20008/细胞外信号调节激酶在蛛网膜下腔出血大鼠脑皮质中的动态表达及神经递质对其的调控机制

背景：细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）信号通路在介导细胞的增殖、分化及存活中发挥重要作用。新近研究发现,ERK可能通过介导细胞凋亡等,参与缺血性脑卒中等脑血管疾病的病理生理过程。但其在实验性蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage,SAH）中的作用及机制尚未阐明。 目的：观察ERK在SAH后的大鼠脑皮质中的动态表达及其与神经细胞凋亡的关系,探讨ERK在实验性SAH中的作用及神经递质对其的调控机制。 设计：随机对照动物实验研究 单位：西安交通大学医学院第一附属医院神经外科 材料：114只健康雄性SD大鼠,体重0.3-0.35(0.325±0.025)kg,由西安交通大学实验动物中心提供。ERK1/2多克隆抗体,生物素标记的二抗IgG工作液,SABC试剂盒均购自北京博奥森公司;氯化乙酰胆碱购自上海三爱思试剂有限公司;去甲肾上腺素注射液购自上海禾丰制药有限公司;DAB显色盒购自北京中山公司;TUNEL试剂盒购自美国promega公司。脑立体定位仪（Narishige）由日本制造。 方法： 实验于2008年3月至2008年12月在西安交通大学医学院实验中心进行。①采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH动物模型,114只SD大鼠随机分为SAH模型组（n=30）,对照组（n=66）,干预组（n=18）。干预组根据脑室给予的不同药物分为3个亚组,分别是：SAH＋Ach组,SAH＋NE组,SAH＋盐水对照组,每个亚组6只动物。②应用HE染色观察细胞形态学变化,免疫组化SP方法检测ERK在大鼠皮质中的动态表达, TUNEL法检测大鼠皮质神经细胞凋亡情况。③结果用SPSS13.0统计软件进行统计分析。方差齐的指标采用一般线性模型中完全随机设计资料的方差分析,并行LSD法进行组间两两比较,方差不齐的指标则用Kruskal－Wallis法行秩和检验。数据以 ±s 表示,以P﹤0.05为差异有统计学意义。ERK表达与神经细胞凋亡的相关性用双变量相关分析。 主要观察指标：大鼠脑皮质ERK表达的动态变化、神经细胞凋亡情况以及脑皮质神经组织结构形态学变化。 结果： HE染色显示SAH模型组神经组织水肿,神经细胞出现不同程度的凋亡和坏死。免疫组化分析显示,SAH后6 h ERK染色阳性细胞开始出现在皮质,12 h达高峰,此后阳性细胞逐渐减少。神经细胞凋亡在SAH 6 h时即可发生,24 h达到高峰。SAH模型组ERK阳性细胞率和细胞凋亡率较对照组均显著升高（P <0.05）。ERK表达与神经细胞凋亡之间存在显著正相关关系（r =0.742,P =0.001）。与干预组中盐水对照组ERK阳性细胞率（13.7%±2.1%）比较,乙酰胆碱（Ach）可能通过下调ERK的表达（8.1%±1.7%）,使神经细胞凋亡减少（P <0.05）。去甲肾上腺素（NE）可上调ERK的表达（18.4%±2.1%）,但与对照组比较,神经细胞凋亡无统计学意义（P >0.05）。 结论： ERK在SAH大鼠皮质中呈规律性的动态表达,并与神经细胞凋亡之间存在显著正相关关系,ERK信号通路可能通过介导神经细胞凋亡参与SAH导致的脑损伤。Ach可通过下调ERK的表达,使神经细胞凋亡减少。     

