人巨细胞病毒pp65抗体检测方法的建立

目的 建立检测人巨细胞病毒pp65IgG抗体(HCMV pp65 IgG)的间接酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 通过棋盘滴定法选择包被抗原和酶标二抗的最适浓度;以商品抗HCMV pp65单抗为阳性模拟标本,建立检测抗HCMV pp65 IgG抗体,并对临床收集的各类血清标本进行检测和分析.结果 检测间接ELISAHCMV pp65 IgG的最佳包被抗原浓度为10 ng/孔,酶标二抗的工作浓度为1∶3000.当阳性吸光度(A)值为0.298时,87份不同组的血清标本(HCMV感染活动组、HCMV感染不活动组、HCMV未感染组)阳性检出率分别为51.6%(16/31)、12.1%(4/33)和0.0%(0/23).3组两两间差异均存在显著性(P＜0.01).结论 本研究建立了检测HCMV pp65抗体的方法,应用该方法能从相应人群中检出该抗体,检测不存在假阳性,并发现该抗体与抗HCMVIgM的检出有关.     

免疫酶法与金标免疫斑点法检测人血清EB病毒抗体的临床应用比较

目的:比较免疫酶法与金标免疫斑点法检测血清EB病毒抗体的优缺点。方法:用免疫酶法与金标免疫斑点法分别检测440份血清的EB病毒抗体,其中已确诊为鼻咽癌的80份,正常对照360份。结果:80份鼻咽癌患者血清,免疫酶法阳性率98%,金标免疫斑点法阳性率96%,两者比较差异无统计学意义。检测健康人360份血清,两者阴性率(特异性)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:免疫酶法灵敏性高、成本较低,适合普查筛选;而金标免疫斑点法特异性和诊断符合率较高,可作为怀疑病例的检查方法。     

三株抗人巨细胞病毒pp65蛋白单克隆抗体的鉴定和应用

目的 制备抗HCMVpp65蛋白的单克隆抗体(简称单抗),并对其进行相关研究.方法 以重组表达的HCMVpp65蛋白为抗原,运用杂交瘤技术制备单抗,对获得的单抗进行Ig亚型、特异性、效价和亲和常数的鉴定与测定,并以免疫荧光检测法与进口同类产品进行比较.结果 获得3株针对HCMVpp65蛋白的单抗,即B6、G12、2B12;Ig亚型依次为IgG1κ型、IgG1κ型、IgMκ型;亲和常数依次为3.6×107 L/mol、3.8×107 L/mol、3.1×108 L/mol;免疫印迹试验结果表明,3株单抗都与HCMVpp65蛋白特异性的结合,除2B12外,B6、G12与EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ、HSVⅡ均无交叉反应;与进口单抗平行检测140份临床标本,结果一致(r=1.00,P＞0.05).结论 成功获得3株稳定分泌抗HCMVpp65蛋白的杂交瘤细胞株,所产生的抗体特异性和亲和力较理想,为HCMVpp65蛋白抗原血症检测国产化试剂盒的研制奠定了基础.     

捕获ELISA检测人巨细胞病毒IgM抗体

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)属疱疹病毒科 ,其感染极为普遍 ,在免疫抑制患者及孕妇中常可导致严重后果。本实验采用重组ＨＣＭＶ (ｒｈＣＭＶ) ｇｐ5 2蛋白[1] 作抗原和辣根过氧化物酶(ＨＲＰ)标记的鼠抗 ｇｐ5 2单克隆抗体[2 ] ,建立了捕获ＥＬＩＳＡ ,检测血清中的ＨＣＭＶＩｇＭ抗体。现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　抗原浓度的确定　ｒｈＣＭＶ ｇｐ5 2蛋白[1] 纯度达 95 %。在捕获ＥＬＩＳＡ检测程序中加入不同浓度的ｇｐ5 2抗原 ,每个浓度重复 3孔 ,将同一抗原浓度的 3个阳性血清Ａ值分别除以 3份阴性血清的平均Ａ值 ,求得Ｐ/Ｎ值…     

人巨细胞病毒pp150-gp52蛋白原核可溶性表达与IgM捕获ELISA方法建立和应用

目的原核系统内表达并纯化巨细胞病毒pp150-gp52融合蛋白优势抗原表位,建立IgM捕获ELISA方法并应用。方法通过重叠PCR技术扩增获得巨细胞病毒pp150-gp52优势片段核酸序列,在原核系统内可溶性表达DsbC-pp150-gp52融合蛋白并纯化,用Western blot和ELISA检测融合蛋白的特异性和应用价值。结果纯化获得的融合蛋白DsbC-pp150-gp52经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测60份临床阳性血清和60份健康人血清。其中以酶标记DsbC-pp150-gp52蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率96.7% ,阴性检出率100%,初步验证DsbC-pp150-gp52融合肽具有非常好的抗原特异性。结论融合蛋白DsbC-pp150-gp52在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,获得的高纯度重组融合蛋白具有抗原性和特异性强的特点,采用IgM捕获ELISA的实验方法,可开发检测试剂盒用于风疹病毒的早期检测。     

