莱菔硫烷对胃癌细胞SGC-7901 RASSFIA甲基化及表达的影响

目的探讨莱菔硫烷（SEN）对胃癌细胞SGC-7901RASSF1A甲基化及表达有何影响。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901细胞,用0,10μM,30μM,50μM的SFN与SCG-7901细胞孵育24～96h,采用甲基化特意性PCR检测RASSFIA基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后SGC-7901细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平。结果静息状态下,SCG-7901细胞可检测出RASSF1A基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μMSFN孵育96h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多。SFN也能以剂量依赖性与时间依赖性方式促进SGC-7901细胞RASSFIA基因mRNA的表达。结论SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,这可能是其抗肿瘤的重要机制。     

莱菔硫烷对胃癌细胞SGC-7901RASSF1A甲基化及表达的影响

目的 探讨莱菔硫烷(SFN)对胃癌细胞SGC-7901 RASSF1A甲基化及表达有何影响.方法 体外培养胃癌细胞SGC-7901细胞,用0,10μM,301μM,50μM的SFN与SCG-7901细胞孵育24-96h,采用甲基化特意性PCR检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后SGC-7901细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平.结果 静息状态下,SCG-7901细胞可检测出RASSF1A基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μM SFN孵育96h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多.SFN也能以剂量依赖性与时间依赖性方式促进SGC-7901细胞RASSF1A基因mRNA的表达.结论 SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,这可能是其抗肿瘤的重要机制.     

莱菔硫烷对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化及表达的影响

目的探讨莱菔硫烷（SFN）对鼻咽癌CNE-2细胞RASSF1A甲基化及蛋白表达水平的影响。方法体外培养鼻咽癌CNE-2细胞,用0,5、10、30μM的SFN与其孵育24～96h,用MTT法检测细胞的增值情况;流式细胞术分析细胞周期的改变;采用甲基化特异性PCR检测RASSF1A基因启动子区域的甲基化改变情况;提取SFN处理后细胞的RNA,用逆转录PCR检测RASSF1A的表达水平,并用Western blot检测处理前后RASSF1A蛋白的表达。结果 SFN能以时间和剂量依赖性方式抑制CNE-2细胞增值,并能使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。随着SNF浓度的增加,甲基化RASSF1A水平逐渐减弱,非甲基化RASSF1A水平逐渐增多。同时SFN能明显上调RASSF1A的mRNA和蛋白表达水平。结论 SFN能使RASSF1A基因去甲基化,并上调非甲基化基因的表达水平,从而抑制细胞的增值和分化而具有抗肿瘤的效应。     

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的探讨曲古菌素A（TSA）体外抑制人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPKl基因表达的影响。方法体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA（37．5、150、600ng／ml）处理后,Annexin V／PI检测细胞凋亡率,RT—PCR、Western Blot分别检测DAPK1 mRNA和蛋白表达水平。结果不同浓度TSA可显著诱导SGC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性（P〈0．05）,TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞后DAPK1 mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈浓度及时问依赖性（P〈0．05）。结论TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因低乙酰化状态逆转有关。     

5-Aza-CdR对人肝癌细胞RASSF1 A甲基化的影响

目的：探讨5-氮杂-2ˊ-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对人肝癌细胞RASSF1A基因启动子甲基化以及mRNA表达的影响。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,分别用0.5、5.0、30.0、50.0μmol/L的5-Aza-CdR与之孵育72 h,甲基化PCR检测处理前后启动子甲基化水平,RT-PCR检测RASSF1A mRNA表达。结果随着药物浓度的增加,甲基化RASSF1A含量逐渐降低,而未甲基化产物逐渐增高;5-Aza-CdR处理后,RASSF1A mRNA的含量随之增高。结论5-Aza-CdR可逆转SMMC-7721细胞株细胞中基因甲基化修饰状态。     

