肝细胞移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥研究

目的研究肝细胞腹腔移植治疗急性肝功能衰竭的免疫排斥反应。方法用胶原酶灌注法分离幼猪及BALB/c和C57BL/6小鼠肝细胞;用腹腔注射CCl4的方法建立C57BL/6急性肝功能衰竭模型;将实验动物分为同基因移植组、同种异基因移植组和异种移植组。各组动物肝细胞移植入急性肝功能衰竭小鼠腹腔内,观察受体小鼠存活情况,比较各组动物T细胞亚群、免疫球蛋白水平和细胞因子的变化。结果①受体小鼠存活情况:同基因移植组为8/10,同种异基因移植组为6/10,异种移植组为3/10,同基因移植组和同种异基因移植组受体的生存情况明显好于异种移植组(P<0.05)。②T细胞亚群变化:移植后7 d内,同基因移植组外周血中CD4+和CD8+T细胞均无明显变化,同种异基因移植组CD4+T细胞于移植后3 d时达高峰(P<0.05),而CD8+T细胞7 d内无明显变化,异种移植组CD4+和CD8+T细胞移植后7 d内均明显升高,且于移植后3 d时达高峰(P<0.05)。③免疫球蛋白水平:同基因移植组血清免疫球蛋白IgM和IgG水平在移植后0.5、1和3 d时未见明显变化,同种异基因移植组和异种移植组的IgM在移植后1 d时达高峰(P<0.05),而IgG在移植后3 d时达高峰(P<0.05)。④血清细胞因子水平:移植后7 d,同种异基因移植组和异种移植组的IFN-γ、TNF-α及IL-2血清浓度明显高于同基因移植组(P<0.05);异种移植组的IL-6血清浓度明显高于同基因移植组和同种异基因移植组(P<0.05)。结论无论同种还是异种肝细胞移植,初期均发生了强烈的CD4+及CD8+T细胞参与的细胞免疫和较强体液免疫反应。     

不同移植途径对大鼠骨髓干细胞迁移至肝脏及分化的影响

目的 探讨门静脉、尾静脉和肝动脉3种移植途径下大鼠骨髓干细胞迁移至肝脏及向肝细胞分化的情况.方法 取30只正常SD大鼠,采用2-乙酰氨基芴和四氯化碳溶液灌胃,制成急性肝损伤模型,取其骨髓,以淋巴细胞分离液分离出干细胞,再用荧光染料(PKH26)进行标记.将此30只急性肝损伤大鼠分为3组,每组10只,门静脉输注组大鼠麻醉后,取腹部正中切口,经门静脉注入自体骨髓干细胞悬液0.4 ml(4×106个,下同);尾静脉输注组大鼠经尾静脉注人自体骨髓干细胞悬液0.4 ml;肝动脉输注组大鼠麻醉后,取腹部正中切口,将胃十二指肠动脉远端结扎,用动脉夹阻断肝总动脉血流,迅速在胃十二指肠动脉结扎点前方进针,注入自体骨髓干细胞悬液0.4 ml.骨髓干细胞移植后2周,取各组肝脏组织,制成冰冻切片,再以用异硫氰基荧光素标记的抗体进行免疫组织化学染色,检测其PKH26标记阳性细胞以及自蛋白和CK18的表达情况.结果 各组大鼠肝脏切片中均可见散在的PKH26染色阳性的红色荧光,门静脉输注组、尾静脉输注组及肝动脉输注组PKH26染色阳性细胞数分别为(58.0±2.67)个、(57.8±3.04)个及(58.3±3.52)个,三组间的差异无统计学意K(P>0.05).各组肝组织切片均广泛表达白蛋白及CK18(绿色荧光),荧光显微镜下可见同时发绿色荧光和红色荧光的细胞(绿色荧光与红色荧光相叠加而成的黄色荧光).结论 经门静脉、尾静脉和肝动脉注入的骨髓干细胞均能定植于肝脏,并在损伤的肝脏中分化为肝细胞,3种途径的效果相当.     

