DNA阵列芯片上的DNA二聚体并行热力学研究及其在SNP基因分析中的应用

目的用DNA阵列芯片进行SNP的探测。方法根据DNA二聚体的热力学性质,在DNA阵列芯片上测定其解链曲线,用数学的方法获得其解链温度(Tm)值,再根据Tm值进行SNP分析。结果用特殊设计的寡聚DNA阵列芯片进行并行热力学研究,测得其DNA二聚体的解链曲线,计算出Tm值,并进行了SNP分析。结论可用DNA阵列芯片成功地进行高通量的SNP基因分析。     

生物芯片、基因组学和蛋白质组学在药物研发中的应用

近年来 ,生物芯片技术、基因组学和蛋白质组学发展迅猛 ,本文就其在药物研究和开发中的应用进行综述。1　生物芯片、基因组学和蛋白质组学的概念及其相互关系生物芯片(Biochip)是指通过微加工和微电子技术在固体载体的表面上构建的可准确、大信息量检测生物组分的微型分析系统 ,含基因芯片 (genechip)、蛋白质芯片 (proteinchip)、细胞芯片 (cellchip)、组织芯片 (tissuechip)和小分子芯片 (small moleculemicroarray)及芯片实验室 (lab on a chip)或微流芯片 (microfuidics)等种类[1 ] 。基因组学(genomics)是研究某物种、组织或细胞等的基因序列、结构和功能的科学。基因组学含结构基因组学 (structuralgenomics)和功能基因组学(functionalgenomics) ,前者研究基因的序列、结构和定位 ,后者研究基因的功能。自人类基因组计划(humangenomeproject,HGP)于 1 990年 1 0月 1日正式实施以来 ,基因组学得到了空前的发展 ,目前已有超过 1 0 0 0种病毒、1 0 ...     

基因芯片及应用前景

１基本概念基因芯片 (ｇｅｎｅｃｈｉｐ)也叫ＤＮＡ芯片、ＤＮＡ微阵列 (ＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ) ,是指采用原位合成 (ｉｎｓｉｔｕｓｙｎｔｈｅｓｉｓ)或显微打印手段 ,将数以万计的ＤＮＡ探针固化于支持物表面上 ,产生二维ＤＮＡ探针阵列 ,然后与标记的样品进行杂交 ,通过检测交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断 ,由于常用硅芯片作为固相支持物 ,且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术 ,所以称之为基因芯片技术。２应用测序。基因芯片利用固定探针与样品进行分子杂交产生的杂交图谱而排列出待测样品的序列 ,…     

DNA芯片技术及其在药物研究中的应用

ＤＮＡ芯片技术是近年来出现的分子生物学与微电子技术相结合的ＤＮＡ分析检测技术。因其突出特点在于高度并行性、高通量、微型化和自动化,从而成为后基因组时代基因功能分析的最重要技术之一。该技术不仅应用于新基因的发现和基因表达的研究,还被用于疾病诊断、药物筛选和药理学研究,并将在药物基因组学的研究中得到广泛应用。     

组织芯片用于免疫组织化学染色的效果

组织芯片(tissue chip)是近几年发展起来的一项生物芯片技术，它分为多组织片，组织阵列和微组织阵列^[1]。笔者把这一技术应用到常规免疫组织化学染色中，进行多药耐药基因蛋白P-gP和谷胱甘肽S转移酶GST-π的染色，以指导临床化疗。     

DNA芯片技术用于贝母的基因分型和种类鉴别

目的通过对贝母几个种遗传多态性的研究来开发在分子水平上用于鉴别贝母基因型及不同种类的DNA芯片技术。方法用PCR扩增法和DNA直接测序法确定核苷酸多态性,用DNA芯片进行基因检测。结果首先提取来自多种贝母根茎的基因组DNA,对26S rDNA基因D2与D3区的多态性片段进行扩增和测序,然后将不同种属多态性片段的特异性寡核苷探针点置于经多聚赖氨酸处理包被的芯片。用来自不同种贝母的荧光素标记的PCR产物与DNA芯片进行杂交,可在芯片特定位置检测到不同种贝母的荧光信号。结论本研究显示DNA芯片技术可为植物种属的验证与质量控制提供一种快速、高通量的检测工具。     

