恶性实体瘤患者自体CIK细胞的体外扩增及初步临床应用

目的观察恶性实体瘤患者外周血来源的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)在自体血浆中的增殖特性,回输治疗的安全性及近期疗效。方法用淋巴细胞分离液分离获取40例恶性实体瘤患者外周血单个核细胞,在含10%自体血浆的RPMI-1640培养液中添加rhIFN-γ、Anti-CD3mAb和rhIL-2联合诱导单个核细胞为CIK细胞。在培养第13天进行细胞计数,通过流式细胞术检测细胞免疫表型,并将细胞进行自体回输。结果在培养第13天,CIK细胞得到大量扩增,细胞数增加30.0±5.2倍。CD3 和CD3 CD16 CD56 细胞在培养第13 d分别为(93.0±6.1)%和(25.8±12.2)%。40例恶性实体瘤患者回输自体CIK细胞后,6例部分缓解;13例好转;9例病情稳定;12例进展。治疗总有效率为15%。治疗过程中主要出现畏寒、发热,未观察到其它明显的毒副作用。结论恶性实体瘤患者自体血浆可以高效扩增CIK细胞,回输治疗安全有效,且无明显的毒副作用。     

恶性实体瘤患者自体PHA-LAK细胞过继性免疫治疗对淋巴细胞表型及功能的影响

目的：研究回输自体PHA-LAK细胞对恶性实体瘤患者淋巴细胞表型及功能状态的影响．方法：入组204例实体瘤患者．并以10例健康成人作为对照．采集与分离外周血单个核细胞，体外扩增PHA—LAK蜘胞，采用流式细胞术分析淋巴细胞表型．MTT法榆测淋巴细胞杀伤活性。结果：实体瘤患者较正常人淋巴细胞亚群CD3 ^ ／CD4^ 细咆、CD、3^ /CD8^ 细胞、B细胞、NK细胞减少，淋巴细胞杀伤活性下降。扩增的PHA-LAK是以激活的淋巴细咆亚群CD.^ ／CD8^ 细胞、CD3^ ／CD56^ 细胞、CD4^ ／CD2^ 细胞为主的异质性群体，其数量及杀伤活性明显增加，激话淋巴细胞标记性抗原分子表达亦增加：PHA-LAK细胞回输冶疗后．患者外周血上述激活淋巴细胞亚群数量增加．淋巴细胞系伤活性增强。结论：实体瘤患者淋巴细胞亚群数量及功能低下．PHA-LAK细胞过继性免痉治疗使患者体时激活淋巴细胞亚群数量增加．杀伤活性增强。     

CIK细胞治疗放化疗后肿瘤患者的临床观察

目的:观察放化疗后的肿瘤患者回输CIK细胞后生活质量及细胞免疫功能变化,探讨CIK细胞回输对放化疗后的肿瘤患者的治疗作用.方法:放化疗治疗后的肿瘤患者31例,分别抽取CIK细胞回输治疗,检测外周血细胞免疫指标,正常人14例作对照,并比较CIK细胞回输治疗后生活质量改善情况.结果放化疗后的肿瘤患者外周血 CD3+、CD4+细胞百分率下降,CD8+细胞百分率上升;CD4+/CD8+比值下调,CD16+CD56+细胞减少,与正常人相比差异有统计学意义(P<0.05),CIK治疗后上述指标较治疗前有改善(P<0.05).CIK细胞回输治疗后患者生活质量评分均较治疗前明显改善(P<0.05).结论:放化疗后的肿瘤患者免疫功能下降,而CIK细胞回输治疗安全可靠,可以改善放化疗后肿瘤患者近期免疫功能及生活质量,可作为放化疗后肿瘤患者辅助治疗的一种选择.     

CIK细胞的特点及其在肿瘤生物治疗中的作用

细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell,CIK)是一种新型的免疫活性细胞,它是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞,由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子,故又被称为NK细胞样T淋巴细胞,CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非MHC限制性杀瘤的优点.在基础及临床研究中对CIK的探讨在不断深入,以期获得更有效的肿瘤生物治疗方法,为临床治疗提供依据.     

