糖氧剥夺诱导神经元磷酸化Rb蛋白表达特点及其与凋亡关系研究

目的观察糖氧剥夺(OGD)诱导体外培养的皮层神经元细胞内磷酸化Rb蛋白(p-Rb)的表达特点并探讨其与神经元凋亡的关系。方法将体外培养的皮层神经元随机分为对照组、OGD1 h后恢复糖氧供给(OGD/R)6 h、12 h和24 h组。应用免疫荧光细胞化学染色观察神经元p-Rb表达特点及其与TUNEL染色的关系。结果 p-Rb在OGD/R各组神经元的表达率较对照组明显增高,主要在神经元细胞浆内强表达,OGD/R6h组p-Rb与TUNEL染色共定位细胞比例开始增高,12 h达最高,与对照组比较差异明显(P<0.01)。OGD/R24 h组很少观察到两者共定位染色。结论 Rb磷酸化介导的神经元细胞周期紊乱可能是缺血缺氧诱导的神经元早期凋亡机制之一。     

CD45RB在大鼠短暂局灶性脑缺血时神经元的表达

目的探讨细胞共同抗原ＣＤ４５ＲＢ在缺血性脑损伤中作用。方法选用ＳＤ成年大鼠阻塞大脑中动脉２ｈ,再灌流０．５～４８ｈ制成短暂局灶性脑缺血,用ＣＤ４５ＲＢ对缺血性脑组织进行免疫组化染色。结果正常组及假性手术组的脑组织有散在的神经元弱表达ＣＤ４５ＳＲＢ。缺血脑组织,皮质层锥体细胞、纹状体及下丘脑区的神经元ＣＤ４５ＲＢ强阳性,其胞核形态及对苏木素着色均正常;轻度变性的神经元弱表达ＣＤ４５ＲＢ：细胞核固缩死亡的神经元ＣＤ４５ＲＢ阴性。结论本实验证实ＣＤ４５ＲＢ在缺血时形态正常的神经元呈强表达,其重要意义尚需进一步研究。     

细胞周期蛋白在局灶性脑缺血中作用机制研究的新进展

局灶性脑缺血对脑神经元损伤的机制是多种因素参与的过程，其中细胞周期相关蛋白有重要作用。研究发现在局灶性脑缺血模型中，许多细胞周期相关蛋白表达增加，且多分布在半暗带。多数学者倾向认为细胞周期相关蛋白参与细胞凋亡过程，并在此过程中起到重要的作用。例如Timsit等认为脑缺血后半暗带神经元内Cyclin D1和CDK4的表达是评估缺血神经元是否再次进入细胞周期的关键标志。本文就目前细胞周期相关蛋白在局灶性脑缺血损伤机制中的研究进展进行综述。     

局灶性脑缺血大鼠脑内Angiogenin表达水平的变化

目的　脑梗死患者存活时间与脑内血管增生程度相关。血管生长素 ( angiogenin)具有促血管生成作用。本研究旨在观察大鼠脑缺血后血管生长素在脑内表达水平的变化。方法　大鼠大脑中动脉栓塞法 ( MCAO法 )制作局灶性脑缺血模型 ,脑切片免疫组织化学染色检测血管生长素蛋白表达。结果　血管生长素在正常大鼠脑中普遍弱阳性表达 ,脑膜、室管膜及血管染色较为明显。脑缺血后 6 h缺血脑区血管生长素表达水平明显增强 ( P<0 .0 1) ,缺血 2 4 h内血管生长素表达水平逐渐升高。结论　脑缺血可诱导缺血脑区血管生长素蛋白表达增强     

大鼠局灶性脑缺血后脑内HO-2蛋白的表达

目的 :研究局灶性脑缺血时脑内血红素氧合酶 2 (HO 2 )的表达。方法 :在大鼠大脑中动脉阻塞致脑缺血的不同时间点应用免疫组化、病理学及图像分析检测HO 2的表达。结果 :正常大鼠及实验大鼠的梗死侧与非梗死侧皮质、丘脑基底节区和海马齿状回均有HO 2阳性神经元。梗死灶内无表达。梗死后各时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5) ,而图像分析显示1 2～ 2 4h时达最高峰 (P <0 0 1 )。结论 :脑缺血时脑内神经元有HO 2蛋白阳性表达 ,其对脑保护作用的机制有待进一步研究     

