卡氏肺孢子虫与肺孢子虫肺炎研究进展

卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)是一种机会性致病的病原体,可引起免疫抑制个体发生肺孢子虫肺炎。严重者导致患者死亡。以前认为肺孢子虫是原虫类,现代分子生物方法基因分析阐明卡氏肺孢子虫应归属于真菌界。目前。引起人体肺炎的肺孢子虫被重新命名为耶氏肺孢子虫(Pneumoeystis     

卡氏肺孢子虫肺炎动物模型的建立及其检测

目的 为开展人卡氏肺孢子虫的病原学形态观察、免疫化学、分子生物学特性以及药物治疗的研究建立卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型。方法 给ＳＤ大鼠腹腕治皮下注射醋酸可的松,６～１２周后,收集支气管肺泡灌洗液和制作肺组织印片,组化染色、镜下观察。结果 实验大鼠的肺印片肺孢子虫病原学染色阳性率９６％（２４／２５）,在２４只肺孢子虫病原学染色检查阳性的大鼠ＢＡＬｓ沉淀涂片阳笥。本次诱导实验包裹检出时间最早的为用药４０     

耶氏肺孢子虫基因突变及其与耐药性的关系

耶氏肺孢子虫是导致免疫抑制宿主尤其是艾滋病患者机会性肺部感染(即肺孢子虫肺炎,PCP)的一种真菌.虽然磺胺类药物和氨苯砜的预防性应用已经明显降低了艾滋病患者PCP的发病率,但是与这些药物相关的抗药性的产生越来越引人关注.二氢蝶酸合成酶(DHPS)和二氢叶酸还原酶(DHFR)是磺胺类药物和氨苯砜作用的位点,现已发现这些相关基因的特殊位点会发生突变.此文对是否由于广泛的预防性用药导致了耶氏肺孢子虫的DHPS和DHFR基因突变、感染突变株患者的预后、DHPS和DHFR基因突变与对甲氧苄啶-磺胺甲基异(哑)唑或氨苯砜加甲氧苄啶或乙胺嘧啶耐药的关系进行综述.     

艾滋病患者卡氏肺孢子虫肺炎的影像学研究

2005年中国现有HIV感染者预计约65万，检测发现的HIV感染者为14．1万人，与估计的感染者相差约51万人。在美国约半数以上的HIV感染者是先诊断卡氏肺孢子虫肺炎（pneumocystis carinii pneumonia，PCP）后才发现艾滋病病毒感染的。PCP的临床诊断十分困难，其主要原因是：虽然患者临床症状明显，但肺部体征较少；患者常常无痰，卡氏肺孢子虫的检出率较低，因无可靠的方法在体外长期培养卡氏肺孢子虫，因此对其生活周期了解较少。为此，作者收集21例PCP患者的临床及影像学资料，现报道如下。     

大鼠卡氏肺孢子虫肺炎黄芩苷治疗效果评价

目的 研究黄芩苷治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)的疗效。方法 以每周2次连续6周皮下注射地塞米松3.5mg/只,建立清洁级SD大鼠PCP动物模型,用黄芩苷100,200和400mg/kg灌胃,连续2周治疗实验大鼠,同时设复方新诺明治疗对照组、PCP模型对照组和正常对照组;通过各组大鼠肺重、肺重/体重比、包囊计数和肺组织病理学变化等指标评价疗效。结果 黄芩苷低(100mg/kg)、中(200mg/kg)、高(400mg/kg)剂量组大鼠肺重分别为(2.26±0.14),(1.79±0.11),(1.57±0.14)g,低于PCP模型对照组的(2.70±0.15)g(P<0.01);肺重/体重比分别为(1.32±0.22)%,(1.04±0.13)%,(0.59±0.11)%,低于PCP模型对照组的(1.98±0.18)%(P<0.01);包囊均数分别为(42.86±5.01),(41.86±6.64),(30.29±4.72),低于PCP模型对照组的(56.29±5.82)(P<0.01);肺组织炎症明显减轻,黄芩苷高剂量组与复方新诺明治疗对照组效果接近。结论 黄芩苷对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎有明显的治疗作用,治疗效果接近复方新诺明。     