去甲基化修饰诱导人胆管癌细胞中RASSF1A基因表达

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）对人胆管癌细胞株QBC-939中RASSF1A基因启动子区域甲基化状态及其表达的影响。方法用5μmol／L的5-Aza—CdR对QBC-939细胞进行化学干预24h，用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测RASSF1A基因启动子区域甲基化状态的改变，RT-PCR观察RASSF1A基因mRNA水平变化，Western blot检测RASSF1A蛋白的表达。结果经5-Aza—CdR化学干预后，RASSF1A基因启动子区域由甲基化状态转变为非甲基化状态；RT-PCR和Western blot结果显示在干预组细胞中分别出现RASSF1A基因的DNA条带（280bp）和蛋白质条带（40kD），而对照组中没有相应条带出现。结论DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza—CdR能够诱导RASSF1A基因启动子区域去甲基化，并通过该机制诱导RASSF1A基因在人胆管癌细朐系QBC-939中的表诀．     

曲格列酮诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的观察过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPAR-γ）的配体曲格列酮（troglitazone,TGZ）对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,SGC-7901细胞分为对照组和曲格列酮不同浓度（5、10、15、20μmol／L）加药组,应用流武细胞仪检测曲格列酮不同浓度对胃癌SGC-7901细胞凋亡率的影响;RT—PCR及Western blot方法观察PPARγ、p53的mRNA及蛋白表达变化。结果曲格列酮可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;曲格列酮干预后,p53的mRNA及蛋白在胃癌SGC-7901细胞中表达上调,而PPARγ的mRNA及蛋白表达水平无明显改变。结论曲格列酮依赖激活PPARγ能在体外诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调抑癌基因p53表达而实现,提示PPA即可能是胃癌治疗的一个新分子靶点。     

RASSF1A基因在胃癌中的表达及意义

目的：检测抑癌基因RASSF1A在胃癌细胞株及组织中的表达情况,探讨RASSF1A在胃癌发生发展中的作用及临床意义。方法：用RT-PCR及Western blot检测细胞株、胃癌及癌旁组织中RASSF1A基因及蛋白的表达水平。结果：RASSF1A在低分化BGC-823细胞中的表达量明显低于中分化SGC-7901细胞,在胃癌中的表达阳性率（43.48%）显著低于癌旁组织（85.51%）,且低分化胃癌中的表达低于中高分化,Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的表达低于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。结论：在原发性胃癌组织中,RASSF1A的表达明显缺失或低下,且与肿瘤的分化程度及分期相关。     

As2O3 demethylates RASSFIA gene in DU145 prostate cancer cells

目的 研究三氧化二砷( arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响.方法 应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和Western blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响.结果 As2O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P＜0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P＜0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达.结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖.     

EGCG抑制卵巢癌细胞RASSF1A基因甲基化并上调其表达

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对卵巢癌细胞系A2780Ras相关区域家族1基因（RASSFl）甲基化及其表达的影响。方法体外培养A2780细胞,用0、10、30和50μmol／LEGCG与A2780细胞孵育24-72h,采用甲基化特异性PCR（MSP）检测RASSFlA基因启动子区域的甲基化改变情况;提取EGCG处理后A2780细胞的RNA,用逆转录PCR（RT-PCR）检测RASSFlA的表达水平。结果静息状态下,MSP结果显示A2780细胞可检测出RASSFlA基因启动子区域有明显的甲基化条带,当与50μmol／LEGCG孵育72h后,甲基化水平有所减弱,而非甲基化基因增多。RT-PCR显示EGCG呈剂量和时间依赖性地促进A2780细胞RASSFlA基因mRNA和蛋白表达。结论EGCG能使RASSFlA基因去甲基化,并上调其非甲基化基因和蛋白的表达水平,这可能是其抗肿瘤的奄耍机制。     

