人参皂甙Rb1改善转基因扩张型心肌病模型小鼠的心功能和心脏重构

目的 利用cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠,研究人参皂甙Rb1对遗传性扩张型心肌病心功能及心脏重构的作用及其可能机制.方法 将cTnTR141W转基因小鼠随机分为模型组和人参皂甙Rb1治疗组(70 mg/kg/d),连续给药7个月,取野生型小鼠作为对照组.心脏超声检测心脏功能及几何构型.HE染色观察心肌细胞变化.透射电镜分析心肌超微结构.RT-PCR检测心肌粘附蛋白的表达.免疫荧光激光共聚焦观察心肌粘附分子Itga8的表达与分布.结果 Rb1长期给药能显著改善该模型的心脏功能及几何构型.光镜和透射电镜观察显示Rb1能减轻心肌细胞排列紊乱及超微结构的破坏.RT-PCR结果显示,在模型中Cx40表达降低,E-cad、itga8 和itgb1bp3表达升高,但在Rb1组中接近正常水平.免疫荧光激光共聚焦结果显示Rb1可降低Itga8的表达量并调节其分布.结论 Rb1可改善扩张型心肌病模型的心功能,抑制心脏重构,其作用可能部分通过调节粘附蛋白的表达而实现的.     

大鼠血清中人参皂甙Rb1的免疫检测

目的建立大鼠血清中人参皂甙Rb1（G-Rb1）的免疫检识方法。方法利用杂交瘤细胞技术制备抗G-Rb1单克隆抗体（mAb）。含G-Rb1的大鼠血清用甲醇沉淀蛋白,制备供试样品．点样于聚醚砜膜上．以乙腈：水：冰醋酸按25：75：1的比例展开;NaIO4处理,与BSA结合,使G-Rbl固定于膜上。将PES膜上的G-Rb1与抗G-Rb1mAb反应后,加过氧化物酶标记的羊抗小鼠kG,用含0．03％H2O2的lmg／ml 4-氯-1-萘酚磷酸缓冲液显色。结果在聚醚砜膜上,在标准品和供试样品的相同位置可清晰地观察到一个青蓝色G-Rb1斑点,该方法检测限为0．25μg。结论这种G．Rb1的免疫检识方法较薄层层析具有更好的专一性和可靠性,灵敏度接近高效液相色谱。且不需要昂贵的仪器．便于操作。     

HPLC法测定复方丹参片中人参皂甙Rb1的含量

目的测定复方丹参片中人参皂甙Rb1的含量。方法HPLC法，流动相：乙腈一水（30：70），检测波长204nm。结果人参皂甙Rb1的线性范围：0．075mg～1．20mg，r=0．9925，回收率为99．3％，RSD为3．1％。结论本法灵敏、准确，可作为该产品的质量控制指标。     

人参皂甙Rb1对大鼠局灶性脑缺血脑组织GDNF表达的影响

目的从蛋白水平探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后的胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）的表达规律性及人参皂甙Rb1对其的影响。方法阻塞大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）2小时再灌注3小时至5天制备脑缺血模型，通过免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）染色观察GDNF表达的改变与分布的特点及人参皂甙Rb1对其的影响。结果脑缺血再灌注损伤后GDNF表达在3小时与2天分别有两个高峰。给予人参皂甙Rb1后，GDNFmRNA与蛋白表达在2天达高峰。单纯脑缺血再灌注组和人参皂甙Rb1给药组，GDNF阳性细胞数主要分布于额顶皮质缺血周边区，其次为纹状体缺血周边区，下丘脑缺血周边区GDNF阳性细胞数最少。根据两组间GDNF免疫组织化学（IHC）染色的强弱比较，给予人参皂甙Rb1后，在同一时间点，同一缺血周边区GDNF阳性细胞数染色增强。对GDNF阳性细胞数统计分析显示，人参皂甙Rb1给药组各时间点GDNF阳性细胞数远远高于与单纯脑缺血再灌注组同时间点的GDNF阳性细胞数（P〈0．01），提示人参皂甙Rb1诱导GDNF表达。结论脑缺血再灌注后GDNF的表达与缺血性损伤有一定的联系，人参皂甙Rb1对中枢神经系统有保护作用。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注丘脑及下丘脑巢蛋白表达的影响