骨髓细胞移植改善宿主肝细胞功能研究

目的 观察骨髓问充质细胞(BMCs)移植能否提高严重肝功能损害合并再生障碍的同种先天性无白蛋白大鼠(F344alb)肝再生和修复能力.方法 F344大鼠为供体,F344alb受体鼠接受Retrorsine(RS)1次/2周腹腔注射2次后4周行2/3肝切除(PH).正常F344alb为组Ⅰ(n=5);BMCs移植为组Ⅱ(n=8);RS/PH预处理为组Ⅲ(n=8);RS/PH预处理后BMCs移植为组Ⅳ(n=8);RS/PH预处理后肝实质细胞移植为组V(n=8).4周后行各组大鼠肝脏形态学和组化染色研究,检测肝功能,及肝组织和骨髓基因检测.结果 (1)生存率:组Ⅳ75%,组Ⅴ 50%,组Ⅲ37.5%,组Ⅰ和组Ⅱ 100%.(2)4周后组肝再生率(67.38±8.66)%显著高于组Ⅳ、Ⅲ[(55.31±8.69)%,(44.27±6.51)%].(3)PH后1 d,组Ⅲ、Ⅳ、V血清TB、ALT显著升高;PH后2 d,组Ⅳ血清,rB、ALT显著下降.(4)组Ⅳ、Ⅴ肝组织切片白蛋白免疫组织化学染色显示白蛋白染色阳性肝细胞呈簇状分布.(5)F344来源白蛋白基因片段出现在组Ⅳ、Ⅴ大鼠肝组织内.(6)PH后2、4周,组Ⅳ、Ⅴ血清白蛋白显著升高.结论 BMCs移植可提高严重肝损合并再生障碍受体鼠肝再生能力,保护肝功能,促进肝修复.     

ω-3不饱和脂肪酸对大鼠肝切除术后肠屏障的影响

目的 观察ω-3不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)对大鼠肝切除术后肠屏障的影响.方法 雄性SD大鼠96只随机分为假手术组(S)、生理盐水组(NS+PH)和大(H+PH)、小剂量(L+PH)ω-3PUFA治疗组(2ml/kg、1 ml/kgω-3PUFA静脉注射+大鼠70%肝切除组).检测肝切除术后1、2、3、5 d谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、门静脉血中自细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、内毒素(ET)水平的变化以及小肠黏膜的病理形态学改变.结果ω-3PUFA治疗组术后1、2、3 d ALT、AST较生理盐水组有显著下降(P<0.05).术后1、2、3、5 d,ω-3PUFA治疗组门静脉血中TNF-α、IL-6有显著降低,内毒素水平也有显著下降[H+PH组分别为:(69.61±15.65)、(53.20±6.26)、(35.90±9.76)、(31.81±8.96)ng/L,L+PH组分别为:(79.99±8.73)、(56.11±5.69)、(43.46±14.39)、(34.40±4.88)ng/L,P<0.05].病理学检查可见生理盐水组肠上皮黏膜组织形态受损明显,ω-3PUFA治疗组肠上皮黏膜受损较小.结论 围手术期应用ω-3PUFA可能通过减少炎症因子的释放达到保护肠屏障的效果.     

半成熟树突状细胞在胚胎干细胞源性肝细胞移植中诱导耐受的研究

目的 在小鼠胚胎干细胞(ESC)源性肝细胞移植中,应用半成熟树突状细胞(smDC)诱导免疫耐受.方法 绿色荧光蛋白(GFP)标记的129小鼠ESC按前期方法向肝细胞诱导分化,129小鼠smDC亦按前期方法由骨髓单核细胞诱导获得.smDC注入BALB/C小鼠3d后,再将ESC分化的肝细胞移植入BALB/C小鼠肝被膜下.检测肝转氨酶、外周血白细胞介素-2(IL)-2和IL-10水平变化,观察移植细胞生长及淋巴细胞浸润情况.结果 移植后7d,smDC组肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)为212.58 U/L,较对照组512.27 U/L明显改善(P＜0.05),7d和14 d外周血IL-10水平较对照组明显升高,而IL-2水平较对照组明显降低(P＜0.05).移植细胞存活率在14、21 d smDC组较对照组明显增高,CD4 +T细胞浸润较对照组明显减轻.结论 在ESC源性肝细胞异基因移植中,smDC预输注可诱导部分免疫耐受,有望作为一种良好的移植耐受原应用于ESC分化细胞移植研究中.     