CIK细胞-肿瘤过继免疫治疗的新希望

1 概述CIK细胞（cytokine－induced killer）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb、IL－2、IFN－γ、IL－1α等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。由于该种细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子1,故又被称为NK细胞样T淋巴细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。因此,应用CIK细胞被认为是新一代抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。2 CIK细胞表型特点CIK细胞中的效应细胞CD3＋CD56＋细胞在正常人外周血中极其罕见,仅1％～5％,在体外经多因子培养28～30天,…     

CIK细胞过继性免疫治疗对结直肠癌化疗患者免疫指标的影响

目的 探讨 CIK 细胞回输对化疗后结直肠癌患者免疫功能的影响.方法 检测化疗联合 CIK 细胞回输后结直肠癌患者的外周血 CD3+细胞百分率,CD4+细胞百分率,CD4+/CD8+比值,NK 细胞百分率.结果 化疗联合 CIK 细胞回输后肿瘤患者CD3'、CD4+、CD4+/CD8+、NK 均显著高于化疗前组,且 CD8+显著低于对照组(P<0.05).结论 FOLFOX 方案化疗后序贯应用 CIK 细胞过继性免疫治疗,可提高结直肠癌患者的免疫功能,有可能降低术后复发和转移.     

CIK细胞治疗晚期肝癌患者免疫功能变化及安全性评价

目的评价细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)治疗晚期肝癌患者的细胞免疫功能变化及安全性。方法检测30例健康志愿者和98例晚期肝癌患者经导管肝动脉化疗栓塞(TACE)术前、术后第7天、CIK回输后第7天的外周血T细胞亚群变化,并观察CIK细胞治疗的毒副反应。结果肝癌患者外周血CD3+、CD3+CD4+细胞比例、CD4+/CD8+比值明显低于健康志愿者。CIK治疗后外周血CD3+、CD3+CD4+细胞的比例显著增多,CD4+/CD8+比值升高。CIK细胞回输后,17例患者出现发热,持续时间2～4 h,大部分自行消退,无其他毒副反应。结论 TACE术后序贯应用CIK细胞过继性免疫治疗,可以提高晚期肝癌患者的细胞免疫功能,安全性良好,有助于降低晚期肝癌患者TACE术后的复发和转移机会。     

肺癌患者淋巴结内培养CIK细胞的抑瘤实验和临床前期研究

背景与目的：细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)兼具T淋巴细胞强大的杀瘤活性与自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)杀瘤的非MHC限制性。CIK细胞可直接杀伤肿瘤细胞,调节并增强免疫功能,同时不损害机体免疫环境,其在治疗恶性肿瘤中的作用已得到广泛认可。本研究旨在观察肺癌手术患者淋巴结培养获得的CIK细胞的杀瘤活性及其临床应用的安全性。方法：获取上海市胸科医院6例经手术治疗的非小细胞肺癌患者的淋巴结及外周血,体外培养分别获得CIK细胞。通过倒置显微镜观察两组CIK细胞的形态,检测淋巴结组及外周血组CIK细胞表型,应用CCK8显色法检测两组CIK细胞对A549细胞株的抗增殖作用,观察回输后血液中癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)的变化及其临床应用中的不良反应。结果：淋巴结组和外周血组CIK细胞CD3⁺CD56⁺T细胞的比例均＞30%。不同效靶比淋巴结组CIK细胞对A549细胞的抑制率均高于外周血组(P<0.05)。回输淋巴结内CIK细胞后肺癌患者有不同程度CEA下降。不良反应轻微,主要表现为皮疹和发热。结论：肺癌手术患者的淋巴结可用于培养CIK细胞,其活性优于外周血来源的CIK细胞,临床前期实验证实安全性高。     

CEA多肽致敏的树突状细胞(DC)治疗晚期非小细胞肺癌临床初步研究

背景与目的树突状细胞(DC)为基础的免疫治疗是肿瘤治疗的新领域,对部分恶性肿瘤有较好的疗效。本研究的目的是应用癌胚抗原(CEA)致敏的DC治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC),观察其临床应用方法、毒副反应和剂量效应。方法选择CEA高表达的肺癌患者,体外培养外周血单个核细胞来源的DC及CIK,CEA多肽于培养的第5天加入培养液以致敏未成熟DC。将DC和CIK细胞静脉回输患者,观察回输后的疗效和毒副反应。结果共22例晚期NSCLC患者接受了DC治疗,回输DC数量为2.5×106~9.6×107,平均5.03×106;回输CIK细胞数量为3.4×108~46×108。治疗后CD3、CD8、NK、IFN-γ明显升高(P<0.05)。全组1年生存率为68.2%(15/22)。主要毒副反应为发热和皮疹。结论DC生物免疫治疗具有较好的耐受性和安全性。     