代谢型谷氨酸受体及其拮抗剂MCPG对弥漫性脑损伤大鼠的影响

目的:观察代谢型谷氨酸受体拮抗剂MCPG对弥漫性脑损伤大鼠的影响。方法:使用Marmarou的动物模型,55只动物分为对照、损伤和MCPG组。给予MCPG组立体定向脑室注射MCPG lumol/5ul。分别在伤后1、4、8、12、24小时测定脑组织含水量、递质性氨基酸(Glu、GABA)及离子Ca~(2+)、Mg~(2+)含量。结果:伤后脑组织含水量、GABA、Ca~(2+)升高,Glu、Asp及Mg~(2+)含量下降。MCPG组较损伤组各项指标均有明显的好转。结论:MCPG能有效的抑制代谢型谷氨酸受体激活导致的继发性损害。     

蛛网膜下腔出血后大鼠脑组织中ERK5的表达研究

目的研究细胞外信号调节激酶5（ERK5）在蛛网膜下腔出血（SAH）后早期脑组织中的分布和表达变化。方法成年雄性SD大鼠72只,分为对照组、SAH后6h、12h、24h、48h、72h共6组（每组12只）。通过建立大鼠SAH模型,于SAH后不同时间点,应用免疫印迹技术和免疫组化检测SAH后脑组织中ERK5的分布和表达变化。结果大鼠SAH后6h脑组织中p-ERK5蛋白水平开始升高,24h达到高峰,其后逐渐下降,72h仍高于对照组。同时,对照组中p-ERK5主要定位于胞浆,SAH后p-ERK5胞核阳性增加,24h达到高峰,其后胞核胞浆阳性都下降。结论大鼠SAH后早期伴有ERK5信号通路的激活,提示ERK5信号通路可能参与SAH后早期脑损伤中的病理生理改变。     

代谢型谷氨酸受体5对创伤性神经元损伤保护作用研究

目的研究代谢型谷氨酸受体5（mGluR5）的特异性激动剂对创伤性脑损伤后神经元的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法原代培养2W大鼠皮层神经元细胞,采用神经元机械性损伤模型,加入两种mGluR5特异性激动剂2-氯-5羟苯基甘氨酸（CHPG）和3-氰．氮苯甲酰胺（CDPPB）,通过乳酸脱氢酶（LDH）释放率、caspase-3活性检测,研究mGluR5激动剂对神经元损伤可能具有的保护作用;通过western—blot检测细胞外信号调节激酶（ERK）、c—Jun氨基末端激酶（JNK）、p38表达变化并研究这种保护作用的产生机制。结果损伤后LDH释放率和easpase-3活性显著增加,CHPG和CDPPB明显抑制了LDH的释放率和easpase-3的活性,并呈剂量依赖性;Westernblot结果提示,CHPG和CDPPB显著增加了ERK的磷酸化水平,而对JNK、p38无影响。结论mGluR5的激动剂CHPG和CDPPB对机械性神经元损伤具有保护作用,这种保护作用可能是通过激活ERK通路实现。     

亚低温对体外缺氧缺糖损伤后神经元的保护作用及其对谷氨酸转运体、亲代谢型谷氨酸受体表达的影响

目的通过研究亚低温对体外缺氧缺糖损伤的神经细胞谷氨酸转运体(GLT-1)、亲代谢型谷氨酸受体(mGluR2/3)表达的影响,探讨亚低温的神经保护途径。方法分组培养大鼠大脑皮层细胞,亚低温组在33 C条件、常温组在37 C条件,缺氧缺糖培养2h后,复氧复糖37 C培养,经时(6h、12h、24h、3d)检测LDH释放量、GLT-1和mGluR2/3蛋白表达量。结果在复氧复糖后,两组LDH释放均呈现上升趋势,其中24h和3d亚低温组的LDH上升水平显著降低(P<0.05);两组GLT-1表达均呈现先下降后上升的趋势,其中6h和12h亚低温组的GLT-1下降水平显著降低(P<0.05);两组mGluR2/3表达均呈现上升趋势,其中12h和24h亚低温组的mGluR2/3升高水平显著增加(P<0.05)。结论亚低温能够在体外水平,通过抑制GLT-1蛋白的表达下调,促进mGluR2/3的表达上调,抑制神经元兴奋性损伤。     

