儿童急性淋巴细胞白血病e2a-pbx1融合基因的表达水平与临床特点、早期治疗反应的相关性

为了探讨急性淋巴细胞白血病儿童初诊的e2a—pbx1融合基因表达水平与患儿临床特点和早期治疗反应的关系．采用实时定量聚合酶链反应定量检测45例患儿初诊e2a-pbx1表达水平和23例诱导缓解治疗第33天时微小残留病（minimal residual disease，MRD）水平；分析初诊e2a—pbx1表达水平、MRD水平与临床特点和早期治疗反应的相关性；比较MRD阳性与阴性患儿初诊e2a—pbx1表达水平及临床特点的差异。结果表明：初诊时e2a-pbx1表达水平与初诊时外周血幼稚细胞百分比呈正相关。23例诱导缓解治疗第33天MRD水平与初诊时各临床特点及e2a—pbx1表达水平均缺乏相关性。MRD阳性组初诊时e2a—pbx1表达水平高于阴性组，而患儿年龄显著低于阴性组。外周血白细胞数〈25×10^9／L的患儿，初诊时外周血幼稚细胞百分比显著低于≥25×10V／L组，血小板计数显著高于≥25×10^9／L组。结论：初诊时e2a—pbx1表达水平可以提示患儿初诊时的肿瘤负荷。MRD阳性患儿初诊时e2a—pbx1表达水平高，年龄小。初诊肿瘤负荷高的患儿，外周血血小板数低。     

TEL-AML1融合与儿童急性淋巴细胞白血病

TEL和AML1基因是造血系统恶性肿瘤染色体易位的常见靶基因,t(12;21)所致的TEL-AML1融合是儿童急性淋巴细胞白血病中最常见的遗传学改变,是提示预后良好的指标之一.本文就TEL和AML1基因在造血系统中的作用及TEL-AML1融合的临床意义做一综述.     

应用实时荧光定量PCR技术检测儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病

本研究旨在应用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RQ-PCR)技术检测儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD),采用B系ALL18对引物、T系ALL8对引物进行PCR反应扩增Ig/TCR基因重排,以Ig/TCR基因重排作为追踪的分子标记,应用SYBR Green I染料法对儿童ALL-MRD水平进行定量。研究结果表明:9例B-ALL患儿中有8例重排,找到患儿重排标记(marker)的机率为88.8%;并对诱导化疗后(第33天)骨髓MRD检测发现,其MRD水平明显下降。结论:本研究证实Ig/TCR基因重排可作为检测儿童ALL MRD标记,SYBR green I实时荧光定量PCR是一种可靠的、相对敏感的、并且比较容易的作为常规检测。     

儿童急性淋巴细胞白血病早期治疗反应评估与预后价值

本研究目的是探讨儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）早期治疗反应在儿童ALL预后中的价值。采用细胞形态学和分子生物学（定量r,cR）方法对2005年3月31日至2008年3月31日期间我院收治的426例初治ALL患儿进行了早期治疗反应评估,评估内容包括第8天强的松试验反应（D8-PR）、第22天骨髓缓解状态（D22-BM）、第33天骨髓缓解状态（D33-BM）,以及第33天MRD水平（D33-MRD）。单因素分析4个评估指标对无事件生存率（EFS）的影响,Cox比例风险模型分析其独立预后意义。所有病例随访截止至2013年10月31日,中位随访时间80个月（0．5-106个月）。结果表明：单因素分析4个早期治疗反应评估指标均具有明显的预后意义。强的松反应良好（PGR）患儿的8年EFS明显高于强的松反应不良（PPR）患儿;第22天、第33天骨髓缓解状态为M1骨髓的患儿预后明显好于M2、M3骨髓的患儿;第33天MRD高水平（≥1014）的患儿预后明显差于MRD低水平（〈1014）患儿（P〈0．001）。多因素分析结果显示,儿童ALL中具有独立预后意义的指标有BCR／ABL＋、D8-PR、D33-BM和D33-MRD,其中以D33-MRD≥10^-2的风险比最高（HR：11．886,P〈0．001）。结论：早期治疗反应在儿童ALL中具有重要的预后价值,是具有独立意义的预后因素,对儿童ALL的危险度分层治疗中具有重要的临床指导意义。     