大鼠局灶性脑缺血再灌注早期DNA单链断裂损伤及神经元形态变化

目的探讨大鼠大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)早期DNA断裂损伤的情况及其意义.方法使用尼氏染色方法观察再灌注早期损伤区域神经元数量和形态的变化,使用DNA聚合酶-I Klenow片段原位检测DNA的断裂损伤.结果再灌注6h损伤区域部分神经元出现形态变化时,可见少量Klenow阳性细胞;再灌注24h损伤区域大量神经元出现形态变化时,Klenow阳性细胞数量陡然显著增加(P＜0.01);再灌注72h损伤区域神经元数量明显减少时,Klenow阳性细胞数量较24h时有所下降(P＜0.01).结论(1)局灶性脑缺血再灌注24h时,数量达到峰值的Klenow阳性细胞中多数应为单链DNA断裂的细胞,并推测这一损伤形式可能是由自由基引发的一系列DNA损伤过程中的一个重要环节;(2)单链DNA断裂大量产生的同时,损伤区域大量神经元出现病理形态变化,说明神经元的不可逆损伤过程在单链DNA断裂时可能就已经发生.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后LPA1的表达对神经元凋亡的影响

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后溶血磷脂酸受体1(LPA1)的表达对神经元凋亡的影响及其可能机制。方法 将24只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,每组各6只,分别为假手术组(A组)、大脑中动脉栓塞(MCAO)组(B组)、MCAO+溶剂组(C组)、MCAO+LPA1拮抗剂(Ki16425)组(D组); 4组均于手术后48 h取标本; 利用HE染色观察大鼠脑组织细胞形态的变化; 四氮唑红(TTC)染色观察大鼠脑梗死面积; 免疫荧光技术检测LPA1在大鼠皮层半暗带神经元表达水平; 免疫印迹、免疫组化技术检测大鼠脑组织中Caspase-3蛋白及p-Akt蛋白表达水平。结果 与A组比较,B组有明显的缺血再灌注损伤,表现为细胞肿胀,细胞溶解坏死,大鼠皮层半暗带神经元的LPA1表达水平较高; 与C组比较,D组大鼠脑梗死面积显著增大(P<0.05),缺血半暗带细胞肿胀更加明显,胞浆空泡区增大,细胞核固缩更加严重,细胞间隙增宽更明显; D组较C组缺血半暗带Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论 抑制大鼠局灶性脑缺血再灌后LPA1的表达可使大鼠脑梗死面积增大,细胞凋亡增加,同时p-Akt蛋白表达减少,这说明在大鼠局灶性缺血再灌注过程中LPA1对神经元具有保护作用,其机制可能是通过Akt途径来发挥保护作用的。     

局灶性脑缺血大鼠脑内NMDA受体活性变化的研究

目的 本文旨在研究局灶性脑缺血时,大鼠脑内NMDA受体的活性变化。方法 线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制成局灶性脑缺血模型。以[3H]TCP为配套,采用放射自显影观察NMDA受体的活性变化。结果 缺血1h、2h和4h组缺血侧纹状体、皮层损伤区[3H]TCP结合位点密度显著高于非缺血侧（P＜0．05）,缺血1h即达峰值（P＜01）。三组[3H]TCP结合位点密度增高区域面积均明显大于梗死区面积（I1、I2P＜0．01;I4P＜0．05）。结论 局灶性脑缺血可引发NMDA受体活性迅速持续升高。梗死区周围的半暗带内,NMDA受体处于持续激活状态。     

大鼠局灶性脑缺血水通道蛋白4的变化

目的 探讨缺血性脑水肿后水通道蛋白4(AQP4)的变化，研究脑水肿的发病机制。方法 选用Wis—tar雄性大鼠42只，体重250～300g，鼠龄3～4月，按缺血时间随机分为6h、1d、3d、5d、7d、14d及假手术组，参考Lon—ga等方法建立大鼠大脑缺血模型，应用免疫组化染色检测脑组织中AQP4的变化。结果 AQP4在缺血组织表达增强，缺血6h即增强，3d达高峰，7d恢复正常。结论 AQP4是影响缺血性脑水肿的重要因素。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 探讨缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和缺血预处理组,每组10只。使用改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型。采用Longa-Bederson（LB）评分法评估缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血后神经功能的影响,采用TTC染色方法分析大鼠海马区梗死面积,采用TUNEL染色法分析大鼠海马区细胞凋亡,使用气相色谱方法分析缺血预处理后大鼠海马区域丙酮酸含量。结果 缺血预处理组大鼠LB评分[（1.67±0.21）分}明显优于缺血组[（3.17±0.31）分;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区梗死面积[（154±8.1）mm2]明显少于缺血组[（221.20±5.86）mm2;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区域丙酮酸含量[（3.70±0.20）μmol/g]明显高于缺血组[（2.58±0.17）μmol/g;P<0.05]。结论 缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血具有显著神经保护作用,其机制可能与明显减少大鼠脑组织梗死、增加海马丙酮酸含量、减少细胞凋亡有关。     

