大鼠单侧输尿管梗阻肾间质纤维化动物模型的实验研究

目的观察单侧输尿管梗阻大鼠模型中肾功能、肾病理改变、肾组织-αSMA表达的变化,验证UUO制作RIF动物模型的可行性。方法将32只Waster大鼠随机分为假手术组、模型组,每组16只。在术后3、10、203、0 d每组各处死4只,处死前1 d测定各组大鼠24 h尿蛋白定量,处死时抽取其腹主动脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;左肾组织行HE染色,动态观察肾病理学变化,评定各组大鼠肾间质损害程度;免疫组化方法测定肾间质-αSMA,并分析其与肾间质损伤指数的相关性。结果各组大鼠24 h尿蛋白无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血肌酐、尿素氮在第3天时无统计学意义(P>0.05)。模型组血清肌酐、尿素氮在10 d时高于假手术组(P<0.01),20d达到高峰,继之出现下降。模型组的肾间质损伤指数及-αSMA的表达明显高于假手术组(P<0.01),-αSMA表达的相对量与肾间质损伤指数呈正相关(r=0.92,P<0.001)。结论UUO可以快速建立RIF动物模型,并作为延缓肾功能损害治疗的理想模型。     

曲尼司特对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化调节作用的实验研究

目的　探讨曲尼司特 (Tranilast)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法　将3 6只大鼠行右侧输尿管结扎 ,另 18只行假手术 (SIAM) ,结扎后大鼠随机分成模型组 (UUO)组和药物组 (Tranilast) ,用药组于术前一天开始给予Tranilast 2 0 0mg·kg-1·d-1,术后第 5、10及 15天分别处死各组大鼠中的 6只 ,用免疫组化方法测定肾间质转化生长因子 β(TGF -β) ,α 平滑肌动蛋白 (α SMA)及Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原 (coIⅠ .coIⅢ )的表达并行HE、MASSON染色 ,并观察肾脏病理变化。结果　Tranilast可显著减少TGF -β ,α SMA ,coIⅠ ,coIⅢ的表达 (P <0 0 5 ) ,有效地改善肾脏的病理学改变。结论　曲尼司特抑制输尿管梗阻后肌成纤维细胞 (MyoF)释放TGF -β而调节胶原的合成 ,减少肾间质Ⅰ型 ,Ⅲ型胶原的沉积 ,从而改善UUO所致肾损伤 ,对实验性肾间质纤维化有一定的防止作用     

大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化与TGFβ1 mRNA表达的关系

探讨转化生长因子β１在单侧输尿管梗阻所致肾间质纤维化中的作用,方法应用原位杂交,生化分析及病理形态学观察等技术,研究ＵＵＯ术后１、３、７、１４、２１ｄ不同时相肾皮质中ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达与小管间质病变,羟脯氨酸代谢的关系。结果ＵＵＯ肾组织中羟脯氨酸含量农渐增加及间质面积增宽,伴ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增高。结论ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达增加是ＵＵＯ致肾间质纤维化的重要原因之一。     

新纤维化相关因子SFTPA2在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达和作用

［摘要］目的　检测新纤维化相关因子SFTPA2在大鼠肾间质纤维化模型中的表达变化．方法　64只SD大鼠,雌雄各半,随机分为单侧输尿管梗阻模型组（UUO）、假手术组、siRNA组和阴性对照组,分别于术后3 d、5 d、7 d、14 d分批（n＝4）处死,留取手术侧（模型组梗阻侧）肾脏组织,采用HE染色评价肾小管间质纤维化损伤;采用ELISA法检测大鼠血SFTPA2、转化生长因子（TGF-β1）、平滑肌肌蛋白（α-SMA）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达;采用western blot法检测肾皮质SFTPA2、E-cadherin、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达水平．结果　肾脏组织形态学观察显示,与假手术组相比,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重．ELISA实验结果表明,与假手术组相比,模型组大鼠血液中TGF-β1 、SFTPA2的表达随着梗阻时间延长逐渐升高,7 d起明显升高（P＜0.05）,于14 d达高峰;与阴性对照组相比,siRNA组大鼠血液中TGF-β1 的表达于7 d开始升高,14 d开始下降（P＜0.05）,而SFTPA2的表达于第5天开始升高,14 d开始下降（P＜0.05）．Western实验结果表明,模型组中SFTPA2的表达在术后7 d开始上升,于14 d达高峰;siRNA组中SFTPA2的表达在术后3 d开始上升,于7 d达高峰,14 d开始下降．但TGF-β1 和SFTPA2未表现出明显的相关性． 结论　在大鼠肾间质纤维化模型中,大鼠血液及肾组织中SFTPA2的表达增加,提示SFTPA2与肾纤维化相关;TGF-β1 与SFTPA2无明显相关性．     

