慢性大鼠酒精中毒钙神经素在脑内的分布与表达及离子改变

目的 检测慢性酒精中毒大鼠脑组织钙神经素(calcineurin,CaN)的异常分布与表达及离子变化情况,探讨慢性酒精中毒代谢性脑病的发病机制.方法 选用健康雄性Wistar大鼠100只,随机分为2组,酒精中毒组60只,盐水对照组40只.正常喂养1w后开始造模.酒精中毒组(60只):每日每只大鼠分别按8ml/kg灌胃2w,随后再按照10ml/kg灌胃1w,按12ml/kg灌胃1w,共灌胃4w.每日灌胃2次,其间隔均为6h,酒精浓度为50％.盐水对照组(40只):同时用等量的生理盐水进行灌胃.每周测量体重,观察其一般生物学特征;免疫组化法测定CaN的阳性表达;原子吸收法测定Ca2、Mg2+、K+、Na+等微量元素变化.结果 两组大鼠一般生物学特征存在明显差异,体重差异具有的统计学意义;酒精组大鼠大脑皮质、海马CaN表达明显多于对照组(p＜0.05),小脑CaN表达无差异(P＞0.1);原子吸收法测定酒精组的Ca2含量比正常对照组明显增多(P＜0.05),Mg2、K+、Na+含量无显著变化(P＞0.05).结论 慢性酒精中毒后可以引起大鼠大脑皮质、海马CaN异常表达及Ca2+含量明显增多,推测酒精中毒后可对神经元产生以Ca2+代谢为主的影响,导致酒精中毒性代谢性脑病的发生.     

酒精中毒后大鼠大脑皮质和海马的血管内皮生长因子变化及相关机制

目的观察酒精中毒后大鼠大脑皮质和海马的血管内皮生长因子(VEGF)变化。方法Wistar雄性大鼠酒精灌胃4周造成酒精中毒模型。通过免疫组化SP染色的方法进行大鼠大脑皮质及海马VEGF的测定。结果对照组大鼠大脑皮质及海马VEGF均未表达,酒精组大鼠大脑皮质其中5只VEGF为强阳性表达,7只为阳性表达,3只为弱阳性表达,2只未表达。海马区7只为强阳性表达,6只为阳性表达,2只为弱阳性表达,2只未表达。结论酒精中毒后可以引起VEGF的表达,VEGF的表达可能对脑血管与神经细胞有保护作用。     

褪黑素对癫(癎)大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的观察褪黑素（Mel）对癫癇大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3表达的影响。方法采用匹罗卡品（Pilo）制作大鼠癫癇持续状态（SE）模型,随机分为Pilo组、Mel组和对照组,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）染色和免疫组化技术检测大鼠海马神经元凋亡数和caspase-3的表达,并与对照组比较。结果SE后6h,Pilo组开始出现少量TUNEL阳性细胞;SE后72h,达到高峰;SE后7d,TUNEL阳性细胞开始减少。SE后6h,Pilo组大鼠海马caspase-3阳性细胞数增多,主要集中于CA1和CA3区;SE后48h,达到高峰;SE后72h,阳性细胞数开始减少;SE后7d,caspase-3表达基本恢复正常。Mel组各时间点大鼠海马TUNEL阳性细胞数和caspase-3表达均明显低于Pilo组大鼠（均P〈0.01）。结论Mel可减少癫癇大鼠海马神经元凋亡,抑制caspase-3的表达,起到神经保护作用。     

慢性酒精中毒脑病大鼠脑部血管及组织病理改变和血浆ET-1变化

目的观察慢性酒精中毒脑病大鼠脑血管和脑组织病理改变及血浆ET-1变化。方法用灌胃法制备慢性酒精中毒脑病大鼠的动物模型;提取对照组和酒精组大鼠额叶、小脑及海马进行病理学观察,并采用放免法于造模后4,8,12,16周末测定各组血浆ET-1水平。结果酒精组额叶血管出现内皮细胞脱落、内弹力膜出现皱褶、管壁轻度增厚,管腔轻度狭窄等一系列病理改变;额叶大脑皮质及海马神经细胞数目缺失,排列不规则,细胞核固缩;小脑皮质浦肯野细胞明显减少,细胞外形不规则,胞体呈明显三角形改变,部分逐渐溶解及消失,颗粒细胞层细胞减少。酒精组血浆ET-1水平较对照组显著升高（P〈0.05）。结论慢性酒精中毒会导致一系列脑组织及脑血管病理改变,酒精导致的脑血管损害是酒精中毒性脑病发生的病理机制之一。ET-1参与了酒精中毒性脑病的病理过程。     