艾滋病继发卡氏肺孢子虫肺炎34例临床分析

目的探讨艾滋病病人继发卡氏肺孢子肺炎(PCP)的诊断治疗及PCP的发生与CD4+T细胞水平之间的关系。方法对2004年4月-2007年2月诊断的34例PCP进行全面分析。结果患者中有发热、咳嗽、有呼吸困难、间断性咳嗽少痰症状的比例分别为100.00%、76.50%、85.30%、66.50%;血氧饱和度52.00%~86.00%;胸片呈间质样改变;乳酸脱氢酶(LDH)升高;CD4+T细胞极度减少(平均27/mm3);复方新诺明(SMZco)治疗反应良好且安全。结论34例艾滋病病人发生PCP时细胞免疫功能极度低下;艾滋病继发PCP的特异性诊断是病原体检查,但是典型的临床表现、胸片影像网状改变、血氧饱和度降低、LDH升高及SMZco治疗有效也可以明确诊断PCP。     

肝脏移植术后卡氏肺孢子虫肺炎的诊治

目的探讨肝移植术后合并卡氏肺孢子虫肺炎的诊治. 方法总结对肝移植术后并发卡氏肺孢子虫肺炎的成功诊治经验. 结果 63例原位肝移植病例中,1例于肝移植术后94d发生卡氏肺孢子虫肺炎,临床症状为发热、呼吸困难,影像学显示双肺弥漫性间质浸润改变,血气分析提示Ⅰ型呼吸衰竭;临床诊断"卡氏肺孢子虫肺炎",给予激素和超大剂量的复方新诺明后治愈出院. 结论卡氏肺孢子虫肺炎是肝移植术后少见、严重的机会性感染,应及时诊治;常规小剂量复方新诺明预防性治疗可以有效预防肝移植术后卡氏肺孢子虫肺炎的发生.     

香菇多糖对卡氏肺孢子虫肺炎预防作用的实验研究

目的：寻找一种可用于卡氏肺孢子虫肺炎预防的新的和较理想的药物。方法：用香菇多糖预防作为动物模型的大鼠产生卡氏肺孢子的虫肺炎，并用SMZCO作为预防对照。结果：（1）香菇多糖对实验大鼠的卡氏肺孢子虫肺炎有一定的预防和保护作用；（2）香菇多糖可能引起卡氏肺孢子虫包裹形状的变化。结论：香菇多糖对卡氏肺孢子虫肺炎的预防作用及其对虫体形态的影响值得进一步研究。     

聚合酶链反应应用于肺孢子虫基因诊断的研究进展

卡氏肺孢子虫（Pheumocystis carinii,Pc）是Chagas等（1909）首先在豚鼠肺组织内发现,所感染的动物和人可发生卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）。该病呈世界性分布,美洲、亚洲、大洋洲及非洲许多国家,如德国、澳大利亚、法国和美国等均有报道。卡氏肺孢子虫肺炎主要发生于营养不良、体质虚弱的婴幼儿、艾滋病患者、白血病和恶性肿瘤患者以及器官移植患者。     

卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型的建立

目的采用SD大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis Carinii pneumonia,PCP)动物模型。方法 20只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组皮下注射地塞米松2.5 mg/只,每周2次,对照组不给药。8周后,分别取肺组织,印片,Giemsa染色检查卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。酚氯仿法提取大鼠肺组织DNA,LAMP法扩增卡氏肺孢子虫DNA。结果诱导后24 d大鼠出现死亡,28 d检获PC,32 d感染阳性率为86%(13/15);LAMP扩增出卡氏肺孢子虫特异DNA。结论成功诱导SD大鼠的PCP模型。     

卡氏肺孢子虫病鼠发病与氧自由基的关系

目的探讨卡氏肺孢子虫感染大鼠后氧自由基产生组织氧化损害与发病之间的关系。方法观察大鼠感染卡氏肺孢子虫后，肺、脑组织感染虫数、病理以及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)3项指标的变化。结果病鼠肺组织印片中有大量原虫，镜下见肺泡壁充血和炎性细胞浸润。肺泡腔内有大量炎性渗出液．一些病灶呈实变。肺组织和脑组织中MDA和XOD升高。而GSH下降。结论卡氏肺孢子虫病鼠发病除与虫体本身所致肺组织的炎性损伤外，还可能与该虫体在宿主组织内引发多种氧化酶类产生严重的氧自由基损害有关。     

