谷胱甘肽-S-转移酶多克隆抗体免疫金测定法检测日本血吸虫循环抗原的研究

目的探讨谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊ２６ＧＳＴ）多克隆抗体诊断日本血吸虫病的应用价值。方法以抗ｒＳｊ２６ＧＳＴ多克隆抗体力捕获并检测抗体，建立双抗体夹心斑点免疫金测定技术，用于检测日本血吸虫循环抗原，并以斑点免疫金测定法和ＥＬＩＳＡ检测抗体作对照。结果３种方法检测急性血吸虫病的敏感性均为１００％；对慢性血吸虫病的敏感性分别为７６．４％、９８．１％和９６．２％；特异性分别为９５．０％、９８．０％和９６．０％。结论ｒＳｊ２６ＧＳＴ抗原对日本血吸虫病具有诊断价值，可望有较好的应用前景。     

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测？…

目的 探索一种简捷的检查血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）的多克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ），并以Ｓ－ＥＬＩＳＡ作对比。结果 用Ｓ－ＤＩＧＦＡ和Ｓ－ＥＬＩＳＡ平行检测９５例慢性血吸虫病患者，阳性检出率分别为８１．０５％和８２．１１％；正常人血清１８０份，两者的假阳性率分别     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（ｒＳｊＣＴＰＩ）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫ｒＳｊＣＴＰＩ表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的多克隆抗体（ＩｇＧ）为捕捉系统,以酶标的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ比较。结果获得了一株抗ｒＳｊＣＴＰＩ的单克隆抗体,其抗体同型为ＩｇＧ１。Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ检浊急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为１００％、９１．７％、０、０和０。而ＳＥＡ－ＥＬＴＳＡ为１００％、９８．３％、６．     

IL—12对血吸虫重组SjGST—Sj32蛋白保护性免疫效果的影响

为进一步提高重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）的免疫保护作用,用ＩＬ－１２作为佐剂进行免疫增强效果的观察。在０、２、６周用ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２经皮下免疫小鼠３次,攻击感染后１、３、５、７、９ｄ经腹腔注射佐剂ＩＬ－２,用减虫率及减卵率表示保护性免疫力。结果与ＰＢＳ对照组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为３８．２％（Ｐ〈０．０１）,每克肝卵数（ＬＥＰＧ）减少率为７５．１％（Ｐ〈０．０１）,每雌肝卵数（ＬＥＰＦ）减少率为７２．９％（Ｐ〈０．０１）;与单独注射ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２／ＩＬ－１２组减虫率为２６．８％（Ｐ〈０．０５）,ＬＥＰＧ减少率为７２．５％（Ｐ〈０．０１）,ＬＥＰＦ减少率为６６．２％（Ｐ〈０．０５）。表明ＩＬ－１２作为佐剂,可同时增强ｒＳｊ     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达、纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达、纯化、鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ，其片段长度均为６５４ｂｐ。通过双脱氧测序结果显示两者碱基排列顺序相同。用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）表达载体在Ｅ．ｃｏｌｉ中高效表达Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ占菌体总蛋白的２５％。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析柱一步纯化法，得到纯品Ｓｊｐ２６ＧＳＴ，将其作为靶抗原用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测血吸虫大陆株感染者和感染小鼠血清及用Ｓｊｃ２６ＧＳＴ免疫的小鼠血清，反应均为阳性。本研究提示Ｓｊｐ２６ＧＳＴ与Ｓｊｃ２６ＧＳＴ在ＤＮＡ序列、氨基酸顺序和抗原性等方面高度同源，Ｓｊｐ２６ＧＳＴ在研制日本血吸虫疫苗方面具有一定应用价值     

日本血吸虫 26 kDa 谷胱甘肽S-转移酶DNA疫苗的研究及其保护性免疫效果观察

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。免疫３次后，免疫鼠产生一定水平的抗血吸虫抗体。用日本血吸虫尾蚴攻击感染免疫小鼠，结果ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６免疫鼠减虫率分别为３７．１９％和４４．４４％，肝组织减卵率为７３．８０％和４７．２０％，每对成虫产卵减少５６．８８％和１５．６７％。实验结果表明，日本血吸虫Ｓｊ２６ＤＮＡ疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定水平的保护性免疫力，预防血吸虫尾蚴感染。同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶在大肠杆菌的温控高？…