miR-433通过JAK2/STAT3信号通路调控氧化应激在大鼠术后认知障碍中的作用研究

目的 探讨miR-433对术后认知障碍(POCD)大鼠海马氧化应激和认知功能的影响及其作用机制。方法 将大鼠随机分为4组,Control组、POCD组、POCD+NC mimic组、POCD+miR-433 mimic组。构建大鼠POCD模型,实时荧光定量PCR实验(RT-qPCR)检测miR-433在POCD大鼠海马组织中的表达;Morris水迷宫试验评价大鼠认知功能;苏木精-伊红(HE)染色检测海马组织病理学变化;TUNEL染色检测细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氧化应激水平;双荧光素酶报告基因系统检测miR-433和JAK2的靶向关系;Western blotting检测海马组织中cleaved caspase-3、Bad、Bcl-2、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果 与Control组比较,POCD组大鼠海马组织中miRNA-433表达显著降低,逃避潜伏期延长,穿越目标平台次数减少,POCD组神经细胞紊乱,细胞数量明显减少,神经元细胞凋亡率显著升高,cleaved caspase-3和Bad蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达...     

人参总皂苷对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究人参总皂苷对脑外伤大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤(TBI)后继发性损伤的作用机制.方法 采用改良的Feeney自由落体法建立脑外伤模型,将Sprague-Dawley大鼠54只按照随机数字表法分为假手术组、脑外伤组、人参总皂苷治疗组(治疗组),每组18只.模型建立后24h处死大鼠,采用干湿重法测量脑水含量,光镜下观察尼氏染色海马细胞形态,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法观察大脑皮质、海马神经细胞凋亡及凋亡基因bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达情况.结果 与脑外伤组比较,人参总皂苷治疗后的治疗组脑含水量明显减低,损伤侧海马病理学改变明显减轻,神经细胞凋亡减少,bcl-2的表达增高,bax、caspase-3的表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人参总皂苷可以减轻脑外伤后继发性损伤,其机制可能是升高bcl-2的表达,抑制bax、caspase-3的表达,从而阻滞TBI后神经细胞凋亡.     

丝胶干预2型糖尿病大鼠海马及大脑皮质血红素加氧酶1的表达

目的：探讨丝胶对2型大鼠海马及大脑皮质血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法：30只雄性SD大鼠随机分为3组,正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组10只。糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶（2.4g/kg/d）灌胃35天。HE染色观察海马和大脑皮质的形态变化;分别采用Western Blotting和RT-PCR法检测海马和大脑皮质HO-1蛋白及mRNA的表达。结果：糖尿病模型组大鼠海马及大脑皮质的神经细胞均出现明显的病理变化,HO-1蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠（P＜0.01）。丝胶治疗组大鼠海马、大脑皮质神经细胞的病理变化明显减轻,HO-1蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠（P＜0.01,P＜0.05）。结论：丝胶可通过下调海马及大脑皮质HO-1的表达,减轻糖尿病时HO-1高表达对海马及大脑皮质神经细胞的毒性损害,发挥对糖尿病神经系统损伤的保护作用。     

细胞凋亡在热打击致大鼠大脑皮质神经元损害中的作用及机制

目的探讨热打击后大鼠大脑皮质神经元凋亡及caspase-3的表达变化。方法将Wistar大鼠随机分为正常对照组和热打击组,正常对照组大鼠始终置于(25±0.5)℃,相对湿度(35±5)%环境下;热打击组置于人工智能气候舱内100 min,舱内温度(40±0.5)℃,相对湿度(60±5)%。TUNEL染色观察大鼠大脑皮质神经元的凋亡情况;免疫组织化学方法及荧光定量PCR检测大鼠大脑皮质神经元caspase-3的表达。结果热打击1 d后大脑皮质神经元出现凋亡,第3天达高峰。caspase-3于热打击2 d后开始表达,于第3天表达最明显。荧光定量PCR检测结果显示,caspase-3在1 d、2 d、3 d和7 d各时间点含量与正常对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),3 d时caspase-3含量最高。结论热打击可激活caspase-3表达,诱导皮质神经元凋亡。     