单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中氧化应激的变化

目的采用单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化大鼠模型，观察UUO后肾脏病理和肾组织羟脯氨酸（Hyp）含量及各氧化应激指标的改变，探讨氧化应激在肾间质纤维化中的作用。方法 成年健康Wistar大鼠24只，随机分为两组（n=12）：模型组（UUO组）大鼠麻醉后打开腹腔分离左侧输尿管，并于靠近肾盂段行左输尿管结扎；假手术组（Sham组）仅分离输尿管，不行结扎。两组大鼠于手术后10d处死取左侧肾脏，HE和Masson染色观察大鼠肾脏常规病理；以化学比色法测定梗阻侧肾组织匀浆中羟脯氨酸（Hyp）的含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）的含量。组间比较采用单因素方差分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果 大鼠行单侧输尿管结扎10d后，梗阻侧肾脏肿大、肾实质变薄，肾间质水肿，弥漫炎细胞浸润，肾小管扩张或萎缩，部分肾小管腔内有蛋白或细胞管型，间质趋向纤维化。与Sham组相比，UUO组梗阻侧肾脏病理改变明显，且肾组织中Hyp和MDA含量增加（P〈0．01），T—AOC含量和T—SOD活性下降（P〈0．01）。相关分析显示肾组织中Hyp和MDA含量与Masson染色中胶原沉积成正相关，（r1=0.69，r2=0.66，P〈0．01）；肾组织中T—SOD活性和T—AOC含量与Masson染色中胶原沉积成负相关，（r3=-0．57，P〈0．05，r4=-0．59，P〈0．01）。结论 单侧输尿管梗阻可以诱导大鼠肾间质纤维化，氧化应激参与肾间质纤维化的形成。     

淋巴增强子结合因子1在肾间质纤维化中的作用及机制

目的 探讨淋巴增强子结合因子1(lymphoid enhancer binding factor 1, LEF1)在肾间质纤维化中的作用及机制。方法 将18只C57BL/6小鼠,采用完全随机设计分为单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)3天组、UUO 7天组和假手术组。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及Masson染色观察肾组织病理变化,Western blot法及免疫组化法检测肾组织中LEF1的表达。Western blot法检测10ng/ml及20ng/ml转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)刺激24h后LEF1的蛋白表达。体外培养HK-2细胞,并分为4组,即Ctrl siRNA组、LEF1siRNA组、Ctrl siRNA+TGF-β1组和LEF1siRNA+TGF-β1组。Western blot法检测HK-2中LEF1、纤连蛋白(fibronectin, FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、多聚磷酸核糖聚合酶剪切体(cleaved poly ADP-ribose polymerase, cleaved PARP)、半胱氨酸蛋白酶-3剪切体(cleaved caspase-3)等蛋白的相对表达水平,比较4组细胞各蛋白相对表达水平的差异。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果 UUO组出现小管扩张、炎性细胞浸润及胶原沉积,LEF1表达高于假手术组(P<0.05)。TGF-β1可导致HK-2细胞中LEF1的蛋白表达水平升高(P<0.05)。LEF1siRNA转染HK-2细胞敲低其表达可以减轻细胞的纤维化反应(P<0.05)。敲低LEF1可以延缓上皮间充质转化(epithelial–mesenchymal transition, EMT)进程并减轻HK-2的凋亡(P<0.05)。结论LEF1可以通过促进肾小管上皮细胞发生EMT进而诱导凋亡,最终导致肾间质纤维化。     

缬沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂(AT1RA)缬沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其可能机制。方法35只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和缬沙坦组(n=10),建立大鼠UUO模型,于术后4周检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、尿β2-微球蛋白(β2-MG);取梗阻侧肾组织,以H-E、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及肝细胞生长因子(HGF)在肾间质的阳性染色,并进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠SCr、BUN、血浆AngⅡ,尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著升高(P<0.01)。与模型组相比,缬沙坦组大鼠SCr、BUN,尿NAG及β2-MG水平差异无统计学意义(P>0.05),但血浆AngⅡ及肾间质α-SMA、FN、PAI-1、TGF-β1表达均显著降低,HGF表达则显著增高(P<0.01)...     