两种化疗方案对于TEL-AML1融合基因阳性儿童急性淋巴细胞白血病的疗效比较

本研究旨在比较北京儿童医院（BeijingChildren’SHospital,BCH）2003方案和中国儿童白血病协作组（Chi—neseChildren’sLeukemiaGroup,CCLG）2008方案对于TEL-AML1融合基因阳性儿童急性淋巴细胞白血病（acutelymphoblasticleukemia,ALL）的疗效,探讨更加适合此亚型患儿的化疗方案。收集2003年1月至2010年10月就诊于首都医科大学附属北京儿童医院血液病中心的TEL—A朋u融合基因阳性ALL患儿的临床资料,比较两种化疗方案治疗的患儿初诊时临床特征、第8天泼尼松反应、诱导缓解治疗结束时微小残留病（minimalresidualdisease,MRD）水平、无事件生存率（EventFreeSurvival,EFS）、无复发生存率（RelapseFreeSurvival,RFS）等。结果表明,在204例TEL-AML1 融合基因阳性患儿中,134例采用BCH-2003方案治疗,70例采用CCLG-2008方案治疗。两组患儿在初诊时年龄、外周血白细胞水平、第8天泼尼松反应及中枢神经系统累及、临床危险度分层等方面均无统计学差异,但CCLG-2008组的男性较多（P=0．025）。BCH-2003组诱导缓解治疗结束时（第33天）的MRD阴性率高于CCLG-2008组（P=0．013）。按照BCH-2003方案分层标准,重新划分CCLG-2008组的危险度后,BCH-2003组的中危患儿的MRD阴性率仍然高于CCLG-2008组的中危患儿（P=0．014）,而标危患儿MRD阴性率两组间没有明显差异。两组患儿在化疗期间感染发生率、EFs及RFS均无明显差异（分别为P=1．000,P=0．327,P=0．251）。结论：对于TEL-AML1 融合基因阳性ALL患儿,BCH-2003方案的诱导缓解治疗方案能迅速地降低患儿的白血病负荷,但是BCH-2003和CCLG-2008两种化疗方案的治疗效果接近。     

利用实时定量PCR检测儿童急性淋巴细胞白血病的E2A-PBX1融合基因

3%～5%的儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）和5%的成人ALL患者,携带t（1;19）（q23;p13）,该易位形成E2A-PBX1（Immunoglobulin Enhancer Binding Factor-Pre-B Leukemia）融合基因.实时定量PCR（RQ-PCR）是近年来得到广泛应用的基因定量技术,已成为PCR更新换代的方法.我们采用RQ-PCR方法成功检测了27例ALL患儿初诊时E2APBX1融合基因表达水平,并定量检测了其中9例患儿诱导缓解治疗结束时的微量残留病（MRD）水平.     

分子生物学特点决定急性淋巴细胞白血病治疗效应

白血病细胞起源、免疫学及分子生物学特征;患者年龄及其与药物代谢相关的基因多态性;药效动力学及药物间的相互作用;白血病细胞逗留的骨髓微环境.这些因素及决定这些因素的分子生物学特征相互作用,决定每个白血病病例的治疗效应,而MRD就是这种综合效应的最重要且最具体反映这些分子生物学特征相互作用的指标.充分认识这点,对正确评估白血病患者预后,动态监控病程,早期发现复发及耐治病例,改进治疗方案,提高疗效,并为深入研究耐药机制及新的治疗提供新的研究方向极为重要.     

成人急性淋巴细胞白血病的MRD动态监测指标及时机

经过现代的综合治疗方案,成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者也可取得80%以上的完全缓解(CR)率,与儿童ALL的CR率基本接近;但5年的总体生存率则仅30%～40%,远逊于儿童ALL,复发是影响其长期生存的最主要原因.对微小残留病(MRD)的动态监测有助于我们了解患者体内的肿瘤负荷,对疾病缓解质量和复发几率的判断具有重要的预测价值,已经成为评价ALL患者预后的最重要因素之一.该文综述了在成人ALL患者中MRD的检测标记以及不同时间点的MRD监测对预后的判断价值.     