雌激素对血管性痴呆大鼠认知功能、海马Bcl-2、Bax蛋白表达及神经元凋亡的影响

目的 探讨雌激素对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能、海马Bcl-2、Bax蛋白表达和神经元凋亡的影响.方法 60只雄性大鼠随机分为假手术组、VD组和雌激素组,每组20只.采用双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型;雌激素组腹腔注射17-β雌二醇(花生油溶解)200 μg/kg,同时假手术组和VD组腹腔注射等量的花生油,均为隔日1次,共30次.60 d后,Y-型迷宫试验检测大鼠学习记忆能力;HE染色观察大鼠海马神经元形态;免疫组化染色检测海马Bcl-2、Bax蛋白的表达,原位缺口末断标记(TUNEL)法检测神经元凋亡程度.结果 与假手术组相比,VD组及雌激素组认知能力明显下降, 海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白表达增加,TUNEL 阳性细胞数明显增多(均P<0.001);与VD组比较,雌激素组认知能力改善,海马CA1区Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白的表达明显减少,TUNEL 阳性细胞明显减少 (均P<0.001).结论 17-β雌二醇可调节Bcl-2、Bax蛋白表达而抑制神经元凋亡,有助于改善VD大鼠的认知能力.     

β-胡萝卜素对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征大鼠学习记忆及海马区caspase-3 、磷酸化tau表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素(β-C)对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAS)大鼠学习记忆及海马区caspase-3、磷酸化tau蛋白表达的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常对照组、单纯OSAS模型组(模型组)和OSAS模型组+β-C干预组(干预组),每组8只。采用低氧舱建立OSAS大鼠动物模型。模型组及干预组小鼠于造模前给予β-C灌胃,正常组不做任何处理。造模完成后,采用Morris水迷宫检测实验大鼠的学习和记忆能力,HE染色观察大鼠海马组织的病理学改变,采用Western Blotting法检测海马组织中caspase-3、p-tau的蛋白表达变化。结果模型组大鼠各时间点逃避潜伏期时间较正常对照组显著延长(均P 0. 05);干预组第2～5 d逃避潜伏期较模型组显著缩短(均P 0. 05)。模型组穿越平台次数明显少于正常对照组和干预组(均P 0. 05)。与模型组比较,正常对照组与干预组caspase-3、p-tau蛋白表达显著降低(均P 0. 05)。结论β-C可减轻OSAS所致的学习记忆能力受损,其机制可能与其抑制caspase-3、p-tau的蛋白表达有关。     

脑缺血对大鼠皮层及海马铜蓝蛋白表达的影响

目的 探讨脑缺血对大鼠皮层及海马中铜蓝蛋白(Ceruloplasmin,Cp)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠60只,随机分为脑缺血1、3、7、28 d组和假手术对照组,每组各12只.实验组结扎双侧颈总动脉造成大鼠脑缺血,假手术对照组仅分离出双侧颈总动脉但不结扎.采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测皮层及海马组织中Cp mRNA的表达,免疫组织化学观察皮层及海马组织中Cp的表达.结果 大鼠皮层和海马均表达Cp mRNA.皮层和海马Cp mRNA的表达随缺血时间的延长逐渐降低,缺血1、3、7、28 d组表达均低于假手术组(P＜0.01).脑组织脉络丛细胞、室管膜细胞、皮层和海马的星形胶质细胞、血管内皮细胞均表达Cp;而皮层和海马的锥体细胞和颗粒细胞均不表达Cp.缺血1 d组皮层及海马Cp表达与对照组差异不显著(P＞0.05);缺血3 d组皮层和海马Cp表达低于假手术组(P＜0.05);缺血第7、28 d组Cp表达减少极为显著(P＜0.01).脑缺血大鼠皮层和海马中铁含量与Cp的表达呈负相关,相关系数分别为-0.831(P＜0.01)和-0.809(P＜0.01).结论 脑缺血可诱导大鼠皮层及海马中Cp表达降低.脑缺血后Cp表达减少可能参与了脑缺血引起的铁含量升高及神经元铁沉积的过程.     