目的：探讨大鼠脑缺血再灌注后丘脑及下丘脑巢蛋白的表达以及人参皂甙Rb1（Ginsenoside Rb1,GRb1）对巢蛋白表达的影响。方法：阻塞大鼠大脑中动脉2h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组（I／R组）和GRb1给药组（GRb1组）。两组按不同的再灌注时间（3h、12h、1d、2d、3d、5d、10d）分为7个亚组,应用免疫组织化学技术检测丘脑和下丘脑巢蛋白的表达。结果：给予人参皂甙Rb1后的丘脑和下丘脑缺血侧巢蛋白阳性细胞明显增多,细胞形态呈神经元样。结论：人参皂甙可上调缺血再灌注大鼠丘脑和下丘脑巢蛋白表达水平,促进神经干细胞增殖,并向神经元方向分化。     

人参皂甙Rb1对马桑内酯癫痫的作用及海马蛋白组表达的影响

目的：观察人参皂甙Rb1（GRb1）对马桑内酯（CL）所致大鼠癫痫及海马神经元损伤的作用,运用双向电泳（2-DE）技术获得可能与CL癫痫发作及GRb1神经保护作用有关的蛋白质成分,探讨海马组织蛋白质在癫痫发生发展过程中的作用和地位及GRb1对其的影响。方法：雄性成年SD大鼠随机均分为对照组、CL组和GRb1＋CL组（n=10）。GRb1＋CL组在实验前3d,大鼠每日灌胃GRb1（1.5mg/ml,30mg/kg）,另2组灌胃等量生理盐水;实验日CL组和GRb1＋CL组腹腔注射CL（1mg/ml,4mg/kg）,对照组腹腔注射等量生理盐水。观察各组大鼠的行为学变化3h。各组半数动物麻醉后灌注固定,HE染色观察海马组织学改变。半数动物,断头处死剥离海马组织并提取蛋白,双向电泳（2-DE）分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定蛋白质。结果：①癫痫发作的行为表现：对照组大鼠未见痫性发作;CL组痫性发作程度较高（Ⅲ～Ⅴ级）;与CL组相比,GRb1＋CL组大鼠的痫性发作程度明显减低,潜伏期变长,持续时间变短（P〈0.01）。②海马组织学（HE染色）改变：对照组大鼠海马组织结构正常;CL组大鼠可见海马神经元变性坏死,尤以CA3区和齿状回最明显;GRb1＋CL组大鼠海马神经元结构无明显改变。③获得大鼠海马组织蛋白质组双向电泳图谱;差异表达蛋白质组分析显示GRb1＋CL组与对照组差异蛋白斑点84个,GRb1＋CL组与CL组差异蛋白斑点120个。④鉴定出6个蛋白质分别是：脑肌酸激酶（brain creatine kinase）、吞蛋白A1（endophilin-A1）、UPF0628蛋白C10orf96同源物（UPF0628 proteinC10orf96 homolog）、细胞色素P-450（cytochrome P-450）、磷导素样蛋白（phosducin-like protein）及桥整合蛋白3（bridging inte-grator 3）。其中前3个蛋白质在GRb1＋CL组表达低于CL组,后3个蛋白质在GRb1＋CL组表达低于对照组。结论：GRb1可减轻CL所致大鼠癫痫的发作程度及海马神经元损伤。CL组、GRb1＋CL组和对照组的表达蛋白质组相比存在明显差异。鉴定出的差异表达的蛋白质brain creatine kinase、endophilin-A1、UPF0628 protein C10orf96 homolog可能与CL所致癫痫发作有关;cytochrome P-450、phosducin-like protein及bridging integrator 3可能与GRb1的神经保护作用有关。     

人参皂甙Rb1对抗运动性骨骼肌疲劳的实验研究

目的为了降低自由基的强氧化性导致的运动性骨骼肌疲劳。方法本文主要运用文献资料法、实验法和数理统计法,对运动性疲劳模型大鼠骨骼肌超氧化物岐化酶(SOD)活性以及骨骼肌丙二醛(MDA)的含量进行检测。结果与模型组比较,人参皂甙Rb1能有效的降低MDA含量,提高SOD活性;人参皂甙Rb1有效提高机体的抗氧化酶(SOD)活性水平、达到抗运动性疲劳的机制可能有两种,一是能够直接参与机体清除自由基离子的能力,二是通过减少氧化还原反应的底物浓度,进而影响酶活性来实现。结论人参皂甙Rb1具有对抗大强度运动时所产生的自由基,减缓运动性骨骼肌疲劳的作用。     