AIDS患者合并感染耶氏肺孢子虫的巢式PCR检测及ITS基因的克隆测序

目的 探讨ITS巢式PCR检测AIDS患者合并耶氏肺孢子虫感染的应用价值并对ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因进行克隆测序.方法 收集AIDS患者痰液标本,用二硫苏糖醇(DTT)消化处理后进行六亚甲基四胺银(CMS)染色镜检;提取肺孢子虫DNA后进行巢式PCR扩增,选取GMS染色和PCR同时阳性的112号和仅PCR阳性的185、200号病例的PCR产物进行TA克隆、测序,然后用Blastn程序和DNANAN软件对所测序列进行同源性比较和序列间比对,并和GenBank登录的耶氏肺孢子虫ITS1-5.KS rDNA-ITS2序列进行比较分析.结果 用ITS巢式PCR法检测AIDS患者99例,耶氏肺孢子虫DNA阳性43例,阳性率为43.4%(43/99),用GMS染色法检测,阳性率为4.04%(4/99),两者比较,有非常显著性差异(P<0.01).TA克隆112、185、200号病例的耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因序列长度分别为523bp、515bp、51lbp,三者之间的基因同源性为95%～97%,与GenBank登录的耶氏肺孢子虫(U07220)、(U07221)、(U07222)和(U07226)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2基因的同源性为95%～98%,其变异位点多在ITS1和ITS2基因片段.结论 ITS巢式PCR法检测耶氏肺孢子虫敏感性明显高于GMS染色法.ITS巢式PCR法可作为肺孢子虫肺炎早期诊断方法,尤其适用无创性标本的检测,CMS染色法对无创性标本痰液的检测敏感性低,在临床上意义不大;成功获取广西株耶氏肺孢子虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的基因序列,与GenBank登录的外国株耶氏肺孢子虫基因序列高度同源,其中5.8S rDNA高度保守,ITS1和ITS2基因变异较大.     

艾滋病合并卡氏肺孢子虫肺炎161例临床病例分析

目的 探讨艾滋病合并卡氏肺孢子虫肺炎的临床特点、诊断和治疗.方法 对2008年5月～2011年8月间经重庆市公共卫生医疗救治中心诊治的161例AIDS合并PCP患者的临床资料进行分析.结果 发热、咳嗽、进行性呼吸困难是最常见的临床症状,CD4+T淋巴细胞数为:2～199/μl,其中110例患者CD4+T淋巴细胞小于50/μl;典型影像表现是肺部磨玻璃影;161例PCP患者经过复方磺胺甲基异噁唑治疗,重症患者联合糖皮质激素治疗,对合并其他机会感染予以相应治疗,其中127例患者于治疗21 d后,症状不同程度的改善,15例未愈自动出院,19例死亡.结论 PCP是AIDS常见的机会性感染之一,其发病率高,常合并多种病原菌感染,早期诊断和治疗困难,及时抗PCP及行相应对症支持治疗能缩短病程,改善预后.     

卡氏肺孢子虫kexin蛋白抗原表位预测

[目的]预测卡氏肺孢子虫kexin蛋白的抗原表位。[方法]应用互联网服务器及相关生物软件预测卡氏肺孢子虫kexin蛋白抗原表位,进行生物信息学分析。[结果]kexin蛋白存在多个潜在的抗原表位,其中T细胞表位按积分位于第367～381,38～52,128～156,351～388,426～440位氨基酸等区域,B细胞表位位于第133～215,300～442及660～733位氨基酸区域。[结论]kexin抗原表位可能主要位于第38～215及300～442氨基酸序列区域内或其附近,抗原表位的预测可以有目的地克隆kexin重组基因片段,为研究高效卡氏肺孢子虫疫苗奠定基础。     

卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒构建与表达

[目的]构建大鼠源卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒,进行表达。[方法]以卡氏肺孢子虫DNA为模板,应用PCR扩增MSG基因片段,连接至pGEM-T Easy载体,再克隆至PCDNA3.1( )载体。构建的重组表达质粒经酶切、PCR鉴定后转染至COS-7细胞,并进行大量增殖。RT-PCR验证转染基因的表达。[结果]重组表达质粒PCDNA3.1( )/MSG经酶切及PCR鉴定结果表明构建成功。RT-PCR结果显示MSG基因片段成功转染至COS-7细胞,并在其中进行基因表达。[结论]成功构建了PCDNA3.1( )/MSG重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究打下基础。     

黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠SOD和MDA影响

目的 研究黄芩苷对卡氏肺孢子虫肺炎(PCP)大鼠血清和肺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MOA)含世的影响,探讨中药黄芩苷对PCP大鼠的抗氧化作用.方法 给SD大鼠皮下注射地塞米松磷酸钠建立PCP动物模型,观察黄芩苷对PCP模型建立前后肺组织病理及血清和肺组织中SOD活性和MDA含量的影响,研究中药黄芩苷对PCP大鼠的抗氧化作用.结果 黄芩苷可使大鼠肺组织炎症明显减轻,血清和肺组织中SOD活性高剂量组分别为(1075.69±9.91)和(1235.73±202.52)U/ml,显著高于模型组的(664.14±245.76),(290.20±39.68)U/ml;MDA含量分别为(1.67±0.57),(1.73±0.35)nmol/(mg prot)显著低于模型的(8.46±0.78)和(28.00±7.43)nmol/(mg prot).结论 黄芩苷对PCP大鼠具有一定的抗氧化作用,能够降低MDA含量和升高SOD活性,减轻炎症反应.     

卡氏肺孢子虫p55基因片段DNA疫苗的免疫原性研究

[目的]构建卡氏肺孢子虫抗原p55基因片段DNA疫苗,并研究该疫苗的体外表达及在小鼠体内的免疫原性.[方法]构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,用免疫印渍技术检测目的蛋白的免疫原性.将雌性BALB/c小鼠分为3组,以肌肉注射方式分别注射重组表达质粒pcDNA3.1(+)-582(免疫组)、pcDNA3.1(+)及PBS(对照组).ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平,MTT法检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖能力.[结果]成功构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,免疫印渍技术证实目的蛋白与免疫后的小鼠阳性血清能发生特异性反应;ELISA结果显示免疫后pcDNA3.1(+)-582组小鼠抗体水平呈增高的趋势,pcDNA3.1(+)-582组小鼠淋巴细胞的增殖指数明显高于pcDNA3.1(+)组及PBS组.免疫组与对照组相比较差异显著,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]卡氏肺孢子虫抗原p55基因片段DNA疫苗构建成功,免疫小鼠后能诱导产生一定的体液免疫和细胞免疫.     

鸦胆子与补骨脂对大鼠肺孢子虫肺炎防治作用

目的探讨鸦胆子与补骨脂对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的防治作用.方法建立卡氏肺孢子虫肺炎大鼠动物模型,用中药鸦胆子与补骨脂合剂治疗患病大鼠,通过病原检测、病理学观察及血清中检测肿瘤坏死因子（TNF-α）指标的变化,探讨其防治作用.结果鸦胆子和补骨脂合剂治疗组大鼠虫体数目明显减少或消失;病变的肺组织炎症减轻或修复;血清中TNF-α指标值较阳性对照组患病大鼠升高.结论鸦胆子和补骨脂对大鼠卡氏肺孢子虫性肺炎具有较好的防治效果.     

徐州市小肠结肠耶氏菌的病原性实验研究

目的：研究徐州地区从腹泻病人、家养动物中分离的16株、5种血清型的小肠结肠耶氏菌的病原性。方法：用生化生物分型，自凝性（AA）试验、钙依赖性（CD）试验，PCR检测毒力基因来检验不同菌株的致病性。用ATB Expression自动鉴定系统对致病菌株做药敏试验。结果：仅2株狗源性菌与1株人源性菌为致病菌，他们均为生物3型／血清型O：3，二者耐药模型完全一致。结论：徐州地区，小肠结肠耶氏菌生物3型／血清型O：3是致病菌型，他在狗和人群之间分布关系密切，其他型别菌株可能不致病或潜在致病。