抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用

目的获得抗HBsAg单链抗体(HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用。方法利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定。结果建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株,其细胞上清效价为1∶160~1∶12 800,腹水效价为1∶50 000~1∶400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a。初步应用结果表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定。结论成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株。     

PCR法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体的研究

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法.方法用免疫-聚合酶链反应（immuno-polymerase chain reanon,PCR）法检测血清抗p53蛋白（一种抑癌基因）抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达.结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人（P＜0.01）.p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关（P＜0.01）.结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具,抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ—39重链可变区基因的克隆与序列分析

从抗人脑胶质瘤单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA，经逆转录-聚合酶链反应（RT－PCR）直接扩增出348bp的重链可变区（VH）CcNA片断，经核着酸序列分析研究，证实已获得了单抗SZ－39重链可变区基因。从而为今后进一步制备基因工程抗体打下了基础。     

抗幽门螺旋菌单克隆抗体的研制及临床应用

抗幽门螺旋菌单克隆抗体的研制及临床应用０５００８１中国人民解放军空军石家庄医院赵满仓，刘菊林，贾艳岩，段雪梅幽门螺旋自（ＨＰ）是一种常见的引起胃粘膜病变的致病菌，它是１９８３年由Ｗａｒｒａｎ和Ｍａｒｓｂａｌｌ首先从胃粘膜组织中培养得到的［１］．此菌与...     

抗TIGIT单克隆抗体的制备及体外生物学活性的初步研究

T细胞免疫球蛋白和ITIM结构域蛋白(TIGIT)通过多种机制抑制固有和适应性免疫,是肿瘤免疫治疗的新型靶点。本研究利用重组人源TIGIT胞外区蛋白免疫BALB/c小鼠(本研究中的小鼠按照国际实验动物护理和使用准则进行使用,并经委托单位京天成生物技术(北京)有限公司实验动物伦理委员会批准),分离并提取小鼠脾淋巴细胞常规融合,成功筛选得到抗TIGIT单克隆抗体c7D3,并初步研究了其生物学活性。结果表明,抗体c7D3能高亲和地结合TIGIT,并能有效阻断TIGIT与配体的结合。细胞功能实验证实, c7D3能激活T细胞,在TIGIT/CD155报告基因实验中促进荧光素酶表达,提高人外周血单个核细胞分泌细胞因子的能力。本研究表明,抗体c7D3具有高亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为新的肿瘤免疫治疗的抗体药物。     

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。     

抗CD20单克隆抗体治疗特发性膜性肾病的研究进展

抗CD20单克隆抗体最初被用于治疗B细胞恶性肿瘤,因其可以削减B细胞数量从而抑制自身抗体的产生而被用于治疗自身免疫性疾病.特发性膜性肾病的传统免疫抑制治疗方案有严重的不良反应,且患者复发率较高,抗磷脂酶A2受体抗体等肾源性自身抗体的发现,为干预抗原-抗体免疫复合物的形成提供了针对性措施.本文就抗CD20单克隆抗体在特发...     

抗人乳腺癌单克隆抗体偶联米托蒽醌白蛋白纳米球的初步研究

乳腺癌是危及女性生命健康最常见的恶性肿瘤,化疗是治疗乳腺癌的重要手段。但抗乳腺癌效果最好的阿霉素有效率也仅为37%[1],这与蒽环类抗肿瘤药物在乳腺中分布甚少有关。米托蒽醌对乳腺癌具有突出疗效,心脏毒性较小[2,3]。因此,本文将其作为模型药物制成白蛋白纳米球,再与抗人乳腺癌(抗ＣｅｒｂＢ2)单克隆抗体进行交联制成免疫纳米球。以提高药物对肿瘤细胞的选择性,达到提高疗效、降低毒副作用的目的。已有药物直接与单克隆抗体结合的研究报道[4],但未见将抗人乳腺癌单克隆抗体与载药纳米球交联的研究报道。仪器与药品Ｄ402Ｆ型电动搅拌机(…     

荧光定量PCR技术检测HCV-RNA的临床价值

目的:探讨丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)载量与抗-HCv含量以及丙氨基转移酶(ALT)水平之间的相关性与符合性.方法:用FQ-PCR法检测232份怀疑HCV感染血清中的HCV-RNA,同时检测ALT和抗-HCV.结果:232份样本中HCV-RNA阳性率为44%(102/232);抗HCV阳性率为50.9(118/232);ALT异常率为42.7%(99/232).HCV平均载量为653×105拷贝/mL血清.抗HCV滴度和ALT异常率随着HCV-RNA载量升高而增加.结论:用FQ-PCR法检测HCV-RNA是评价抗病毒治疗效果的重要指标,更适合临床标本的常规检测.