单侧输尿管梗阻法制作大鼠肾间质纤维化模型的改进

目的建立改良的大鼠肾间质纤维化模型。方法用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,动态观察4周。治疗的第12、、3周末检测血肌酐、尿素氮含量等指标,观察肾功能变化;4周末采用HE染色、六胺银(periodic acid-silver methenamine,PASM)染色和丽春红染色观察肾组织病理变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮均有明显上升;模型组大鼠大部分肾小球呈玻璃样变,硬化的肾小球周围所属肾小管萎缩、基底膜增厚,部分肾小管消失;少数残存的肾小球肥大并周围肾小管扩张严重;肾间质胶原纤维增生和大量炎细胞浸润。结论该模型有明显的肾间质纤维化特征,且死亡率低,适合肾间质纤维化的实验研究。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨福辛普利对肾间质纤维化的影响。方法采用单侧输尿管结扎法（UUO）致肾间质纤维化的动物模型,以福辛普利为阳性对照,测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、血浆血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）水平,免疫组化和原位杂交方法分别检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1mRNA）的表达。结果福辛普利能降低血Scr、BUN、AngⅡ水平,抑制α-SMA、TGF-β1mRNA表达上调,减轻肾间质纤维化程度。结论福辛普利有早期防治肾间质纤维化作用。     

氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效观察

目的：观察氟非尼酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的疗效,探讨氟非尼酮对肾间质纤维化大鼠肾 组织中I型胶原(collagen type I,Col I),III型胶原(collagen type III,Col III),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA),结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor, PDGF)表达的影响。方法：将15只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和氟非尼酮组(n=5)。对模型组和氟非尼酮 组大鼠行左侧输尿管结扎术建立单侧输尿管梗阻模型。氟非尼酮组从造模前24 h开始以氟非尼酮[125 mg/(kg.d)]溶于 0.5%羧甲基纤维素钠(sodium carboxyl methyl cellulose,CMC-Na)中灌胃,模型组和假手术组以等体积0.5% CMC-Na灌 胃。于术后14 d处死大鼠,取梗阻侧肾组织行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变;用免疫组织化学检测 Col I,Col III,α-SMA,PDGF,CTGF的蛋白表达;用RT-PCR检测Col I,Col III,PDGF,CTGF mRNA表达。结果：模 型组肾间质损伤指数、胶原相对面积评分及Col I,Col III mRNA和蛋白表达均较假手术组增高(P<0.05),氟非尼酮治 疗后明显改善(P<0.05)。模型组肾组织α-SMA,PDGF,CTGF蛋白表达及PDGF,CTGF mRNA表达均较假手术组明显 增加(P<0.05),氟非尼酮治疗后表达均明显减少(P<0.05)。结论：氟非尼酮(125 mg/kg.d)能够显著改善单侧输尿管梗阻 大鼠肾间质纤维化,其作用机制与抑制肌成纤维细胞的活化及关键促纤维化因子PDGF和CTGF的表达有关。     

细胞间粘附分子1反义寡核苷酸对小鼠肾小管间质病变的治疗作用

目的 探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在肾小管间质炎性病变中的作用。方法 将劳光标记的ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸经静脉注射至正常小鼠体内,观察其分布状况。小鼠在行单侧输尿管梗阻术后从尾静脉注射ＩＣＡＭ－１反义寡核苷酸（７只）,术后第７天留取输尿管梗阻侧肾脏检测肾组织ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达并作病理检查。同时设立对照寡核苷酸（８只）和注射用水组（６只）作为空白对照。结果 ＩＣＡＭ－１反义寡核苷     

Ginsenoside Rb1, a panoxadiol saponin against oxidative damage and renal interstitial fibrosis in rats with unilateral ureteral obstruction

Objective:To investigate the possible protective effect and mechanism of ginsenoside Rb1 against oxidative damage and renal interstitial fibrosis on rats with unilateral ureteral obstruction(UUO). Methods:In total,80 male rats were randomly divided into 4 groups,20 in each group:the sham operated group (SOR),UUO group,UUO with ginsenoside Rb1 treatment group(treated with intraperitoneal injection of 50 mg/ kg daily) and UUO with Losartan treatment group(as the positive control,treated with 20 mg/kg by ga...     