基因芯片技术在肿瘤研究中的应用

基因芯片是将大量靶基因 (或基因片段 )用点样仪有序地(点与点之间的距离一般小于５００μｍ )点在玻璃、硅等载体上制作而成 ,包括ＤＮＡ芯片 (ＤＮＡ微阵列 )与ｃＤＮＡ芯片（ｃＤＮＡ微阵列 )两种。将待测样品用荧光染料标记制成的探针与芯片杂交 ,杂交信号用激光扫描仪检测 ,计算机分析检测结果 ,可获得类似于传统的点杂交等的分子杂交数据 ,比较各组间靶基因表达谱的差异 ,可达到快速、高效、高通量及平行性地分析生物信息的目的。近年来 ,基因芯片技术已广泛地应用于肿瘤的多项研究中。１肿瘤性疾病的分类、诊断和预后与传统的分子诊…     

基因芯片技术及其在疾病诊断上的应用

生物芯片 (或称微阵列技术 )是将大量序列已知的寡核苷酸分子、基因片段或多肽分子等 ,应用特殊的微阵列技术固定在玻璃、硅片、塑料等材料上 ,被测片段经荧光等物质标记后与芯片上的探针分子结合 ,通过激光共聚焦扫描仪或电荷偶联摄像机 (ＣＣＤ)对各阵列荧光信号的强度进行检测 ,就可对大量标本的序列特征、基因表达量或表达差异等进行平行分析[1～ 4 ] 。根据芯片上探针类型的不同 ,生物芯片可分为基因芯片和蛋白芯片两类。从 90年代生物芯片技术出现至今 ,在短短几年内 ,该技术已在基因测序[5] ,基因突变及多态性分析[6～ 7] ,基因表达…     

生物芯片技术及其在医学中的应用

介绍生物芯片技术的概念、特点、原理、类型和在医学上的应用,着重介绍蛋白质芯片和组织芯片.蛋白质芯片可用于寻找疾病生物学标志物、研究蛋白质相互作用、药物或毒物新靶点及其作用机制等;组织芯片可用于基因表达分析、寻找与临床治疗及预后有关的标志物、发现新的侯选癌基因或抑癌基因等.     

生物芯片技术及其在医学上的应用

介绍生物芯片技术的概念、特点、原理、类型和在医学上的应用,着重介绍蛋白质芯片和组织芯片.蛋白质芯片可用于寻找疾病生物学标志物、研究蛋白质相互作用、药物或毒物新靶点及其作用机制等;组织芯片可用于基因表达分析、寻找与临床治疗及预后有关的标志物、发现新的侯选癌基因或抑癌基因等.     

分子生物学技术在肝癌研究中的应用

肝癌的发生是有其分子生物学基础的。自８０年代以来许多技术相继开发应用到肿瘤的分子生物学研究，并取得了显著的成效。一类主要用于基因组ＤＮＡ的检测，如肝癌基因和抑癌基因的定位克隆，比较基因组杂交，代表性差异分析；用于ｃＤＮＡ或ｍＲＮＡ或ｍＲＮＡ水平的技术包括消减杂交、差异显示ＰＣＲ、ｃＤＮＡ代表性差异分析、ＤＮＡ芯片及探微列陈等。这些技术的应用为肝癌的分子生物学研究开拓了一个崭新的领域。１ＤＮＡ水平的研究１．１ 定位克隆癌基因和抑癌基因：利用各种ＤＮＡ多态性标记对癌基因或抑癌基因进行染色体定位进而克…     