细胞外信号调节激酶在蛛网膜下腔出血损伤中的作用及意义

目的研究细胞外信号调节激酶(ERK)途径在蛛网膜下腔出血(SAH)脑损伤中的作用。方法ICR小鼠随机分为假手术组、模型组、U0126干预组,采用非开颅血管内穿线法制备小鼠SAH模型,给予ERK抑制剂U0126,术后行颅底检查,分别在SAH后12、24、48h 3个时相点取右侧大脑动脉标本,在光镜下观察大脑中动脉病理变化,应用免疫印迹法检测各组p-ERK1/2、caspase-8蛋白表达,TUNEL法检测大脑中动脉内皮细胞凋亡。结果随损伤时间延长,模型组小鼠p-ERK1/2、caspase-8蛋白均有不同程度增强,凋亡细胞增多。与模型组比较,U0126干预组小鼠各时相点3项指标的表达均不同程度下调。结论 ERK信号途径参与小鼠SAH病理损伤过程,并在神经细胞凋亡进程中发挥关键作用。     

氟伐他汀对SAH患者sICAM-1、hs-CRP的影响研究

目的研究氟伐他汀对蛛网膜下腔出血(SAH)患者血清细胞间黏附分子-1(s ICAM-1)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)的浓度变化的影响。方法 60例临床确诊的SAH患者随机分为氟伐他汀组和对照组,氟伐他汀组在常规治疗基础上加用氟伐他汀40 mg,每晚一次口服;对照组仅给予同样的常规治疗。于起病24 h、第3天、第7天、第14天分别检测两组患者s ICAM-1、hs-CRP的含量。两组以SAH病程第14天末或者死亡为本研究终点。采用SPSS 15.0统计软件进行统计学分析,数据以均数±标准差表示,组间比较进行卡方或秩和检验,以P0.05作为差异显著性指标。结果氟伐他汀组患者s ICAM-1水平呈逐渐降低趋势,而对照组第3天、第7天的s ICAM-1水平均呈较前次升高,直至第14天出现降低。氟伐他汀组第3天、第7天、第14天测得的s ICAM-1水平均显著低于对照组(P0.05)。氟伐他汀组血清hs-CRP水平呈逐渐降低趋势,第7天和第14天测得的血清hs-CRP水平均显著低于对照组患者(P0.05)。结论氟伐他汀能有效降低SAH患者血清ICAM-1和hs-CRP的含量水平。     

巴曲酶对大鼠SAH后迟发性脑血管痉挛细胞凋亡的影响

目的　探讨巴曲酶防治蛛网膜下腔出血 (SAH)迟发性脑血管痉挛 (DCVS)及细胞凋亡的作用。方法　“枕大池二次注血法”建立大鼠SAH DCVS动物模型 ,采用TUNEL法和流式细胞仪动态观察巴曲酶对大鼠SAH DCVS的血管内皮细胞、平滑肌细胞及神经细胞凋亡的影响。结果　TUNEL检测发现巴曲酶组在SAH后 3d、7d血管内皮细胞、平滑肌细胞及神经细胞凋亡数均明显低于同期单纯注血组 ;流式细胞仪检测亦发现巴曲酶组凋亡率明显降低 ,与相对应单纯注血组比较均有明显差异 (P <0 .0 0 1)。结论　巴曲酶可以抑制SAH后的细胞凋亡 ;防治SAH DCVS及其所致的迟发性脑缺血、迟发性神经元损伤。     