肝细胞生长因子在大鼠肾间质纤维化中作用机制的研究

目的：通过观察大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)后，肝细胞生长因子(HGF)的表达及其与转化生长因子-β1(TGF-β1)之间的动态变化关系，以探讨HGF在肾间质纤维化中的作用机制。方法：将36只雄性SD大鼠中的18只行左侧输尿管结扎术，另外18只行假手术。于术后第3、7、14天分别处死各组中的6只大鼠，用免疫组化方法测定HGF、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及纤维粘连蛋白(FN)的表达，并行苏木精-伊红(H—E)和Masson染色，动态观察肾的病理学改变。结果：在肾间质纤维化早期，肾HGF表达明显增加而TGF-β1表达却明显下降；在肾间质纤维化晚期，肾HGF表达明显下降而TGF-β1表达却明显上升，同时α-SMA和FN的表达明显增强，肾的病理改变明显，而且HGF表达与TGF-β1、α-SMA及FN表达呈明显负相关。结论：HGF可能是肾间质纤维化进程中重要的调节因子，它与TGF-β1相互作用，共同调节肾间质纤维化的发生和发展。     

地灵丹汤对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的防治作用

目的：研究中药复方地灵丹汤对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）致肾间质纤维化模型大鼠肾间质纤维化的防治作用及其可能机制。 方法：将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依那普利组及地灵丹组。采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型，观察血尿素氮、血清肌酐和24h尿蛋白定量及肾组织病理改变，并采用免疫组织化学法检测转化生长因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及层黏连蛋白（laminin，LN）的表达。 结果：第7天模型组肾间质大量炎症细胞浸润及胶原表达，TGF-β1、FN和LN表达面积百分率较假手术组明显增加（P＜0．05）；地灵丹组间质纤维化面积较模型组减少（P＜0．05）。第14天地灵丹组和依那普利组肾间质TGF-β1、α-SMA、FN和LN表达面积百分率较模型组减少（P＜0．05），BUN、SCr和24h尿蛋白无明显差异。第21天地灵丹组SCr、肾间质纤维化和TGF-β1表达面积百分率较依那普利组和模型组下降（P＜0．05）。 结论：地灵丹能减轻单侧输尿管梗阻模型大鼠的蛋白尿和肾间质纤维化，抑制TGF-β1、α-SMA、FN和LN的表达。在较长时间应用后，地灵丹对模型大鼠的肾功能保护作用优于依那普利。     

Effects of Mycophenolate Mofetil on Renal Interstitial Fibrosis after Unilateral Ureteral Obstruction in Rats

Theseverityoftubulointerstitialfibrosishaslongbeenconsideredasthecrucialdeterminantinprogres siverenalinjuryandlong term prognosisinbothhu manandexperimentalglomerulonephritis[1] Howtoimpedeinterstitialfibrosisandlimittheprogressionofchronicrenaldiseasestowardsend stagerenaldisease(ESRD)becomeanewfocusinthisfield Mycophenolatemofetil (MMF)isahighlyspe cificimmunosuppressor Interestingly ,MMFisanimmunosuppressivedrugthatisalsoknowntohaveaneffectoncellsoutsideimmunesystemandparticu larlyhav…     

氧化苦参碱对单侧输尿管梗阻大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的 探讨氧化苦参碱对大鼠肾间质纤维化的影响.方法 将48只SD雄性大鼠随机分为假手术(SOR)组、单侧输尿管梗阻(UUO)组、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂氯沙坦组(LOS组)和氧化苦参碱组(OM组).大鼠肾组织行苏木精-伊红和Masson染色,计算肾间质纤维化的相对面积.免疫组化技术检测ColⅠ和FN在肾组织中的表达.结果 OM治疗组和LOS治疗组能有效改善UUO大鼠的肾脏问质纤维化,ON组和LOS组中各时间点ColⅠ和FN蛋白的表达均分别低于UUO组(P<0.05),但高于SOR组(P<0.05),两组治疗间差异无统计学意义(P>0.05).结论 氧化苦参碱在一定程度上可减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度,延缓肾脏间质纤维化.