以重组质粒ｐＳｊ２６为模板，ＰＣＲ扩增出编码２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ｃＤＮＡ，双酶切后克隆到ｐＢＶ２２０ＤＮＡ，构建ｐＢＶ２２０－Ｓｊ２６温控表达载体，ＣａＣｌ２法转化大肠杆菌ＤＨ５α，氨苄青霉素筛选转化子，酶切图谱分析及ＰＣＲ鉴定阳性克隆。阳性克隆菌在３０℃培养，４２℃温控表达Ｓｊ２６。测定表达产物ＧＳＴ活性，并用ｒＳｊ２６抗原免疫的鼠血清及日本血吸虫感染鼠血清进行Ｄｏｔ     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S-转移酶基因真核表达载体的构建及序列测定

目的 扩增日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）基因片段，构建其重组真核表达载体，以研制ＳｊＧＳＴ核酸疫苗。方法 根据已知基因序列设计一对引物，运用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增Ｓｊ２６ＧＳＴ目的基因片段，将其克隆到ｐｃＤＮＡ３质粒中，并经酶切、ＰＣＲ鉴定，测序证实。结果 获得ＧＳＴ－ｐｃＤＮＡ３重组克隆。结论：本实验获得Ｓｊ２６ＧＳＴ重组克隆，为进一步研制核酸疫苗创造了条件。     

日本血吸虫26 kDa基因重组蛋白免疫小鼠抗体内血吸虫生殖的作用

目的：探讨日本血吸虫２６ｋＤａ基因重组蛋白（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）抗日本血吸虫生殖作用及其免疫机制。方法：小鼠经ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫,攻击感染日本血吸虫尾蚴４０±１条,于６ｗｋ后解剖检虫体,计算虫数与肝组织和脾组织内的虫卵数,并对虫体主要生殖器官作透射电镜超微结构的观察。结果：证明ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ具有明确的抗生殖免疫作用。与对照组相比,免疫鼠减虫率为３０．０％,肝组织和脾组织内虫卵减少率分别为５７．１％与７９．９％,透射电镜观察显示免疫鼠体内雌虫的卵黄腺及雄虫的睾丸组织均产生不同程度的抑制作用,主要表现为卵黄细胞胞质中卵黄球、卵黄滴、脂滴和睾丸组织中精细胞、支持细胞胞质中的脂滴数量均有明显减少。结论：ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ有抗日本血吸虫生殖的作用,使虫体生殖器官受到损害     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG4 …

探讨ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法，用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｉＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳＪ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ〉０．０５）     

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG_4考核疗效的比较研究

目的探讨ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法,用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常人和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ＞０．０５）;用ＳｊＭＡｇ和ＫＬＨ分别检测治疗后１２个月血清中ＩｇＧ和ＩｇＧ４的阴转率均显著高于ＳＥＡ（Ｐ＜０．０１）、检测治疗后２４个月血清中ＩｇＧ４的阴转率均达９７．６％。结论ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２具有与ＳＥＡ相似的诊断价值和较高的疗效考核价值;特异性ＩｇＧ４可能系一种疗效敏感抗体,可望成为疗效考核评价指标。     

日本血吸虫重组谷胱甘肽-S-转移酶诱生的保护性免疫应答特征的研究

目的：研究日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ）在不同品系小鼠（ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及Ｃ５７ＢＬ／６小鼠）诱生免疫应答的差异。方法：将ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ（弗氏佐剂）经皮下免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠及Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,收集免疫前和免疫后血清及取小鼠脾脏,分析ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫小鼠诱生的特异性抗体、脾脏淋巴细胞特异性增殖能力及细胞因子种类等。结果：ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠所诱生的抗体总ＩｇＧ及ＩｇＧ亚类均较明显高于免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠。抗体ＩｇＧ亚类分析显示,ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ在Ｃ５７ＢＬ／６小鼠诱生较高滴度的ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ及ＩｇＧ２ｂ（血清按１∶４００稀释,Ａ４９２ｎｍ值分别为＞３．０、１．１２７、＞３．０）,而在ＢＡＬＢ／ｃ小鼠主要诱生较低滴度的ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ及ＩｇＧ２ｂ（血清按１∶４００稀释,Ａ４９２ｎｍ值分别为１．１８９、０．３９、０．６２５）;ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫能够诱导小鼠Ｔｈ细胞激活。细胞因子分析显示ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠既能诱生较高水平的ＩＬ－２及ＩＦＮ－γ,又能诱生ＩＬ－５。而ｒｅＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠仅     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