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和West-ern blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响。结果 As2 O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P<0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P<0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达。结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷逆转RASSF1A基因甲基化对人乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的：探讨启动子甲基化对乳腺癌MCF-7细胞RASSF1A基因的作用及5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）干预对启动子甲基化的影响,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法：用1,3,5,7,9μmol/L不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株,通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响;建立5μmol/L,10μmol/L的浓度梯度流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡率的影响,MSP（甲基化PCR）检测5-Aza-CdR处理前后RASFF1A抑癌基因的甲基化状态,RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA表达情况.结果：5-Aza-CdR抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞周期停滞在G0/G1期,呈浓度依赖性.经5-Aza-CdR处理人乳腺癌MCF-7细胞后,MSP检测RASSF1A基因发生了甲基化,RT-PCR检测RASSF1A mRNA恢复了表达.结论：RASSF1A基因启动子甲基化是导致其失活的主要原因,5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞株MCF-7细胞RASSF1A基因启动子甲基化状态,使其重新表达．     

曲古抑菌素A对人胃癌细胞SGC-7901生长及bcl-2、caspase-3mRNA表达的影响

目的研究曲古抑菌素A（TSA）对人胃癌细胞的增殖、凋亡及bcl-2、caspase-3 mRNA表达的影响及其意义。方法体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,MTT法检测不同浓度TSA作用不同时间后细胞的增殖情况;流式细胞术检测不同浓度TSA作用48 h后的细胞凋亡情况;RT-PCR检测胃癌细胞中bcl-2、caspase-3 mRNA表达情况。结果不同浓度TSA作用不同时间后,随着时间延长及浓度增高,细胞的增殖抑制明显,呈现明显时间-效应关系及剂量效应关系;与阴性对照组比较,随着TSA浓度的增加,胃癌细胞SGC-7901的早期凋亡率逐渐增高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与阴性对照组比较,胃癌细胞中bcl-2 mRNA随TSA浓度的增高,表达逐渐下调,而caaspase-3mRNA随TSA浓度的增高表达逐渐上调,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 TSA对人胃癌细胞SGC-7901具有明显生长抑制作用,呈时间与剂量依赖性;能诱导人胃癌细胞SGC-7901发生早期凋亡能诱导胃癌细胞株SGC-7901细胞发生早期凋亡;TSA抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖与诱导凋亡作用可能与bcl-2 mRNA表达下调、caspase-3mRNA表达上调有关。     

沉默Beclin1基因对β-榄香烯抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖与诱导自噬的影响

目的探讨Beclin1基因对β-榄香烯抗人胃癌SGC-7901细胞增殖及自噬诱导的影响。方法用前期实验构建成功的GV112-Beclin1-shRNA1(short hairpin RNA,短发夹RNA)慢病毒载体感染人胃癌SGC-7901细胞。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测β-榄香烯对SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及沉默Beclin1基因后对β-榄香烯抗增殖能力的影响。免疫蛋白印迹(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3-II、P62的表达,评价β-榄香烯作用SGC-7901后的自噬水平和Beclin1基因沉默对β-榄香烯诱导自噬的影响。结果 MTT法显示,β-榄香烯能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制作用随浓度的增加而递增(浓度为20、50、100μg/mL比0μg/mL时,抑制率为21.5%、31.7%、37.4%比0,P<0.05);沉默Beclin1基因后β-榄香烯抑制胃癌SGC-7901细胞抑制率增加(42.3%比36.1%,P<0.05)。Western blot法显示,β-榄香烯能诱导SGC-7901细胞发生保护性自噬,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达上调,P62蛋白表达下降,沉默Beclin1基因可抑制β-榄香烯对SGC-7901细胞保护性自噬的增强,LC3-Ⅱ蛋白表达水平下降,P62蛋白表达增加。结论β-榄香烯可诱导胃癌SGC-7901细胞发生保护性自噬,下调Beclin1基因有助于降低保护性自噬的发生,从而增强β-榄香烯的抗癌效果。     