鞘内注射T型钙通道反义寡聚核苷酸对慢性背根节压迫大鼠痛阈的影响

目的观察鞘内注射T型钙通道(Cav3.0)反义寡聚核苷酸对慢性背根节压迫(chronic compression of dorsal root ganglion,CCD)大鼠痛阈的影响,初步探讨脊髓T型钙通道在神经病理性疼痛形成中的作用。方法鞘内置管♂SD大鼠32只,随机分为4组(n=8):CCD+NS组、CCD+Cav3.0反义寡聚核苷酸组(CCD+Cav3.0-AS)、CCD+Cav3.0错义寡聚核苷酸组(CCD+Cav3.0-MM)、假手术(sham)+NS组。各组大鼠在CCD或sham术后d1始连续4d每天2次鞘内分别注射12.5μg,容积均为10μl的Cav3.0-AS、Cav3.0-MM或NS10μl,分别观察手术后1～14d大鼠机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)。结果鞘内注射Cav3.0反义寡聚核苷酸能延缓CCD大鼠痛敏的形成,在CCD术后d8～9才形成与CCD+NS组类似的痛敏,而鞘内注射Cav3.0错义寡聚核苷酸则与CCD+NS组差异无统计学意义。结论脊髓T型钙通道参与神经病理性疼痛的形成,抑制脊髓T型钙通道基因的表达具有疼痛治疗作用。     

组织芯片技术在研究肿瘤组织中抗原表达的应用

目的:研究多种肿瘤组织芯片、肿瘤进展组织芯片以及肿瘤预后相关组织芯片中多种抗原的表达,明确组织芯片技术在肿瘤研究中的应用。方法:运用组织芯片技术和免疫组织化学法检测多种肿瘤组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达、肺癌进展组织中P53的表达及肺鳞癌组织中P16的表达。结果:手工制作的组织芯片阵列排列整齐,仅有1个组织缺失(1/625=0.16%),3个组织有折叠(3/625=0.48%),其余组织形态均好;ER、PR在乳腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌等多种肿瘤中均有强弱不等的表达;P53在肺癌及不典型增生组织中阳性表达率(70%,40%)明显高于在正常支气管黏膜中的表达(0%)(P<0.05);P16蛋白在肺鳞癌中失表达率为57.9%,其中有转移组(8/13=61.5%)高于无转移组(7/17=41.2%)(P<0.05)。结论:组织芯片技术能快速、高效地对大量肿瘤组织样本进行各种检测分析,低消耗、可比性强,手工制作简单又经济,可以广泛地应用于肿瘤病理研究的各个方面;应用组织芯片技术,检测到ER,PR在多种肿瘤中均有表达,提示两者与多种肿瘤的发生有关;证明了P53基因的突变是肺癌发生的早期事件,参与了肺癌的发生与发展;P16基因在肺鳞癌中有一定的失表达率,而且与肿瘤预后相关因素中是否转移有一定相关性。     

miR-137对人喉癌细胞株Hep-2细胞增殖的影响

目的 研究miR-137对喉癌细胞株Hep-2细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将Hep-2细胞分为转染miR-137寡聚核苷酸组(A组)、转染无义序列组(B组)和空白对照组(C组).采用RT-PCR、MTT法、流式细胞仪和Western blot技术评价各组细胞增殖和细胞周期的生物学特征.结果 转染miR-137寡聚核苷酸后,Hep-2细胞中miR-137表达显著增加.与C组相比,A组细胞增殖水平明显抑制,miR-137寡聚核苷酸能够有效诱导Hep-2细胞周期阻滞在G1/G0期;A组细胞分裂周期蛋白42表达水平明显下调,细胞周期调控因子蛋白CDK4及细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低.结论 miR-137寡聚核苷酸能够显著抑制喉癌细胞Hep-2的增殖,miR-137是潜在的人喉癌细胞基因治疗的候选靶点.     