局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3和其激活的DNA酶与神经元损伤的关系及半胱氨酸蛋白酶-3抑制剂的保护作用

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)及由半胱氨酸蛋白酶激活的DNA酶(caspase-activated deoxyribonuclease,CAD)的表达变化与神经元损伤的关系,研究caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO对缺血神经元的保护作用.方法 实验设干预组和模型组,线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞1 h后再通模型,干预组于侧脑室给予Ac-DEVD-CHO,模型组给予二甲基亚砜(DMSO).应用HE、免疫组织化学、TUNEL染色及电镜观察大鼠大脑中动脉栓塞1 h后再灌注6、12、24、48、72 h时caspase-3和CAD蛋白的表达及神经元损伤程度的变化.结果 HE染色和电镜观察下,模型组和干预组差异不明显;TUNEL染色阳性细胞数除6 h外,两组间其余时间点相比差异具有统计学意义;模型组和干预组caspase-3蛋白表达24 h达高峰,分别为2.360±0.318与0.804±0.206(t'=10.039,P<0.01),12～48 h与模型组同期相比差异均有统计学意义;模型组和干预组CAD蛋白表达于48 h达高峰,分别为3.061±0.567与0.812±0.240(t'=8.960,P<0.01),12～72 h与模型组同期相比差异均有统计学意义.结论 caspase-3-CAD-DNA降解途径是鼠脑缺血再灌注神经元损伤的重要途径,caspase-3抑制剂具有一定程度的神经保护作用.     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

亚低温通过抑制AIF核转位改善大鼠颅脑损伤

目的 探讨亚低温对颅脑损伤（TBI）大鼠脑组织凋亡诱导因子（AIF）核转位的影响。方法 将36只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、TBI组、亚低温组，每组12只。采用控制性皮质撞击建立TBI模型，亚低温组大鼠给予亚低温处理。TBI后24 h，HE染色观察大鼠脑组织病理学变化；免疫组织化学方法检测大鼠脑组AIF的表达部位；免疫印迹法检测损伤脑组织线粒体和细胞核AIF、caspase-3的表达情况。结果 HE染色结果显示，TBI后，损伤侧脑组织可见沿灰白质界面的挫伤和出血，亚低温组挫伤和出血灶明显减轻。免疫印迹法检测结果显示，TBI后，损伤脑组织caspase-3表达量明显增加（P<0.01），细胞核AIF表达量明显增加（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显降低（P<0.05）；亚低温组损伤脑组织caspase-3表达量明显下降（P<0.01），细胞核AIF表达量明显下降（P<0.01），而线粒体AIF表达量明显升高（P<0.05）。免疫组织化学染色结果显示，假手术组AIF位于大脑皮质和海马神经元细胞核外；TBI组后，损伤侧皮质及海马区AIF从线粒体转移至细胞核内的阳性细胞数量明显增多（P<0.01）；亚低温组损伤侧皮质及海马区AIF发生核内转移的阳性细胞数量减少（P<0.01）。结论 亚低温可能通过抑制AIF的核转位减轻颅脑损伤后神经细胞凋亡，从而起到神经保护作用。     

石杉碱甲、尼莫地平对脑缺血鼠学习记忆障碍与血管内皮生长因子、Caspase-3表达的影响

目的:对脑缺血大鼠采用尼莫地平与石杉碱甲进行药物干预治疗,观察治疗后不同药物组血管内皮生长因子(VEGF)、caspase-3表达水平与学习记忆改善程度。方法:采用免疫组化和Y迷宫检测脑缺血鼠学习记忆功能的变化及VEGF、caspase-3在缺血区的表达。结果:各治疗组VEGF、caspase-3在海马区、大脑皮质、基底节区表达均显著低于脑缺血对照组(A组)P<0.01,尤以海马、大脑皮质区较显著。其中石杉碱甲加尼莫地平干预组(B组)VEGF、caspase-3细胞阳性表达的降低和学习记忆功能的改善,明显好于A、C、D组,P<0.01。结论:石杉碱甲加尼莫地平治疗组与其他药物治疗组比,能有效改善VEGF、caspase-3表达水平和提高学习记忆的能力,为认知障碍早期的治疗提供依据。     

高剂量灵芝孢子粉干预戊四氮致痫模型大鼠海马及皮质区神经细胞Bcl-2、Bax的表达

采用中药灵芝孢子粉低、中、高剂量（150, 300, 450 mg/kg）干预戊四氮致癫痫模型28 d，并设空白对照组。经免疫组织化学染色和TUNEL检测后发现，与模型相比，灵芝孢子粉高剂量组大鼠海马和皮质区神经细胞TUNEL阳性细胞数及Bax阳性细胞数均减少，而Bcl-2阳性表达细胞数增加。Morris水迷宫实验检测结果显示，灵芝孢子粉高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短，跨过原平台次数增加。说明高剂量灵芝孢子粉上调癫痫模型大鼠海马和皮质区神经细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制Bax免疫反应及癫痫所致的神经细胞凋亡，明显改善其学习记忆功能。     