转染大鼠白细胞介素10基因的骨髓源性肝干细胞移植治疗大鼠肝纤维化

目的 探讨转染大鼠白细胞介素10(IL-10)基因的β2m-/Thy-1+骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对大鼠肝纤维化的治疗效果.方法 分选Wistar大鼠的β3m-/Thy-1+BDLSC,转染大鼠IL-10基因.Wistar大鼠皮下注射CCl4,制作肝纤维化模型,分为3组:(1)模型组,经大鼠门静脉分支输注无菌生理盐水1 ml;(2)BDSC组,经大鼠门静脉分支输注β2m-/Thy-1+BDLSC悬液1ml(含2×105个细胞);(3)IL-10组,经大鼠门静脉分支输注转染1L-10基因的β2m-/Thy-1+BDLSC悬液1 ml(含2×105个细胞);另以皮下注射橄榄油的Wistar大鼠为对照(正常组).用细胞核染色剂二脒基苯基吲哚(DAPI)标记β2m-/Thy-1+BDLSC,以观察该细胞在肝内的定位情况.观察各组大鼠肝组织病理学改变和胶原的沉积情况,检测其肝功能和凝血功能.结果 大鼠肝组织中可见DAPI标记的β2m-/Thy-1+BDLSC.模型组大鼠的肝组织病理学改变明显,BDLSC组病理学改变有所减轻,IL-10组的组织形态最接近正常组.模型组大鼠肝组织内胶原沉积明显增多,BDLSC组胶原沉积较少,IL-10组胶原沉积明显减少.IL-10组大鼠的血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和胆红素总量(TBIL)以及全血凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血激酶时间(APTT)均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05),其中ALT、TBIL、PT和APTT均降至正常组水平,与BDLSC组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 转染大鼠IL-10基因的β2m-/Thy-1+BDLSC移植对大鼠肝纤维化有一定的治疗效果.     

门静脉高压症脾脏巨噬细胞内游离Ca2＋变化的初步研究

目的 观察门静脉高压症(PH)脾脏巨噬细胞(Mφ)游离Ca2+浓度和分布的变化,为深入探讨门静脉高压症脾脏的变化及评价其免疫功能状况提供实验依据.方法 选取门静脉高压症脾亢患者(均为慢性乙型肝炎患者)的手术切除脾脏(12例)为实验组,外伤性脾破裂患者的手术切除脾脏(4例)为正常对照组.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mφ,使用Ca2+荧光指示剂Fluo-3/AM负载Mφ,以激光共焦镜显微镜观察Mφ内Ca2+的分布,流式细胞仪检测Mφ内Ca2+的浓度变化.结果 与正常脾脏相比,PH脾脏Mφ内Ca2+的分布无明显变化,但可见细胞表面有较多的Ca2+荧光染色阳性的伪足样突起;PH脾脏Mφ内Ca2+浓度为明显升高(48.75±2.61 vs 39.92±1.76,P＜0.05).结论 PH脾脏Mφ内Ca2+浓度明显升高,进一步说明PH脾脏Mφ处在活化状态,但PH脾脏MφCa2+浓度变化的具体机制,以及这种变化对PH脾脏免疫功能的影响还需要进一步的研究.     

骨髓单个核细胞经门静脉移植对大鼠肝纤维化的减轻作用

目的 对比研究骨髓单个核细胞经门静脉移植治疗大鼠肝硬化的疗效,为临床应用提供依据.方法 采用四氯化碳(CCl4)综合法制作Wisrar大鼠肝硬化模型,8周后经病理检查证实成模者共20只进入实验.随机分为治疗组和对照组,每组10只,两组大鼠分别经门静脉注入骨髓单个核细胞和等体积的肝素生理盐水.各组大鼠继续皮下注射CCl4(CCl4使用方法与前述造模方法相同),在原环境下继续饲养4周后处死.切取肝组织分别作HE及Masson染色.疗效评价指标包括:①一般情况;②肝脏羟脯氨酸和胶原纤维含量;③肝纤维化病理学分级.结果 (1)治疗组大鼠一般情况改善;对照组无明显改变.(2)治疗组与对照组中肝脏羟脯氨酸含量分别为(0.50±0.12)g、(0.59±0.34)g;胶原纤维含量百分数分别为(3.75±0.98)%、(5.02±0.44)%.两组之间各指标均有统计学差异(P<0.05).(3)治疗组肝纤维化病理分级也有下降,治疗前后差异明显(P<0.05),而对照组无明显变化.表明治疗组行骨髓单个核细胞移植后大鼠肝纤维化程度减轻.结论 骨髓单个核细胞肝内移植能改善大鼠肝纤维化程度,为临床肝硬化的治疗带来了新的手段.     