薄层扫描法测定速效排石灵胶囊中人参皂甙Rb1含量

目的　测定速效排石灵胶囊中人参皂甙Rb1含量。方法　硅胶G薄层板 ,氯仿—甲醇—水(6 5 :15 :10 )展开 ,入s=5 2 5nm ,狭缝 0 .4mm× 5mm ,扫描速度 4mm·s-1,单波长线性扫描。结果　回收率为97.4% ,相对标准差为 2 .3%。结论　该方法可作为速效排石灵胶囊中人参皂甙Rb1的质量控制方法。     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

目的建立cTnT^R92Q肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT^R92Q基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT^R92Q转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT^R92Q转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT^R92Q转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个不同表达水平的cTnT^R92Q转基因小鼠品系。转入的cTnT^R92Q基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。组织学分析显示cTnT^R92Q转基因小鼠心脏变大,心室壁肥厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室壁变厚,收缩期容积和舒张期容积显著缩小,射血分数、短轴缩短率明显增加。结论cTnT^R92Q转基因小鼠心脏变大,室壁变厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化以及心肌舒张功能失调,说明成功建立了cTnT^R92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型,为研究肥厚型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

Meox1在心脏过表达引起转基因小鼠扩张性心肌病

目的建立心脏特异表达Meox1转基因小鼠,研究Meox1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Meox1转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测Meox1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠及野生小鼠的心脏结构和功能。结果在生理状态下,Meox1基因只在幼鼠心脏中表达,在病理状态下,Meox1基因在成年心肌病小鼠的心脏组织表达升高。通过显微注射,建立了两个Meox1基因在心脏组织的表达水平明显高于同龄对照小鼠的转基因小鼠品系。与野生型小鼠相比,两个Meox1转基因小鼠品系收缩期左室内径分别增加7.2%、12.8%(P0.01,n=16),舒张期左室内径分别增加15.6%、24.2%(P0.01,n=16),收缩期容积分别增加36.8%、65.7%(P0.01,n=16),舒张期容积分别增加18.2%、33.8%(P0.01,n=16)。射血分数分别减小6.6%、9.3%(P0.05,n=16),短轴内径缩短率分别减小9.4%、12.3%(P0.05,n=16)。结论Meox1在心肌病心脏中表达,其在心脏高表达引起心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数及短轴缩短率减少等扩张性心肌病表型,是参与心肌病病理发生的基因之一。     

HB—EGF、C—erbB一2在卵巢癌组织中的表达及意义

目的：探讨肝素结合样表皮生长因子（HB-EGF）、C-erbB-2癌基因在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法：选取2010年1月～2012年12月间于我院因卵巢肿瘤行手术治疗的患者60例,其中良性卵巢瘤、交界性卵巢瘤、上皮性卵巢癌各20例,取卵巢组织,采用组织流式细胞术检测卵巢组织中HB—EGF、C～erbB～2的表达情况。结果：HB-EGF、C—erbB一2在卵巢癌组织中阳性细胞率显著高于良性卵巢瘤,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）,且两种因子在卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期组织中表达高于I～1I期（P〈0．05）。结论：HB—EGF、C-erbB一2检测可作为卵巢良恶性肿瘤鉴别诊断的辅助指标,且与卵巢癌病情严重程度呈正相关,二者联合检测可更准确反映卵巢癌病情。     

大鼠肝纤维化过程中miR-141表达的变化

目的:探讨微小RNA-200家族成员中微小RNA-141(miR-141)在大鼠肝纤维化过程的表达变化及其作用。方法:雄性Wistar大鼠32只,随机分为正常对照组及肝纤维化组。皮下注射60%CCl4制备肝纤维化模型,分别在造模4周、8周末处死大鼠,测定肝脏指数、血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量并观察肝组织结构改变。实时荧光定量PCR方法测定各组大鼠肝组织中miR-141的表达水平。结果:造模不同时间肝纤维化组大鼠肝脏指数、血清ALT和AST活性均显著高于相应正常对照组(P<0.01)。病理学观察发现造模4周大鼠肝脏纤维结缔组织明显增多,且随时间增长纤维化病变逐步加重,在肝纤维化8周组大鼠肝脏中有明显假小叶形成。Real time-PCR结果显示,大鼠肝脏miR-141水平肝纤维化4周组较相应对照组明显降低(P<0.01),肝纤维化8周组明显高于相应正常对照组(P<0.01)及肝纤维化4周组(P<0.01)。结论:研究表明CCl4诱导大鼠肝脏miR-141的表达水平有明显的改变,提示肝脏miR-141可能通过某种机制参与了大鼠肝纤维化的发生发展。     