两种佐剂对日本血吸虫重组抗原SjGST-Sj32保护效果的影响

目的 比较弗氏完全佐剂（ＦＣＡ）与单磷脂Ａ（ＭＰＬ）的免疫增强作用,为提高重组ＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２）的疫苗效果提供依据。方法 ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２加弗氏完全佐剂（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２＋ＦＣＡ）或单磷脂Ａ（ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２＋ＭＰＬ）免疫小鼠３次,ＥＬＩＳＡ法检测抗体水平,用减虫率及减卵率表示保护性作用。结果 与ＰＢＳ对照组相比,ｒＳｊＧＳＴ－Ｓｊ３２加ＦＣＡ或ＭＰＬ     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达,纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达，纯化，鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ，抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ其片段长度均为６５４ｂ     

日本血吸虫中国大陆株 26kDa基因重组蛋白(rSjc26GST)对宿主肝肉芽肿形成的影响

目的探讨日本血吸虫中国大陆株２６ｋＤａ基因重组蛋白对宿主肝虫卵肉芽肿形成的影响。方法将 ＩＣＲ雄性小鼠分成 ２组,１组经 ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ免疫,另 １组为对照。免疫结束后第 ５天,２组小鼠均感染日本血吸虫尾蚴 ４０条±１条／鼠,于 ６周后剖杀,取肝组织进行观察。结果免疫组与对照组肝表面虫卵结节数分别为５．６９±１．１９和２０．４７±１．８３,前者比后者减少７２．２０％;肝肉芽肿平均直径免疫组为 １４０．００ μｍ±３８．２４ μｍ,与对照组２４５．７２ μｍ±３２．７３ μｍ相比,减少４３．０２％;同时免疫组小鼠体内特异性抗ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ抗体水平明显高于对照组。结论ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ对日本血吸虫具有明显的抗病效果。     

日本血吸虫26kDa谷胱甘肽S—转移酶DNA疫苗的研究及其保 …

本文对大陆株日本血吸虫２６ｋＤａ谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｓｊ２６ＧＳＴ）的ＤＮＡ疫苗进行研究，并观察了其免疫保护效果。分别构建含Ｓｊ２６ＧＳＴ基因的重组质粒ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６，采用脂质体介导的基因转移将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６分别导入ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞，用免疫荧光法（ＩＦＡ）证实Ｓｊ２６ＧＳＴ在真核细胞中的表达。分别将ｐＣＤ－Ｓｊ２６和ｐＢＫ－Ｓｊ２６及ｐＢＫ－ＣＭＶ肌注     

COMPARATIVE STUDY ON DETECTION OF ANTI-TOXOPLASM A GONDII ANTIBODIES BY USING DOT-ELISA AND DOT-IMMUNOGOLD SILVER STAINING

为比较斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫抗体的敏感性和特异性，本实验以弓形虫速殖子可溶性蛋白抗原为诊断用抗原，同时用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测６５份弓形虫感染者血清、１７６份其他寄生虫感染者血清和７６份对照血清。结果显示，用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染者抗体阳性率分别为９８．４６％及９２．３１％，平均抗体滴度分别为１∶３８４及１∶２１８（１∶２０－１∶２５６０）。用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ检测，有２３份血清抗体滴度高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，有８份低于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ。二种方法所测抗体滴度呈直线正相关关系（ｒ＝０．６０８，Ｐ＜０．０１）。二种方法检测其他寄生虫感染者和对照血清，假阳性率分别为５．９５％及１３．８９％。Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ操作流程和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ相似，但敏感性、特异性均优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，前者不使用对人体有害的底物，有较好的推广前景。     

斑点免疫金银染色与Dot—ELISA检测抗弓形虫抗体的对比研究

为比较斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫抗体的敏感性和特异性，本实验以弓形虫速殖子可溶性蛋白抗原为诊断用抗原，同时用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测６５份弓形虫感染者血清、１７６份其他寄生虫感染者血清和７６份对照血清。结果显示，用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染者抗体阳性率分别为９８．４６％及９２．３１％，平均抗体滴度分别为１：３８４及１：     

4种抗原诊断血吸虫病效果的比较研究

目的 寻找特异性、敏感性较高，且价廉和制备简易的血吸虫病诊断抗原。方法 用酶链免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）比较４种抗原检测５８例慢性血吸虫病人的阳性率及４１例正常人血清和１０４例其它寄生虫病人的阴性率。结果 ＳＥＡ、ＳｊＭＡｇ，ｒＳｊ３２和ＫＬＨ４种抗原的敏感性分别为９４．８％、９８．３％，９３．１％和９６．６％，特异性分别为９５．２％、９７．９％、９７．２％和９９．３％。４种抗原之间敏感性和特异性