内皮祖细胞移植对大鼠肝硬化作用的研究

目的 探讨内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)移植对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的大鼠肝硬化的作用.方法 本组38只SD大鼠中8只大鼠为正常对照,其余30只采用25%的CCl4/橄榄油灌胃制备肝硬化模型.再将肝硬化大鼠分为3组,每组10只.12周后直接处死的为肝硬化模型组,门静脉输入大鼠EPCs为EPCs移植组,经门脉输入生理盐水为移植对照组.移植4周后检测移植组和移植对照组大鼠肝组织胶原Ⅲ(collagen Ⅲ,COL Ⅲ)、平滑肌动蛋白(smooth muscle actin α,α-SMA)和Ki67的表达,检测外周血肝功能和血凝分析.结果 肝硬化模型组大鼠肝脏体积增至正常时的2倍.EPCs移植组大鼠与肝硬化模型组比较,肝组织学活动指数(histological activity index,HAI)(F=75.062,P<0.01),丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)(F=29.942,P<0.05),门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)(F=16.618,P<0.05)和总胆红素(total bilirubin,TBIL)(F=9.911,P<0.05)水平降低,白蛋白(albumin,Alb)(F=4.944,P<0.05)和Ki67(F=45.966,P<0.01)水平升高,纤维化面积(F=25.025,P<0.05)减少,α-SMA(F=7.86,P<0.05)和COL Ⅲ(F=135.787,P<0.01)表达降低;与正常肝脏相比,移植对照组HAI,ALT,AST和TBIL水平升高,Alb和Ki67水平降低,纤维化面积增加,α-SMA和COL Ⅲ表达升高(P<0.05).移植对照组大鼠凝血酶原时间延长,差异有统计学意义(P<0.05). 结论移植EPCs可以促进大鼠肝硬化的肝细胞增生,减轻肝纤维化程度.     

胚胎干细胞源性肝细胞的获得及体内移植研究

目的 探讨体外定向诱导小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为肝细胞的方法及肝损伤模型肝内移植的可行性.方法 常规培养ES细胞后,继续悬浮培养4 d以形成拟胚体(EBs),转移EBs到铺有明胶的6孔板中贴壁培养,并添加3 mmol/L丁酸钠开始诱导分化,7 d后加入淤胆血清筛选、纯化ES源性肝细胞,分化过程中用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及超微结构的改变;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝细胞特异性标志基因:白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、甲状腺素运载蛋白(TTR)、α1抗胰蛋白酶(AAT)、葡萄糖6磷酸酶(G6P)、酪氨酸转氨酶(TAT)mRNA水平的表达;以荧光示踪剂CFDA-SE标记诱导获得的肝细胞,并移植到肝损伤小鼠肝内,观察移植细胞在肝内的定居、增殖情况.结果 诱导分化过程中,ES细胞形态逐渐出现肝细胞样改变,其超微结构与小鼠肝细胞超微结构十分相似;RT-PCR结果显示,随着诱导时间的推进,标志肝细胞发育过程的ALB、AFP、TTR、AAT、G6P、TAT mRNA顺序表达;肝内移植实验结果显示:ES源性肝细胞可在肝损伤小鼠肝内定居并增殖.结论 丁酸钠联合淤胆血清可以诱导ES细胞分化为肝细胞,ES源性肝细胞肝损伤模型体内移植是可行的,这有可能为细胞移植治疗难治性肝病提供一种新的细胞来源.     