头孢曲松钠对大鼠蛛网膜下腔出血后认知功能的影响

目的 探讨头孢曲松钠（CEF）对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后的认知功能的影响及其机制。方法 将68只成年SD大鼠随机分为4组:正常组（n=12）、对照组（n=24）、CEF低剂量治疗组（n=8）和CEF高剂量治疗组（n=24）。采用枕大池双次注血方法建立大鼠SAH模型。SAH后3 h经小脑延髓池缓慢注射100 μl CEF（高剂量组浓度为100 μmol/L,低剂量组浓度为50 μmol/L）,对照治疗组注射等体积生理盐水。采用Morris水迷宫检测各组动物学习记忆能力;Western blot检测各组大鼠海马 Caspase-3和兴奋性氨基酸转运体2（EAAT2）的表达水平。结果 与对照组相比,CEF治疗组SAH后动物的水迷宫实验中的逃逸时间显著减少（P<0.05）,大鼠海马组织中EAAT2的表达增加（P<0.05）,Caspase-3的表达减少（P<0.05）。结论 CEF对SAH后具有显著的神经保护作用,CEF治疗可能通过上调星形胶质细胞EAAT2的表达逆转SAH诱导的神经损伤。     

代谢型谷氨酸受体亚型1基因在锂—匹罗卡品致痫大鼠齿状回中的长期高表达

目的:观察锂-匹罗卡品诱导的癫痫大鼠模型海马结构中代谢型谷氨酸受体亚型1(mGluRl)mRNA的动态表达变化。方法:用地高辛标记的多相寡核苷酸探针通过原位杂交方法检测海马各个区域在7d、14d和28d时mGluRlmRNA的表达。结果:在上述3个时间点齿状回mGluRlmRNA的表达明显上调,而在海马CA1区仅7d时可见mGluRl mRNA的相对上调,其余时间点无明显变化。结论:本研究提示锂-匹罗卡品癫痫模型齿状回mGluRl mRNA表达长期上调可能与海马结构的重塑和癫痫易感性形成有关。     

弥漫性脑损伤大鼠丘脑网状核代谢性谷氨酸受体变化及意义

目的 研究大鼠弥漫性脑损伤(DBI)时丘脑网状核(TRN)中代谢性谷氨酸受体la(mGluRla)的表达水平变化及其意义.方法 雄性SD大鼠45只按随机数字表法分为正常组(不处理)、假手术组(仅固定并切开头皮处理)与DBI组(固定,重物打击颅脑处理),每组又按不同处死时间(造模后6、12和24h)分为3个亚组,每亚组5只.光镜观察脑组织病理变化,并采用免疫组化等方法检测TRN区mGluRla表达变化情况.结果 与正常组和假手术组比较.DBI组的mGluRla表达水平随时间延长而增高,12h时显著上调.24h时略有恢复,但表达水平仍很高,与其余两组比较.差异有统计学意义(P=0.000).结论 大鼠DBI后mGluRla表达水平显著增高,推测其为加重神经元损伤的主导因素.     

尼莫地平减轻蛛网膜下腔出血后脑损伤

目的 探讨尼莫地平对蛛网膜下腔出血(SAH)后脑损伤的防治作用。方法 用血管内穿刺法制作大鼠SAH模型。对SAH组和尼莫地平处理组观察24h内局部脑血流量(rCBF)和脑组织水、电解质含量的动态变化。结果 SAH后rCBF迅速降低，1h达最低值，24h内持续于低水平状态。SAH后6h、24h脑组织含水率和Na^ 含量明显增加，K^ 含量减低；脑组织Ca^2 含量在SAH后1h开始显著增加。尼莫地平对上述的指标均有改善作用。结论 尼莫地平可减轻实验性SAH后脑损伤。     

甲基强的松龙对兔实验性脑血管痉挛的作用

目的探讨大剂量甲基强的松龙对蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)的作用。方法将24只雄性新西兰白兔随机分成2组:SAH对照组和SAH 大剂量甲基强的松龙(MP,18mg/kg)治疗组。通过枕大池二次注血法构建SAH模型,观察MP对脑基底动脉的影响。应用酶联免疫生化技术检测各组兔基底动脉血管平滑肌细胞膜蛋白激酶C(PKC)活性。结果经脑血管造影证实该剂量甲基强的松龙明显减轻实验性脑血管痉挛的严重程度,与对照组相比,PKC活性在大剂量甲基强的松龙治疗组没有明显提高。结论大剂量甲基强的松龙能够明显减轻脑血管痉挛程度,通过抑制血管平滑肌细胞来防治脑血管痉挛的发生发展。     

