2存在差异,提示CYP2C9与三氯乙烯在生物体内毒性存在一定关系。  相似文献   

9.
目的探讨三氯乙烯(TCE)、四氯乙烯(PCE)对体外培养人皮肤角质形成细胞(KC)氧化损伤作用及维生素E的保护作用。方法将来源于3个或3个以上不同健康个体的皮肤KC细胞混合培养于K—SFM培养基中,利用中性红吸附实验确定其半数抑制浓度(IC50),并据此确定TCE、PCE染毒浓度。染毒4h后,测定细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)水平;维生素E保护组使用不同浓度维生素E预作用2h后,再分别换入0.5mmol/LTCE或0.2mmol/LPCE与不同浓度维生素E混合物作用4h后,测定细胞内MDA、SOD、ROS水平。结果TCE、PCE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤,且具有浓度一反应关系。而维生素E对其具有保护作用,能下调其氧化损伤,且具有浓度一反应关系。结论TCE、PcE能引起体外培养人皮肤KC细胞氧化损伤,而维生素E对其具有保护作用。  相似文献   

10.
三氯乙烯诱导皮肤角质形成细胞凋亡的体外研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 检测三氯乙烯(TCE)对人表皮角质形成细胞(NHEK)的凋亡诱导作用,探讨TCE皮肤毒性的作用靶.方法 采用中性红吸附试验测定TCE对体外无血清培养的NHEK的中性红吸附减少50%的浓度(NR50值),确定TCE染毒剂量;测定丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力反映细胞脂质过氧化作用和氧化状态;用透射电子显微镜(TEM)和流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡形态学改变和测定细胞DNA含量,计算凋亡发生率及增殖指数(PI).结果 TCE对NHEK的NR50值为4.53(3.92~5.13)mmol/L;TCE处理NHEK 4 h后,MDA含量的增加和SOD活力的抑制均具有剂量-效应关系(r=0.98,r=0.93,P<0.01);TEM观察显示,与对照相比,TCE处理组细胞可见明显凋亡改变;FCM测定显示,DNA含量直方图中G1期前可见明显的凋亡峰,与对照组相比,TCE处理组细胞凋亡率明显增高(空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmol/L组分别为18.42%、31.83%、38.63%、44.35%),而PI则明显降低(空白对照及TCE 0.125、0.500、2.000 mmoL/L组分别为4.99%、3.26%、2.48%、2.07%).结论 在体外培养条件下,TCE可通过脂质过氧化和氧化应激作用诱导NHEK凋亡,抑制其增殖.  相似文献   

11.
脑脊液免疫球蛋白及白蛋白对脑膜炎的鉴别诊断意义   总被引:3,自引:1,他引:3  
目的 分析脑脊液 (CSF)免疫球蛋白 (Ig)和白蛋白 (Alb)对病毒性脑膜炎 (VM )、结核性脑膜炎 (TM )、化脓性脑膜炎(PM )的鉴别诊断意义。方法 用速率散射比浊法测定VM 5 3例 ,TM 40例 ,PM 14例患者CSFIg和Alb的含量。结果 IgG、IgM和Alb在TM和PM中均显著高于VM组 (P <0 0 0 1) ,且以PM升高最明显 ,但TM和PM间 ,Alb及比值变化无显著性意义 ;与VM相比 ,TM以IgG变化最突出 ( 75 %) ,PM以IgM变化为显著 ( 78%) ;Alb在TM和PM升高比例最高 ( 10 0 %)。PM 14例中有 12例 ( 85 .7%)、TM 40例中仅 6例 ( 15 %)符合典型CSF常规和生化改变。如果把CSFAlb >3 0 0mg/L和IgG >61mg/L作为条件 ,则TM的诊断阳性率达 3 8/ 40 ( 95 %)。结论 TM和PM血脑屏障的破坏明显大于VM ,CSFIg和Alb的含量检测弥补了CSF常规分析的不足 ,有助于颅内感染的诊断和鉴别诊断  相似文献   