心肌营养素-1在扩张型心肌病大鼠心肌的表达

目的探讨心肌营养素-1（CT-1）在DCM大鼠心肌的表达及作用。方法30只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组：DCM组20只,腹腔内注射阿霉素（ADM）2．5mg／kg,2次／周,共6周,诱导大鼠DCM模型;对照组10只,同法注射等量生理盐水。第8周时行心脏超声检测,用VG染色观察心肌组织病理改变,用半定量RT—PCR检测CT-1在对照组大鼠与DCM大鼠心肌的表达。结果DCM组的心脏较对照组明显扩大,且心肌纤维化明显,心肌CT-1表达明显升高（P〈0．01）。结论在阿霉素诱导的DCM大鼠心肌中CT-1过度表达,可能与其保护心肌细胞、促进心肌细胞肥大有关。     

斑马鱼rnf141基因结构与表达分析

目的:探讨斑马鱼rnf141基因在物种间进化以及在斑马鱼胚胎发育和成体中表达分布特点.方法:采用生物信息学方法分析斑马鱼rnf141基因结构特征;运用胚胎整体原位杂交和多组织RT-PCR技术分别检测斑马鱼胚胎发育不同阶段和成体各组织rnf141基因表达情况.结果:斑马鱼RNF141蛋白与人类和小鼠同源蛋白(ZNF230、Znf230)分别具有79.8%、78.5%的同源性,其中C3HC4型锌指结构域及其保守的半胱氨酸和组氨酸残基组成与人类(或小鼠)的同源性分别为84.8%、100%;而且,斑马鱼RNF141蛋白与人类ZNF230蛋白在C3HC4型锌指区域具有完全相同的二级结构.杂交结果显示,rnf141基因在斑马鱼胚胎中广泛表达,尤以端脑、小脑和后脑表达丰度为高.RT-PCR结果表明,rnf141基因在受检的成体组织中均有表达,但在睾丸组织中表达丰度较高.结论:斑马鱼rnf141基因为脊椎动物保守基因,并可能在胚胎发育和精子发生过程中起着重要作用.     

系统表达HB-EGF转基因小鼠的建立

目的建立系统表达肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)的转基因动物模型,利用转基因动物模型研究HB-EGF与组织纤维化的关系。方法RT-PCR法克隆小鼠HB-EGF基因,将其插入Chickenβ-actin启动子下游,构建Chickenβ-actin-HB-EGF表达载体,利用显微注射的技术把表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立HB-EGF转基因小鼠。利用特异引物PCR的方法鉴定转基因的基因型,采用Western Blot方法鉴定HB-EGF基因在全身组织的表达。分别取HB-EGF转基因鼠与同窝阴性小鼠的肝、肾、肺及膀胱组织进行Massion染色。结果建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,Western Blot发现其HB-EGF在肝、肺、肾及膀胱的表达与同窝阴性对照小鼠相比明显增加。Massion染色结果表明转基因鼠肝、肺、肾及膀胱组织纤维化程度明显高于同窝阴性对照小鼠。结论成功建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,HB-EGF的过度表可显著加重组织纤维化程度。     

MiR-200c和miR-141在膀胱移行细胞癌中的表达研究

目的:探讨microRNA 200c(miR-200c)和microRNA 141(miR-141)在膀胱移行细胞癌中的表达及意义?方法:MicroRNA芯片筛选膀胱癌和癌旁组织差异表达的microRNA,实时定量 RT-PCR法验证miR-200c和miR-141在膀胱癌组织和膀胱癌细胞系中的表达?结果:MiR-200c和miR-141的表达强度在膀胱肿瘤组织高于癌旁正常膀胱黏膜,在表浅性膀胱肿瘤高于肌层浸润性膀胱肿瘤,在高级别组膀胱肿瘤高于低级别组,在分化较好?恶性度较低的5637细胞系中表达较高,在分化较差?恶性度较高的T24?J82?EJ细胞系中表达均较低?结论:MiR-200c和miR-141可能参与膀胱癌的进展?