金标免疫斑点法检测肾综合征出血热病毒抗体及其临床应用

肾综合征出血热（HFRS）流行期间对该病的早期、快速诊断是防治HFRS流行的关键。我们采用金标免疫斑点法快速检测血清中HFRS病毒抗体（IgM,IgG）,对临汾地区医院1998年7月一1999年5月间42例经实验诊断和临床最后确诊为流行性出血热的患者标本及27例具有急性发热,有消化道症状,全身酸痛无力,血清ALT增高,蛋白尿阳性等与HFRS有相似症状,但最后确诊为非HFRS的患者作为对照。用金标免疫斑点法进行检测,并与EIJSA检测法进行统计学比较,通过分析旨在评价金标法诊断HFRS的准确性及其临床推广价值。1材料和方法1．1观察对象…     

人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法的建立及应用

目的建立具有较好试验重复性的人巨细胞病毒中和抗体快速微量检测方法。方法建立快速微量中和试验方法,用于健康人血浆及IVIG中的CMV中和抗体效价检测。结果用该方法检测336份健康人血浆,其中CMV中和抗体效价≥1∶128的比例为28.1%;检测27批"蓉生静丙"和9批国内其它厂家IVIG的CMV中和抗体效价,其CMV中和抗体效价的GMTs分别为1∶498和1∶485。结论建立了快速、简便、检测通量高、重复性较好的快速微量中和试验方法,为CMV-IVIG的研制提供了可供选择的血浆筛选方法。     

人巨细胞病毒低基质蛋白pp65亲水性片段的克隆与表达

目的 为建立人巨细胞病毒（HCMV）活动性感染检测方法，表达HCMV早期复制的标志物pp65蛋白，以制备相应的抗体。方法 将pp65全基因和其亲水性强、有抗原代表性的片段（pp65 hp）分别克隆到表达载体pET22b（＋）中诱导表达，并以免疫印迹考察重组蛋白的抗原性。结果 重组rpp65全蛋白表达量低于全菌体蛋白的5％，而rp65 hp蛋白获得高效表达，约为全菌体蛋白的40％，并与HCMV IgG抗体特异性结合。结论 亲水性pp65 hp片段有较好的抗原性，可以制备相应的抗体，来检测HCMV活动性感染。     

免疫斑点法检测登革病毒抗体的临床应用

免疫斑点法检测登革病毒抗体的临床应用周坚（番禺市何贤纪念医院，广东番禹５１１４００）关键词登革病毒抗体免疫斑点法实验诊断登革热的常规方法是登革病毒（ＤＶ）分离和血清学试验，如中和试验，补体结合试验等。但由于操作烦琐、敏感性低等因素而影响结果。笔者采用...     

亚甲蓝光化学法灭活血制品中巨细胞病毒的研究

目的探讨亚甲蓝光化学法(MBP)灭活血制品中巨细胞病毒(HCMV)的效果。方法将HCMVAD16910%分别加入血浆、红细胞悬液中并进行MBP病毒灭活处理(MB浓度5μmol/L,光照时间1h,光照强度38000lux),分别加至人胚肺成纤维细胞(HELF)单层中培养,与对照细胞比较观察细胞病变情况(CPE)。结果经MBP病毒灭活处理后,含HCMV血浆及红细胞的组织培养半数感染量(TCID50)下降4～6。结论MBP能灭活血液中的HCMV。     

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的　比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法　收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果　pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论　pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgM抗体的研究

目的 建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法。方法 采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体，制成免疫层析测试条。血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg、HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条。结果 自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份，各单项指标IgM—抗HAV、IgM-抗HEV两法总符合率依次为97．9％、98．4％，检测灵敏度可达2ng／ml。结论 用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA试条的制备条件已基本建立；其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备。     

荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较

目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。     

鼠疫F1抗体胶体金检测试剂的研制和现场评价

目的 为建立鼠疫诊断和监测所需的快速检测F1抗体水平的方法,研制并评价金标检测试剂.方法 胶体金标记和实验室检测,14个省17个监测点现场监测中检测了动物和人的血清样本4789份.结果 金标检测试剂特异性强,敏感性、稳定性好,现场检测结果与间接血凝方法无差异.结论 鼠疫F1抗体胶体金检测试剂可以用于鼠疫病例诊断和动物监测.     