Effect of metabotropic glutamate receptor activation on receptor-mediated cyclic AMP responses in primary cultures of rat striatal neurones

Co-activation of group I metabotropic glutamate (mGlu) receptors and adenosine receptors resulted in an augmented cyclic AMP response in primary cultures of rat striatal neurones. -glutamate and the selective group I agonist, (S)-dihydroxyphenylglycine (S-DHPG) evoked concentration-dependent potentiations of cyclic AMP accumulation stimulated by the adenosine receptor agonist, 5′-N-ethylcarboxamidoadenosine (NECA), with EC₅₀ values of 3.41±0.39 and 5.69±1.64 μM, respectively, and maximal augmentations of approximately 350% at concentrations of 100 μM. The S-DHPG potentiation was inhibited by group I mGlu receptor antagonists and a protein kinase C inhibitor, Ro 31-8220, implicating products of PI hydrolysis in this effect. Furthermore, -glutamate and S-DHPG stimulated PI hydrolysis in striatal neuronal cultures with similar EC₅₀ values to those observed for the augmentation of NECA cyclic AMP responses (5.19±1.18 and 3.78±1.42 μM, respectively). In situ hybridization and immunofluorescence techniques indicate that group I mGlu receptor-evoked potentiations are likely to be mediated via mGlu₅ receptors, which are expressed at high levels in these cultures. In contrast to cross-chopped slices of neonatal rat striatum, of equivalent age, the group II mGlu receptor agonist, (2S,2′R,3′R)-2-(2′,3′-dicarboxycyclopropyl)glycine (DCG-IV) was without effect on NECA- or forskolin-stimulated cyclic AMP responses in primary striatal neuronal cultures. This lack of effect might be due to a low level of expression of group II mGlu receptors in cultured striatal neurones.     

甲基强的松龙对兔实验性脑血管痉挛的作用

目的探讨大剂量甲基强的松龙对蛛网膜下腔出血（SAH）后脑血管痉挛（CVS）的作用。方法将24只雄性新西兰白兔随机分成2组：SAH对照组和SAH＋大剂量甲基强的松龙（MP，18mg／kg）治疗组。通过枕大池二次注血法构建SAH模型，观察MP对脑基底动脉的影响。应用酶联免疫生化技术检测各组兔基底动脉血管平滑肌细胞膜蛋白激酶C（PKC）活性。结果经脑血管造影证实该剂量甲基强的松龙明显减轻实验性脑血管痉挛的严重程度，与对照组相比，PKC活性在大剂量甲基强的松龙治疗组没有明显提高。结论大剂量甲基强的松龙能够明显减轻脑血管痉挛程度，通过抑制血管平滑肌细胞来防治脑血管痉挛的发生发展。     