DC-CIK 治疗难治性多发性骨髓瘤的临床研究

目的探讨树突状细胞(DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗难治性多发性骨髓瘤的疗效和安全性。方法 41例难治性多发性骨髓瘤患者,根据患者意愿分为22例实验组和19例对照组。将实验组自体DC-CIK细胞进行体外扩增,再过继回输进行治疗。对照组患者接受维持治疗。对过继治疗前后患者的免疫指标以及临床疗效进行对比和观察。结果诱导后CD表面CD1a、CD83、CD86和HLA-DR分子阳性率均较诱导前显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。诱导后DC-CIK表面CD3、CD8和CD56阳性率均较CIK有显著提高,差异有统计学意义(P<0.01)。治疗3个月后,实验组患者QOL、Ag-NOR和外周血IL-12等指标均较对照组有显著优化,差异有统计学意义(P<0.05)。3个月治疗后,实验组患者肾功能、24 h尿液轻链、血清M蛋白、β2-M、骨髓瘤细胞比例均相较对照组有显著改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DC-CIK过继治疗难治性MM具有较好的临床疗效,可帮助患者带瘤长期生存,获得较大受益。     

DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗对恶性肿瘤患者凝血功能变化的影响

目的:探讨DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗前、后的晚期恶性肿瘤患者凝血功能、D-二聚体及血小板的变化.方法:选择DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗的61例晚期恶性肿瘤患者,在采集细胞前1天内及DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗后的3天内行凝血功能、D-二聚体及血小板的检测.比较DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗前、后的凝血功能、D-二聚体及血小板的差异.结果:DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗后D-二聚体、FDP均较前升高(P＜0.05),差异有统计学意义;PT、PT_INR较治疗前有所升高,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论:DC、CIK、CD3AK细胞免疫治疗3天内D-二聚体及FDP水平升高,在一定程度上加重晚期肿瘤患者高凝状态或血栓形成的风险.     

CIK细胞治疗老年人中晚期胃癌的副反应分析

目的：探讨使用细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells，CIK细胞）免疫治疗老年中晚期胃癌的副反应及其处理方法。方法：采用生物技术诱导培养CIK细胞，经培养后的CIK细胞回输给老年中晚期胃癌患者，同时观察输注后的临床反应。结果：在回输后29例老年中晚期胃癌患者中PR8例，MR9例，SD7例，PD5例，总缓解率为58.6％。患者的全身反应及局部反应包括寒战13例，发热9例，恶心呕吐1例，全身不适3例，经对症处理后无一例患者出现休克、毛细血管渗漏综合征、皮疹与血尿常规、肝肾功能异常。结论：用自体CIK细胞治疗老年中晚期胃癌，可使老年中晚期胃癌患者的临床症状和体征得到改善，治疗中的副反应经对症处理可以缓解。     

In vivo distribution and antitumor effect of infused immune cells in a gastric cancer model

Adoptive cellular transfer has been employed for cancer immunotherapy, including patients with gastric cancer. However, little is known about the distribution of effector cells after their injection via different pathways. In this study, we used human gastric cancer cells (BGC823) tagged with enhanced green fluorescent protein (EGPF) to establish a subcutaneous gastric cancer model in nude mice. Cytokine-induced killer (CIK) cells and cytotoxic T?lymphocytes (CTLs) were generated from human peripheral blood and labeled with red fluorescent PKH26. A portion of CIK?cells was armed with CEA/CD3-bispecific single-chain antibody. When CIK?cells were injected into nude mice with established subcutaneous gastric cancer via peritumoral (p.t.), intravenous (i.v.) and intraperitoneal (i.p.) infusion respectively, the distribution of cells was observed using a live fluorescence imaging system. We found that only a very small number of CIK?cells could travel to the tumor site after i.p. or i.v. infusion, and they inhibited subcutaneous tumor growth in?vivo only immediately following injection. In contrast, p.t. injection resulted in a significantly higher accumulation of CIK?cells at the tumor site for 48 hours and mediated the greatest tumor inhibition compared with the other two injection methods. In addition, we compared the antitumor activity of CIK, CEA/CD3-bscAb-CIK and CTL?cells in?vitro and in?vivo after p.t. injection. Among the three types of immune cells, CTLs demonstrated the strongest antitumor activity both in?vitro and in?vivo. CEA/CD3-bispecific single chain antibody could effectively link T?lymphocytes and tumor cells expressing CEA, and resulted in significantly higher accumulation of CIK?cells at the tumor site compared with the parental CIK?cells. This study indicates that peritumoral injection of immune effector cells by minimally invasive surgical procedures represents an effective delivery method of adoptive cellular immunotherapy. Tumor-specific immune cells, such as CTLs, are a better choice of effector cells than CIKs in cellular immunotherapy. Furthermore, CD3+ immune cells armed with the CEA/CD3-bispecific single chain antibody could more effectively travel to and accumulate at the site of tumors expressing CEA, such as gastric cancer.     