Innovative use of the vascular endothelial growth factor in an experimental model of acute liver failure

Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) is an endothelial cell mitogen and an important stimulator of sinusoidal endothelial cell proliferation. The aim of this research was to study the effects of exogenous VEGF in a rat model of acute liver failure. The study was conducted on 64 rats (240-300 g). All rats underwent intraperitoneal injection (5 ml/kg) of 25% carbon tetrachloride (CCl4) and 75% paraffin oil. This dosage of CCl4 was devised to induce nonfatal acute liver failure with spontaneous recovery in 7 days. The animals were randomly divided into 2 groups. Group B animals underwent i.v. injection of 200 ng of VEGF165 one hour following intra-peritoneal injection of CCl4. To obtain daily liver functional tests (LFTS) and histological liver samples, 4 rats in each group were sacrificed daily up to 8 days. In group A, the liver histology showed massive periportal hepatocyte necrosis associated with portal lymphocytic infiltrates. The peak of the damage was documented at 72 hours following CCl4. Group B showed minimal necrosis, moderate periportal edema and a minimum periportal steatosis. At 48 hours steatotic changes had disappeared and the periportal edema was resolving. LFTs demonstrated severe liver damage in rats in group A. In group A the peak AST (mean 322.5 IU/L) and ALT (mean 250.25 IU/L) were recorded at 72 hours. In group B, at 72 hours the mean AST was 137 IU/L (normal < 95 IU/L) and ALT 68 IU/L(normal < 45 IU/L). The maximum levels of AST and ALT, in group B, were 152.3 IU/L and 72.3 IU/L, at 24 hours. According to our results exogenous VEGF successfully protects the liver from CCl4 induced acute liver failure. Further studies will demonstrate if exogenous VEGF can be effective in other liver injuries.     

铁死亡在肝缺血—再灌注损伤大鼠肠损伤中的作用

目的 探究铁死亡在肝缺血-再灌注损伤(HIR)大鼠肠损伤中的作用。方法 选择健康清洁级雄性SD大鼠40只,周龄8～10周,体重220～260 g。采用随机数字表法将大鼠分成四组：假手术组(S组)、铁死亡抑制剂Ferrostatin-1+假手术组(SF组)、HIR模型组(IR组)和铁死亡抑制剂Ferrostatin-1+HIR模型组(IF组),每组10只。S组腹腔注射等容量0.02%DMSO,30 min后行假手术,仅进行开腹、分离第一肝门和关腹处理。SF组腹腔注射Ferrostatin-1(溶于0.02%DMSO)5 mg/kg, 30 min后行假手术。IR组腹腔注射等容量0.02%DMSO,30 min后制备HIR模型。IF组腹腔注射Ferrostatin-1(溶于0.02%DMSO)5 mg/kg, 30 min后制备HIR模型。于再灌注后8 h处死大鼠,取小肠组织,采用ELISA法检测肠组织丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和铁(Fe²⁺)浓度;采用速率法检测血清中ALT和AST活性;采用Western blot法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁...     

四氯化碳、硫代乙酰胺和猪血清诱导大鼠肝纤维化模型的比较

目的：比较采用四氯化碳（CCl4）,硫代乙酰胺（TAA）及猪血清诱导3种方式制备大鼠肝纤维化模型的效果和特点。方法：将72只SD大鼠随机均分为：CCl4组,TAA组,猪血清组及对照组,分别每周2次皮下注射40% CCl4（0.5 mL/100 g）,0.03% TAA（200 mg/kg）,猪血清（0.5 mL/只）和生理盐水（0.1 mL/kg）。观察大鼠一般情况及体重变化;在造模第3,6,9周末,测定大鼠血清中的天冬氨酸氨基转移酶（AST）,谷氨酸氨基转移酶（ALT）,丙二醛（MDA）,透明质酸（HA）水平;取肝组织进行HE染色,观察肝组织结构变化,并对肝纤维化程度进行分级和评分。结果：CCl4,TAA组大鼠体重增加量均明显低于对照组（均P<0.05）,而猪血清组与对照组间体重增加量差异无统计学意义（P>0.05）;TAA组3个时间点ALT浓度均明显升高（均P<0.05）,而CCl4组和猪血清组ALT无明显升高。CCl4组AST浓度在第3周明显升高（P<0.05）,但在第6,9周有所下降,TAA组3个时间点AST浓度均明显升高（均P<0.05）,猪血清组AST浓度无明显升高。3个实验组MDA和HA浓度在3个时点间均有所升高（均P<0.05）,两者均在TAA组升高最明显;3个实验组第9周均可见不同程度的肝细胞颗粒样变,汇管区纤维组织异常增生;与对照组比较,3个实验组的肝纤维化分级和SSS计分差异均具有统计学意义（均P<0.05）,第9周时,TAA组的SSS计分高于CCl4组（P<0.05）,而CCl4组的SSS评分高于猪血清组（P<0.05）。结论：3种方法均可诱导大鼠肝纤维化模型,TAA效果略优于CCl4。猪血清法造模对动物整体损伤较轻微。     