儿童急性淋巴细胞白血病个体化治疗现状

急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童时期发病率最高的恶性肿瘤,是由于造血干细胞增殖分化异常而引起的恶性血液病。目前,儿童ALL的治疗效果明显改善,行之有效的方法主要是个体化治疗。对于标危ALL,降低了化疗强度从而减轻化疗药物的副作用,只有对真正属于高危型的ALL才进一步加强化疗,且应根据其不同的生物学特征采用不同的治疗手段。对于复发型ALL,即使加强化疗或换用新药,其预后仍旧较差,可采取分子靶向治疗或造血干细胞移植。此外,近年来微小残留病检测技术及药物基因组学研究的发展在一定程度上有助于评价化疗药物敏感性并判断预后,也为ALL个体化治疗提供了可靠的客观依据。本文就目前儿童ALL个体化治疗现状进行综述。     

急性淋巴细胞白血病微小残留病诊断研究进展

监测微小残留病(MRD)几乎已成为所有儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)和大多数成人ALL患者一线治疗的常规临床工作。MRD是评价复发风险最具特异性的敏感指标,是ALL重要的独立预后因素,也是确定不同危险组治疗方案的重要参考依据。同样,在复发的ALL患者和进行干细胞移植的患者中,MRD检测常常用于指导治疗决策。此外,通常采用检测MRD的方法评价抗体和小分子药物等新药的临床试验疗效。事实上,MRD检测或可很好地用于替代终点观察,由此而缩短随访时间。MRD技术需要良好的敏感性、实用性和经济性。目前来看,流式细胞术、PCR[等位基因特异性寡核苷酸(ASO)-PCR]分析免疫球蛋白和T细胞受体基因重排符合这些标准,但是前者敏感性尚不能完全满足要求。而经典的ASO-PCR费时费力。因此,正在研发能评估百万序列或细胞的高通量测序和下一代流式细胞术(多维的),每项技术都有其优缺点。     

儿童急性淋巴细胞白血病伴有TEL-AML1融合基因表达的免疫表型特点分析

为了探讨伴有TEL—AML1融合基因表达的儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的免疫表型及其它临床特点，采用三色流式细胞术（FCM）检测免疫表型，用巢式逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测TEL—AML1融合基因的表达；同时在FAB分型基础之上进行形态学（M）、免疫学（I）、细胞遗传学（c）分型。结果显示：④儿童B系ALL中TEL—AML1^＋占18．5％（22／119），主要以L2亚型为主，糖原（PAS）染色阳性率和积分值均数分别为65％和121，均高于TEL—AML1^-组（P〈0．05）；②与儿童B系ALLTEL—AML1^-组相比，TEL—AML1^＋年龄、性别、白细胞计数、外周血中幼稚细胞数目均未见有统计学差异；③TEL/AML1^＋组中，普通淋巴细胞表型295．5％（21／22）；与TEL／AML1^-组比较，CD13表达率增高（59．1％，13／22），CD20表达率减低（22．7％，5／22）（P〈0．05）；CD10及HLA—DR的平均荧光指数（MFI值）增高，分别为92．80及53．61（P〈0．05）。结论：儿童伴TEL—AML1融合基因表达在儿童ALL中较常见，且具有特殊的免疫表型特点，该特点可作为儿童白血病微量残留病的辅助检测。     