胶体金法和免疫荧光法检测血浆肌钙蛋白I的比较

目的通过两种方法检测结果的比较,对胶体金法(Colloidal Gold Assay)检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)进行方法学评价,并探讨其临床应用价值。方法应用胶体金法测定20名健康人和20例急性心肌梗死(AMI)患者的血清cTnI水平,并与免疫荧光法(IFA)检测结果相比较,系统研究胶体金法测定cTnI的敏感性、特异性、可用度。结果胶体金法(Y)与免疫荧光法(X)具有良好的相关性(Y=0.801 X-0.174,r=0.980),结果差异无统计学意义(P>0.05)。诊断敏感度、特异度、可用度分别为85.0%、95.0%、80.3%,阳性和阴性似然比分别为17.0%和15.8%,阳性预测值和阴性预测值分别为94.4%、86.4%。结论胶体金法操作简便、结果准确可靠、自动化程度高,且检测快速,具有较高的临床可用度;cTnI对诊断AMI有高度特异性和敏感性,且持续时间较长,适合在临床工作中推广应用。     

胶体金法与ELISA检测新型冠状病毒IgM和IgG抗体的临床诊断价值比较

目的 通过胶体金法与酶联免疫吸附测定(ELISA)检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体免疫球蛋白(Ig)M和IgG,评价2种方法在检测SARS-CoV-2特异性抗体中的诊断价值.方法 收集2020年1-2月在该院住院的患者81例,根据相关标准分为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊患者组38例,疑似患...     

胶体金标记单克隆抗体测定单增李斯特菌试剂盒制备

目的制备单增李斯特菌54001、54002型的单克隆抗体（McAb）,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测试剂板。方法以纯化单增李斯特菌为抗原,免疫Balb／c小鼠,制备单克隆抗体,鉴定其特性,建立并验证胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析试剂板的检测方法。结果筛选出2株单抗杂交瘤细胞株F5、F9,免疫球蛋白亚类均为IgM。通过选用柠檬酸钠法制备胶体金,测定其最适结合蛋白浓度为28g/ml,制备胶体金标记单增李斯特菌抗体免疫层析检测板。结论为产单核李斯特菌提供了一个方便、快捷、切实有效的检测技术。     

胶体金免疫层析法对呼吸道合胞病毒抗原快速检测结果分析

目的分析胶体金免疫层析法对呼吸道合胞病毒(RSV)抗原快速检测的灵敏度和特异度。方法用RSV抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对197例疑似RSV感染患者的鼻咽抽吸物或鼻咽拭子标本进行检测,以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析法对不同类型标本和不同年龄组患者的灵敏度。结果 197例患者标本中经RT-PCR检测,95例(48.2%)为阳性。以RT-PCR核酸检测结果为标准,胶体金免疫层析法的灵敏度和特异度分别是34.7%和100%。该方法对鼻咽抽吸物的阳性检出率较鼻咽拭子高(36.2%对8.6%,P<0.01),鼻咽抽吸物标本的灵敏度明显高于鼻咽拭子(22.1%对12.6%)。RSV检出率与年龄呈负相关(P<0.01),1岁以下患儿的阳性检出率最高(29.5%),而在>5岁患儿中阳性检出率为0。结论胶体金免疫层析法对1岁以下幼儿的鼻咽抽吸物中的RSV有较好检测效果,可辅助临床进行早期筛查。但鉴于该方法灵敏度较低,且适用于5岁以下儿童,临床上还需用RT-PCR对RSV进行确认和补充检测,以免漏诊。     

金标法检测乙肝表面抗原漏检原因分析

目的：分析金标法检测乙肝表面抗原（HBsAg ）的漏检原因。方法采用金标法和酶联免疫吸附法（ELISA）对10335例献血者血液标本进行HBsAg检测,计算阳性率、漏检率。采用金标法和ELISA检测 HBsAg质控品,分析检测灵敏度。结果金标法检测阳性率为0．33％,ELISA为1．14％,金标法检测阳性率低于 ELISA （χ2＝46．76,P＜0．05）。金标法漏检率为71．19％。金标法反应时间为5、10、15 min时,漏检率为94．92％、88．98％、71．19％,比较差异有统计学意义（χ2＝38．27,P＜0．05）。金标法不能检出浓度为0．5 ng/mL的 HBsAg质控品。结论金标法检测灵敏度较ELISA低,并且受人为因素影响较大,适用于献血前初筛。