硫酸镁在大鼠局灶脑缺血中的保护作用

目的 研究非竞争性谷氨酸受体拮抗剂－－硫酸镁在大鼠局灶脑缺血中的作用。方法 采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉区永久脑缺血模型,分别于缺血前半小时,、缺血后第１、３、６、１２小时静滴１０％硫酸镁溶液,滴速１．５ｍｌ／ｈ,通过神经功能评分、梗死体积及含水量的改变、病理学检查,探讨硫酸镁对脑缺血的保护作用及治疗时间窗。结果 缺血６小时内应用硫酸镁能改善运动功能,减轻脑水肿,缩经体积。结论 硫酸镁具有明显     

大鼠局灶性脑缺血后CPP32和P53蛋白的表达

目的　探讨大鼠脑缺血后神经元损害过程中CPP32和P5 3蛋白表达的变化。方法　建立大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO 2h)模型 ,采用免疫组化方法观察CPP32和P5 3蛋白在大鼠脑缺血后不同时间的动态变化。结果　CPP32蛋白在脑缺血再灌注 2 2h和 4 6h ,阳性表达最明显。而P5 3在脑缺血再灌注 2 2h阳性表达最明显 ,并持续至再灌注 70h。阳性表达主要位于神经元严重受损的缺血区内。结论　CPP32和P5 3蛋白表达与脑缺血后神经细胞死亡关系密切。     

首乌延寿丹对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的研究首乌延寿丹对大鼠局灶性脑缺血的保护机制。方法采用改良的线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(MCAO)。将健康成年大鼠随机分为5组:假手术组、缺血模型组、缺血前首乌延寿丹低、中、高处理组。测定丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT),并进行病理组织学检查。结果首乌延寿丹能明显提高缺血脑组织中SOD、CAT活性,降低MDA含量,减轻脑水肿,首乌延寿丹能改善脑缺血造成的大鼠脑组织损伤。结论首乌延寿丹对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用,其机制可能是通过有效的拮抗自由基损伤,提高脑组织抗氧化能力来实现的。     

头孢曲松钠对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

目的 探讨在大鼠局灶性脑缺血模型中应用头孢曲松钠对脑缺血损伤的保护作用及其相关机制.方法 制备Wistar大鼠局灶性脑缺血模型,并按随机数字表法分为单纯缺血组(MCAO组)、头孢曲松钠治疗组(MCAO+CTX组)和盐水对照组,其中MCAO+CTX组为缺血90min时给予头孢曲松钠200 mg/kg.缺血后24 h、48 h、7 d时对各组大鼠进行神经行为学评分和脑水肿程度测定,同时比较各组大鼠皮层和海马谷氨酸转运体功能的差异.结果 随着缺血时间延长,各组大鼠神经行为学评分逐渐提高;脑水肿在缺血后24 h、48 h时逐渐加重,至7 d时已逐渐消退.与MCAO组比较,各时间点MCAO+CTX组大鼠神经行为学评分明显提高,脑水肿程度明显减轻,伤侧皮层及海马谷氨酸转运体功能明显增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 头孢曲松钠对大鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用,其机制可能与增强谷氨酸转运体功能从而减轻谷氨酸神经毒性作用有关.

Abstract：

Objective To explore the neuroprotective effect of ceftriaxone on cerebral ischemia injury in rats with focal cerebral ischemia and its possible mechanism. Methods Focal cerebral ischemic models were established in Wistar rats and randomly divided into ischemic group (performed middle cerebral artery occlusion [MCAO]), ceftriaxone (CTX) therapy group (given CTX at a dosage of 200 mg/kg 90 min after MCAO) and control group (given physiological saline only). Twenty-four and 48 h, and 7 d after MCAO, neurological behaviors and cerebral edema level were evaluated in these 3 groups;glutamate transporter function in the cortex and hippocampus of rats was compared between each 2 groups. Results With time extended, neurological behaviors scores were obviously elevated in every group;and cerebral edema became worse at 24 and 48 h and decreased 7 d after MCAO. As compared with that in the ischemic group, glutamate transporter function, level of edema and neurological behaviors scores in cortex and hippocampus of rats in the CTX therapy group were statistically increased at different ischemic time points (P<0.05). Conclusion Ceftriaxone has a neuroprotective effect against focal cerebral ischemia in rats, which may relate to increased glutamate transporter function and reduced glutamate neurotoxicity.     