大鼠蛛网膜下腔出血后细胞外调节蛋白激酶1/2激活介导海马区神经细胞自噬

目的探讨大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后海马区细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)激活与神经细胞自噬的关系。方法 120只雄性SD大鼠随机分成假手术组、SAH组、ERK1/2抑制剂U0126组、自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)组。采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型;U0126组和Rap组分别于造模前30min侧脑室注射U0126(5μg/μL)和Rap(10nmol/μL)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、ERK1/2 mRNA和自噬标志蛋白(Beclin-1和Beclin-1mRNA、LC3-Ⅱ和LC3mRNA)表达水平。结果与假手术组比较,SAH组神经细胞死亡率增加(14.9%±5.7%,28.3%±9.8%,44.2%±10.9%)(q值依次为27.56、35.65、44.81;均P0.05),ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA水平增加(1.83±0.01,2.82±0.06,1.34±0.04;1.46±0.02,1.76±0.02,1.35±0.02;1.52±0.04,1.89±0.01,1.31±0.04)(q值依次为42.99、60.66、48.08,71.26、72.46、49.50,48.49、82.40、41.18;均P0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平增加(均P0.05);与SAH组比较,U0126组神经细胞死亡率增加(19.6±6.5%,36.2±7.7%,58.2±12.7%)(q值依次为9.59、10.43、14.66;均P0.05),U0126组ERK1/2 mRNA、Beclin-1 mRNA和LC3 mRNA表达降低(1.23±0.02,1.40±0.02,1.12±0.02;1.22±0.04,1.48±0.06,1.24±0.03;1.34±0.04,1.33±0.02,1.14±0.04)(q值依次为75.66、65.35、31.11,37.18、26.70、15.56,16.79、51.85、22.58;P0.05),p-ERK1/2、Beclin-1和LC3–Ⅱ蛋白水平降低(P0.05);与SAH组比较,Rap组神经细胞死亡率降低(9.1%±4.6%,18.8%±8.6%,28.21%±9.2%)(q值依次为11.86、12.54、16.74;均P0.05),Rap组Beclin-1mRNA和LC3mRNA增加(1.78±0.02,2.27±0.05,1.86±0.04;1.97±0.06,2.31±0.08,1.85±0.00)(q值依次为49.57、48.63、72.12、41.96、38.88、71.73;P0.05),Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白增加(P0.05),ERK1/2 mRNA变化差异无统计学意义(q值依次为2.63、2.65、2.83,P0.05),p-ERK1/2蛋白变化差异无统计学意义(P0.05)。结论 SAH后激活的ERK1/2激活,可促进Beclin-1和LC3-Ⅱ表达介导神经细胞丢失。     

Interleukin-1 beta down-regulates the expression of metabotropic glutamate receptor 5 in cultured human astrocytes

Expression of metabotropic glutamate receptor 5 (mGluR5) protein is known to be plastic and to depend critically on the astrocytes' microenvironment. In the present study we investigated whether interleukins, which are involved in the immune response following brain injury, could contribute to the regulation of mGluR5 protein in human astrocytes in culture. Using Western blotting and immunocytochemistry, no detectable changes in the expression of the mGluR5 protein were observed with both interleukin 1β and interleukin 6 in undifferentiated cultures (growing in serum free media). In contrast, in cultures that had been morphologically differentiated by exposure to epidermal growth factor (EGF), addition of interleukin 1β (but not interleukin 6) reduced mGluR5 protein expression. In addition, stimulation of phosphoinositide hydrolysis by the selective group I agonist (S)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG) was reduced after exposure to interleukin 1β. The suppressive effect on mGluR5 was prevented by the interleukin 1 receptor antagonist. Thus, interleukin 1β may represent an additional pathway through which mGluR5 expression and function can be modulated in astrocytes under different pathological conditions associated with an inflammatory response.     

银杏黄酮减轻大鼠蛛网膜下腔出血后脑水肿和神经元损伤

目的探讨银杏黄酮对大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后脑水肿、海马神经元超微结构及凋亡基因Fas配体（FasL）表达的影响。方法 成年雄性Wistar大鼠80只随机分为5组：正常对照组、SAH组、SAH＋生理盐水组、SAH＋50mg/kg银杏黄酮组（Gf50组）、SAH＋200mg/kg银杏黄酮组（Gf200组）。采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立大鼠SAH模型。于SAH模型建立后,24h和72h测定脑组织含水率;72h后用透射电镜观察神经元超微结构;免疫荧光法检测FasL蛋白的表达。结果 SAH组脑组织含水率较正常对照组增加。与SAH组比较,脑组织含水率在银杏内酯不同剂量组均明显降低,其中200mg/kg银杏黄酮组脑组织含水率降低最为显著（P〈0.01）。与正常对照组比较,其余4组大鼠神经元超微结构均有不同程度的损伤,其中SAH组损伤最为严重。SAH组FasL蛋白的表达较正常对照组增多（P〈0.01）,两个银杏黄酮剂量组较SAH有不同程度减少（P〈0.05）。结论 银杏黄酮可降低SAH大鼠的脑组织含水率,对海马神经元具有保护作用。银杏黄酮可抑制SAH后大鼠FasL表达水平增高,高剂量组效果更明显。     