突变改变HBsAg免疫学亚型并影响其抗原性及免疫原性

HBsAg是一种糖基化的脂蛋白,血清学上它具有一个a抗原决定簇和d或y、w或r两组亚型。已经知道:a抗原决定簇位于氨基酸138～147位置,d或y位于110～139。运用特异的氨基酸突变技术可使HBsAg亚型发生改变。含有s基因的1.78kb BamHI DNA片段,克隆入噬菌体M13mp8中形成亚克隆,做为突变试验的靶基因,设计合成y-113、y-122和y-134三个由17个核苷酸组成的寡聚核苷酸片段,诱导突变(分别可使氨基酸113位:丝     

手工制作组织芯片的技术心得

目的介绍一种组织芯片的手工制备技术。方法利用改进的穿刺针、盖玻片朔料包装盒及x线废片手工制作组织芯片,进行免疫组织化学和常规HE染色。结果阵列蜡块完整,组织蜡芯排列整齐有序、无移位,组织芯片切片染色效果满意。组织位点的形态可观测率为94．37％。结论手工制备组织芯片方法简单易行、费用低廉;制片质量可媲美进口的组织微阵列仪或组织芯片制作机的制片质量,且易于推广。     

反义药物的开发与研究进展

反义药物是近20多年来发展起来的一种以反义核酸技术为基础开发的以治疗为目的安全有效的新型药物。反义药物(Antisense drugs)指的是反义脱氧寡核苷酸类药物,主要包括反义DNA(AS-ODN),反义RNA(AS-ON),多肽核酸(PNA),核酶(ribozymer)等。其主要是根据碱基互补配时原则和核酸杂交原理,利用人工合成、天然存在的互补寡核苷酸片段,以反向互补方式特异性地与目的基因(单链、双链)或信使核糖核酸(mRNA)的特定序列相结合,从基因复制、特录、剪接、转运翻译等水平上调节靶基因的表达,干托遗传信息从核酸向蛋白质的传递,从而达到抑制、封闭或破坏靶基因表达,达到治疗疾病的目的。因此,反义药物是对多种疾病都有潜在治疗价值的新型药物。自1978年Stephenson和Zamenick首次报道与病毒核酸序列互补的13met反义寡聚脱氧核苷酸能够抑制Rous病毒复制,提出了反义寡聚脱氧核糖核酸能够抑制特定基因表达的概念,并预测了在活疗病毒性疾病和癌症方面的前景。     

反义药物的作用机理与临床应用

反义药物是以反义核酸技术为基础开发的以治疗为目的的安全有效的新型药物。与传统的药物相比较 ,反义药物的性质和作用对象明显不同 ,表现为 :新的化学物质 寡聚核苷酸 ;新的药物受体 ｍＲＮＡ(信息核糖核酸 ) ;新的受体结合方式 :Ｗａｔｓｏｎ Ｃｒｉｃｋ杂交 ;新的药物受体结合后反应 ,如ＲＮａｓｅＨ(核糖核酸酶Ｈ)介导的靶ＲＮＡ的降解[1] 。近年来 ,随着对反义寡聚脱氧核苷酸 (ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ )及其结构衍生物如硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸 (ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ…     

组织芯片技术及其在新药毒理学研究中的应用

组织芯片(tissue microarray,TMA)也称组织微阵列,是将数十个甚至上千个微小组织标本整齐排列在一张载玻片上制成的高通量微阵列,是基因芯片的延伸和发展,可以同时进行多个标本的同一个指标的研究,具有体积小、耗材少、快速、含生物学信息量大等优点,该技术还可以与免疫组化(immunohistochemistry,ICH)、荧光核酸原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、RNA原位杂交(RNA in situ hybridization,RNA-ISH)等技术相结合,在基因、转录和表达产物的不同表达分子水平进行研究。本文结合组织芯片技术的特点,对其在新药毒理学研究中的应用进行初步探讨。     

组织微阵列在生物制药研发中的应用

组织芯片(tissue chips)又称组织微阵列(TMA)是近几年发展起来的新技术，它是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片。一个芯片蜡块的连续切片可同时用作免疫组化、荧光原位分子杂交、多彩FISH、mRNA原位分子杂交等方法的分析。使基因DNA、mRNA和蛋白质同时在不同分子水平表达和原位分析成为可能。它具有体积小、信息量大、快速平行、高效等诸多优点。本文结合组织芯片的特点和用途，对其在生物制药研发中的运用进行了初步探索。