12.
目的 观察山东省克山病患者的抗氧化酶活性和血管内皮功能,探讨二者与克山病发生发展的关系。方法 选择慢型、潜在型克山病患者57人、病区健康人34人、非病区健康人36人,分别采集清晨空腹外周血按试剂盒要求检测血清及红细胞GSH—Px、SOD、LPO、LT、NO、NOS含量及活性。结果 ①病区人群红细胞GSH—Px活性较非病区健康人明显降低(P<0.01);RBCSOD含量也较非病区健康人明显减少(P<0.01)、RBCSOD活性减低(P<0.01);②克山病患者血清LPO含量明显升高,与病区和非病区健康人之间差异有统计学意义(P<0.01),病区健康人又较非病区健康人明显升高(P<0.01);③克山病患者LT、NO和NOS含量明显高于病区健康人(P<0.01),且慢型克山病患者与潜在型克山病患者之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论 克山病患者和病区健康人的红细胞抗氧化功能明显降低;血管内皮功能失调,二者在克山病发生发展中存在某种联动关系,加重心肌缺血、缺氧,导致心肌变性、坏死和瘢痕形成。  相似文献   

13.
王庆广  朱祖福 《职业与健康》2011,27(13):1552-1553
目的探讨三叉神经颞肌、咬肌外感受抑制试验(ES)检测紧张型头痛的应用价值。方法对30名紧张型头痛和30名正常志愿者利用肌电图(EMG)刺激眶下神经进行ES试验,检测颞肌、咬肌的潜伏期和时限。结果与对照组相比,紧张型头痛患者的第2抑制期(ES2)潜伏期延长,时限缩短现象。经t检验,紧张型头痛组左右侧颞肌和咬肌EF2潜伏期、左侧颞肌时限与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。结论咀嚼肌外感受抑制试验对紧张型头痛具有诊断和研究价值。  相似文献   

14.
Preterm neonates display a high risk of postnatal malnutrition, especially at very low gestational ages, because nutritional stores are less in younger preterm infants. For this reason nutrition and growth in early life play a pivotal role in the establishment of the long-term health of premature infants. Nutritional care for preterm neonates remains a challenge in clinical practice. According to the recent and latest recommendations from ESPGHAN, at birth, water intake of 70–80 mL/kg/day is suggested, progressively increasing to 150 mL/kg/day by the end of the first week of life, along with a calorie intake of 120 kcal/kg/day and a minimum protein intake of 2.5–3 g/kg/day. Regarding glucose intake, an infusion rate of 3–5 mg/kg/min is recommended, but VLBW and ELBW preterm neonates may require up to 12 mg/kg/min. In preterm infants, lipid emulsions can be started immediately after birth at a dosage of 0.5–1 g/kg/day. However, some authors have recently shown that it is not always possible to achieve optimal and recommended nutrition, due to the complexity of the daily management of premature infants, especially if extremely preterm. It would be desirable if multicenter randomized controlled trials were designed to explore the effect of early nutrition and growth on long-term health.  相似文献   

15.
目的比较传统凝血试验(conventional coagulation test, CCT)和血栓弹力图分析仪(thromboelastography,TEG)在诊断腹部创伤患者凝血功能障碍的价值。 方法选择2017年1月至2018年1月东南大学医学院附属江阴市人民医院普通外科收治的38例以腹部创伤为主患者同时进行CCT与TEG监测,比较两种检测方法诊断凝血功能障碍的敏感性与特异性;并对发现创伤后早期(≤6 h)患者亚组进行比较分析。 结果腹部创伤患者凝血功能障碍CCT阳性率(8例,21.1%)明显低于TEG(阳性21,55.2%,P<0.05);创伤后早期凝血功能障碍CCT阳性率(3/13,23.1%)亦明显低于TEG(9/13,69.2%,P<0.05)。 结论TEG诊断创伤后凝血功能障碍的敏感性与特异性明显优于CCT方法,特别是对于创伤后早期凝血功能障碍的诊断TEG更具有优势。  相似文献   