肝缺血再灌注对肝硬化大鼠的损伤作用

目的 研究肝硬化大鼠肝缺血再灌注（hepatic ischemia reperfusion,HIR）损伤的机制和程度。方法 用60％四经碳（CCl4）溶液皮下注射方法制作肝硬化大鼠模型，肝硬化大鼠随机分为六组：A组：假手术组（6只）；B、C、D组：分别为肝门完全阻断20min、30min、40min（每组各16只）；E组“单纯肠系膜上静脉阻断（16只）;F组：肝门阻断＋门腔转流（16只）；另外，随机取10只正常肝脏大鼠组成G组，行肝门完全阻断30min。观察7天存活率、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、肿瘤坏死因子（TNF），以及肝、肺病理的变化。结果 B、C、D、E、F、G组的7天存活率分别为10／10只、6／10只、4／10只、5／10只、8／10只、6／10只；再灌注后4h血清TNF变化：后六组均明显高于术前，C、D组高于B、A组，E、F组也明显高于A组（P＜0.01）再灌注4h后HA变化：D组明显高于B、E组，F、C组明显高于A组（P＜0.05）；再灌注4h后D、C组的AST、ALT均明显高于B组、A组、D组的AST明显高于F组，F组的AST、ALT显著高于E组（P＜0.05）；C、G两组比较，上述指标的差异无显著性（P＞0.05）；肝、肺组织学检查可见肝、肺的病理损害，程度随缺血时间的延长而加重，E组损伤重于F组。结论 硬化肝脏肝缺血再灌注损伤涉及全身多个器官，门脉静淤血可能是损伤乃至死亡的主要原因；肝硬化大鼠耐受肝缺血的最大的时限在30min以内。     

Lack of protection of ischaemic preconditioning in the rat model of major hepatectomy with ischaemia reperfusion injury

OBJECTIVE: To investigate the effects of ischaemic preconditioning (IP) on residual liver regeneration after major hepatectomy without portal blood bypass in rats, and to verify whether it can protect the residual liver from ischaemia reperfusion (IR) injury. METHODS: Ninety rats were randomized into three groups: Group PH, rats were subjected to 70% hepatectomy alone; Group IR, rats were subjected to 30 minutes of total hepatic ischaemia, and 70% hepatectomy was performed just before reperfusion; Group IP, rats were pretreated with IP (5/10 minutes). During the preoperative period and at 0.5, 6, 12, 24 and 48 hours after the operation, serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) activities were measured using an autoanalyser. Serum hyaluronic acid (HA) was measured by radioimmunoassay. Regenerated liver weight (RLW) of the rats was measured and the expressions of Ki-67 and cyclin D1 were determined by immunohistochemistry in remnant liver tissue. RESULTS: There were no significant differences in serum AST and ALT levels in all the groups before the operation. After partial hepatectomy, AST and ALT levels increased rapidly. From 0.5 to 24 hours after operation, serum AST and ALT levels were significantly higher in IP group rats than in PH and IR rats (p < 0.05). There were no significant differences in serum HA levels in all the groups before the operation. After partial hepatectomy, HA levels increased rapidly, reaching peak values at 12 hours. In the early stage (during 12 hours) after the operation, HA level was significantly higher in IP rats than in PH and IR rats (p < 0.05). The RLW of the rats rapidly increased after partial hepatectomy, and significantly decreased in IP rats compared with PH and IR rats (p < 0.05). Cyclin D1 and Ki-67 expression in all groups before the operation were low and were not significantly different. After partial hepatectomy, they rapidly increased. The expression of Ki-67 and cyclin D1 reached a peak at 24 hours after the operation in PH rats, and they were significantly higher compared with IR and IP rats (p < 0.05). In groups IR and IP, the expression of cyclin D1 and Ki-67 reached peak values at 48 hours. A significant decrease (p < 0.05) was observed after 24 and 48 hours of reperfusion in group IP compared with groups PH and IR. CONCLUSION: IP impairs residual liver regeneration after major hepatectomy without portal blood bypass in rats, and protection from IR injury disappears. IP-induced hyperperfusion may be the cause of reduced liver regeneration.     