Effects of tetrahydrobiopterin on cerebral infarction after transient focal ischemia in rats

Abstract

Objectives: The present study investigated the effects of tetrahydrobiopterin (BH4) on cerebral infarction after transient focal ischemia in rats.

Methods: Focal ischemia (1·5 hours) was created in male Sprague-Dawley rats (250-280 g) by middle cerebral artery occlusion. Some rats were treated with 20 mg/kg tetrahydrobiopterin by intraperitoneal injection 30 minutes before reperfusion. At 2, 6, and 12 hours of reperfusion, the brains were harvested for the nitric oxide synthase (NOS) activity and nitric oxide (NO) level assays. At 12 hours of reperfusion, the brains were harvested for infarct size measurement.

Results: NOS activity and NO level were all augmented after reperfusion. BH4 treatment significantly further increased NOS activity and NO level. Cerebral infarct size was significantly bigger in BH4 treatment group compared to that in no treatment group.

Conclusions: The data indicate that BH4 enhances cerebral infarction after transient focal ischemia in rats, through NOS and NO pathway.     

栓线法大鼠局灶性脑缺血模型的研究

采用颈部旁侧手术入路，结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支后颈内动脉栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌流损伤模型。闭塞成功率９４．１％，动物偏瘫症状评分在缺血２ｈ再灌流３ｄ后趋于稳定，病理改变以尾壳核损害最重。再灌流７ｄ脑梗塞体积为９７．８±９．４ｍｍ３，动物死亡率５９．４％。缺血２ｈ后再灌流先出现过渡灌注，而后呈持续性低灌注。本文模型勿需开颅，缺血效果可靠，对局灶性脑缺血的研究具有实用价值。     

大鼠短暂局灶性大脑中动脉缺血后calpain的表达

目的：研究calpain在缺血性脑损伤中的作用，进一步探讨缺血性脑血管病的分子机制，为治疗研发提供理论依据。方法：用Belayev改良的Langa线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉(MCA)缺血／再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的形成，分别用原位杂交及免疫组化技术检测鼠脑中calpain mRNA与活性蛋白的表达。结果：缺血2h再灌注24h,TTC染色见明显的梗死灶形成，正常脑组织、假手术组及：MCAO缺血对侧脑中有少量的calpain mRNA表达，但活性蛋白几无表达；缺血脑组织calpain mRNA表达及蛋白质活化均显著增加，呈双峰式，MCA缺血2h增加，再灌注4h减少，至24h更明显增高，而48h又有所下降。结论：Calpain参与了缺血性脑损伤过程，尤其在迟发性神经元死亡中起重要作用。     

实验性局灶性脑缺血再灌流后bcl—2蛋白的表达

目的探讨ｂｃｌ－２在大鼠局灶脑缺血再灌流损伤中的表达与缺血所致凋亡的关系。方法采用免疫组化方法观察ｂｃｌ－２蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌流后皮层和基底节区动态变化。结果ｂｃｌ－２蛋白在大脑中动脉阻塞２ｈ后，随再灌流时间延长其解剖分布不同。基底节区持续时间短，而皮层区持续时间较长，其中再灌流６ｈ，ｂｃｌ－２蛋白表达最显著。结论ｂｃｌ－２蛋白表达与神经细胞存活密切相关，可能是神经细胞自我保护机制之一，防止或减少细胞凋亡的发生     

大鼠局灶性脑缺血细胞因子介导的中性粒细胞化学吸附剂的动态观察

目的;探索细胞因子介导的中性粒细胞化学吸附剂（CINC）在脑缺血损伤中的作用。方法：用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,观察不同脑缺血时程血浆（sera）和脑组织内CINC浓度与髓质过氧化物酶（MPO）活性。结果：缺血组,血浆中CINC浓度的高峰在缺血6小时,脑组织内CINC浓度和髓质过氧化物酶（MPO）活性均呈低水平,其中CINC浓度高峰在缺血12小时,与对照组比较,差异均有极显著性意义（P＜0．01）;血浆中MPO活性随着缺血时间延长而逐渐升高,缺血6小时以上各组与对照组比较差异均有极显著性意义（P＜0．01）;脑组织内各组MPO活性差异无显著性意义（P＜0．05）。结论：缺血时,脑组织内表达的CINC可能是启动缺血性脑损伤的因素之一