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-AAG）对人胃癌细胞SGC-7901
细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生
长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化
及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901 细胞中Fas 蛋白的表达。结果MTT 法显示17-AAG 能明显抑制胃癌
SGC-7901 细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901 细胞发生
G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的
加大,阳性表达率也逐渐增加。结论17-AAG 通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,上调
SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。
     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷调控RASSF1A基因表达对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对人子宫内膜癌（Hu－man endometrial cancer,HEC）-1-B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。方法：应用不同浓度的 5-Aza-CdR处理HEC-1-B细胞,甲基化特异 PCR（Methylation-specific polymerase chain reaction,MSP）法检测处理前后RAS相关域家族1A（RAS association domain family 1A,RASSF1A）基因甲基化状态,应用 RT-PCR方法检测 RASSF1A基因 mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：HEC-1-B细胞 RASSF1A基因启动子区呈高甲基化状态,经过 5-Aza-CdR处理后,RASSF1A基因启动子区呈去甲基化状态,其 mRNA重新表达,细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论：5-Aza-CdR能够逆转RASSF1A基因甲基化状态,调控RASSF1A基因表达,并能有效地抑制HEC-1-B细胞的增殖和诱导细胞调亡。     

大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A去甲基化作用研究

目的研究大黄素是否可增强5AzA-cdR对胰腺癌Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。方法采用细胞增殖实验检测不同浓度大黄素对Panc1细胞的生长抑制情况,焦磷酸盐测序PCR（BSP）分别检测大黄素、5AzA-cdR及大黄素联合5AzA-cdR对Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A甲基化状态的影响,并用荧光定量PCR（FQ-PCR）和Westernblot分别检测p16、RASSF1A及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果大黄素以时间和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长。BSP结果显示大黄素具有微弱的去甲基化作用,5AzA-cdR具有一定程度的去甲基化作用,当两者联用时,去甲基化作用更加显著;FQ-PCR和Westernblot结果显示大黄素与5AzA-cdR联用时,p16、RASSF1A的表达水平均较空白对照明显增高（均P＜0.05）,DNMT1、DNMT3a的表达水平均较空白对照明显降低（均P＜0.05）。结论大黄素与5AzA-cdR联用可通过降低DNMT1和DNMT3a的表达水平来增强5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。     

山竹提取物对胃癌SGC-7901细胞的体外实验研究

目的观察山竹提取物（GME）对人胃癌细胞SGC-7901增殖情况的影响,探讨其作用机制。方法采用新型四氮唑盐法（MTS）检测GME对SGC-7901细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测GME对SGC-7901细胞凋亡和诱导活性氧（ROS）水平的影响;采用Westernblot检测不同浓度GME对BGC-7901细胞的PTEN、Bax、Bcl-2表达的影响。结果GME显著抑制SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）,与阳性对照组5-氟尿嘧啶（5-FU）相比抑制率也较高（P＜0.05）,其半数抑制浓度为：7.89滋g/ml。经5、7.5滋g/ml的GME处理24h后,可有效促进SGC-7901细胞凋亡（P＜0.05）,ROS水平的累积;GME相同方式处理后,SGC-7901细胞中PTEN和Bax的蛋白表达量上调,Bcl-2蛋白表达量降低（P＜0.05）。结论GME能够显著抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,能够诱导SGC-7901细胞ROS水平的累积,并通过影响PTEN、Bax和Bcl-2蛋白的表达,促进其凋亡。     

siRNA干扰Msi1对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的探讨siRNA沉默Msi1基因表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移的影响。方法针对Msi1 mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞。RT-PCR法检测Msi1基因表达;Westernblot检测survivin、caspase3及MMP-9表达;MTT法检测SGC-7901细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果Msi1 siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中Msi1的表达,与空白对照组比较,Msi1 siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P<0.05);survivin、MMP9蛋白表达水平显著下调(P<0.05),而caspase3蛋白表达水平上调(P<0.05);Msi1 siRNA组凋亡率增高。结论沉默Msi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、侵袭与转移有负性调节作用。