Central Nervous System Complications of Diabetes in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats: A Histopathological and Immunohistochemical Examination

Diabetes mellitus is a common, potentially serious metabolic disorder. Over the long term, diabetes leads to serious consequences in a number of tissues, especially those that are insulin insensitive (retina, neurons, kidneys). It also causes a variety of functional and structural disorders in the central and peripheral nervous systems. We investigated whether neurodegenerative changes were observable in the hippocampus, cortex, and cerebellum after 4 weeks of streptozotocin (STZ)-induced diabetes in rats and the effect(s) of melatonin. Male Wistar rats (n = 32) were divided into four groups (n = 8 each): untreated controls, melatonin-treated controls, untreated diabetics, and melatonin-treated diabetics. Experimental diabetes was induced by a single dose of STZ (60 mg/kg, intraperitoneal (ip)). For 3 days before the administration of STZ, melatonin (200 μg/kg/day, ip) was injected and continued for 4 weeks. Sections of hippocampus, cortex, and cerebellum were stained with hematoxylin and eosin and examined using light microscopy. In addition, brain tissues were examined immunohistochemically for the expression of glial and neuronal markers, including glial fibrillary acidic protein (GFAP), neuron-specific enolase (NSE), and heat shock protein-70 (HSP-70). No neurodegenerative changes were observed in the hippocampus, cortex, or cerebellum of the untreated diabetic group after 4 weeks compared with the other groups. We did not observe any change in GFAP, NSE, or HSP-70 immunostaining in the brain tissues of STZ-induced diabetic rats. In summary, after 4 weeks of STZ-induced diabetes in rats, no degenerative or immunohistochemical changes were detected in the hippocampus, cortex, or cerebellum.     

Anti-apoptotic and neuroprotective effects of Tetramethylpyrazine following subarachnoid hemorrhage in rats

This study was designed to explore the effects of Tetramethylpyrazine on cerebral vasospasm and early brain injury and its underlying mechanisms after experimental SAH in rats. Male Sprague-Dawley rats (n=164) were allocated randomly to SAH+TMP, SAH+vehicle (sodium chloride), or sham-operated group. The SAH model was induced through perforating internal carotid artery. TMP (30 mg/kg) or the vehicle was injected via vena caudalis 60 min before the perforation. Mortality, neurological scores, water content of brain and cerebral vasospasm were recorded at 24 h after SAH. Apoptosis of cerebral cortex was determined by TUNEL staining; caspase-3, bax and bcl-2 by Western blotting; P53 expression by immunohistochemical staining. TMP administrated in advance improved neurological scores, ameliorated cerebral edema and cerebral vasospasm. TUNEL-positive cells were reduced significantly in TMP-treated group. P53 was not found significantly different between TMP-treated and vehicle-treated group, while P53 positive cells were markedly higher in SAH group than that in sham-operated group. Cleaved caspase-3 protein was decreased significantly in TMP-treated group, while bax, bcl-2 protein expression did not differ statistically among the three groups. In conclusion, TMP ameliorated cerebral vasospasm and early brain injury after experimental SAH in rats. The underlying mechanisms may be partly related to inhibition of caspase-3 dependent proapoptosis pathway.     

降纤酶对大鼠局灶脑缺血／再灌后caspase—3 mRNA表达和细胞凋亡的影响

目的:通过观察降纤酶对大鼠脑缺血损伤后半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达和细胞凋亡的影响,研究其对脑保护机制。方法:采用大鼠线栓法栓塞一侧大脑中动脉(MCAO)制作局灶脑缺血/再灌注模型,健康雄性Wistar大鼠144只,分为生理盐水组和降纤酶两组,用原位杂交和原位末端标记(TUNEL)方法,观察缺血0、1、3、6和24 h;缺血3 h再灌注3、6和24 h;缺血 6 h再灌注3、6和 24 h的caspase-3 mRNA的表达和 TUNEL染色阳性细胞数。结果:降纤酶保护组caspase-3 mRNA的表达和TUNEL染色阳性细胞数明显少于生理盐水组。结论:降纤酶可抑制大鼠脑缺血/再灌注后caspase-3 mRNA的表达和细胞凋亡。