Netrin-1在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的:研究Netrin-1蛋白在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的表达及其与临床指标的相关性,并探讨其可能的调控机制。方法:采用ELISA法检测48例ALL患儿(初诊、复发)外周血血清中Netrin-1的表达水平,并分析其与27例非恶性血液病患儿对照样本表达水平的差异,进而分析ALL外周血Netrin-1水平与临床指标的相关性。体外培养ALL细胞Jurkat、Molt-4、SUP-B15和Raji,经不同浓度重组人Netrin-1蛋白处理后,用Transwell法检测细胞的侵袭能力;CCK-8法测定Netrin-1对细胞增殖的作用;采用Western blot检测FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键蛋白的表达及其磷酸化水平。结果:ALL患儿外周血中Netrin-1的表达量显著高于对照组(P<0.05)。随着Netrin-1表达水平的上调,WBC水平(r=-0.290,P<0.05)呈下降趋势,Plt水平(r=0.483,P<0.05)呈上升趋势,且与年龄、Hb水平、骨髓幼稚细胞比例无显著相关性;Netrin-1浓度在25-50 ng/ml水平时,Netrin-1水平与WBC(r=0.886,P<0.05)呈正相关;WBC>50×10^9/L和Plt<20×10^9/L的患儿Netrin-1表达水平显著降低(P=0.042,P=0.001);Netrin-1的表达水平在危险度分级中具有显著性差异(P=0.017),与低危组与中危组相比,高危组Netrin-1的表达水平显著提高;Netrin-1在性别、肝脾淋巴结肿大、MRD、复发、染色体异常等分组中的表达水平均无显著性差异;Netrin-1对4种细胞的侵袭能力有促进作用(P<0.05),随着Netrin-1浓度的提高,细胞数有先增加后降低的趋势,且均在Netrin-1浓度为100 ng/ml时,侵袭下室的细胞数最高;Netrin-1浓度为25 ng/ml时,4种细胞存活率显著增加(P<0.05),其中SUP-B15细胞在浓度为100 ng/ml时,细胞存活率最高;4种细胞存活率呈现低浓度升高及高浓度降低的趋势;Western blot结果显示,Netrin-1使FAK、Erk1/2、PI3K、Akt等信号通路关键分子磷酸化水平提高(P<0.05)。结论:ALL患儿血清中存在Netrin-1的异常表达,Netrin-1可能通过增加白血病细胞的增殖、侵袭能力来影响ALL的发生发展,可能成为ALL的危险因素或生物治疗中的潜在靶点。     

IGF-ⅠR和IR在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达

本研究的目的是探讨胰岛素样生长因子Ⅰ受体(insulin-like growth factor-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)、胰岛素受体(insulin receptor,IR)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者的外周血淋巴细胞表面的表达及其与临床特征的关系。收集43例儿童ALL和14例健康儿童外周血标本,采用实时定量PCR检测IGF-ⅠR和IR mRNA的表达。结果表明:儿童ALL和正常儿童的外周血淋巴细胞表面均表达IGF-ⅠR mRNA。ALL初发组、复发组及高血糖组的IGF-ⅠR mRNA表达水平与正常对照组相比明显升高(P=0.000,P=0.002和P=0.05)。完全缓解组与初发组和复发组相比,IGF-ⅠR mRNA表达水平明显减低(P=0.000和P=0.018)。初发组和复发组ALL患儿外周血淋巴细胞IR mRNA表达水平明显低于正常对照组(P=0.001和P=0.018)。完全缓解组与初发组和复发组相比表达量升高,差异有统计学意义(P=0.000和P=0.001)。ALL儿童外周血淋巴细胞IGF-ⅠR mRNA和IR mRNA在不同病程阶段的表达差异有统计学意义,但表达水平与性别、年龄及初诊时白血病计数无关。结论:IGF-ⅠR的表达与儿童ALL病程相关,病情进展时(初发、复发)表达升高,病情缓解(CR)时则降低,提示IGF-ⅠR在ALL增殖中起重要作用,其表达量增高可能反映了ALL细胞恶性增殖倾向。     