16.
In this study, the concentrations of disinfection byproducts (DBPs), including trihalomethanes (THMs; chloroform, bromodichloromethane, dibromochloromethane, and bromoform), haloacetic acids (HAAs; dichloroacetic acid and trichloroacetic acid), haloacetonitriles (HANs; dichloroacetonitrile, trichloroacetonitrile, bromochloroacetonitrile, and dibromoacetonitrile), and chloral hydrate (CH) were measured in 86 indoor swimming pools in Seoul, Korea, treated using different disinfection methods, such as chlorine, ozone and chlorine, and a technique that uses electrochemically generated mixed oxidants (EGMOs). The correlations between DBPs and other environmental factors such as with total organic carbon (TOC), KMnO(4) consumption, free residual chlorine, pH, and nitrate (NO(3)(-)) in the pools were examined. The geometric mean concentrations of total DBPs in swimming pool waters were 183.1±2.5μg/L, 32.6±2.1μg/L, and 139.9±2.4μg/L in pools disinfected with chlorine, ozone/chlorine, and EGMO, respectively. The mean concentrations of total THMs (TTHMs), total HAAs (THAAs), total HANs (THANs), and CH differed significantly depending on the disinfection method used (P<0.01). Interestingly, THAAs concentrations were the highest, followed by TTHMs, CH, and THANs in all swimming pools regardless of disinfection method. TOC showed a good correlation with the concentrations of DBPs in all swimming pools (chlorine; r=0.82, P<0.01; ozone/chlorine; r=0.52, P<0.01, EGMO; r=0.39, P<0.05). In addition, nitrate was positively correlated with the concentrations of total DBPs in swimming pools disinfected with chlorine and ozone/chlorine (chlorine; r=0.58; ozone/chlorine; r=0.60, P<0.01), whereas was negative correlated with the concentrations of total DBPs (r=-0.53, P<0.01) in the EGMO-treated pools.  相似文献   

17.
目的探讨丙烯腈(ACN)对男工性激素水平的影响,全面评价ACN生殖危害,为保护工人及子代健康提供科学依据。方法选112名职业性接触ACN的男工为接触组,同时选择地理位置和经济条件相近的128名不接触ACN男工为对照组,用放射免疫分析法(RIA)测定其血清中睾酮(T)、黄体生成素(FSH)、卵泡刺激素(LH)和雌二醇(E2)浓度。结果接触组男工血清中T和FSH浓度明显低于对照组(P<0.05),LH和E2浓度两组之间差异无显著性。当按车间分组时,ACN浓度较低的溶剂车间的男工血清中T浓度高于其他3个车间,但差异无显著性。当接触组按个人累计外接触剂量(包括吸烟)分组时,接触组男工血清中FSH和T浓度随接触剂量增加呈下降趋势。当外接触剂量≥50g时,T浓度明显降低(P<0.05),E2浓度明显升高(P<0.05);当外接触累计剂量≥100g时,血清中FSH浓度也明显低于对照组(P<0.05)。结论ACN及其代谢产物(CEO)能诱导男工血清中FSH、T和E2水平发生改变;提示,接触ACN可能对内分泌功能和睾丸中支持细胞和间质细胞有损伤,从而可能引起性功能障碍。  相似文献   

18.
19.
低氧动物血清的EPO生成拮抗效应   总被引:1,自引:0,他引:1  
实验表明慢性间断低氧(0.42atm,22h/day)可致小鼠血清促红细胞生成素(EPO)浓度早期增加,其后迅速减低;而红细胞生成持续递增。将低氧6天小鼠的血清注入同种小鼠体内,低氧3天后血清EPO浓度显著低下。表明低氧动物血清中存在某种拮抗EPO生成的体液性因子。  相似文献   

20.
异位妊娠药物治疗研究进展   总被引:2,自引:1,他引:1  
近年异位妊娠(ectopic pregnancy,EP)的发病日趋年轻化,剖宫产率增加致剖宫产切口疤痕妊娠(cesarean scar pregnancy,CSP)显著增加,使异位妊娠的药物治疗,成为目前研究的热点。本文聚焦异位妊娠的药物治疗研究进展,旨在探索更为安全、简便、有效、低毒且能保留生育功能的异位妊娠治疗方法。  相似文献   

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