芍药苷对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠NLRP3炎性小体表达的影响

目的 探究芍药苷(Paeoniflorin,PAE)对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)早期脑损伤大鼠NLR家族Pyrin域蛋白3(NLR family Pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性小体表达的影响。方法 将60只大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组、芍药苷高剂量(PAE-H)组; Sham组不刺破血管,其余各组采用血管内穿孔法构建SAH大鼠模型; PAE-L组、PAE-H组腹腔注射对应剂量的芍药苷(10、20 mg/kg),Sham组、SAH组腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液,2次/d,共3 d; 采用Garcia评分法评估大鼠神经功能; SAH评分法评估蛛网膜下腔出血情况; 脑组织含水量测定评估脑水肿; 伊文思蓝(Evans blue,EB)染色评估血脑屏障通透性; 苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠脑组织病理损伤; TdT介导的dUTP末端标记法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色检测神经元凋亡; 免疫荧光染色检测NLRP3、离子钙结合衔接分子-1(Ionized calcium binding adapter molecule-1,Iba-1)和髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)表达水平; 免疫组化染色检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Cysteinyl aspartate-specific proteinase,Caspase-1)表达水平; Western Blot检测B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X的蛋白质(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、Caspase-3,NLRP3,ASC,Caspase-1、白介素-1β(Interleukin-1 β,IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Iba-1和MPO表达水平。采用氧化血红蛋白(Oxygenated hemoglobin,OxyHb)构建原代皮层神经元体外SAH模型,并将其分为对照(Control)组、模型(OxyHb)组、芍药苷低剂量(PAE-L)组和芍药苷高剂量(PAE-H)组; Control组正常培养,OxyHb组、PAE-L组、PAE-H组神经元在含20 uM OxyHb的神经元培养基中培养,PAE-L组、PAE-H组分别加入对应剂量的芍药苷(10、20 uM); 各组神经元孵育48 h; 采用细胞计数试剂盒8(Cell counting kit 8,CCK8)法和TUNEL染色检测神经元活性及凋亡; Western Blot检测Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达水平。结果 动物模型显示,Sham组大鼠脑组织未见积血,脑组织细胞结构清晰可辨; 与Sham组比较,SAH组脑组织可见大量积血,脑组织细胞排列松散,Garcia评分降低(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量升高(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数增加(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平升高(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数增加(P<0.05); 与SAH组比较,PAE-L组、PAE-H组脑组织积血减少,脑组织细胞状态趋于正常,Garcia评分升高(P<0.05),SAH评分、脑含水量、EB渗出量降低(P<0.05),神经元TUNEL阳性细胞数减少(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3,NLRP3,ASC,Caspase-1,IL-1β,IL-18,TNF-α表达水平降低(P<0.05),Iba-1和MPO阳性细胞数减少(P<0.05)。细胞模型显示,Control组神经元形态正常; 与Control组比较,OxyHb组神经元肿胀,突触丧失,神经元活性降低,凋亡率增高(P<0.05),Bcl-2表达水平降低,Bax,Caspase 3表达水平升高(P<0.05); 与OxyHb组比较,PAE-L组、PAE-H组细胞损伤减轻,神经元活性升高,凋亡率降低(P<0.05),Bcl-2表达水平升高,Bax,Caspase 3表达水平降低(P<0.05)。结论 芍药苷能够减轻SAH后大鼠脑水肿、细胞凋亡和神经损伤,其机制可能为通过抑制NLRP3炎性小体的激活,并抑制小胶质细胞和中性粒细胞浸润,改善SAH后早期脑损伤。