树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性血液肿瘤患者免疫功能的影响

目的 观察应用树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK细胞）治疗恶性血液肿瘤对患者外周血T淋巴细胞亚群和免疫蛋白的影响.方法 选择25例恶性血液肿瘤患者,采集外周血单个核细胞,经体外培养获得DC-CIK细胞,并将质检合格的DC-CIK细胞分4次回输给患者,分别于治疗前和治疗后3周抽取外周静脉血,检测T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白变化情况,与30例非肿瘤患者进行比较分析,同时观察治疗过程中的不良反应.结果 25例患者DC-CIK细胞治疗后外周血中的CD3＋、CD3＋ CD8＋、CD3＋ CD16＋ CD56＋、CD3-CD16＋ CD56＋细胞比例较输注前明显增加（P＜0.05）,CD3＋ CD4＋T细胞比例无明显变化（P＞0.05）;外周血免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）浓度无明显变化（P＞0.05）.DC-CIK细胞治疗过程中有2例出现短暂性低热,均可自行缓解.恶性血液肿瘤患者在DC-CIK细胞治疗前与非肿瘤患者比较,外周血CD3＋、CD4＋、NK及NKT细胞比例明显下降（P＜0.05）,外周血中的IgG、IgM及IgA浓度无明显变化（P＞0.05）.结论 DC-CIK细胞免疫治疗能显著提高恶性血液肿瘤患者体内的肿瘤杀伤性T细胞及其效应细胞的数量,改善恶性血液肿瘤患者免疫失衡状态,增强机体抗肿瘤免疫功能,且安全有效,为恶性血液肿瘤的治疗提供了新的选择.     

自体CIK细胞治疗恶性肿瘤的护理

目的 观察73例恶性肿瘤患者进行CIK细胞治疗后的反应及护理体会。方法 73例恶性肿瘤患者使用血细胞分离机采集外周血单个核细胞(PBMC),在体外诱导扩增CIK细胞后给予静脉回输,观察其疗效及不良反应。结果 本组51例患者反馈睡眠质量、食欲、活动耐力、精神状态有不同程度改善,22例患者未见明显改善;除3例出现低热反应外,其余无不良反应发生。结论 CIK细胞治疗是一种安全有效的治疗方法,对患者伤害小,不良反应少,经护理干预,可改善恶性肿瘤患者的生存质量,在过继性免疫治疗中具有良好的应用前景。     

荷CEA-rV的DC诱导的CIK对CEA阳性原代肿瘤细胞的特异杀伤作用

目的：探讨携带CEA重组基因痘苗病毒（CEA-rV）抗原的树突状细胞（DC）诱导的杀伤细胞（CIK）对CEA阳性原代肿瘤细胞的特异性杀伤作用。方法：用脐血制备脐血单个核细胞（UBMC）、DC、CIK、DC＋CIK、CEArV＋DC＋CIK和CEA-rV＋DC＋UNBC细胞。取新鲜切除的食管癌组织和肺癌组织，制备原代培养的CEA阳性肿瘤细胞作为靶细胞。用MTT法测5组效应细胞对两种靶细胞的杀伤活性。结果：1）用CEA兔抗人单克隆抗体鉴定证实两种原代培养靶细胞系CEA阳性细胞。2）流式细胞仪测定DC的分子表型，证实为DC。3）流式细胞仪测定CIK的CD3^＋CD56^＋双阳性细胞达75．4％。4）DC＋CIK和CIK相比，对两种CEA阳性肿瘤细胞的杀伤率差异无统计学意义，P〉0．05。5）CE-rV4-DC＋CIK对两种CEA阳性肿瘤细胞的杀伤率（78．80％）明显高于DC＋CIK（52．94％），P％0．05。结论：CEA—rV＋DC能明显提高CIK细胞对原代培养的CEA阳性肿瘤细胞的杀伤活性，而单纯DC不能提高CIK的杀伤活性，说明CEA—rV在提高CIK对CEA阳性肿瘤细胞的特异杀伤作用中起重要作用。     