N-乙酰半胱氨酸预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法 18 例肝血管瘤手术患者随机分为3 组(n=6):对照组(C0)、NAC 预处理组(PR)和NAC 后处理组(PO),其中PR和PO 组分别于肝门阻断前和开放后给予NAC 120 mg/kg.三组患者均于切皮前(T0)、肝门阻断开放后1 h(T1)及6 h(T2)抽血检测谷丙转氨酶活性(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,并于肝门阻断开放后1 h(T1)取肝组织测定丙二醛(MDA)含量及核因子κB(NF-κB)活性.结果 肝门阻断开放后1 h(T1)和6 h(T6),各组的ALT 和AST 水平均明显高于肝门阻断前(T0)水平(P<0.01);与对照组相比,PR 和PO 组的MDA 含量在肝门阻断开放后1 h(T1)明显减少(P<0.01),但NF-κB 的活性仅在PR 组显示有明显的降低(P<0.01).结论 NAC 预处理可有效防治肝脏缺血再灌注损伤,其机制与抑制再灌注后NF-κB 的启动激活有关.     

雌激素在大鼠肝移植缺血再灌注损伤中的保护作用

目的 了解雌激素对大鼠肝移植缺血再灌注损伤是否具有保护作用及其可能的作用机制.方法 将大鼠分为三组:雄性组、雌性组以及给予外源性雌激素的雄性组,分别应用两袖套法实施肝移植手术.术后6 h麻醉后处死,取血及肝组织标本.观察外周血丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷氨酸氨基转移酶(AST)以及一氧化氮(NO)水平,免疫组化染色分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在各组肝组织中的表达.结果 与雄性组和雌性组比较给予外源雌激素的雄性大鼠血清ALT水平和AST水平显著降低(分别为561.69 U/L比730.78 U/L和678.82 U/L,726.44 U/L比914.21 U/L和861.86 U/L);血清NO水平明显升高,平均为63.54 μmol/L;肝组织eNOS表达显著增加,iNOS表达显著降低.结论 雌激素对于大鼠肝移植缺血再灌注损伤具有保护作用,这种保护作用一部分是通过调节eNOS和iNOS表达、提高NO水平实现的.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of 17β-estradiol on ischemia reperfusion injury in rat liver transplantation. Methods The rats were divided into three groups: male to male group(MG), female to female group (FG), and male to male group which were given 17β-estradiol 4000 μg/kg 24 hours before liver transplantation intraperitoneally (M + EG). Then transplantation was performed. At 6 hours after portal vein reperfusion, blood samples were obtained to determine the levels of alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase (AST), and nitric oxide(NO). The expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in liver were observed by immunohistochemistry. Results ALT and AST levels in the M+EG group were lower than those in MG and FG (561. 69 U/L vs 730. 78 U/L and 678. 82 U/L; 726. 44 U/L vs 914. 21 U/L and 861. 86 U/L). The NO level (63. 54 μmol/L) was much higher than those in the MG and FG groups. The expression of eNOS in the M+EG group was higher than those in MG and FG, while the expression of iNOS in M+EG were lower than those in MG. and FG. Conclusion 17β-estradiol can attenuate ischemia reperfusion injury in rat liver transplantation by improving the balance of eNOS and iNOS.     

缺血预处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的免疫机制研究

目的探讨大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)的免疫机制和缺血预处理(IPC)的保护作用。 方法80只大鼠被随机分为假手术组(A组)、肝门阻断20 min组(B组)、30 min组(C组)、40 min组(D组)以及肝门阻断30 min前预处理组(E组),每组再分为再灌注2 h亚组和24 h亚组,各8只。检测再灌注后2 h、24 h的血丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、白细胞介素10、12(IL-10、IL-12)以及外周血T淋巴细胞亚群的水平,观察再灌注后2 h、24 h时的存活率及肝脏病理情况。 结果随着肝门阻断时间的延长,ALT、AST显著升高,肝内炎症细胞浸润增加,24 h存活率逐渐降低。D组再灌注2 h时,CD8+ T淋巴细胞显著升高,CD4+/CD8+比值下降,调节性T淋巴细胞显著减少,血清IL-10显著降低,而IL-12水平显著升高。再灌注后24 h,B组大鼠各项指标逐步恢复至假手术组水平,而D组大鼠CD4+T淋巴细胞、CD4+/CD8+比值尤其是Treg显著升高,且IL-10水平显著升高,IL-12水平明显降低。与C组相比,E组阻断30 min后无一例死亡,再灌注2 h的ALT、AST水平显著降低,Treg和IL-10水平显著升高,IL-12水平明显降低,再灌注24 h后各项指标恢复并接近假手术组水平,肝脏病理损伤较轻。 结论肝缺血再灌注引起肝脏损伤甚至死亡,可能与诱导T淋巴细胞尤其是Treg和细胞因子的紊乱有关。缺血预处理可以增加再灌注早期的Treg细胞,有效纠正免疫紊乱,减轻损伤。     