IKZF1基因IK6亚型在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义

本研究通过检测IKZF1基因在成人急性淋巴细胞白血病（ALL）患者骨髓细胞中的表达亚型,探讨IK6功能缺陷亚型患者的临床特征及预后。应用巢式RT-PCR方法检测79例初诊ALL患者IKZF1基因表达亚型,统计IK6亚型阳性患者比例,分析IK6阳性患者年龄、性别、白细胞计数、融合基因、危险分层特点,比较IK6阳性组与IK6阴性组患者总生存率、无病生存率的差异。结果表明：在ALL患者中检测到IKZF1基因表达的功能亚型为IK1、IK2/3,功能缺陷亚型主要为IK4、IK6、IK8、IK9;表达IK6亚型患者占B-ALL患者的34.4%,占T-ALL患者的22.2%;B-ALL中IK6阳性组患者BCR/ABL1阳性率及高危组患者比例均高于IK6阴性组（P=0.027,P=0.048）,而两组的年龄、性别、白细胞计数无显著性差异,T-ALL中IK6阳性组与IK6阴性组的年龄、性别、白细胞计数、危险分层均无显著性差异,在Ph染色体阴性的B-ALL患者中,IK6阳性组的总生存率和无病生存率均低于IK6阴性组（P=0.009,P=0.002）。结论：在成人ALL中IKZF1基因IK6表达亚型为主要功能缺陷亚型,IK6亚型的表达可作为Ph染色体阴性的B-ALL患者预后危险因素,指导成人ALL治疗。     

成人T细胞急性淋巴细胞白血病中NOTCH1突变的特征研究

本研究旨在阐明NOTCH1突变在成人T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）中的特征及临床意义。通过对42例成人T-ALL患者外显子（exon）26／异二聚体N末端（HD-N）、exon27／异二聚体c末端（HD-C）、exon28和exon34／脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸（PEST）区域进行扩增、克隆和测序,研究NOTCH1突变的发生率、突变位点和类型、突变与临床和实验室指标的相关性及其预后意义。结果显示,本组成人T-ALL中NOTCH1突变率66．7％（28／42）,共发现45种NOTCH1突变,最多见于HD-N（48．9％,22／45）和PEST（40．0％,18／45）;HD-N结构域突变最多位于氨基酸位点1575（L1575P）（25．O％,7／28）,PEST结构域突变最多位于氨基酸位点2443（14．3％,4／28）;初诊时白细胞计数大于10×10^9／L者NOTCH1突变组显著高于无突变组（91．7％vs 54．5％,P=0．021）;骨髓原始及幼稚淋巴细胞比例超过50％者突变组显著高于无突变组（95．8％vs 57．1％,P=0．006）;流式免疫表型CDl0阳性表达率突变组显著高于无突变组（51．9％vs0％,P=0．006））,CD15和CD11b阳性表达率突变组显著低于无突变组（分别为5．3％vs 42．9％,P=0．047和0％vs57．1％,P=0．002）。结论：成人T-ALL的NOTCH1突变具有不同于儿童的突变特征和预后意义,而且中国成人T-ALL的NOCH1突变与西方国家相比可能存在差异。     

HLA-DRB1＊15与162例儿童急性淋巴细胞白血病发病的关系

为了研究HLA—DRB1＊15与儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）的关系,用特异性引物,对162例15岁以下儿童ALL患者进行HLA—DRB1＊15检测,对HLA—DRB5＊进行PCR扩增,并与1000份健康脐血做显著性比较,计算相对危险度。结果表明：儿童ALL患者DRB1＊15的抗原频率为40．12％,等位基因频率为22．62％;对照组抗原频率为30．8％,等位基因频率为16．81％。两组比较,差别有显著的统计学意义（χ^2=5．560,P=0．018,RR=1．506）。结论：儿童ALL患者HLA—DRB1＊15的抗原频率和等位基因频率均显著高于正常对照,此结果对儿童ALL的发病机制研究有重要意义。     

间期荧光原位杂交在儿童急性淋巴细胞白血病t(12;21)检测中的应用

目的　探讨双色间期荧光原位杂交(I -FISH)技术在儿童急性淋巴细胞白血病t(12 ;2 1)检测中的应用价值。方法　联合双色I -FISH和常规染色体核型分析技术(CCA)对5 1例儿童初治ALL的骨髓或外周血有核细胞进行t(12 ;2 1) /TEL- AML1融合基因检测。结果　11例患儿经I -FISH检测发现t(12 ;2 1) ,占总病例2 1 .6 % ;仅1例CCA检测发现有可疑的t(12 ;2 1)。结论　t(12 ;2 1)是儿童ALL最常见的染色体易位,常规染色体核型分析极难发现,需用FISH等分子检测方法加以证实。