CIK细胞体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性的研究

目的：探讨细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的体内外抗宫颈癌HeLa细胞活性。方法：收集8名健康献血者和8名宫颈癌患者的新鲜外周血,分别通过常规方法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,应用相应细胞因子体外诱导分化出CIK细胞,动态观察CIK细胞的体外增殖活性、细胞表型和对HeLa细胞的杀伤活性;在BALB/c裸鼠皮下接种效应细胞,观察宫颈癌患者CIK细胞对接种HeLa细胞的荷瘤鼠的抑瘤作用,同时设淋巴因子激活的杀伤细胞（lymphokine activated killer cells,LAK）和PBMC细胞作为对照。结果：源于健康人和宫颈癌患者的CIK细胞间的增殖活性无明显区别（P〉0.05）。表型分析结果表明,两种来源的CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞均得到了大量扩增,宫颈癌患者CIK细胞中CD3~＋CD56~＋双阳性细胞在实验开始前约占0.13%,到实验后第28天上升到25.8%。体外实验表明,宫颈癌患者的CIK细胞杀伤宫颈癌HeLa细胞的细胞毒活性明显高于PBMC细胞。裸鼠体内实验表明,宫颈癌患者CIK细胞能够显著抑制肿瘤的生长,其抑瘤率可达80.6%,高于LAK细胞的59.1%和PBMC细胞的38.3%（P〈0.01）。CIK治疗后肿瘤体积明显比空白对照组缩小（P〈0.05）。结论：宫颈癌患者CIK细胞具有较强的体内外抗宫颈癌细胞活性,有可能用于临床上宫颈癌的过继性免疫治疗。     

DC-CIK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效观察

目的：探索DC-CIK细胞应用于临床的质量控制及对恶性肿瘤的疗效.方法：选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科中晚期恶性肿瘤患者33例（恶性黑色素瘤3例,肠癌4例,肺癌5例,胃癌3例,食管癌4例,宫颈癌7例,肾癌7例）.采集患者外周血分离PBMC,诱导DC-CIK细胞,并扩增培养.质控检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、感染源、流式细胞术检测免疫表型.将检测合格后的DC-CIK细胞分5次静脉回输入患者体内,每2天回输一次,每疗程5次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应.结果：经诱导后的DC-CIK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求.33例患者经治疗后,完全缓解3例,部分缓解17例,稳定9例,进展4例.总有效率60.6％,临床受益率87.8％.治疗后患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD3＋CD56＋T细胞比例分别为（60.25±7.75）％、（29.76±3.85）％、（30.25±4.35）％和（18.20±4.30）％,较治疗前均明显增高（P均＜0.05）.生活质量KPS评分较治疗前明显上升（P＜0.01）[（75.3±7.6）分vs（58.5±6.2）分].无严重不良反应和化验指标异常.结论：DC-CIK细胞制剂质量控制指标切实可行,对恶性肿瘤有较好的临床疗效,并能有效增强患者的免疫功能.     

抗原致敏DC联合CIK在原发性肝癌治疗中的应用

目的:探讨负载自身肝癌裂解物的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养对CIK体外杀伤活性的影响,并观察抗原致敏DC(Ag-DC)联合CIK治疗原发性肝癌后患者的免疫状态、临床疗效及毒副反应.方法:选择24例原发性肝癌患者,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF和IL-4诱导产生DC,并负载自体肿瘤裂解物;悬浮细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1α体外诱导产生CIK.将Ag-Dc与CIK共培养,观察CIK在体外对肝癌细胞株SMMC-7721的杀伤活性;24例患者接受Ag-DC+CIK的过继免疫治疗,观察疗效.结果:1)Ag-DC与CIK共培养后,CIK体外肿瘤杀伤活性明显提高;2)Ag-Dc联合C1K治疗原发性肝癌可明显改善患者细胞免疫功能,提高临床疗效;3)除一过性发热、畏寒外未见其它不良反应.结论:负载自体肿瘤细胞裂解物的DC疫苗联合CIK可作为原发性肝癌常规治疗的有效辅助手段.     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗恶性淋巴瘤的研究进展

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）是一群体外诱导的以CD3＋ CD56＋T细胞为主的异质细胞群,具有效应CD8＋T细胞的T细胞受体特异性和非主要组织相容性复合体（MHC）限制性抗肿瘤活性的特点.国内外研究结果表明CIK细胞对恶性淋巴瘤有明显的抗肿瘤效应,且有很好的耐受性.提示CIK细胞治疗对于恶性淋巴瘤患者尤其是不能耐受放化疗的淋巴瘤患者具有重要价值.