一氧化氮/内皮素平衡关系与移植肝功能的相关研究

目的　研究大鼠肝移植术后早期一氧化氮 (NO ) /内皮素 (ET )平衡关系的改变 ,探讨其与肝功能的相关性 ,观察前列腺素E1 (PGE1 )的干预作用。方法　大鼠随机分为 4组 (各组n =8) :(1)正常对照组 (A组 ) ;(2 )手术对照组 (B组 ) ;(3 )实验组 (C组 ) ;(4 )PGE1 干预组 (D组 )。采用“双袖套法”建立肝移植模型。检测和比较受体术后 6h血液ALT ,AST ,NO和ET水平 ,观察肝脏组织学改变。结果　术后 6hB ,D组全部存活 (10 0 % ) ,C组存活 5只 (62 .5 % )。与C组比较 ,D组ALT ,AST ,ET明显降低 (P <0 .0 5 ) ,NO明显升高 (P <0 .0 5 )。NO ,ET及NO /ET值与ALT呈现明显的相关性 (依次为r =-0 .681,0 .793和 -0 .73 2 )。C组肝脏见明显的组织学损害 ,B ,D组组织结构基本保存完好。结论　肝移植术后早期血液NO ,ET水平及NO /ET比例关系 ,较好地反映了肝脏内皮细胞的功能状况。PGE1 可减轻肝血窦内皮细胞的损害 ,保护了移植肝功能。     

西罗莫司预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制

目的 探讨西罗莫司(SRL)预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制.方法 将SD大鼠随机分为4组,每组12只.假手术对照组:开腹后仅用生理盐水纱布覆盖切口60min,关腹;假手术SRL组:手术方式同假手术对照组;实验对照组:开腹后夹闭肝门静脉左支、肝动脉左支及左肝管,60 min后开放血管;实验SRL组:手术方式同实验对照组.两SRL组大鼠术前2周开始给予SRL 2 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,术前6 h加用1次.而两对照组同期仅给予等体积无菌生理盐水灌胃.术后24 h分别采集各组大鼠的血液和肝组织,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,光镜下观察肝组织的病理学变化,采用流式细胞术检测肝组织中CD4~+ CD25~+ T淋巴细胞占单个核细胞的比例.采用实时聚合酶链反应检测肝组织中Foxp3 mRNA的表达,采用酶联免疫吸附试验检测血清巾转化生长因子-β(TGF-β)和白细胞介素10(IL-10)的含量.结果 假手术对照组和假手术SRL组血清ALT和AST均处于较低水平,而实验SRL组和实验对照组明显升高,且实验SRL组低于实验对照组(P<0.05).假手术对照组和假手术SRL组肝组织结构正常,实验对照组可见明显的片状坏死,实验SRL组肝小叶结构基本完整,未见明显细胞坏死.假手术对照组、假手术SRL组、实验对照组和实验SRL组CD4~+ CD25~+ T淋巴细胞占单个核细胞的比例分别为(6.12±1.87)%、(22.36±6.75)%、(4.53±1.02)%和(13.29±3.16)%.假手术SRL组Foxp3 mRNA的相对表达量以及血清中TGF-β和IL-10的含量明显高于假手术对照组(P<0.05),实验SRL组明显高于实验对照组(P<0.05).结论 SRL可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤,其机制可能与SRL诱导体内CD4~+ CD25~+ Foxp3~+ 调节性T淋巴细胞的分化以及增加TGF-β和IL-10的分泌抑制炎症反应有关.